Seleccin de un sistema de atomiZacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecHo fluido. PP .

: 87 - 100

ARTCULO PRODUCTO DE LA INVESTIGACIN

Seleccin de un sistema de atomizacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecho fluido
Judith Elena Camacho, Laura Fernanda Villamizar, Martha Isabel Gmez
1. Doctorado en Biociencias, Universidad de la Sabana, Bogot, Colombia 2. Centro de Biotecnologa y Bioindustria, Corpoica, Km. 14, va Mosquera, Bogot, Colombia Correspondencia: Recibido: 04-11-10 / Aceptado: 06-27-10

Resumen La elaboracin de micropartculas en lecho fluido es de gran inters en la industria farmacutica, alimentaria y agrcola, ya que este tipo de formulacin permite controlar la liberacin de ingredientes activos y su estabilidad y funcionalidad mediante la formacin de pequeas partculas slidas. El lecho fluido es el equipo comnmente usado en la industria para realizar el proceso y ste puede tener dos sistemas de atomizacin: superior (Top spray) e inferior (Bottom spray). En este trabajo se evaluaron los dos sistemas de atomizacin con miras a la formacin de micropartculas de Eudragit S100. Se realizaron experimentos para ajustar los factores crticos del proceso y los niveles de stos utilizando un diseo factorial multinivel y trabajando en un lecho fluido marca Glatt GmbH D 01277. Los factores evaluados fueron la temperatura de entrada, la presin interna de la cmara y la velocidad de flujo. El material de recubrimiento consisti en un polmero del cido metacrlico denominado Eudragit S100 y como ncleo se emple talco malla 325. El sistema seleccionado para la microencapsulacin fue el de atomizacin superior (Top spray). Las condiciones de atomizacin establecidas fueron velocidad de flujo de 4,12 mL/min (flujo 8 rpm), temperatura de entrada de80C y presin interna de la cmara de 1 y 3 bares. Las micropartculas presentaron formas y tamaos homogneos, menores de 100 m.Las condiciones fijadas para el sistema de atomizacinsuperior se pueden aplicar al desarrollo de procesos de microencapsulacin de diferentes principios activos utilizando como polmero Eudragit S100. Palabras clave: Microencapsulacin, micropartculas, Eudragit, atomizacin superior, atomizacin inferior, factores crticos Abstract Selecting a spray system for the formation of Eudragit S100 microparticles in a fluid bed The development of microparticles in fluid bed is of high interest in the pharmaceutical, food and agriculture, as this type of formulation to control the release of active ingredients and their stability and functionality by the formation of small solid particles. The fluid bed equipment is commonly used in industry

87

NOVA - Publicacin Cientfica EN CIENCIAS BIOMDICAS - ISSN:1794-2470 Vol.8 No. 13 / enero - junio DE 2010 - 1- 120

to carry out the process and this can have two sets of spray drying: top spray and bottom spray.In thisstudy we evaluatedthe two setsofspraydrying towardstheformationofmicroparticlesofEudragitS100. Experiments were conducted toadjustthecritical processfactorsandtheirlevelsusingamultilevelfactorialdesignand working inaGlattfluid bedbrandGmbHD-01277. Factorsevaluatedwerethe inlet temperature, thepressure insidethe chamber andtheflow rate. The coating materialconsisted ofamethacrylicacid polymerknownasEudragit S100andcore325 meshpowderwasused.The system selected for the microencapsulation was top spray. The spray dryingconditions were set flow rate of4.12 mL/min (flow 8 rpm), inlet temperature of 80C and pressure inside the chamber 1 and 3 bars.The microparticles showed homogeneous shapes and sizes, less than 100 microns. The conditions set for the top spray system can be applied to the development of microencapsulation processes of different active ingredients using as polymer Eudragit S100. Key words: Microencapsulation, microparticles, Eudragit, Top spray, Bottom spray, critical factors

Introduccin Las Micropartculas son generalmente elaboradas con materiales polimricos y pueden ser obtenidas por varios mtodos fsicos y qumicos (1) dentro de los que se destaca el proceso de atomizacin (2, 3,1) Este proceso se realiza en un equipo denominado lecho fluido y presenta ventajas tales como ser rpido y en un solo paso, aplicable a materiales sensibles al calor y fcil de escalar industrialmente (2,3,4). Adems es posible controlar el tamao de las partculas y su morfologa por variacin de los parmetros del proceso y de la formulacin (5). La encapsulacin o recubrimiento de principios activos es de gran utilidad en diferentes industrias, ya que permite controlar la liberacin de los constituyentes funcionales de una formulacin y brinda proteccin frente a condiciones ambientales (6, 7, 8). Durante el proceso de atomizacin (Spray drying), pequeas gotas lquidas son secadas y endurecidas por una corriente de aire caliente. Un cambio extra en la superficie de las gotas por transferencia de calor y masa y un diferencial elevado de temperaturas entre el lquido y el aire (20C a 200C) produce una alta velocidad de secado inicial. El agua u otro solvente utilizado se evapora continuamente de la superficie de la gota, lo cual produce ms y ms secado. Se observa consecuentemente que la temperatura del aire disminuye y la humedad relativa del aire se incrementa (9).

La atomizacin en lecho fluido es un proceso tecnolgico complejo que permite el ajuste de algunos parmetros que pueden afectar las propiedades fisicoqumicas del producto obtenido, siendo deseable la produccin de una forma farmacutica slida con comportamiento controlable y predictible (10). La atomizacin puede ser superior o inferior (Figura 1) y el uso de cada una de stas depende de diferentes criterios como el proceso de granulacin o encapsulacin a realizar,las propiedades fsicas de las materias primas a utilizar, los requerimientos del producto final, la productividad, el nivel de encapsulacin o recubrimiento requerido y la capacidad requerida. La atomizacin superior es utilizada en granulacin y atomizacin.La atomizacin inferior es utilizada en procesos de granulacin, encapsulacin con liberacin controlada y atomizacin (11). Para la atomizacin superior el polmero de recubrimiento usualmente est en solucin acuosa y es rociado continuamente en forma descendente sobre la superficie del lecho fluidizado, como se observa en la figura 1a. Cada partcula recibe una pequea cantidad de material de recubrimiento y cada tiempo pasa este hacia la regin de rociamiento, en la cual coexisten las partculas fluidizadas y las gotas rociadas. Movimientos repetidos de y hacia la regin de rociamiento producen una construccin gradual de una capa de recubrimiento relativamente uniforme circundante a cada partcula (8,12).

88

Seleccin de un sistema de atomiZacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecHo fluido. PP .: 87 - 100

Figura 1. Sistema de atomizacin a. Superior o top Spray; b. Inferior o bottom spray(15)

En la atomizacin inferior la solucin polimrica es rociada en un movimiento ascendente desde una boquilla localizada sobre el plato distribuidor en el fondo del inserto y hacia la tolva (Figura 1b). Las partculas secas caen por fuera del tubo divisorio luego fluyen en forma ascendente dentro de ste. La circulacin de las partculas se repite hasta que la cantidad de recubrimiento deseado es depositado en la superficie de las partculas slidas. Este proceso involucra humedad y secado en relacin estrecha con el movimiento de las partculas, Figura 1 (13,14). Los parmetros del proceso como la velocidad y la temperatura del aire de entrada, la velocidad del lquido atomizado, el tamao de la boquilla, la presin y la temperatura de la cmara entre otros, afectan el rendimiento del proceso y la morfologa de las partculas. As lo demostr Cheow (16) cuando elaboraron nanoagregados de slica y concluyeron que con una velocidad del lquido atomizado de 0,18 x 10 m/h, una velocidad de flujo de aire (presin interna de la cmara) de 0,332m/h, una temperatura de120C y una concentracin de la solucin de alimentacin de 0,8%(w/w) se obtienen nanoagregados esfricos y huecos con tamaos menores a 5 m, con una morfologa ideal para ser utilizada como vehculos de medicamentos para terapias inhalatorias. En otros estudios sobre la produccin de partculas por atomizacin se identific la temperatura de secado y la velocidad de flujo, como los dos parmetros que determinan la morfologa de las partculas producidas por atomizacin (10, 17, 18).

En esencia, el recubrimiento por lecho fluido es un proceso complejo de transferencia de calor y masa que involucra diversos microprocesos, tales como la produccin de gotas, la evaporacin del solvente, la transferencia de calor, la dispersin de gotas y el comportamiento de las partculas en un lecho fluido. Sin embargo, es muy poco lo conocido sobre las interacciones entre estos microprocesos y como ellos se relacionan con el rendimiento del proceso, la uniformidad del recubrimiento y la ocurrencia de efectos sobre la superficie (12). Por tal razn para el escalamiento de un proceso de estas caractersticas, se deben determinar las condiciones de operacin a escala de laboratorio para luego aplicarlas en producciones a gran escala. Dentro de la amplia diversidad de materiales disponibles para la elaboracin de micropartculas se destacan los polmeros del cido metacrlico. Dentro de stos se encuentran los Eudragit que estn disponibles en diferentes formas inicas. Se presentan en forma de polvo blanco micronizado cuyo peso molecular promedio es 135.000. El Eudragit S100 es pHdependiente, siendo altamente soluble a valores de pH alcalino, debido a la neutralizacin de los grupos carboxilo (Figura 2) con la respectiva formacin de la sal, y por lo tanto, exhibiendo el carcter de polielectrolito aninico en solucin (2,19). Diferentes tipos de Eudragit han sido ampliamente utilizados en la elaboracin de microparticulas que permiten la liberacin de principios activos a nivel intestinal, evitando la inactivacin de frmacos en el estmago, gastroresistencia (2), por ejemplo, en

89

NOVA - Publicacin Cientfica EN CIENCIAS BIOMDICAS - ISSN:1794-2470 Vol.8 No. 13 / enero - junio DE 2010 - 1- 120

la preparacin de micropartculas que permiten la administracin oral de pptidos y protenas, utilizndose Eudragit RS100 por sus propiedades mucoadhesivas (20); adems han generado un gran inters para el desarrollo de sistemas de administracin oral de insulina (19) y en procesos de microencapsulacin de partculas virales (21).

Figura 2. Estructura molecular de las unidades de repeticin del Eudragit S100 con m = 1 y n = 2.

Considerando el alto potencial del Eudragit S100 para la encapsulacin de principios activos obteniendo beneficios como mayor estabilidad, liberacin controlada por pH y bioadhesividad, el objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de dos sistemas de atomizacin en lecho fluido (superior e inferior) y diferentes factores del proceso, en la formacin de micropartculas, como primera aproximacin al desarrollo de un proceso eficiente de microencapsulacin de diferentes principios activos. Materiales y mtodos Materiales : Eudragit S100 (Rhm GmbH &Co.) donado por Almapal S.A. (Colombia). Talco malla 325 calidad farmacutica (Humedad 0,415%). Etanol al 96% (CIACOMEQ S.A.S). Fosfato dibsico de sodio anhidro (Sigma) y cido ctrico (Merck). Preparacin de la solucin polimrica: En 70mL de solucin tampn pH 8,0 se adicion la cantidad correspondiente de polmero segn el tratamiento, Tabla 1, y se mantuvo agitacin constante hasta obtener una solucin translcida. Posteriormente se adicionaron 30 mL de etanol manteniendo la agitacin. Elaboracin de micropartculas por atomizacin (Spray drying): Las micropartculas se elaboraron en un lecho fluido marca Glatt GmbH D01277, que est equipado con una roseta a 1,0 mm para ajustar el flujo de aire.

En ensayos previos se fijaron los valores alrededor de los cuales deba realizarse la experimentacin para la formacin exitosa de micropartculas (datos no mostrados).Estos valores fueron: concentracin del polmero del 5,0 %, concentracin del ncleo del 1,5% (21) y presin de aleta expresada como ngulo de apertura con valor de 40. A partir de los resultados previos y la revisin bibliogrfica se fijaron los parmetros de temperatura de entrada, presin interna de la cmara y velocidad de flujo, los cuales se variaron segn la matriz de tratamientos que se presenta en la tabla 1, generada utilizando un diseo factorial con tres factores y dos niveles por factor. Estas condiciones se trabajaron en los dos sistemas: atomizacin inferior (BS) y atomizacin superior (TS). De cada tratamiento se realiz una sola corrida para cada sistema.
Tabla 1. Variables y niveles evaluados para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 por atomizacin en lecho fluido

Factores Temperatura de entrada (C) Presin interna de la cmara(bar)*** Flujo (rpm)*** Velocidad de flujo (ml/min)
*** (22) *** (23,24)

Niveles Bajo 50 1 8 (4,12) Alto 60 3 16 (8,61)

Se evaluaron algunos parmetros cualitativos como obtencin de producto seco, la homogeneidad y el tamao de partcula, la prdida de material en los filtros, la prdida de material en la tolva y la fcil recuperacin del producto. Estas caractersticas se calificaron con un valor de cero (0) cuando se obtuvo el comportamiento no deseado y con un valor de uno (1) cuando se obtuvo el comportamiento deseado, lo que permiti aplicar una matriz de decisin para seleccionar el tratamiento ms promisorio. Caracterizacin de las micropartculas Morfologa y tamao: La forma y el tamao de las micropartculas se evaluaron por microscopa. El tamao se determin por observacin directa usando

90

Seleccin de un sistema de atomiZacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecHo fluido. PP .: 87 - 100

un microscopio de luz Olympus CH3ORF100 equipado con un micrmetro, en el aumento de 10X. Para la realizacin de esta actividad se tomaron las muestras obtenidas de la pared de la tolva para los diferentes ensayos y sistemas trabajados. Las muestras se observaron directamente al microscopio, antes y despus de tamizar la muestra por una malla con tamao de poro de 100 m. Resultados Elaboracin de micropartculas por atomizacin (Spray drying) Atomizacin inferior (Bottom spray). La codificacin de los tratamientos evaluados se presenta en la Tabla 2 y los resultados para cada uno de estos se presentan en la Tabla 3, donde se destaca que los tratamientos 3 y 4 no permitieron la formacin de micropartculas. La temperatura de entrada es importante para el proceso de microencapsulacin, ya que sta influy
TRATAMIENTOS 1 2 3 4 5 6 7 8 TE (C) 50 50 50 50 60 60 60 60

directamente en la temperatura interna del producto y la temperatura de salida, Tabla 3. Es as como las temperaturas de entrada de 50C y 60C generaron temperaturas internas del producto entre 17,3C y 20,3C y entre 20,1C a 41,3C respectivamente y temperaturas de salida de 19C a 26C y de 22C a 40C, respectivamente. Estos valores de temperatura son adecuados para el proceso de microencapsulacin de principios activos sensibles a temperaturas altas como las partculas virales de Baculovirus, las cuales se inactivan a temperaturas mayores de 50C (25). Los resultados muestran que la velocidad de flujo (Flujo) influenci la temperatura interna del producto, la cual se redujo cuando el flujo se aument, lo cual puede ser aprovechado para minimizar el efecto de las altas temperaturas de entrada sobre principios activos sensibles a altas temperaturas (26). La temperatura de entrada fijada en el equipo tambin influenci la temperatura dentro del equipo, observndose una relacin directa entre las dos variables, Tabla 3.
Flujo Vel. Flujo PI (rpm) (mL/min.) (bares) 16 8,61 1 8 4,12 1 16 8,61 3 8 4,12 3 8 4,12 1 16 8,61 1 8 4,12 3 16 8,61 3

Tabla 2. Tratamientos evaluados para la formacin de micropartculas utilizando atomizacin inferior

[TE]: temperatura de entrada, [PI]: presin interna de la cmara

Tabla 3. Variables respuesta en el proceso de atomizacin inferior

Tratamiento 1 2 3 4 5 6 7 8

[TE]: temperatura de entrada, [TIP]: temperatura interna del producto, [TS]: temperatura de salida, [PI]: presin interna de la cmara,[N.D]: No determinado por no obtenerse formacin de partculas

FACTORES Y NIVELES Velocidad Flujo TE PI de Flujo (rpm) (C) (bar) (mL/min.) 16 8,61 1 8 4,12 50 16 8,61 3 8 4,12 8 4,12 1 16 8,61 60 8 4,12 3 16 8,61

VARIABLES RESPUESTA TE mx. (C) 54 -55 57-80 N.D. N.D. 60-64 68,0 - 68,0 62,0 - 64,0 79,0 - 79,0 TIP (C) 18,8 20,2 17,6-20,3 N.D. N.D. 38,7 41,3 20,9 - 20,9 28,8 - 29,6 20,1 - 20,1 TS (C) 19,0 -19,0 23,0 -26,0 N.D. N.D. 35-40 22,0 - 22,0 25,0 - 26,0 23,0 - 23,0

91

NOVA - Publicacin Cientfica EN CIENCIAS BIOMDICAS - ISSN:1794-2470 Vol.8 No. 13 / enero - junio DE 2010 - 1- 120

Tabla 4. Matriz de decisin del proceso de microencapsulacin en el sistema de atomizacin inferior (Bottom Spray).

Tratamiento 1 2 3 4 5 6 7 8

Sin HT de Humedad MPs 0 0 N.D. N.D. 1 0 1 0 0 0 N.D. N.D. 1 1 1 0

MPs de menos de 100 m 0 0 N.D. N.D. 1 1 1 0

Prdida de material en filtros 0 0 N.D. N.D. 1 0 1 0

Prdida de material en Tolva 0 0 N.D. N.D. 1 0 1 0

Facilidad de Recuperacin 0 0 N.D. N.D. 1 0 1 0

Total 0 0 N.D. N.D. 6 2 6 0

Observaciones Falla proceso de secado Falla proceso de secado Falla proceso de secado Falla proceso de secado Material seco Falla proceso de secado Material seco Falla proceso de secado

[H T de MPs]: homogeneidad en el tamao de las micropartculas, [N.D.]: No determinado por no obtenerse formacin de partculas.Valor 0: comportamiento no deseado, Valor 1: comportamientodeseado

El proceso de atomizacin (spray drying) para microorganismos no debe alcanzar altas temperaturas para mantener la integridad del principio activo. Por ejemplo Liu y Liu (4) encontr la mayor estabilidad de la viabilidad del hongo Beauveriabassiana cuando se microencapsul utilizando una temperatura de entrada de 60C y una temperatura de salida de 30+/2C, en comparacin a la atomizacin convencional que maneja una temperatura de entrada de 100C y una temperatura de salida de 80+/-5C. De igual forma en el estudio de Behle (22), se encontr que el nucleopoliedrovirus de Anagrapha falcifera (AfMNPV) puede presentar una prdida mnima de actividad cuando se expone a altas temperaturas en el proceso de atomizacin por pocos minutos. En la Tabla 4 se presenta la matriz de decisin utilizada para seleccionar el tratamiento ms promisorio. Dentro de los parmetros calificados se incluyeron factores como la obtencin de producto seco, la homogeneidad en el tamao de las micropartculas, un menor tamao de micropartculas (<100m), la prdida de material en filtros, la prdida de material en la tolva y la fcil recuperacin del producto. En la matriz se puede observar que uno de los problemas que present el proceso de atomizacin inferior con una temperatura de entrada de 50C, correspondiente a los ensayos 1, 2, 3 y 4 fue la

no formacin adecuada de partculas, debido a que la suspensin del polmero y el ncleo fueron atomizados pero no se logr la evaporacin completa de los solventes. Cuando la temperatura de entrada fue de 60C, la velocidad de flujo de 8,61 mL/min y a presiones internas de la cmara de 1 y 3 bares, correspondientes a los ensayos 6 y 8 tambin se encontr humedad en la cmara de atomizacin, posiblemente porque bajo estas condiciones el proceso de secado no est bien controlado generndose condensacin de agua (26), observndose presencia de la suspensin de recubrimiento en las paredes de la cmara de atomizacin y en el cilindro ubicado en la parte inferior. No se detect humedad en el sistema de atomizacin inferior cuando se trabaj con una velocidad de flujo de 4,12mL/min y temperatura de entrada de 60C, con presiones interna de la cmara de 1 y 3 bares, condiciones que corresponden a los tratamientos5 y 7. Esto indica que a estas condiciones, se controla el proceso de secado. Adems utilizando estas condiciones la prdida de material en los filtros y en la tolva fue menor y la recuperacin del producto final se facilit por encontrarse ms seco que con los tratamientos restantes. Los tratamientos con la calificacin ms alta fueron el 5 y el 7, para los cuales se emple una temperatura de entrada de 60C, una velocidad de

92

Seleccin de un sistema de atomiZacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecHo fluido. PP .: 87 - 100

Figura 3. Micropartculas obtenidas por el sistema de atomizacin inferior (Bottom spray) 10X

flujo de 4,12mL/min (8rpm) y presiones internas de 1 y 3 bares respectivamente, por lo que se puede concluir que la presin no tuvo un efecto significativo en la respuesta, pero los dos factores restantes (temperatura y flujo) si influyeron en el proceso. Sin embargo algunos autores han concluido que para el proceso de atomizacin inferior el parmetro ms crtico es la fluidizacin del aire que depende de la presin interna de la cmara y de la seleccin del plato ubicado en la parte inferior de la tolva que distribuye el aire y logra una buena separacin (elevacin) de las partculas durante su movimiento (11). El establecimiento de estos parmetros es de gran importancia, as como lo concluy Cheow (16) quien determin que estas variables deben ser seleccionadas previamente para prevenir el exceso de humedad que se puede presentar en la cmara de atomizacin, lo cual se present en algunos de los tratamientos evaluados el presente estudio. El control de estos parmetros permite una buena circulacin de las partculas y un adecuado proceso de microencapsulacin, lo cual es importante en el sistema de atomizacin inferior (Bottom spray), en el cual la fluidizacin est dada por el flujo del aire en interaccin con el movimiento de las partculas (13). De acuerdo a la calificacin de los tratamientos en la matriz de decisin, Tabla 4, se establecieron como condiciones a utilizar en el sistema de atomizacin inferior para la suspensin de Eudragit S100 al 5%

utilizando como ncleo talco al 1,5%, una velocidad de flujo de 4,12mL/min (8rpm), presin interna de la cmara entre 1 y 3 bares y temperatura de entrada de 60C. Estas condiciones evitan un exceso de humedad en la cmara, ya que un aumento en la humedad causa un bajo rendimiento del proceso y compactacin de las micropartculas (16). En el proceso de atomizacin inferior se pudo determinar que la prdida de producto ocurre principalmente porque el proceso de secado no se controla adecuadamente, lo cual causa prdida de la suspensin de recubrimiento y el material se deposita en las paredes del colector generndose una prdida de producto en diferentes partes del equipo (27,5). Caracterizacin de las micropartculas. Se obtuvieron micropartculas de diferentes tamaos y formas, presentndose formas irregulares y poco homogneas en tamao, Figura 3. Adems se formaron aglomerados de partculas, posiblemente por coalescencia de las gotas durante la evaporacin de los solventes y la fluidizacin de las mismas. Las micropartculas obtenidas por el proceso de atomizacin inferior mostraron un tamao menor de 100 m as como los obtenidos en diferentes trabajos como en la microencapsulacin por atomizacin de conidios de Beauveriabassiana en el cual se obtuvieron micropartculas con tamaos entre 2,5 y 10m (4) y de Trichoderma harzianumdonde se obtuvieron tamaos entre 10 y 25 m (26).

93

NOVA - Publicacin Cientfica EN CIENCIAS BIOMDICAS - ISSN:1794-2470 Vol.8 No. 13 / enero - junio DE 2010 - 1- 120

Figura 4. Fotografas de la micropartculas obtenidas por atomizacin inferior observadas al microscopio con un aumento de 10X (a) Microparticulas Tratamiento 1 (b) Microprarticulas Tratamiento 5 (c) Micropartculas Tratamiento 6 (d) Micropartculas Tratamiento 7.

Una de las ventajas de la aplicacin de tcnicas de atomizacin (spray drying) en microencapsulacin es que permite el ajuste del atomizador (presin interna de la cmara) y la velocidad de la bomba de alimentacin (velocidad de flujo) para obtener partculas de tamaos pequeos o grandes segn se requiera (26). En la figura 4 se muestran fotografas de la partculas obtenidas con los tratamientos 1, 5, 6 y 7, que corresponden a condiciones de presin interna de la cmara de 1 y 3 bares y velocidades de flujo de 4,12mL/min y 8,61mL/ min, con temperaturas de entrada de 50C y 60C. Las micropartculas ms homogneas con respecto a forma y tamao se obtuvieron con la condicin de temperatura de entrada 60C, velocidad de flujo 4,12mL/min y

presin interna de la cmara de 3 bares, ensayo 7, Figura 4d. En el sistema de atomizacin inferior la calidad de la formacin de la micropartcula depende del flujo de aire o fluidizacin, ya que una alta velocidad de flujo de aire dado por la presin interna de la cmara mejora la circulacin de las partculas y asegura la transferencia de masa y calor. Es por esto que en este sistema la seleccin de la presin interna de la cmara es muy importante para que asegure un buen flujo de aire que no permita que la suspensin de recubrimiento se deposite en las paredes, lo que causa la prdida de material y bajos rendimientos del proceso (13).

94

Seleccin de un sistema de atomiZacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecHo fluido. PP .: 87 - 100

Tabla 5. Tratamientos evaluados para la formacin de micropartculas utilizando atomizacin superior.

TRATAMIENTOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

[TE]: temperatura de entrada, [PI]: presin interna de la cmara

TE (C) 50 50 50 50 60 60 60 60 80 80 80 80

Flujo (rpm) 8 16 8 16 8 16 8 16 8 8 16 16

Vel. de flujo (mL/min) 4,12 8,61 4,12 8,61 4,12 8,61 4,12 8,61 4,12 4,12 8,61 8,61

PI (bar) 1 1 3 3 1 1 3 3 3 1 1 3

Tabla 6. Variables respuesta en el proceso de atomizacin superior.

TRATAMIENTOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

FACTORES Y NIVELES Velocidad Flujo TE PI de flujo (rpm) (C) (bar) (mL/min) 8 4,12 1 16 8,61 1 50 8 4,12 3 16 8,61 3 8 4,12 1 16 8,61 1 60 8 4,12 3 16 8,61 3 8 4,12 3 8 4,12 1 80 16 8,61 1 16 8,61 3

VARIABLES RESPUESTA TE mx. (C) N.D. N.D. N.D. N.D. 82-98 84-84 115-120 88-109 80-85 80-85 105-120 91-100 TIP (C) N.D. N.D. N.D. N.D. 18,4-19,7 13,9-13,9 14,1-15,1 8,9-9,5 33,6-38,3 40,6-51,2 20,8-30 8,7-8,7 TS (C) N.D. N.D. N.D. N.D. 22,0-22,0 19-19 21,0-21,0 17,0-19,0 22-28 18-35 24-25 15-15

[TE]: temperatura de entrada, [TIP]: temperatura interna del producto, [TS]: temperatura de salida, [PI]: presin interna de la cmara, [N.D.]: No determinado por no obtenerse formacin de partculas

Adems este mtodo de atomizacin tiene que afectan la morfologa de las micropartculas, la generacin de altas velocidades que producen el choque de las partculas, as como la presencia dezonas muertas cercanas a la pared interna de la cmara de atomizacin, donde el proceso no se realiza adecuadamente porque las partculas se mueven muy lentamente y se producen micropartculas de tamao y forma heterognea (14), fenmeno que pudo presentarse con los tratamientos evaluados en el presente trabajo. Atomizacin superior ( Top spray ). La codificacin de los tratamientos evaluados se presenta en la Tabla 5 y los resultados para cada uno de estos

se presentan en la Tabla 6, donde se destaca que los tratamientos 1, 2, 3 y 4 no permitieron la formacin de micropartculas. En la Tabla 6 se observa que cuando la temperatura de entrada se ajust 50C no se determinan valores para las variables de respuesta porque no hay formacin de micropartculas, posiblemente porque la suspensin fue asperjada pero la evaporacin del solvente fue lenta y no se secaron las gotas formando partculas, por el contrario el material hmedo qued en la superficie interna de la cmara. Estos tratamientos correspondieron a los codificados como 1, 2 ,3 y 4.

95

NOVA - Publicacin Cientfica EN CIENCIAS BIOMDICAS - ISSN:1794-2470 Vol.8 No. 13 / enero - junio DE 2010 - 1- 120

Con una temperatura de entrada de 60C se presentaron temperaturas internas del producto entre 8,9C y 19,7C y temperaturas de salida entre 17C y 22C. En general el proceso de atomizacin superior con esta temperatura no fue adecuado, ya que se present condensacin de agua y depsito de suspensin lquida en la superficie interna de la cmara de atomizacin, resultados que corresponden a los ensayos 5, 6,7 y 8. Cuando se utiliz una temperatura de entrada de 80C se obtuvieron temperaturas internas de producto entre 8,7C y 40,6C y temperaturas de salida entre 15C a 28C.Adems al aumentar la velocidad de flujo se produjo condensacin de agua y gotas de suspensin lquida en la superficie de la cmara de atomizacin, lo que caus una disminucin de la temperatura interna del producto y un aumento de la temperatura de entrada mxima detectada por el equipo, la cual alcanz los 120C, en el tratamiento 11 y 100C en el tratamiento 12. Es importante tener en cuenta que en el sistema de atomizacin superior (Top Spray) las variaciones en las velocidades de flujo del lquido y las velocidades de flujo del aire (presin interna de la cmara) determinan el proceso de secado de las gotas fluidizadas en el lecho de aire (12). Adems se ha determinado en otros trabajos que el proceso de atomizacin superiores eficiente cuando se trabaja a temperaturas altas (11). En el estudio de Horaczek yViernstein (28) se encontr que para una buena actividad y longevidad de conidios de Beauveria brongniartii y Metarhizium anisopliae en un proceso de microencapsulacin, el parmetro ms importante y que debe ser controlado es la temperatura de salida del proceso, la cual depende de la temperatura de entrada y la velocidad de flujo. En la microencapsulacin por atomizacin (spray drying) de conidios de Trichoderma harzianum se determin como relacin ptima de la temperatura de entrada y la temperatura de salida: 60C /31C, ya que cuando se trabaj con una relacin de temperaturas de entrada/temperaturas de salida de 40C/20C apareci condensacin de agua en la pared de la cmara de atomizacin, indicando que el proceso de secado no estaba bien controlado, adems en este estudio se estableci que ajustando la velocidad de flujo (alimentacin) y la temperatura de

entrada, se puede controlar la temperatura de salida y as minimizar el efecto de temperaturas altas sobre este principio activo(26). En la matriz de decisin (Tabla 7) utilizada para calificar los tratamientos evaluados se observa que los parmetros a seleccionar en este proceso son la velocidad de flujo, la temperatura de entrada y la presin interna de la cmara para determinar las interacciones que ocurren entre estas condiciones y poder lograr un buen proceso de microencapsulacin. El ajuste de los tres factores afect el desarrollo adecuado del proceso de atomizacin superior, ya que al trabajar con temperaturas de 50C y 60C y velocidad de flujo de 8,61 mL/min (16 rpm), correspondientes a los ensayos 1, 2, 3, 4, 6 y 8, el proceso de secado no fue eficiente, presentndose humedad en la cmara de atomizacin, prdida de material (suspensin) y dificultad en la recuperacin del producto. En el sistema de atomizacin superior (Top spray) la velocidad de flujo, la presin interna de la cmara y la posicin de la boquilla en la parte superior de la cmara de atomizacin fueron los parmetros que ms influyeron en el proceso, posiblemente porque stos determinan la distribucin de la temperatura y la humedad de las partculas. Cabe destacar que para el proceso es importante la correcta preparacin de la suspensin de recubrimiento, ya que caractersticas como una alta viscosidad y tensin superficial pueden causar prdidas en el proceso de atomizacin, variacin en la distribucin de la temperatura sobre las partculas, afectando su dimetro y el rea superficial en la cual ocurre la transferencia de masa de las gotas al medio dispersante (12). Los tratamientos con la mayor calificacin segn la matriz de decisin (Tabla 7) fueron los tratamientos 9, y 10 que sugieren que para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 (5%) con talco como ncleo al 1,5% utilizando atomizacin superior, se debe trabajar con una velocidad de flujo de 4,12 mL/min (8 rpm) y con una temperatura de entrada de 80C, siendo indiferente la presin interna de la cmara. Caracterizacin de las micropartculas Las micropartculas obtenidas por el proceso de atomizacin superior presentaron tamaos y formas homogneas, encontrndose partculas esfricas

96

Seleccin de un sistema de atomiZacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecHo fluido. PP .: 87 - 100

Tabla 7. Matriz de decisin del proceso de microencapsulacin en el sistema de atomizacin superior (Top Spray).

Tratamiento 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Sin HT de Humedad MPs N.D. N.D. N.D. N.D. 1 0 0 0 1 1 0 0 N.D. N.D. N.D. N.D. 1 0 0 0 1 1 0 1

MPs de Prdida de Prdida de Facilidad de menos de material en material en Recuperacin 100 m filtros Tolva N.D. N.D. N.D. N.D. 0 1 0 0 1 1 0 1 N.D. N.D. N.D. N.D. 0 1 0 0 1 0 0 0 N.D. N.D. N.D. N.D. 1 0 0 0 1 1 0 0 N.D. N.D. N.D. N.D. 1 0 0 0 1 1 0 0

Total N.D. N.D. N.D. N.D 4 2 0 0 6 5 0 2

Observaciones Falla proceso de secado Falla proceso de secado Falla proceso de secado Falla proceso de secado Material seco Falla proceso de secado Falla proceso de secado Falla proceso de secado Material seco Material seco Falla proceso de secado Falla proceso de secado

[H T de MPs]: homogeneidad en tamao de micropartculas, [N.D.]: No determinado por no obtenerse formacin de partculas. Valor 0: comportamiento no deseado, Valor 1: comportamiento ideal.

Figura 5. Micropartculas obtenidas por el sistema de atomizacin superior (Top Spray) 10X

(Figura 5), resultados similares a los obtenidos por otros autores utilizando atomizacin superior, en los cuales la morfologa de las partculas es homognea (29). La morfologa de las micropartculas depende de diferentes factores como la naturaleza del material de encapsulacin usado y de las condiciones

operacionales de secado como temperatura de entrada, concentracin de slidos, velocidad de flujo de aire o velocidad de alimentacin (1). El tamao de las micropartculas obtenidas fue menor a 100 m, un pequeo tamao que podra deberse a que la relacin entre presin interna de

97

NOVA - Publicacin Cientfica EN CIENCIAS BIOMDICAS - ISSN:1794-2470 Vol.8 No. 13 / enero - junio DE 2010 - 1- 120

(a)

(b)

(c)

(d)

Figura 6. Fotografas de la micropartculas obtenidas con atomizacin superior observadas al microscopio con un aumento de 10X (a) Micropartculas tratamiento 5 (b) Micropartculas tratamiento 7 (c) Micropartculas tratamiento 9 (d) Micropratculas tratamiento 10.

la cmara y velocidad de flujo producen una fuerte atomizacin que genera gotas de tamaos pequeos y en consecuencia micropartculas pequeas(16). Por ejemplo, en los tratamientos donde utiliz la mayor presin interna de la cmara (3 bares), se produjeron micropartculas ms homogneas en cuanto a forma y tamao (Figuras 6b y 6c). En el proceso de atomizacin superior la velocidad de flujo y la presin interna de la cmara afectan la uniformidad del crecimiento de la capa de recubrimiento, ya que al incrementarse la presin interna de la cmara se incrementa el flujo de aire de enfriamiento y de secado, lo cual influye en la distribucin de la temperatura sobre la partcula (12). En el estudio realizado por Tajber (10), los factores ms significantes que afectaron las caractersticas del

producto final fueron la temperatura de entrada, la velocidad de flujo de la bomba peristltica y la concentracin de los excipientes. Adems se encontr que el parmetro que ms influy en el tamao de partcula fue el flujo de aire, ya que a un alto flujo de aire se obtuvo un tamao de partcula ms pequeo. Se han estudiado efectos de los parmetros de atomizacin en el sistema de atomizacin superior sobre las propiedades fsicas de las micropartculas (11) y se ha observado que un aumento en la velocidad de flujo produce partculas grandes, como se obtuvo con el tratamiento 12 (Figura 5), en cual se trabaj con una velocidad de 8,61 mL/min. Un incremento en la temperatura de entrada disminuye el tamao de las micropartculas, como se observa en los tratamientos 9 y 10 (Figuras 6c

98

Seleccin de un sistema de atomiZacin para la formacin de micropartculas de Eudragit S100 en lecHo fluido. PP .: 87 - 100

y 6d), en los cuales se utiliz una temperatura de entrada de 80C en comparacin con lo observado en los tratamientos 5 y 7 (Figuras 6a y 6b) en los cuales se utiliz una temperatura de entrada de 60C. Un incremento en la presin interna de la cmara produce una disminucin del tamao de las micropartculas porque se generan gotas de tamaos pequeos, como se observa en los tratamientos 7 y 9 (Figura 6b y 6c), en los cuales se utiliz una presin interna de la cmara de 3 bares, en comparacin con lo obtenido en el ensayo 5 (Figura 6a) en el cual se utiliz una presin interna de 1 bar. Estudios desarrollados para evaluar los parmetroscrticos del proceso de atomizacin superior han concluido que la presin interna de la cmara es el parmetro ms crtico, seguido por la velocidad de flujo, la concentracin de slidos y la temperatura de entrada. Adems se observaron interacciones significantes entre algunos de estos parmetros. En este sistema de atomizacin la fluidizacin del aire no es significante. Sin embargo para que este proceso de atomizacin funcione correctamente se necesita un buen control de todos los parmetros involucrados para minimizar las variaciones en los productos obtenidos (11). Se seleccionaron como condiciones ptimas para el proceso de atomizacin superior (Top spray) para la suspensin de Eudragit S100 al 5% con talco como ncleo al 1,5%, una temperatura de entrada de 80C, una presin interna de la cmara entre 1 y 3 bares y un flujo de 8 rpm que equivale a una velocidad de flujo de 4,12mL/min. Los resultados para los dos sistemas de atomizacin ensayados evidencian que diferentes condiciones de atomizacin afectan el producto final, como lo reporta el trabajo de Yu (3), en el cual se investigaron cuatro parmetros de atomizacin: la temperatura de entrada del aire, la concentracin de slidos, la temperatura de alimentacin y la velocidad de flujo y sus efectos en la eficiencia de encapsulacin y el tamao de las micropartculas de fosfolpidos. En dicho trabajo se obtuvieron como condiciones de ptimas de operacin una temperatura de aire de entrada de 140C, una temperatura de alimentacin 30C y una concentracin de slidos del 20%, adems en este estudio se determin que la velocidad de flujo no influenci la eficiencia del proceso.

Al evaluar el efecto de los dos sistemas de atomizacin en lecho fluido(superior e inferior) y los diferentes factores del proceso, en la formacin de micropartculas, se seleccion el sistema de atomizacin superior (Top Spray), con el cual se obtuvo una formacin adecuada de micropartculas, las cuales presentaron menor tamao y mayor homogeneidad en la forma. Las condiciones fijadas para dicho sistema fueron una velocidad de flujo de 4,12mL/min (8rpm), una temperatura de entrada de 80C y una presin interna de la cmara entre 1 y 3 bares. En el sistema de atomizacin superior (Top spray), la velocidad de flujo y la presin interna de la cmara influyen en lamorfologa de las micropartculas obtenidas y en el control del proceso de atomizacin (12). En el sistema de atomizacin inferior (Bottom spray) la calidad del recubrimiento depende principalmente del flujo de aire (fluidizacin) o sea de la presin interna del aire que produce el movimiento de las partculas (13). Conclusiones Se demostr la factibilidad tecnolgica para preparar micropartculas por atomizacin, utilizando como polmero Eudragit S100 y talco como ncleo. Cuando se utiliz el sistema de atomizacin inferior (Bottom spray) se tuvo como condicin crtica del proceso la presin interna de la cmara, la cual no favoreci la morfologa de las partculas producidas. Cuando se utiliz el sistema de atomizacin superior (Top Spray) las condiciones crticas del proceso fueron la velocidad de flujo y la temperatura, cuyas interacciones favorecieron el secado y en consecuencia la homognea morfologa de las micropartculas y su menor tamao Agradecimientos Los autores agradecen a Almapal-Colombia por su generosidad en proveer el polmero para el desarrollo del presente trabajo.
1. 2. Li X., Anton N, Arpagaus C, Belleteix F, Vandamme Th. 2010. Nanoparticles by Spray drying using innovate new technology: The Bchi Nano Spray Dryer B-90. Journal of Controlled Release 147: 304-310 Beck R. C. R, Pohlmann A. R, Guterres S. 2004. Nanoparticle-coated microparticles: preparation and characterization. J. Microencapsula-

Referencias

99

NOVA - Publicacin Cientfica EN CIENCIAS BIOMDICAS - ISSN:1794-2470 Vol.8 No. 13 / enero - junio DE 2010 - 1- 120 tion. 21: 499512 Yu C, Wang W, Yao H, Liu H. 2007. Preparation of Phospholipid Microcapsule by Spray Drying. Drying Technology 25: 695702 Liu Ch, Liu S-D. 2009. Low-Temperature Spray Drying for the Microencapsulation of the Fungus Beauveria bassiana. Drying Technology 27:747753 Brki K, Jeon I, Arpagaus C, Betz G. 2011. New insights into respirable protein powder preparation using a nano spray dryer. International Journal of Pharmaceutics 408: 248256 Winder R S, Wheeler J J, Conder N, Otvos I S, Nevill R, Duan L. 2003. Microencapsulation: A Strategy for Formulation of Inoculum Biocontrol. Science and Technology 13:155-169 Fini A, Cavallari C, Ospitali F. 2008. Raman and thermal analysis of indomethacin/PVP solid dispersion enteric microparticles. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 70: 409420 Ronsse F, Pieters J, Dewettinck K. 2008. Modelling side-effect spray drying in top-spray fluidized bed coating processes. Journal of Food Engineering 86: 529541 Turchiuli C, Gianfrancesco A, Palzer S, Dumoulin E. 2011. Evolution of particle properties during spray drying in relation with stickiness and agglomeration control.Powder Technology 208: 433440 Tajber L, Corrigan O, Healy A. 2009. Spray drying of budesonide, formoterol fumarate and their CompositesII. Statistical factorial design and in vitro deposition properties. International Journal of Pharmaceutics 367: 8696 Srivastava S, Mishra G. 2010. Fluid Bed Technology: Overview and Parameters for Process Selection. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Drug Research 2: 236-246 Ronsse F, Pieters J. G, Dewettinck K. 2009. Modelling heat and mass transfer in batch, top-spray fluidised bed coating processes. Powder Technology 190: 170175 Mafadi S, Hayert M, Poncelet D. 2003. Fluidization Control in the Wurster Coating Process. Chem. Ind. 57: 641-644) Fitzpatrick S, Ding Y, Seiler Ch, Lovegrove C, Booth S, Forster R, Parker R, Jonathan S. 2003.Positron Emission Particle Tracking Studies of a Wurster Process for Coating Applications.Pharmaceutical Technology 70-78. Glatt. com http://www.glatt.com/e/01_tecnologien/01_04_09.htm (consulta septiembre del 2010) Cheow W, Li S, Hadinoto K. 2010.Spray drying formulation of hollow spherical aggregates of silica nanoparticles by experimental design chemical engineering research and design 88: 673685 17. Kho K, Hadinoto K. 2010a. Effects of excipient formulation on the morphology and aqueous re-dispersibility of dry-powder silica nanoaggregates Colloids and Surfaces A. Physicochem. Eng. Aspects 359: 7181 18. Kho K, Hadinoto K. 2010b. Aqueous re-dispersibility characterization of spray-dried hollow spherical silica nano-aggregates. Powder Technology 198: 354363 19. Villamizar L, Martnez F.2008. Determination of the basic conditions for microencapsulation of an enthomopathogenic Baculovirus by means of coacervation using Eudragit S100. VITAE 15:123- 131 20. Lopedota A, Trapani A, Cutrignelli A, Chiarantini L, Pantucci E, Curci R, Manuali E, Trapani G. 2009. The use of Eudragit RS100/cyclodextrin nanoparticles for transmucosal administration of glutathione. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 72: 509-520 21. Villamizar L, Barrera G, Cotes A, Martnez F.2010. Eudragit S100 microparticles containing Spodoptera frugiperda nucleopolyehedrovirus: Physicochemical, characterization,photostability and invitro virus release. J. Microencapsulation 27:314-324 22. Charpentier A, Gadielle P, Benoit P. 1999. Rhizobacteria microencapsulation : properties of microparticles obtained by spray-drying. J. Microencapsulation 16: 215-229 23. Tamez P, McGuire M, Behle R, Shasha B, Pingel R. 2002. Storage Stability of Anagrapha falcifera nucleopolyehedrovirus in spray dried formulations. Journal of Invertebrate Pathology 79: 716 24. Behle R, Tamez-Guerra P, Mcguire M. 2006. Evaluating conditions for producing spray-dried formulations of Anagrapha falcifera nucleopolyhedroviruses (AfMNPV). Biocontrol Science and Technology 16:941-952 25. Young S. 2005. Persistence of viruses in environment.http: www.Agctr. isu.edu/s265/young.htm. (consulta septiembre 2010). 26. Jin X, Custis D. 2011. Microencapsulating aerial conidia of Trichoderma harzianum through spray drying at elevated temperatures. Biological Control 56: 202208 27. Johansen P, Merkle H, Gander B. 2000. Technological considerations related to the up-scaling of protein microencapsulation by spray-drying. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 50:413-417 28. Horaczek A, Viernstein H. 2004. Comparison of three commonly used drying technologies with respect to activity and longevity of aerial conidia of Beauveria brongniartii and Metarhizium anisopliae. Biological Control 31: 6571 29. Hede P, Bach P, Jensen A. 2008. Top-spray fluid bed coating: Scale-up in terms of relative droplet size and drying force. Powder Technology

3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

11. 12. 13. 14.

15. 16.

100