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Cromatografa
Sistema analtico que permite separar los diferentes componentes de una muestra problema por distribucin entre dos fases, una estacionaria y otra mvil, con el fin de identificarlos y/o cuantificarlos.
Fase Mvil: Efecto de desplazamiento ejercido sobre los componentes de la mezcla por una fase mvil, que puede ser un liquido o un gas, sobre una fase estacionaria.
Fase estacionaria: Efecto de retencin producido sobre los componentes de la mezcla por una fase estacionaria, que puede ser slida o lquida, anclada a un soporte slido.
Tipos de cromatografa
Segn la naturaleza de la fase estacionaria y de la fase mvil.
a. Slido Liquido (Estacionaria= Slida y la Mvil = Liquida) b. Liquido Liquido (Estacionaria= Liquido anclado a un soporte solido) c. Liquido Gas (Estacionaria= Liquido no voltil impregnado en un slido y la Mvil = Gas) d. Slido Gas (Estacionaria = Solida y la Mvil = Gas)
Tipos De Cromatografa
Segn el tipo de interaccin que se establece entre los componentes de la fase mvil y la fase estacionaria.
a. Absorcin (Estacionaria = Slido polar capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediantes interacciones de tipo polar) b. Particin (Separacin por solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y mvil, ambas liquidas) c. Intercambio Inico (Estacionaria= Slido con grupos funcionales ionizables cuya carga se pueden intercambiar con los iones de la fase mvil)
Gas
Papel
Elementos:
Cromatoplaca : Hoja de vidrio de 20 x 20 cm, recubierta con el soporte o sorbente. Eluyente: Solvente o mezcla de solventes.
Cubeta: Contiene al eluyente y a la cromatoplaca.
El eluyente generalmente es menos polar que la fase estacionaria (slica gel) por tanto, entre mas rpido se desplace un componente ser menos polar.
La reproductibilidad de la tcnica es de +/- 20% por lo cual se recomienda correr un duplicado en la misma placa.
La fase mvil asciende a lo largo de la placa por capilaridad, desplazando los componentes de la mezcla a diferentes velocidades, provocando su separacin.
Cuando el frente del disolvente se encuentra prximo al extremo superior de la placa se saca y se visualiza.
Rocio con una solucin de agua/H2SO4 1:1, despus calentar intensamente hasta carbonizar los compuestos.
RF (Rate factor) = (DM) Distancia recorrida por el compuesto (DF) Distancia recorrida por el disolvente
Comparacin del tamao e intensidad de la mancha de la sustancia problema Vs. Patrones de diferentes concentraciones.
B. Densitometra: Con un densitmetro se mide la intensidad de la luz reflejada directamente sobre la placa. Ventajas: Menor tiempo y trabajo. Buena exactitud y reproductibilidad Rta/ En papel milimetrado en forma de picos cuya rea es proporcional al tamao de la mancha .
Adicionar 25 ml, de cloroformo y agitar por 3 min, (abrir la llave del embudo para liberar la presin por volatilidad del cloroformo)
Separar las dos capas formadas y filtrar la capa inferior (fase orgnica)
Dejar caer el cloroformo (fase orgnica) que queda en la parte inferior del embudo de separacin.
Redisolver la capsula de la muestra con 0,5 ml de cloroformo, y con un capilar sembrarla 20 veces en el mismo sitio del punto de siembra de la placa, evitando romper la slica.
Poner la placa en la cmara de saturacin que contiene Metanol: Amoniaco (100:1,5) y dejarla correr hasta el punto final del recorrido.
Retirar y dejar secar la placa para ser revelada por aspersin con el reactivo de Dragendorff.
El mtodo es cualitativo y el limite de deteccin para drogas de naturaleza bsica y neutra es de al menos 1ug/ml.