LABORATORIO 7: AMINOCIDOS Y PROTENAS.

Jessica Beltrn 1124564, jeka-beltran@hotmail.com Christian Andrs Zapata 1210315, cazs13@hotmail.com Santiago de Cali, Colombia

Departamento de Qumica, Facultad de Ciencias, Universidad del Valle Diciembre 14/2013

ABSTRACT En la prctica se tom el PH al acido amino actico con papel tornasol, y se hizo reaccionar con oxido de cobre; despus se separ una solucin de albumina de huevo en diferentes tubos de ensayo y se adicion a cada uno etanol, acido clorhdrico, acido ntrico la cual luego se calent, hidrxido de sodio al cual se le agreg formaldehido, sulfato de cobre y formol; se comprob el carcter acido de los aminocidos y se observo la formacin de aminocidos y protenas a partir de las distintas reacciones. KEY WORDS: clot, protein, reaction, filtration, amino acid. INTRODUCIN: Las protenas son biopolmeros compuestos de muchos aminocidos conectados unos con otros a travs de enlaces amida (peptdicos). Presentan diferentes papeles en los sistemas biolgicos. Algunas protenas son los componentes principales de las estructuras de los tejidos (musculo cabello, piel, uas). Otras transportan molculas de una parte a otra en un sistema vivo. Otras incluso actan como catalizadores para la gran cantidad de reacciones biolgicas que son necesarias para mantener la vida. [1] Las protenas fueron nombradas y descritas por primera vez por el qumico sueco Jns Jakob Berzelius en 1838. Sin embargo, el papel central de las protenas en los organismos vivos no se aprecia plenamente hasta 1926, cuando James B. Sumner mostr que la enzima ureasa es una protena. La primera secuencia de protenas que se descubri fue la de insulina por Frederick Sanger. Las primeras estructuras de protenas resueltas son la hemoglobina y la mioglobina, por Max Perutz y Sir John Cowdery Kendrew, respectivamente, en 1958. Las estructuras tridimensionales de ambas protenas fueron determinadas por anlisis de difraccin de rayos-x. [2]. Los aminocidos son las unidades qumicas o elementos constitutivos de las protenas; contiene aproximadamente 16% de nitrgeno. Los aminocidos se combinan para formar protenas del organismo. Todos los aminocidos componentes de las

Fig. 1. Estructura de una protena.

protenas son L-alfa-aminocidos. Por lo tanto, estn formados por un carbono alfa unido a un grupo carboxilo (COOH), a un grupo amino (-NH2), a un hidrgeno y a una cadena (habitualmente denominada cadena lateral o radical R) de estructura variable, que determina la identidad y las propiedades de cada uno de los diferentes aminocidos. [3].

aminocetico con 2 gotas de solucin acuosa de fenolftalena y no con tornasol como lo indic la gua, en un tubo de ensayo. En la segunda reaccin se mezclaron 0.3 g de cido aminocetico con 5 mL de agua en un tubo de ensayo, adicionalmente se aadi 1 g de xido de cobre (II) y se hirvi la mezcla para luego proceder a filtrar los residuos obtenidos y evaporarlos en bao mara. En la tercera reaccin se verti 1 mL de clara de huevo en 4 tubos de ensayo y se realizaron las siguientes pruebas: Tabla 1. Pruebas en 5 tubos de ensayo. Prueba Tubo ensayo 3 4 5 6 de

Fig.

2.

Estructura

general

de

un

aminocido.

Aproximadamente el 66% de los aminocidos producidos se utilizan en la industria de alimentos, el 30% como aditivos de piensos y el 4% restante en medicina y cosmtica as como material de partida en la industria qumica. Algunas aplicaciones de las protenas en la industria: pelcula, papel fotogrfico, pinturas, colas, calzados, alimentos, detergentes, fibras, medicinas; entre otras. PROCEDIMIENTO: Para estudiar las propiedades de los aminocidos y protenas se realizaron diversas reacciones basadas en la albmina. A continuacin se describe brevemente en que consisti cada reaccin: En la primera reaccin se mezcl 0.1 mL de solucin al 2% de cido

Calentar y medir temperatura Agregar 4 mL de etanol Aadir 5 gotas de HCl concentrado Aadir 5 gotas de cido ntrico concentrado Aadir 5 gotas de solucin concentrada de NaOH

Para la tercera reaccin se verti 1 mL de clara de huevo en 3 tubos de ensayo con los siguientes reactivos: al primer tubo se le aadieron 5 gotas de sulfato de cobre (II). Al segundo tubo de ensayo se le aadieron 5 gotas de solucin al 5% de acetato de plomo (II) y para el tercer tubo de ensayo no se realiz prueba ya que el reactivo (cloruro de mercurio) es altamente peligroso y cancergeno.

Para la cuarta reaccin se aadi 1 mL de clara de huevo y 0.6 mL de cido ntrico concentrado en un tubo de ensayo, se calent y seguidamente se le aadieron 10 gotas de NaOH. Para la quinta reaccin se mezcl 1 mL de solucin de clara de huevo con 1 mL de solucin al 10% de hidrxido de sodio y 5 gotas de sulfato de cobre (II) en un tubo de ensayo y posteriormente se calent. Para la sexta reaccin se mezcl 0.2 mL d solucin de clara de huevo con 1 gota de solucin diluida de formaldehdo y 2 gotas de cido sulfrico concentrado. RESULTADOS: I. cidez de los aminocidos:

Imagen 1. Cristales obtenidos al filtrar el exceso de xido de cobre. Tabla 2. Datos de filtracin de cristales formados en la reaccin. Elemento Papel filtro Papel filtro con precipitado Precipitado Masa 2,182 2,270 0,088

Despus de obtener el precipitado, se calcul su % de rendimiento:

III.

Coagulacin de la albmina:

Se encontr que la mezcla inicialmente era de color transparente y mantuvo su color luego de aadir la fenolftalena. II. Formacin de una sal compleja de cido aminocetico:

En un principio la solucin present coloracin transparente, luego de aadir el xido de cobre pas a color marrnnegro. Al hervir se formaron dos fases, una lquida y una slida; para obtener el precipitado (cristales azules, ver Imagen 1) en su forma ms pura se realiz una filtracin, los datos se muestran en la siguiente tabla:

Para el primer tubo se observ una coloracin blanco-lechoso. Luego de calentar la solucin, la temperatura marcada por el termmetro fue de 76 C y sta present coagulacin de color blanco. Para el segundo tubo se observaron 2 fases en la que una estaba la coagulacin de color blanco. Para el tercer tubo de ensayo se observaron 2 fases, una de color blanco-lechoso y otra en la que se form un coagulo de color blanco. Para el cuarto tubo de ensayo se observaron 2 fases, una de color blanco-lechoso y otra en la que se present un coagulo de color amarillo. Para el quinto tubo de ensayo se observa que la solucin toma una coloracin transparente y no se form coagulo. IV. Precipitacin de protenas con metales pesados:

Para el primer tubo de ensayo se observ una coloracin verde claro con

formacin de un coagulo de color turquesa. Para el segundo tubo de ensayo se observ un coagulo de color blanco en la solucin. V. Reaccin Xantoproteica:

Para esta reaccin se observ que cuando se aade cido ntrico concentrado la solucin toma un color amarillo, cuando se adicion NaOH se observaron 2 fases; una amarilla y otra de color naranja en forma de coagulo. VI. Reaccin de biuret:

Imagen 2. Reacciones de precipitacin de protenas con metales pesados, reaccin xantoproteica, reaccin de biuret y reaccin coloreada del formaldehido para protenas. DISCUSIN DE RESULTADOS: cidez de los aminocidos: En los resultados se encontr que el color de la solucin no cambi, para explicar esto se hace necesario tener en cuenta el pKa de la glicina ya que con este se puede deducir si la fenolftalena afect o no la reaccin. pKa 1 = 2,3 pKa 2= 9,4

Para esta reaccin se observ que inicialmente cuando se mezcl hidrxido de sodio con sulfato de cobre (II) la solucin tom una coloracin morada y al calentar la coloracin cambi a negro. VII. Reaccin coloreada del formaldehdo para protenas:

Inicialmente la solucin era de color transparente, al adicionar el formaldehdo no se observaron cambios de coloracin. Al aadir las gotas de cido sulfrico concentrado se form un precipitado blanco. A continuacin se muestran fotos de los resultados obtenidos durante este proceso:

Debido a que existe ms de un pKa, el compuesto posee carga neutra en su estructura, y por tanto el pI (punto isoelctrico) es equivalente al pH.

Imagen 1. Reacciones de acidez de aminocidos y coagulacin de la albmina.

El resultado anterior sugiere que el pH de la glicina es cido, esto es debido a que la fenolftalena al disolverse en un medio cido (glicina) permanece incoloro a su vez que es un cido dbil porque pierde cationes H+. Si se encontrar en un medio bsico cambiara a un color rosa o violeta.

Fig. 1. Estructura de la glicina. A continuacin se muestra las ecuaciones de grupos carboxilo y amino disociado en sus respectivos iones:

Fig. 2. Estructura de una amina. Formacin de una sal compleja de cido aminocetico: En esta reaccin se forma una sal llamada glicinato de cobre a partir de la glicina y el xido de cobre (II). La mayora de los iones metlicos reaccionan con donadores de electrones formando compuestos de coordinacin o complejos. La especie donadora (ligando) debe tener por lo menos un par de electrones no compartidos para formar el enlace. Un ligando que slo tiene un grupo donador disponible, como el amoniaco se denomina unidentado. Mientras que los que tienen dos grupos, como la glicina, se llaman bidentados. [3]

Ecuacin 1. Disociacin de iones de grupos carboxilo y amino. El grupo carboxilo se disocia en agua para producir un anin carboxilato y un ion hidronio (ver Ecuacin 2).

Ecuacin 2. Iones del cido carboxlico. Lo que hace que tenga el comportamiento cido se basa en dos razones: que el carbono carbonlico lleve una carga positiva significativa ( +), esto hace que se distribuya la carga entre los enlaces porque se da el desplazamiento una carga negativa en el tomo de oxgeno adyacente, que es exactamente lo que ocurre cuando se ioniza un protn a partir del grupo hidroxilo. La carga negativa se dispersa de forma equivalente sobre los dos oxgenos, de manera que en el ion carboxilato cada oxigeno sobrelleva solamente la mitad de la carga negativa. En cuanto al grupo amino, ste tiene un par de electrones no compartidos por parte del nitrgeno lo que hace que su comportamiento sea bsico.

Fig. 2. Reaccin de glicina y xido de cobre (II). Esta formacin de complejo neutro dada por la glicina y el oxido de cobre ( ) explica el cambio de coloracin de la solucin luego de ser sometida al calor, el color negro del precipitado indica el exceso de xido de cobre (II). La coloracin de los cristales formados luego de la filtracin. Coagulacin de la albmina: En la prueba 1 se form el coagulo de la albmina, esto es debido a un factor principal: al someter a una protena a altas temperaturas como sucedi en la

prctica, la protena se desnaturaliza, es decir, pierde la forma de su estructura terciaria y pasa de una forma enroscada a una forma desplegada. La hlice alfa se estira o despliega, por rompimiento de enlaces de hidrgeno. En la protena desnaturalizada ocurren cambios estructurales que afectan sus propiedades biolgicas, como la hormonal, enzimticas y la actividad inmunolgica. . Se produce una prdida de solubilidad, ya que se exponen grupos hidrofbicos que hacen insoluble la protena. La desnaturalizacin es generalmente un proceso irreversible, fuertemente endotrmico, que produce un aumento de la entropa o desorden del sistema. [10]

Fig. 4. Reaccin de albmina y etanol. Para favorecer el equilibrio hacia la derecha suele usarse uno de los reactivos en exceso (generalmente el alcohol) [11]. Este tipo de reaccin resulta de gran utilidad para modificar temporalmente, o proteger alguno de los grupos funciones, especialmente durante la unin controlada de los aminocidos para formar pptidos o protenas. [1] En la tercera prueba se encuentra que al adicionar el cido clorhdrico en la albmina este se coagula debido a que se genera una reaccin de formacin de sal, donde se protege al grupo cido (HCl) generando el aumento de los iones en la solucin, esto explica el color blanco del coagulo.

Fig. 5. Reaccin de albmina y HCl. En la cuarta prueba la coagulacin de la solucin fue dada por la nitracin electrofilia aromtica en donde el nucleofilo (nitrgeno) ataca al anillo sustituyendo uno de sus hidrgenos por nitrgeno. A continuacin se describe el mecanismo de reaccin:

Fig. 3. Proceso de desnaturalizacin de la estructura terciaria de una protena. En la segunda prueba ocurre la esterificacin del grupo carboxilo. Los cidos carboxlicos pueden transformarse directamente en steres al calentarlos con alcoholes en presencia de una cantidad cataltica de cido mineral (generalmente ). Esta reaccin forma agua como subproducto y es reversible [11]. A continuacin se muestra su ecuacin:

Fig. 6. Mecanismo electrfila a aromtica.

de

nitracin

El electrfilo es el ion nitronio, NO2+, que se genera del cido ntrico, por

protonacin y perdida de agua. Este ion genera un carbocatin intermediario, cuando este pierde un protn se genera el nitrobenceno como producto de sustitucin [12]. Este tipo de reaccin se caracteriza principalmente por el cambio de coloracin, en donde parte de ser incolora a ser de color rojizo o amarillo, ya que estos compuestos poseen una oxidacin muy txica.

SOLUCIN A LAS PREGUNTAS DE LA GUA: 1. En qu consiste la prueba de milln? Cuales protenas dan positiva esta prueba? Cul es la reaccin qumica fundamental? El reactivo de milln es una mezcla de nitrato mercuroso y mercurio en cido ntrico; que sirve para saber si existe tirosina en la solucin, si esto es as se genera un coagulo blanco que por calentamiento pasa al rojo carne. [4]. Es decir que esta prueba da positiva para las protenas que contienen el aminocido tirosina.

Fig. 6. Reaccin de albmina y cido ntrico. En la ltima prueba de esta secuencia de reacciones se da lugar a la formacin de sales a partir del componente cido de la albmina.

Fig.54. Reaccin qumica fundamental de

la prueba de milln.

Fig. 7. Reaccin de albmina e hidrxido de sodio. Precipitacin de metales pesados: protenas con

2. Por qu el acido ntrico colorea la piel de amarillo? Qu sucede en esta reaccin? Esto se debe a que ocurre una "reaccin xantoproteica". Ya que El cido ntrico, un oxidante fuerte. Lo que ocasiona que reaccione con grupos S-H de la metionina y puente S-S entre cistenas, formando nitro derivados lo cual se traduce en un color amarillento de la piel, que slo se ir cuando la capa de piel mude. 3. Describa el ensayo de la reaccin coloreada del formaldehido para protenas.

Reaccin Xantoproteica:

Reaccin de biuret:

Reaccin coloreada del formaldehdo para protenas:

Este ensayo constituye la formacin de una imina, esto se da por que la reaccionar una protena con el formol (formaldehido), se forma una protena ms compleja, ya que, el doble enlace del aldehdo se va a romper por accin de los hidrgenos del grupo amidas, de la protena (albumina), formando a si la imina correspondiente y agua, y esta protena se va manifestar de color. El procedimiento que describe esta reaccin es el siguiente: En un tubo de ensayo se ponen 0.2 mL de una solucin de clara de huevo y se aade una gota de solucin diluida de formaldehido. A continuacin se agrega con cuidado acido sulfrico concentrado, de tal forma que este forme una capa separada en el fondo del tubo. [5]. 4. Qu es una protena globular? Son molculas redondeadas y compactas generalmente solubles en agua. [6].

un ejemplo es la ovulina de la clara de huevo [1]. 5. Qu es el punto isoelctrico de una protena? El punto isoelctrico de una protena.es un pH en el cual la molcula de protena no lleva carga neta, ya que es ese pH en el que la protena es electroforticamente inmvil. [7]. El clculo de este est dado por:

6. Escriba formulas de los siguientes aminocidos: alanina, leucina, valina, prolina, fenilalanina, triptfano, cistena, arginina histidina, tirosina. Alanina:

Leucina:

Figura 4. Estructura general de una

protena globular.

Valina:

Estas protenas realizan funciones biolgicas dentro de las cuales estn: catalizadores biolgicos; mensajeros qumicos que regulan los procesos biolgicos, acarreadores de molculas pequeas de una parte a otra del organismo, como la hemoglobina que transporta el oxigeno en la sangre; actan como almacenes de alimentos;

Prolina:

Fenilalanina: Tirosina:

Triptfano: 7. Cmo se determina la presencia de azufre en las protenas? Se puede determinar mediante la reaccin de aminocidos azufrados, ya que se pone de manifiesto la presencia del azufre por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Esta reaccin da positiva, con aminocidos que presentan azufre en su estructura. Cuando se pone a bao mara, con el hidrxido de sodio se forma una precipitacin de tipo lechoso, cuando se agrega acetato de plomo se separa la fraccin que contiene azufre de la fraccin aminocida para reaccionar con el acetato de plomo, de tal forma que forme un precipitado de color caf oscuro-negruzco, esto indica la presencia de azufre en la protena. [8]. 8. Escriba las ecuaciones de las reacciones efectuadas durante el desarrollo de la prctica. Histidina: CONCLUSIONES:

Cistena:

Arginina:

BIBLIOGRAFA: [1]. HART, H. Qumica Orgnica. 12 Editorial. Mc Graw Hill. 2007. Pg. 290, 490, 491, 492, 493, 469, 502, 515. [2]. Historia de las protenas. Alimentos y Protenas. Consultado el: 11 de Diciembre 2013. Disponible en: http://alimentosproteinas.com/proteinas [3]. Phyllips A. Recetas nutritivas que curan Editorial Elliot Glass. 1998. Pg. 36. 4. Mtodos cuantitativos para la identificacin de aminocidos y protenas. Prueba de Milln. Consultado el: 11 de Diciembre 2013. Disponible en: http://tuylaquimica.files.wordpress.com/ 2012/02/reactivos-y-proteinas.pdf [5]. INSUASTY, B, RAMREZ, A. Aminocidos y protenas. Gua de Laboratorio de Qumica Orgnica. Universidad del Valle. [6]. Diccionarios Oxford Complutense. Biologa. Complutense S.A. 2004. Pg. 85 Ed.

[7]. J.G. Morris. Fisicoqumica para bilogos. Editorial Revert S.A. 2001. Pg. 163. [8]. Reconocimiento De Protenas. Uniqundio. Consultado el: martes 11 de diciembre de 2013. Disponible en: http://www.uniquindio.edu.co/uniquindi o/ntic/trabajos/10/davidyoscar/paginas/r ecprot.htm [3]. Reacciones de formacin de complejos. Consultado el: 11 de Diciembre 2013. Disponible en: http://www.uia.mx/campus/publicacion es/quimanal/pdf/8formacioncomplejos.p df
[10]. http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/protei nas/ [11]. http://objetos.univalle.edu.co/files/Acidos _carboxilicos_y_sus_derivados.pdf [12]. http://www.textoscientificos.com/quimica /aromaticos/sustitucion-aromatica