MANUAL DE PRCTICAS

PRCTICA DE LABORATORIO Nro. 03

RECONOCIMIENTO DE BIOMOLCULAS ORGNICAS (GLCIDOS, PROTENAS, LPIDOS) 21 1. INTRODUCCIN:
La materia orgnica que forma parte de la vida est constituida principalmente por glcidos, y gua en lpidos, se forma protenas, En la la en vitaminas presente protenas para ello cidos nucleicos.

realizar cualitativa

determinacin de glcidos, lpidos y diversas muestras biolgicas utilizando determinados las indicadores caractersticas qumicos que al reaccionar con ellas demostrarn peculiares por las cuales se determinar la presencia o no de dichas biomolculas orgnicas.

2. OBJETIVOS:

Determinar cualitativamente la presencia de glcidos reductores y no reductores en muestras biolgicas. Reconocer cualitativamente la presencia de lpidos. Determinar cualitativamente la presencia de protenas en muestras biolgicas.

3. PARTE TERICA:
3.1. GLCIDOS:
Los glcidos o carbohidratos son molculas formadas por C, H,O; en una proporcin 1:2:1 respectivamente, donde los tomos de carbono estn unidos a radicales hidroxilo o alcohol (-OH) y a radicales hidrgeno (H). En todos los

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glcidos siempre hay un grupo carbonilo, que puede ser un grupo aldehdo (CHO) o un grupo cetona (-CO), pudiendo definirse a los glcidos como polihidroxialdehidos (aldosas) o polihidroxicetonas (cetosas). Los glcidos se clasifican segn su tamao molecular, desde los ms pequeos o simples: Monosacridos ( glucosa, galactosa, fructuosa y manosa) que se caracterizan por ser no hidrolizables; los intermedios u oligosacridos (disacridos como maltosa, sacarosa, lactosa), y las largas molculas llamadas polisacridos (almidn, glucgeno, celulosa). Los monosacridos son slidos, cristalizables, de sabor dulce, solubles en agua, no se hidrolizan. Debido a la presencia del grupo carbonilo los monosacridos poseen carcter reductor. Esta propiedad se emplea como mtodo de reconocimiento que permite detectar su presencia en una muestra (Reactivo de Benedict y Fehling). Los monosacridos son reconocidos especficamente por el reactivo de Fehling A y B. Se dice que un glcido es reductor cuando tiene el carbono anumrico libre, es decir, cuando su OH est intacto, sin formar ningn enlace, esto slo es vlido para monosacridos ( que siempre sern reductores por no estar formando enlaces, y por tanto tener dichos carbonos libres) y disacridos (que podrn serlo o no, dependiendo de en qu carbono se enlacen); los polisacridos no son reductores por regla general. Los glcidos con estructuras qumicas que incluyen un tomo de carbono anomrico libre (tal como glucosa, maltosa, lactosa y fructosa) utilizan este extremo libre para reducir el oxgeno en una reaccin qumica mediante la donacin de electrones a la otra (unin) molcula. Otros azcares (tales como sacarosa) han cerrado estructuras qumicas, donde los tomos abiertos son utilizados para unir a la estructura en su conjunto y, por lo tanto, no tienen los electrones libres para donar a la molcula de unin. Debido a esto, la oxidacin no se reduce durante la reaccin.
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La determinacin de glucosa es de importancia mdica ya que niveles sanguneos alterados pueden ser signo de una enfermedad metablica comn conocida como diabetes mellitus. Por otra parte, el almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una reaccin qumica sino a la adsorcin o fijacin de yodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo cual slo ocurre en fro. Como reactivo se usa una solucin denominada lugol que contiene yodo y yoduro potsico.

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3.2.

LPIDOS:
Los lpidos son molculas orgnicas formadas principalmente por carbono e hidrgeno, y en menor proporcin oxgeno. Adems pueden contener tambin fsforo, nitrgeno y azufre. Es un grupo de sustancias muy heterogneas que slo tienen en comn que son insolubles en agua, pero solubles en solventes orgnicos como benceno, ter, cloroformo, etc. Cuando en su molcula contienen cidos grasos insaturados, las grasas se presentan como aceites, tal es el caso de los vegetales. Si contienen cidos grasos saturados dan lugar a grasas slidas o semislidas, como ocurre en los animales (sebos y mantecas). Desde el punto de vista nutritivo son la mayor fuente de caloras, siendo utilizadas como reserva energtica de uso no inmediato. Adems, son portadoras de vitaminas liposolubles (A, D, E, K) y contienen los llamados cidos grasos esenciales, de gran importancia para el buen funcionamiento del organismo. Algunos lpidos como el colesterol, forman parte importante de las membranas celulares. Los lpidos ms importantes en los seres vivos son los triglicridos y fosfolpidos (que contienen cidos grasos) y los esteroides (que no poseen cidos grasos en su composicin). Se puede reconocer a los lpidos por su incapacidad de solubilizarse en agua o en otros casos por la capacidad de algunos lpidos de saponificarse es decir formar jabones. Una prueba directa de presencia de lpidos es la prueba de Sudn III que es un tinte diazo del tipo lisoenzima (tinte soluble en grasa) usado para manchar de triglicridos en secciones congeladas, y algunos lpidos y lipoprotenas. Este tinte tiene el aspecto de cristales rojizos.

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Los cidos grasos del contenido del lpido, se mezclan con la solucin Sudan III, que permite diferenciar las grasas neutras que se tien de color amarillo, las grasas minerales son incoloras y las grasas cidas adquieren una coloracin roja.

3.3.

PROTENAS:
Estn formadas bsicamente por C, H, O y N, siendo el elemento caracterstico el N. Pueden contener adems azufre, y en algunos tipos de protenas otros elementos como fsforo, hierro, magnesio y cobre. Son las molculas orgnicas ms abundantes en las clulas, y son fundamentales para la estructura y funcin celular, incluso se puede decir que no existe vida sin protenas. Pueden considerarse como polmeros de unas pequeas molculas llamadas aminocidos, unidos entre s mediante enlaces covalentes llamados enlaces peptdicos. Una molcula proteica puede tener de 50 a miles de aminocidos. Las protenas estn bsicamente destinadas a proporcionar aminocidos con las que se construyen y reparan las estructuras propias de nuestro organismo. Las protenas son especialmente abundantes en alimentos de origen animal (carne, pescado, leche, huevos). Adems de su funcin eminentemente plstica o estructural tambin realizan otras: transportadora, enzimtica, hormonal, inmunolgica... La presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo contiene solucin alcalina de Biuret en acuosa (de NaOH o CuSO4

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KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un de complejo

coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no

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compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos (- CONH -) que se destruyen al liberarse los aminocidos, cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado.

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PARTE PRCTICA

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3.4.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1. Cmo determinar la presencia de glcidos reductores y no reductores en muestras orgnicas? 2. Cmo determinar la presencia de lpidos en muestras orgnicas? 3. Cmo se puede determinar la presencia de protenas en muestras orgnicas?.

3.5. HIPTESIS 1:

PLANTEAMIENTO DE LA HIPTESIS HIPTESIS 2: HIPTESIS 3:

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3.6. PROCEDIMIENTOS DE EXPLORACIN 3.6.1. Trabajo en equipos
Por equipos aseguren los siguientes materiales y sustancias/reactivos.

MATERIALES
06 Tubos de ensayo pirex de 13mm x 100 mm 01 gradilla para tubos de ensayo. 01 pinza para calentar tubos de ensayo. 01 Bagueta 01 vaso de precipitado de 250 ml . 01 Mechero de Bunsen. 01 trpode y rejilla de asbesto.

SUSTANCIAS/REACTIVOS
Glucosa u orina de paciente diabtico. Sacarosa o azcar domstico. Almidn o papa rallada. Aceite. Clara de huevo Reactivo de Fehling A y B HCl diuido. Bicarbonato. Reactivo de Benedict. Lugol. Reactivo Sudn III. Reactivo de Biuret. Vinagre o cido actico. Acetona. 1 caja de fsforos. Detergente. Escobilla para lavar tubos Plumn indeleble.

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Realizar los siguientes procedimientos:

EXPERIMENTO A. IDENTIFICACIN DE GLCIDOS REDUCTORES.

Los monosacridos y algunos disacridos (excepto la sacarosa) son glcidos reductores. Esto puede ponerse de manifiesto por medio de una reaccin redox llevada a cabo entre ellos y el sulfato de cobre (II). Las soluciones de sulfato de cobre son de color azul. Cuando reaccionan con el glcido reductor se forma xido de cobre (I), de color rojo. El cambio de coloracin evidencia, por tanto, la presencia de glcidos reductores. 1. En un tubo de ensayo depositar 3 ml de disolucin de glucosa al 1%. 2. Aadir con una pipeta de Pasteur 1 ml de Fehling A, que lleva sulfato de cobre (II). 3. Aadir con otra pipeta de Pasteur 1 ml de Fehling B, que lleva NaOH para alcalinizar el medio. 4. Calentar en bao de mara por 5 minutos y observar el resultado. 5. Repetir el experimento utilizando una disolucin de sacarosa al 1%. 6. Aadir HCl diluido a la sacarosa (agregar bicarbonato previamente para neutralizar). Agregar el reactivo de Benedict.
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EXPERIMENTO B. RECONOCIMIENTO DE POLISACRIDOS. (ALMIDN). El almidn en contacto con reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color azul-violeta caracterstico. No se trata de una verdadera reaccin qumica sino que se forma un complejo de inclusin al quedar el almidn atrapado entre las espiras de la molcula de almidn. 1. En un tubo de ensayo depositar 5 gotas de solucin de almidn. 2. Aadir cuatro gotas de reactivo de Lugol. 3. Observar los resultados. 4. Calentarlo suavemente a la llama del mechero y enfriarlo con el chorro directo del grifo; observar lo que ocurre. EXPERIMENTO C. RECONOCIMIENTO DE GRASAS (ACEITE). Los lpidos son insolubles en agua pero solubles en disolventes orgnicos como la acetona. Adems tien de rojo con el colorante Sudn III. 1. Depositar 2 ml de aceite en dos tubos de ensayo. 2. Aadir a uno de ellos agua y al otro 2 ml de acetona. 3. Agitar ambos tubos. El aceite junto con al agua formar una emulsin transitoria de pequeas gotitas o micelas. Dejar reposar y observar el resultado 4. A continuacin aadir 5 gotas de Sudan III y observar lo que sucede. EXPERIMENTO D. RECONOCIMIENTO DE PROTENAS. (ALBMINA). Las protenas producen una coloracin violeta roscea caracterstica con el sulfato de cobre (II) en medio bsico. Es la reaccin de Biuret y se debe a los enlaces peptdicos que unen los aminocidos, los cuales en presencia de un lcali forman el llamado complejo de Biuret que al reaccionar con el sulfato cprico da la coloracin violeta. 1. Depositar 3 ml de disolucin de albmina en un tubo de ensayo. 2. Aadir 3 ml de solucin de biuret. 3. Agitar y observa el resultado. 4. Agregar unas gotas de vinagre y observar.

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3.6.2. Trabajo individual
Observa minuciosamente los procesos anteriores para realizar los registros correspondientes.

Registra las observaciones a travs de fotografas o dibujos. Completa el cuadro con los datos obtenidos de la prctica experimental.
NRO. DE TUBO DE ENSAYO MUESTRA REACTIVO TIEMPO DE REACCIN COLOR A TEMPERATURA AMBIENTE. PRODUCTO COLOR AL INCREMENTAR LA TEMPERATURA OBSERVACIONES ADICIONALES

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Nro. 01

Nro. 02

Nro. 03

Nro. 04

Nro. 05

Nro. 06

Analiza los resultados obtenidos en los tubos de ensayo y responde lo siguiente: 1. Los productos obtenidos en cada uno de los tubos de ensayo, han permitido identificar una biomolcula especfica en cada caso. Cules son dichas

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biomolculas?, Cmo actuaron los indicadores para evidenciar su presencia en cada tubo?.

4. REFLEXIN
4.1. Qu funcin cumplen las biomolculas orgnicas: Glcidos reductores y no reductores, Lpidos y Protenas en los organismos vivos?

5. APLICACIN
Cules sern las aplicaciones biomdicas a partir del reconocimiento de las biomolculas en las diferentes muestras de materia viva?.

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6. REFERENCIAS Almudena Moreno, Jarillo (2009) Prcticas de Bioqumica. Innovacin y Experiencias Educativas ISNN 1988 6047. Alberts , B. (2004) Biologa Molecular de la Clula. 4 edicin, Ed. Omega. www.iesizpisuabelmonte.es Asociacin Universidad Privada San Juan Bautista Facultad de Ciencias de la Salud Escuela profesional de medicina humana Semestre (2013) Gua de prctica de Biologa Celular y Molecular De la Cruz Lazo, Jessie (2011) Gua de Prcticas: Biologa Celular y Molecular. Universidad Privada de Huancayo Franklin Roosevelt. Franco Navia, Jos (2010). Gua de Prcticas. Facultad De Ciencias De La Salud Carrera Profesional de Estomatologa Universidad Andina de Cusco. Recuperado el 03 de abril del 2014 desde: www.http://biologiageneralestomatologia

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