1. Maduracin de los linfocitos B. 1.1. ONTOGENIA DE LAS CLULAS B.

La ontogenia de las clulas B es el proceso de desarrollo que conduce desde los primeros precurores reconocibles de linaje de B hasta las clulas plasmticas secretoras de anticuerpos. 1.1.1. LOCALIZACIN. En los mamferos, primero se forman en el hgado fetal, a partir de la octava y novena semana de gestacin (en los espacios Disse); posteriormente se desvanece esta funcin y pasa a la mdula sea (situacin adyacente al endostio). Los linfocitos B son generados por el organismo a lo largo de la vida, aunque cada vez en cantidades menores. Esto tambin ocurre para otros linajes hematopoyticos. Los progenitores de los LB, en el estadio de reordenamiento de genes, pueden producir hasta 64 descendientes. Estas clulas migran al centro de la cavidad del hueso esponjoso, alcanzan la luz del sinusoide, y maduran en asociacin con las clulas reticulares del estroma. Slo llegan al final del proceso de maduracin el 25% de los LB, y el resto muere por apoptosis, y son fagocitadas por los macrfagos. 1.1.2. FASES DEL PROCESO. La ontogenia de las clulas B se puede dividir en dos grandes fases: - Fase independiente de antgeno: ocurre en la mdula sea (rgano linfoide central o primario) y concluye con la salida de la mdula del linfocito B maduro virgen e inmunocompetente. - Fase dependiente de antgeno: ocurre en los rganos linfoides secundarios o perifricos, y que conduce a la diferenciacin del linfocito B en dos subclones hermanos: uno de clulas plasmticas secretoras de Ac y otro de linfocitos B cebados de memoria.

1.1.2.1. FASE INDEPENDIENTE DE ANTGENO En cavidades del hueso esponjoso ocurre la linfopoyesis de clulas B. La maduracin tiene lugar en sentido radial, desde el endostio hacia el seno venoso central. Los progenitores linfoides adyacentes al endostio van produciendo reordenaciones gnicas y dividindose, de modo que cada progenitor genera unos 64 descendientes. Estos descendientes, que ya son del estadio de clulas pre-B, emigran hacia el centro de la cavidad; la mayora mueren por apoptosis (siendo fagocitados sus restos por macrfagos especializados llamados macrfagos de cuerpos tingibles). Finalmente, las clulas B maduras salen al seno venoso central. Durante todo este proceso se dan interacciones estrechas entre clulas estromales y las distintas fases madurativas del linaje de clulas B. Cerca del endostio predominan las clulas estromales reticulares,

mientras que cerca de los senos venosos se reconocen las clulas estromales adventicias, que son importantes en el mecanismo de trnsito de la clula B madura a dicho seno. Las clulas pro-B se multiplican e interaccionan con las clulas estromales reticulares; esta interaccin hace que la clula pro-B se diferencie a clula pre-B. Las clulas stem de la mdula sea no tienen Ig en superficie, no han reordenados sus genes an, y para diferenciarse requieren de la participacin de clulas del estroma de la mdula sea (adiposctos, fibroblastos, reticulocitos, endoteliocitos, etc) que participan en el proceso a 2 niveles: mediante contactos directos y mediante factores solubles. El proceso de diferenciacin se inicia por la interaccin del CD44 de la clula stem con cido hialurnico de clulas del estroma. Esta interaccin parece favorecer contactos entre el c-kit de la clula precursora con SCF (stem cell factor) de la clula del estroma o soluble. As, la clula pro-B temprana se diferencia en clula pro-B tarda. La interaccin c-kitSCF favorece la proliferacin de estos precursores.

Posteriormente, en las clulas pro-B tardas y clulas pre-B es necesaria la participacin de factores solubles de activacin y en concreto de la IL-7. Esta citosina, producida por las clulas del estroma, induce proliferacin de los precursores. En las ltimas etapas de diferenciacin, los contactos entre los precursores B (clulas pre-B y B inmaduras) con las clulas estromales parecen estar mediados por molculas de adhesin.

- Durante las fases de progenitor linfoide, pro-B y parte de pre-B se expresan los genes de activacin de recombinacin (RAG-1 y RAG-2), as como el gen de la desoxinucleotidil transferasa terminal (TdT). - Durante las fases de progenitor y pro-B se reordena DH/JH en ambos cromosomas. - En fase pre-B se intentan reordenaciones productivas VH/DHJH (Si no son productivas, la clula entra en apoptosis; si alguna de las dos es productiva, la clula escapa de la apoptosis, probablemente por la accin de rescate de la clula estromal). Simultneamente est ocurriendo la a dicin de Nnucletidos.

En esta fase pre-B tiene lugar la sntesis del receptor de clulas pre-B: - Se ensambla VHDHJH con el gen C-mu, con lo que se producen cadenas pesadas de tipo mu. - Se unen por splicing dos segmentos nuevos: VpreB y delta-5, que conduce a la sntesis de lo que se llama cadena L sustititutiva (pseudo-L). - El ensamblaje de dos cadenas mu y dos cadenas pseudo-L produce la pseudo-IgM de membrana (que va acompaada de Ig-alfa/Ig-beta), que es el receptor caracterstico de clulas pre-B.

Este receptor de pre-B est implicado en algunos de los fenmenos que vienen a continuacin: - la cadena pesada mu H logra la exclusin allica. - El receptor en su conjunto induce la expansin proliferativa de las clulas pre-B que han logrado la reordenacin productiva de la cadena H (se trata pues, de una seleccin positiva por el receptor de las propias clulas pre-B). - En las clulas pre-B seleccionadas tiene lugar la reordenacin aleatoria de genes de cadenas lambda. Si tiene xito (productiva), se provoca la exclusin allica del otro alelo de lambda y de los dos alelos de kappa. Si el primer alelo de lambda no es productivo, se intenta con el segundo, y si tampoco es productivo, se intenta con los kappa. Si finalmente ninguno de los alelos son productivos, se entra en apoptosis.

Si la clula ha logrado reordenaciones productivas y ha escapado a la apoptosis, ha alcanzado la fase de clula B inmadura, que expresa en su superficie autntica mIgM, con una determinada especificidad. Estas B inmaduras son de vida corta (3-4 das), y durante este perodo se produce el proceso de seleccin negativa: una parte de los linfocitos poseen mIg con especificidades autorreactivas, es decir, que reconocen molculas del propio organismo (auto-antgenos). En respuesta al auto-antgeno la clula B inmadura hace un intento de corregirse, induciendo una reordenacin secundaria de genes de cadena L: - La unin auto-antgeno vs. mIgM desencadena la detencin de la diferenciacin y al mismo tiempo mantiene o eleva los niveles de expresin de los genes RAG-1 y RAG-2, para probar suerte con otra reordenacin de segmentos gnicos de cadenas ligeras. - Las clulas B inmaduras que hayan logrado reordenaciones que generen mIgM no auto-reactivas (bien sea en el primer intento o en esta fase de correccin de ltima hora) siguen adelante en su maduracin. - En cambio, las clulas B inmaduras que en esta segunda oportunidad que supone la correccin de cadenas L sigan siendo auto-reactivas, entran en apoptosis y mueren, o bien quedan anrgicas. Estamos, pues, ante un mecanismo para la evitacin de clones de clulas B autoinmunes. - Al madurar, los linfocitos B coexpresan mIgM + mIgD en sus superficies. Salen de la mdula sea a travs del seno venoso (ayudados por las clulas adventicias del estroma) y emigran a los rganos linfoides secundarios (perifricos), donde aumentan el nivel de mIgD, de modo que ste llega a superar en 10 veces la cantidad de mIgM. Estos linfocitos B maduros vrgenes se pueden alojar temporalmente en dichos rganos, debido a que expresan receptores de alojamiento ( homing) apropiados.

1.1.2.2. FASE DEPENDIENTE DE ANTGENO En la periferia, el linfocito B virgen puede encontrarse o no con el antgeno para el que son especficas sus inmunoglobulinas de membrana. 1. Si no encuentra su antgeno especfico, muere por apoptosis al cabo de unos pocos das o semanas (menos de un mes).

2. Si entra en contacto con su antgeno especfico, se convierte en linfocito B activado que se expande clonalmente y se diferencia en dos subclones: - Clulas plasmticas secretoras de anticuerpos: El linfocito B pierde su mIgD y experimenta un cambio de clase por un mecanismo de splicing diferencial. Adems, aumenta mucho la tasa de transcripcin de los genes reordenados, por lo que se producen y secretan grandes cantidades de Ac con la misma especificidad que las mIg del linfocito B progenitor. Las clulas plasmticas son clulas a trmino que ya no se diferencian ms, y mueren por apoptosis al cabo de unos das. - Clulas B cebadas de memoria: Las clulas B de memoria que quedan en los centros germinales de los rganos linfoides secundarios sufren hipermutacin somtica, por lo que va madurando la afinidad de sus mIg. Tienen vida larga (de meses a muchos aos) que esta en funcin de su mIgD: las cadenas pesadas delta parecen regular la persistencia de clulas B maduras de memoria en la periferia.

1.2. DESARROLLO DE LA RESPUESTA DE Ac. 1.2.1. MADURACIN DE LA AFINIDAD. El aumento de afinidad de los Ac T-dependientes se debe al cambio de IgM a IgG, puesto que no existe maduracin de la afinidad en la IgM. La maduracin de la afinidad se produce por HIPERMUTACIN SOMTICA en los genes recombinados de la regin variable (CDR). El grado de maduracin depende de la dosis de Ag suministrada , porque cuando la [Ag] es baja, se va a producir una seleccin de los clones con Rc de superficie de mayor afinidad por el Ag, y estos van a producir Ac de mayor afinidad. S la dosis es alta, no hay esta seleccin, y la maduracin y aumento de afinidad es menor. En la maduracin de la afinidad intervienen dos procesos: a) Produccin de clones de LB con mayor afinidad por ligeras modificaciones en las regiones CDR ocurridas tardamente, en la respuesta primaria frente a un Ag T-dependientes. b) Expansin selectiva de los clones de alta afinidad (LB memoria) provocada por el Ag. 1.2.2. MUTACIN Y PROGRESIN DE LA RESPUESTA INMUNE. La hipermutacin somtica es un hecho comn en los LB de memoria cuando son activados durante la respuesta T-dependiente. Afecta selectivamente a los genes de las Ig y es importante en la produccin de Ac de alta afinidad. Es un fenmeno normal y beneficioso, pero en ciertas ocasiones aparecen mutaciones que originan auto-Ac IgG de alta afinidad. 1.3. LOS MARCADORES DEL LINAJE B. En el camino de la maduracin, van encendiendo y apagando la expresin de ciertas protenas de superficie (con diferente CD), que permiten determinar en que estado de diferenciacin se encuentran las clulas.

Las clulas poco diferenciadas (pro-B) expresan el enzima Tdt. Los linfocitos B desde etapas de diferenciacin tempranas expresan molculas HLA de clase II que slo existen adems en clulas presentadoras de antgenos. Tambin, en todas las etapas del proceso de diferenciacin se expresa CD 19, que es el mejor marcador del linaje B. En la tercera etapa madurativa (pre-B) se comienza a expresar la Inmunoglobulina en superficie, aunque slo se completa en la ultima etapa de diferenciacin (clula B inmadura), con la expresin de IgM e IgD en superficie. Es tambin en esta ltima etapa de diferenciacin donde se aprecia la expresin de CD 20, que se pierde en el paso a clulas plasmticas Los linfocitos B inmaduros y maduros expresan CD21 que es a la vez receptor para complemento y para el virus de Epstein-Barr (EBV). Las molculas CD19 y CD20 son importantes en la proliferacin y activacin de los linfocitos B. Por ltimo, en los linfocitos B activados se enciende la expresin de la protena CD38 (marcador de estado de activacin que tambin tienen los linfocitos T activados). Otra molcula accesoria fundamental en los linfocitos B es CD40, puesto que cuando esta molcula se une a su ligando, da seales al linfocito B para que cambie de isotipo en su Inmunoglobulina.

Otra forma de seguir la maduracin de los linfocitos B es a traves de la expresin de los genes de la inmunglobulinas: a) Las clulas primordiales linfoides expresan MHC-II y desoxinucleotidil-transferasa terminal (TdT). Tambin son CD19+, CD24+. b) Progenitor de clulas B (pro-B): comienza el reordenamiento de los genes de las cadenas pesadas de las Ig. Aparece CD10, CD20, CD21, CD22, CD38 y CD32. c) Las clulas pre-B: - Expresan cadenas mu (IgM) en el citoplasma. Aqu, ya se ha producido la exclusin allica de los genes materno o paterno. - Se produce el reordenamiento de los genes de las cadenas ligeras . - Expresan cadenas mu en la membrana junto con los pseudogenes de las cadenas ligeras, en baja densidad. - Pierden los marcadores TdT; CD38 y CD10. d) Las clulas B inmaduras sintetizan cadenas ligeras kappa o lambda y pueden expresar IgM en la superficie. La clula B queda determinada a reconocer un tipo de Ag. Aparece CD23. e) Los LB maduros son IgM+, IgD+ en superficie.

f) Clulas B activada/blstica: Son IgM+, IgD- en superficie. g) Clulas de memoria: son IgM+, IgG+, IgA+ de membrana y no desarrollan aparato secretor. h) Clulas plasmticas: llevan Ig en el citoplasma y la secretan. El nmero de Ig de membrana disminuye o desaparece por completo. Aparece CD38 y PCA-1. La clula B inmadura que sintetiza IgM de superficie, cuando es estimulada (no por el Ag), se divide, diferencia y sintetiza IgM (clula B inmadura), y despus aparece la IgD (clula B madura). Hasta este punto, el proceso es independiente del Ag, pero el paso a clula plasmtica s es dependiente de Ag. La IgM/IgD/IgG o IgA de superficie tienen la misma especificidad por tener la misma regin variable, aunque en la IgG e IgA puede surgir diversidad adicional en un clon (mutacin somtica). Esta secuencia de aparicin se cumple en las Ig sricas del feto y recin nacidos : IgM es la primera que se sintetiza. IgA es la segunda en sintetizarse. IgG comienza a sintetizarse unas semanas antes del parto y alcanza los niveles de adulto despus de 12 aos de vida, mientras que la IgA tarda ms tiempo en alcanzar los valores normales. La IgG es la Ig con niveles ms altos en el feto, pero procede de la madre por va transplacentaria. 1.4. LINFOCITOS B CD5+. Durante el desarrollo fetal, a la semana 17 emigra a los ganglios linfticos fetales una primera poblacin de clulas B que son distintas a las estudiadas hasta ahora: - Poseen mIgM, pero presentan el marcador de superficie CD5+, que comparten con timocitos y clulas T. - Expresan inmunoglobulinas a partir de genes no mutados de lnea germinal. - Producen sobre todo IgM, pero tambin IgG e IgA, que se denominan anticuerpos naturales. Dichos anticuerpos son de baja avidez, pero curiosamente son polirreactivos, y responden bien a los antgenos timo-independientes (no requieren colaboracin de linfocitos T coadyuvantes, TH). - Se ha propuesto que sus posibles funciones podran ser el representar una primera lnea de defensa contra ciertos microorganismos, el de eliminacin de auto-componentes daados y la participacin en las redes idiotpicas. - El equivalente en ratn de estas clulas se denomina Ly-1+ - < 12% en sangre perifrica del adulto, pero en bazo, rganos linfoides embrionarios y sangre de cordn umbilical, son ms del 50% de los LB. - Son Ac polirreactivos que pueden ir dirigidos contra auto-Ag: DNA, Fc de Ig, protenas del citoesqueleto, tiroglobulina, insulina, etc. Estn en alta concentracin en el adulto y son caractersticos de enfermedades autoinmunes: artritis reumatoides, enfermedad de Graves-Basedow, diabetes mellitus tipo I. - Aumentado en leucemia linftica crnica. 1.5. LOCALIZACIN FINAL DE LOS LINFOCITOS B. a) Con respecto al resto de linfocitos:

- Bazo (folculos primarios y secundarios de la pulpa blanca de la zona marginal): 50%. - Ganglios linfticos (zona cortical). - Mdula sea: 75%. - Sangre perifrica: 10-15%. Las clulas plasmticas son poco frecuentes en sangre perifrica (<0.1% de los linfocitos circulantes). Normalmente estn en rganos linfoides secundarios (pulpa roja del bazo y mdula de los ganglios) y en mdula sea. b) Con respecto a los LB (% de LB repartido por rganos): - Bazo: 27%. - Ganglios linfticos: 23%. - Sangre perifrica: 20%. - Conducto torcico: 18%. - Mdula sea: 6%. - Amgdalas: 6%. - Timo. 1-2%?. 2. ONTOGENIA DE LOS LINFOCITOS T. El TCR presenta dos funciones principales segn la fase de desarrollo en que se encuentre la clula dentro del linaje de los linfocitos T: 1. Durante la maduracin de los timocitos en el timo, participa en la seleccin tmica positiva y negativa. Slo llegan a madurar el 2% de los timocitos intracelulares que originan clulas restringidas a reconocer lo no-propio en el contexto del haplotipo MHC propio (autorrestriccin y autotolerancia). Una vez que el linfocito T ha madurado, emigra a la periferia, y entonces el receptor participa en el reconocimiento de antgenos, lo que desencadena un programa de activacin que lleva a la proliferacin y diferenciacin de las clulas T en dos subclones: uno de clulas efectoras, y otro de clulas de memoria.

2.

El proceso de reconocimiento vara segn el tipo de TCR: - TCR-2 (alfa/beta): se reconocen pptidos en el contexto del MHC clsico, y se requieren molculas coestimuladoras y cosealizadoras como CD4 (para linfocitos TH) o CD8 (para los linfocitos TC). La maduracin es intratmica y representan el 90-95% del total de los linfocitos T. - TCR-1 (gamma/delta): no se requiere MHC clsico, y no participan CD4 ni CD8. Estos LT que se diferencian en la mdula sea y/o en el timo, y van a recubrir las superficies epiteliales, aunque tambin se encuentran en sangre y ganglios linfticos. Son LT con actividad citoltica constitutiva, lo cual puede ser una primera lnea de defensa contra microorganismos al destruir clulas infectadas. El reconocimiento de del Ag es por interaccin protena/protena previo procesamiento del antgeno..

2.1. MADURACIN INTRATMICA. 2.1.1. FORMACIN DEL TIMO. El esbozo tmico se desarrolla a partir de la tercera bolsa farngea, que recibe a las clulas primordiales linfoides que llegan por va sangunea, de la mdula sea. Son suficientes con unas pocas clulas primordiales que llegan en oleadas y atradas por factores tmicos. Se ha demostrado que las clulas primordiales que rodean al esbozo tmico humano ya expresan el marcador pant-T y CD7 (marcadores de linaje T), PERO SE CREE QUE SIGUEN SIENDO PLURIPOTENCIALES. Las clulas primordiales se diferencian hacia clulas T bajo la influencia del microambiente epitelial de este rgano. Las clulas epiteliales especializadas de las reas perifricas (clulas nodrizas) contienen timocitos en vesculas intracitoplasmticas e intervienen en el proceso de adiestramiento tmico. Al nacer, los humanos tienen ya plenamente desarrollado el timo. 2.1.2. ESTRUCTURA GENERAL DEL TIMO. El timo es un rgano lobulado con formaciones corticales y medulares . La regin subcapsular esta colonizada por las clulas pre-T de la mdula sea, las cuales se desarrollan hacia linfoblastos grandes que proliferan y autorrenuevan, para dar los timocitos. - En su corteza encontramos slo timocitos en fases tempranas de su maduracin, junto con algunos macrfagos, dentro del estroma cortical a base de clulas corticales epiteliales. Los timocitos corticales representan el 85-90% de los timocitos que son muy sensibles a corticoides. - En la mdula encontramos timocitos en fases ms avanzadas de maduracin con clulas dendrticas y macrfagos, todos inmersos en un estroma medular a base de clulas epiteliales medulares. Los timocitos medulares abandonan el timo por las venulas postcapilares de la unin corticomedulares o por los vasos linfticos. Estas clulas poseen Rc de colonizacin que permiten su emigracin hacia reas especficas T-dependientes de los tejidos linfoides secundarios.

2.1.3. CAMBIOS FENOTPICOS DURANTE LA MADURACIN DE LAS CLULAS T. El primer marcador de superficie en aparecer es CD2 (marcador que caracteriza al linaje de T). Estas clulas CD2+ CD4- CD8- (dobles negativas) pueden escoger dos vas alternativas: 2.1.3.1. LA MAYORA DE LAS CLULAS VAN HACIA TCR-2 (alfa/beta). Son la mayora de los LT en tejidos linfoides secundarios y sangre perifrica. Hay una serie de modificaciones que se pueden resumir en tres estadios: a) Estadio I (timocitos precoces): - Expresan CD7,CD2,CD5,CD38 y Rc transferrina (CD71). - Los timocitos son CD3+CD4-CD8- y se situan cerca de la regin subcapsular. - El compromiso T de los timocitos precoces se pone de manifiesto por el reordenamiento de los genes beta del TcR. Si no se logran reordenaciones productivas, entran en apoptosis. Si la reordenacin es productiva, la cadena beta se asocia con la llamada cadena alfa sustitutiva (una especie de pseudoalfa, o cadena alfa de pre-T, que se abrevia pTalfa), generando el receptor pTalfa:beta (junto con CD3). - Este receptor pTalfa:beta induce la proliferacin celular, la coexpresin de CD4 y CD8 y la reordenacin de genes de cadenas alfa. b) Estadio II (timocitos intermedios): - Constituyen el 85% de los timocitos. Se trata de los pequeos timocitos dobles positivos, que dejan de dividirse. - Se caracterizan por presentar CD1, CD4 y CD8 (clulas dobles positivas), adems de los anteriores. Por tanto son clulas dobles positivas (CD3+CD4+CD8+) y se situan en la zona cortical. - Los genes alfa del TcR estn reordenados y se expresan en baja densidad, junto a CD3, en la membrana. - Estas clulas ya provistas del complejo receptor especfico van a ser sometidas, hasta la poca del nacimiento (en que alcanzan sus mximos niveles), a seleccin positiva y negativa c) Estadio III (timocitos maduros): - Presentan TCR2/CD3 en alta densidad, en la membrana y pierden CD1, CD38, Rc de transferrina. - Tambin hay diferenciacin de dos subclases de timocitos (CD4+ y CD8+) que son casi indistinguibles de los LT maduros. - Todas estas clulas expresan CD44 (interviene en la migracin y asentamiento en los tejidos linfoides perifricos).

2.1.3.2. LA MINORA VA HACIA TCR-1 (gamma/delta). - En la ontogenia, la recombinacin de los genes gamma preceden a alfa y beta de TCR2. - No hay expresin de CD1, CD4, CD8. - El producto final de esta va son TCR1/CD3 y no expresan CD4 y CD8. - Estas clulas se sitan en el epitelio de la epidermis y las mucosas y al activarse, pueden adquirir CD8 alfa/beta. Son los linfocitos intraepiteliales con funciones citotxicas. Se cree que tambin hay precursores procedentes de la mdula sea se pueden instalar en las mucosas y madurar fuera del timo, hacia TcR gamma/delta con CD8 alfa/alfa.

2.1.4. SELECCIN TMICA. En ambos procesos selectivos parecen jugar un papel importante las clulas del estroma tmico: clulas epiteliales tmicas, macrfagos y clulas dendrticas; todas ellas expresan en sus membranas grandes niveles de molculas MHC-I y/o MHC-II. Los timocitos inmaduros dobles positivos (CD4+ CD8+ TCR+ CD3+) interaccionan con estas clulas estromales, lo que conduce a la seleccin positiva y negativa. La

afinidad de la interaccin entre la clula T y la clula presentadora en el timo, va la interaccin TcR(MHC-pptido), es la que determina si una clula T ser seleccionada positiva o negativamente.

a) Hay una seleccin positiva de las clulas capaces de reconocer el MHC propio (educacin tmica) . En la seleccin positiva se da interaccin de los timocitos con clulas epiteliales corticales del timo (Las clulas corticales epiteliales van provistas de largos procesos de membrana que permiten contactos simultneos con varios timocitos). Sobreviven aquellas clulas que tengan TCR capaces de reconocer MHC-I o MHC-II de clulas epiteliales del timo. Con ello se garantiza la restriccin por propio haplotipo de las clulas T. Se produce una muerte programada (apoptosis) de las clulas que tienen baja afinidad por el MHC.

b) Hay una seleccin negativa (tolerancia central) de las clulas T que reaccionan contra los auto-Ag sobre las CPA. La seleccin es producida por las clulas entrelazadas y los macrfagos de la corteza profunda y mdula. Ello tiende a garantizar la propiedad de autotolerancia por eliminacin de los linfocitos T autorreactivos. Despus de esta fase se pierde CD4 o CD8 y se convierten en timocitos maduros positivos simples (slo el 5% de la poblacin total, el resto muere).

La seleccin positiva tambin regula otros dos fenmenos: - Regulacin de reordenaciones de cadenas alfa: la expresin en membrana del TCR no es suficiente para desconectar los genes de RAG y de TdT, de modo que contina la reordenacin de segmentos gnicos de cadenas alfa, pudindose dar el caso de que una misma clula pueda tener dos tipos de TCR que tienen en comn sus cadenas beta, pero que difieren en las cadenas alfa, si bien slo uno de ellos ser funcional. - Regula la expresin del correceptor (CD4 o CD8) en las clulas maduras (es decir, el hecho de que dejan de ser doble positivas para convertirse en CD4+ o CD8+). Ello depende a su vez de la especificidad del TCR por la clase de MHC (I o II). 2.1.5. LOCALIZACIN DE LOS LINFOCITOS T. Los linfocitos vrgenes emigran desde los rganos linfoides primarios a los secundarios, donde pueden reconocer los Ag. Los linfocitos estimulados evolucionan a clulas efectoras y clulas de memoria. En estas clulas se van a producir cambios epigenticos en el aparato de activacin, maquinaria efectora, y capacidad de reconocimiento del Ag. Estos linfocitos T se diferencian en las zonas T-dependientes de los rganos linfoides perifricos. Estos LT son CD45+ (protena fosforilasa-kinasa), en sus dos isoformas: - CD45 RA+/RO- (clulas vrgenes): son ms abundante en la sangre del neonato. - CD45 RA-/RO+ (clulas efectoras/memoria): son la mayora de los LT de sangre perifrica. Estas clulas CD45 RO+ participan en la respuesta secundaria y en la produccin de citocinas . Dentro de este grupo se pueden distinguir dos poblaciones, Th1 y Th2, cuya produccin est regulada el microambiente de los rganos linfoides secundarios (no es al azar). Los linfocitos T se distribuyen en el: - Timo: ms del 75% de los linfocitos totales.

- Bazo (zona periarteriolar de la pulpa blanca): 20-30%. - Ganglio linftico (paracortical o cortical profunda): 30-40%. - Sangre perifrica: 70-80%: - LT CD4+: (uniformemente distribuidos): 50-60%. - LT CD8+: (pocos en ganglios y abundante en bazo): 20-30%. 2.2. LINFOCITOS T gamma/delta. Constituyen del 5 al 10% de los T perifricos, y del 1 al 3% de los residentes en ganglios y otros rganos linfoides. Sin embargo, son muy abundantes en la piel, y los epitelios intestinal y pulmonar. - Clulas dendrticas epidrmicas (DEC). Dichas clulas expresan los marcadores CD2, CD3, pero no CD4 ni CD8. Proceden del timo. - Linfocitos intraepiteliales (IEL) que se encuetran en el epitelio intestinal. Expresan CD3 y CD8, pero carecen de CD2 (que como vimos, es el marcador de linaje de las clulas T maduradas en el timo). Es probable que no procedan del timo, sino de la mdula sea. Estos linfocitos epiteliales no recirculan, sino que son residentes fijos en esos tejidos epiteliales. Lo curioso es que en cada tipo de epitelio la poblacin residente de T gamma/delta muestra un repertorio muy limitado de reordenaciones de segmentos variables; adems proceden de oleadas distintas surgidas durante la vida fetal y post-fetal. - Durante la vida fetal hay dos oleadas principales. Ambas oleadas usan la misma regin Jgamma y emplean el mismo tipo de cadena delta. A diferencia de lo que ocurre con las alfa/beta, no hay adicin de N-nucletidos (no hay actividad de la desoxinucleotidil-transferasa terminal). - Tras las oleadadas discretas de linfocitos epiteliales tiene lugar una gran oleada continua en la que ya se usan ms tipos de segmentos Vgamma, y ya existe adicin de N-nucletidos. Estos son los linfocitos T gamma/delta que se localizan en tejidos perifricos. Pero an empleando mayor diversidad de receptores, exhiben una gama limitada, preparada para detectar slo cierto tipo de antgenos. El papel y significacin de estos enigmticos linfocitos T gamma/delta no esta claro actualmente. Puede que estos linfocitos sean parte de una lnea de defensa inespecfica. Se ha sugerido que pueden representar el nivel ms temprano y primitivo en la evolucin de la inmunidad especfica mediada por clulas. Estas T se habran especializado en reconocer y combatir patgenos que entran por piel o por intestino.