COLEGIO DE ESTUDIOS CIENTIFICOS Y TECNOLOGICOS DEL ESTADO DE CAMPECHE

ESPECIALIDAD: Biotecnologa

SUBMODULO: III Cultivo de vegetales utilizando herramientas biotecnolgicas obtienen y a dimita plantas in vitro.

ALUMNO: Gerardo Alexander Tzec Chan.

MAESTRO: Q.F.B. Francisco Montalvo Villaseor.

CUARTO SEMESTRE

Definicin de invernadero (invernculo)

Un invernadero es lugar cerrado, esttico y accesible a pie, que se destina a la produccin de cultivos, dotado habitualmente de una cubierta exterior translcida de vidrio o plstico, que permite el control de la temperatura, la humedad y otros factores ambientales para favorecer el desarrollo de las plantas.

Tipos de invernaderos

Puede intentarse una clasificacin segn diferentes criterios (por ej. materiales para la construccin, tipo de material de cobertura caracterstica, caractersticas de la techumbre, etc.) no obstante, se prefiere enumerar los ms importantes obviando algunas caractersticas para su clasificacin. Dentro de los tipos de invernaderos ms comunes en el mundo se encuentran:

1. Invernadero-tnel. 2. Invernadero capilla (a dos aguas). 3. Invernaderos en diente de sierra.

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4. Invernadero capilla modificado (tipo chileno). 5. Invernadero con techumbre curva. 6. Invernadero tipo parral almeriense. 7. Invernadero holands (tipo Venlo)

1. Invernadero-tnel Es difcil establecer una lnea divisoria entre lo que es un invernadero y un macrotnel, por no existir un parmetro definido. No obstante, se ha optado como medida de clasificacin el volumen de aire encerrado por cada metro cuadrado de suelo. En general, de acuerdo a diferentes opiniones al respecto, podemos definir como invernadero aquella estructura que supera los 2,75-3,00 m3/m2. Se trata de invernaderos que tienen una anchura y altura variable, encontrndose en el mercado modelos importados con las siguientes dimensiones:

Este tipo de estructura tiene algunas ventajas e inconvenientes: VENTAJAS Alta resistencia a los vientos y fcil instalacin (recomendable para productores que se inician en el cultivo protegido). Alta transmitancia de la luz solar. Apto tanto para materiales de cobertura flexibles como rgidos. DESVENTAJAS Relativamente pequeo volumen de aire retenido (escasa inercia trmica) pudiendo ocurrir el fenmeno de inversin trmica. Solamente recomendado en cultivos debajo a mediano porte (lechuga, flores, Frutilla, etc.).

2. Invernadero capilla (a dos aguas) Se trata de una de las estructuras ms antiguas, empleadas en el forzado de cultivos, muy empleados en nuestro pas, fundamentalmente en la zona de La Plata. La pendiente del techo (cabio) es variable segn la radiacin y pluviometra (variando normalmente entre 15 y 35). Las dimensiones del ancho, varan entre 6 y 12 m (incluso mayores), por largo variable. Las altura de los laterales varan entre 2,0-2,5 m y la de cumbrera 3,0-3,5 m (tambin se construyen ms bajos que los sealados, pero no son recomendables). La ventilacin de estos invernaderos en unidades sueltas, no ofrece dificultades; tornndose ms dificultosa cuando varios de estos invernaderos se agrupan formando bateras. VENTAJAS Construccin de mediana a baja complejidad. Utilizacin de materiales con bajo costo, segn la zona (postes y maderos de eucaliptus, pinos, etc.). Apto tanto para materiales de cobertura flexibles como rgidos. DESVENTAJAS Problemas de ventilacin con invernaderos en bateras. A igual altura cenital, tiene menor volumen encerrado que por ejemplos invernaderos curvos. Mayor nmero de elementos que disminuyen la transmitancia (mayor sombreo). Elementos de soportes internos que dificultan los desplazamientos y el emplazamiento de cultivos.

3. Invernaderos en dientes de sierra Una variacin de los invernaderos tipo capilla, que se comenz a utilizar en zonas con muy baja precipitacin y altos niveles de radiacin, fueron los invernaderos a una vertiente. Estos invernaderos, contaban con una techumbre nica inclinada en ngulos que variaban entre 5 y 15 (orientados en sentido este-oeste y con presentacin del techo hacia la posicin del sol norte para el hemisferio sur-). El acoplamiento lateral de este tipo de invernaderos dio origen a los conocidos como dientes de sierra. La necesidad de evacuar el agua de precipitacin, determin una inclinacin en las zonas de recogida desde la mitad hacia ambos extremos.

VENTAJAS Construccin de mediana complejidad. Excelente ventilacin (lo que no plantea las limitantes del tipo capilla, en cuanto a la conformacin de bateras). Empleo de materiales de bajo costo (segn zonas). DESVENTAJAS Sombreo mucho mayor que capilla (debido a mayor nmero de elementos estructurales de sostn).Menor volumen de aire encerrado (para igual altura de cenit) que el tipo capilla. 4. Invernaderos tipo capilla modificado Se trata de una variante de los tipos capilla (muy utilizados en la V regin de Chile, y promovidos por el Programa Hortalizas del INIA), muy utilizados en nuestro pas en la provincia de Corrientes. La modificacin (respecto al capilla) consiste en el ensamble a diferentes altura de cada cabio, lo que permite generar un espacio para una ventana cenital (lucarna). Las dimensiones ms comunes de estos invernaderos son: Ancho de cada mdulo: 6,0 m. Altura lateral: 2,4 m. Altura cenital: 3,6 m. Abertura cenital (lucarna): 0,3-0,5 m. Los postes se plantas cada 2,0 m (tanto en el lateral como en la parte central), utilizndose postes sulfatados o bien, impregnados con brea al menos en los 0,400,60 m que van enterrados). VENTAJAS Construccin de mediana complejidad. Excelente ventilacin (al igual que el diente de sierra), siendo muy adecuada para la conformacin de bateras. Empleo de materiales de bajo costo (segn zonas). DESVENTAJAS Sombreo mayor que capilla (debido a mayor nmero de elementos estructurales de sostn) pero menor que diente de sierra. A igual altura cenital, tiene menor volumen encerrado que por ejemplos invernaderos curvos. Elementos de soportes internos que dificultan los desplazamientos y el emplazamiento de cultivos.

5. Invernaderos con techumbre curva Este tipo de invernaderos, tienen su origen en los invernaderos-tneles. Por lo comn, son de tipo metlicos (caos de 2a 2,5 de dimetro bien p erfiles triangulares con hierro redondo trefilado de 8-10 mm de dimetro) o bien con techumbres metlicas y postes de madera. Dentro de este tipo de invernaderos, pueden encontrarse diferentes alternativas segn la forma que adopta el techo (i.e. circulares, semielpticos (medio punto)(Foto 4), ojivales, etc.). Las dimensiones ms comunes de estos invernaderos van de 6,0-8,0 m de ancho por largo variable. En la zona del cinturn hortcola de la ciudad de Santa Fe, existe una alternativa de muy bajo costo (ms prxima al tipo semielptico) construida con postes de madera y techumbre de madera arqueada o caa (Foto 5). Se trata de estructuras muy endebles y de muy baja altura, tornndose en una importante limitante para el clima de la zona. VENTAJAS Junto con los invernaderos tipo tnel, el de ms alta transmitancia a la luz solar. Buen volumen interior de aire (alta inercia trmica).Buen comportamiento (resistencia) a los vientos. Espacio interior totalmente libre (facilidad de desplazamientos, laboreo mecanizado, conduccin de cultivos, etc.) Construccin de mediana a baja complejidad (debido a la disponibilidad de los elementos prefabricados). DESVENTAJAS Tienen la misma limitante que el tipo capilla, cuando deben acoplarse en batera (de no poseer algn sistema de ventilacin cenital). La limitante antes sealada, plantea la necesidad de no superar los 25-30 m (de invernaderos acoplados), debido a las dificultades para ventilacin. 6. Invernadero tipo parral (almeriense) Son invernaderos originados en la provincia de Almera (Espaa), de palos y alambres, denominados parral por ser una versin modificada de las es tructuras o tendidos de alambre empleados en los parrales para uva de mesa. En nuestro pas, este tipo de invernadero tuvo su mayor difusin en la provincia del NOA (particularmente Salta). Actualmente existe una versin moderna a los originales, que se construyen con caos galvanizados como sostenes interiores, permaneciendo el uso de postes para los laterales de tensin o an, siendo reemplazados tambin stos por muertos enterrados, para sujecin de los vientos constituidos por doble alambre del 8. Estos invernaderos suelen tener una altura en la cumbrera de 3,0 a 3,5 m, la anchura variable, pudiendo oscilar en 20 metros o ms por largo variable.
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La pendiente es casi inexistente, o bien (en zonas con pluviometra de riesgo) suele darse 10-15, lo que represente altura de los laterales del orden de 2,0-2,3 m.. Se ventila solamente a travs de las aberturas laterales. En la techumbre slo se utiliza un doble entramado de alambre, por entre el cual se coloca la lmina de polietileno, sino otra sujecin. VENTAJAS Gran volumen de aire encerrado (buen comportamiento segn la inercia trmica). Despreciable incidencia de los elementos de techumbre en la intercepcin de la luz. Aun tratndose de una estructura que ofrece alta resistencia a los vientos, es poco vulnerable por el eficiente sistema de anclaje. DESVENTAJAS Deficiente ventilacin. Alto riesgo de rotura por precipitaciones intensas (escasa capacidad de drenaje). Construccin de alta complejidad (requiere personal especializado). En zonas de baja radiacin, la escasa pendiente del techo representa una baja captacin de la luz solar. 7. Invernadero tipo Venlo (holandes) Son invernaderos de vidrio, los paneles descansan sobre los canales de recogida del agua pluvial. La anchura de cada mdulo es de 3,2 m y la separacin entre postes en el sentido longitudinal es de 3 m. Estos invernaderos carecen de ventanas laterales (puede ser debido a que en Holanda no existen demasiadas exigencias en cuanto a ventilacin). En vez, tiene ventanas cenitales, alternadas en su apertura (una hacia un lado y la siguiente hacia el otro) cuyas dimensiones son de 1,5 m de largo por 0,8 m de ancho. VENTAJAS El mejor comportamiento trmico (debido al tipo de material empleado: vidrio, y actualmente materiales rgidos). Alto grado de control de las condiciones ambientales. DESVENTAJAS Alto costo. La transmitancia se ve afectada, no por el material de cobertura, sino por el importante nmero de elementos de sostn (debido al peso del material de cubierta. Al tratarse de un material rgido, con duracin de varios aos, resulta afectada su transmisibilidad por polvo, algas, etc.

Condiciones y Estructuras La eleccin de un tipo de invernadero, es decir de su estructura, est en funcin de una serie de factores o aspectos tcnicos: Tipo de suelo. Se deben elegir suelos con buen drenaje y de alta calidad aunque con los sistemas modernos de fertirriego es posible utilizar suelos pobres con buen drenaje o sustratos artificiales. Topografa. Son preferibles lugares con pequea pendiente orientados de norte a sur. Vientos. Se tomarn en cuenta la direccin, intensidad y velocidad de los vientos dominantes. Exigencias bioclimticas de la especie en cultivo. Caractersticas climticas de la zona o del rea geogrfica donde vaya a construirse el invernadero. Disponibilidad de mano de obra (factor humano). Imperativos econmicos locales (mercado y comercializacin).

La estructura con la que se construir el invernadero consta de dos materiales: acero y hormign para los cimientos, as como tambin de policarbonato para la cubierta exterior. La estructura est basada en el sistema de prticos, constituyendo ocho iguales colocados paralelamente y unidos mediante correas. El prtico, como se ha comentado en el apartado anterior, es tipo inacral. Cada prtico consta de dos pilares con perfil HEB, siendo de un perfil superior los pilares de los prticos de los laterales puesto que han de aguantar ms que los centrales. Saliendo de cada HEB se encuentran los perfiles IPE que convergen en un punto ms cercano al pilar derecho, constituyendo as su particular asimetra para el mximo aprovechamiento del sol. Tambin se disponen de unas vigas IPE en los vanos dos, cuatro y seis para aguantar los aparatos de calefaccin. Algunos perfiles HEB e IPE estn sobredimensionados con tal de facilitar la unin por soldadura. Los pilares laterales disponen de un muro que arriostra a pandeo y que cubre hasta su altura mxima. Las correas que unen los prticos aguantarn su peso sobre ellos y son conformados en Z. Las medidas de la nave son las siguientes: Longitud: 35 metros Ancho: 11 metros Altura mxima: 4.5 metros Altura de pilares laterales: 3 metros

Con estas medidas quedara cumplimentado el real decreto 486/97 que especifica que la altura libre en un puesto de trabajo no puede ser menor de 2,5 metros. Etapas de Adaptacin

Etapa 0. Preparacin del material vegetal. Los factores que influyen sobre la calidad del explanto son 1) El tipo de rgano que sirve como explanto 2) La edad ontogentica y fisiolgica del mismo. Los rganos jvenes o bien rejuvenecidos son los que tienen mejor respuesta en el establecimiento que los obtenidos de materiales adultos. 3) La estacin en la que se colecta el material. Se recomienda la recoleccin durante la estacin estival o primaveral, cuando existe una brotacin activa de las yemas, el uso de yemas en dormicin ocasiona problemas de contaminacin. 4) El tamao. 5) El estado sanitario general de la planta donante. Es recomendable hacer crecer las plantas donantes en invernaderos con el fin de controlar el estado sanitario. Etapa 1. Establecimiento del cultivo El objeto de esta etapa es establecer cultivos viables y axnicos. El xito depende de: La edad de la planta donante La edad fisiolgica El estado del desarrollo Tamao del explanto Los materiales que muestran tener mayor capacidad regenerativa son los obtenidos de tejidos meristemticos jvenes, sean yemas axilares o adventicias, embriones o semillas en plantas herbceas y tejido meristemticos que como el cambium determinan el crecimiento en grosor de las plantas leosas. Las yemas adventicias (yemas formadas de novo) tienen una mayor tasa de variacin somaclonal en cultivo. Para asegurar las condiciones de esterilidad del cultivo se pueden hacer a priori anlisis que detecten patgenos (ELISA, PCR). En el momento de manejar el explante se procede a la desinfeccin del mismo (etanol, hipoclorito de Na). Una vez establecido el cultivo, la aparicin de hongos y bacterias puede hacer necesario la utilizacin de fungicidas y antibiticos.

Etapa 2. Multiplicacin El objetivo de esta etapa es mantener y aumentar la cantidad de brotes para los nuevos ciclos de multiplicacin sucesivos y poder destinar parte de ellos a la siguiente etapa de produccin (enraizamiento, bulbificacin, etc.) En esta etapa es conveniente evitar la formacin de callo para evitar la variacin somaclonal. En esta etapa los medios de cultivo, los reguladores del crecimiento como auxinas, giberelinas y citoquininas y las condiciones de crecimiento juegan un papel muy importante sobre la multiplicacin clonal de los explantos. Existen dos vas de regeneracin, ambas pueden darse directa o indirectamente a travs de la formacin de callo: Organognesis. Mediante la induccin de yemas axilares o adventicias. Embriognesis La embriognesis somtica es una va ms conveniente porqu permite saltar las etapas de formacin de yemas y enraizamiento, regenerando plantas de una forma ms rpida y eficiente, disminuyendo adems el riesgo de variacin somaclonal y adems disminuye costos para su implementacin a escala comercial. Los principales problemas de esta etapa son la vitrificacin y la acumulacin de compuestos fenlicos. Las condiciones culturales en las que crece el explanto son el resultado de la interaccin de tres factores: El estado del explanto o material vegetal (determinado en parte por el medio de cultivo) El recipiente de cultivo Condiciones del cuarto de cultivo La capacidad de respuesta de los explantos a un mismo medio de cultivo cambia con: El nmero de subcultivos El tipo de explanto subcultivado Mtodo de repique. Por esto mismo el medio de cultivo debe optimizarse a fin de lograr la mayor tasa de multiplicacin vegetativa. Comnmente se usa como medio basal el MS complejo (Murashige and Skool, 1962) suplementado con un 30% de sacarosa como fuente de carbono. A este medio se le adicionan auxinas y citoquininas. La etapa de multiplicacin comprende dos periodos

 Fase de induccin. Implica el empleo de altas concentraciones de reguladores del crecimiento (generalmente de auxinas ms que de citoquininas), para favorecer la desdiferenciacin Fase de multiplicacin propiamente dicha. Requiere un balance hormonal adecuado para favorecer los procesos de diferenciacin y multiplicacin celular(en este caso el sistema es ms dependiente de citoquininas).

Etapa 3. Enraizamiento y aclimatacin En esta etapa se produce la formacin de races adventicias ms fcilmente en las herbceas que en las leosas dada su limitada capacidad rizognica. Puede realizarse el enraizamiento in vitro o ex vitro. In vitro: Sustrato: medio solidificado con agar, perlita o vermiculita humedecidos en medio nutrtivo o H2O Auxinas: promueven rizognesis a concentraciones elevadas. La ms utilizada es el IBA (cido 3-indolbutrico) a concentraciones de 1-10 M unas pocas horas (altas concentraciones de auxinas pueden inducir la formacin de callo por lo que para cada cultivo es necesario optimizar un protocolo de rizognesis). Posteriormente se transfieren los vstagos a un medio sin reguladores de crecimiento para permitir el desarrollo de las races. Aproximadamente a los 20 das se observan una cantidad adecuada de races funcionales que permiten que se contine con la etapa de aclimatacin.

Ex vitro: Permite enraizamiento y aclimatacin simultaneamente. Sin embargo el estrs debido a la evapotranspiracin acelerada de las plantas en las primeras etapas del transplante pueden reducir mucho se supervivencia. Se utilizan distintos sustratos, mezclas de tierra y arena y/o abonos que convienen que estn esterilizados. La aclimatacin debe llevarse a cabo en invernaderos o cmaras con temperatura y humedad relativa moderadas

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IDENTIFIQUE Y CONTROLE LOS REGISTROS NUTRICIONALES DEPENDIENTE DE LA ESPECIE VEGETAL A TRATAR. CAA DE AZUCAR El objetivo de este trabajo fue determinar efectos del lombricompuesto como sustrato, en adaptacin de plantas micropropagadas de caa de azcar en condiciones de invernadero. El lombricompuesto se obtuvo de deyecciones de la lombriz roja californiana, Eisenia foetida, alimentada con estircol bovino descompuesto. Las plantas micropropagadas de NA 63-90 se obtuvieron del meristema apical con dos o tres primordios foliares, incubado en MS (1962) modificado. Los plantines setrasplantaron a bandejas de plstico de 72 celdas con los siguientes tratamientos en %: T1: 0 lombricompuesto +100 tierra; T2: 20 lombricompuesto + 80 tierra; T3: 40 lombricompuesto + 60 tierra; T4: 60 lombricompuesto + 40 tierra; T5: 80 lombricompuesto +20 tierra y T6: 100 lombricompuesto + 0 tierra. A los 60 das, 24 plantas por tratamiento se llevaron a macetas de plstico (9,5 x 10 cm). Cada 20 das se evalu longitud de races, nmero y altura de plantas. El diseo experimental fue totalmente al azar, con 5 repeticiones. Para la obtencin del humus de lombriz se trabaj con la lombriz roja californiana, Eisenia foetida, y como alimento se utiliz estircol bovino previamente descompuesto durante dos meses. La composicin qumica de este lombricompuesto es la siguiente: N: 1,75 %; P: 2,4 %; K: 3,5 %; M.O: 47 %; pH: 6,4. El material vegetal utilizado fueron plantas de caa de azcar de la variedad NA 63-90, obtenidas por micropropagacin en el Laboratorio de Cultivo de Caa de Azcar. Para la multiplicacin in vitro, se us como explante inicial el meristema apical con dos o tres primordios foliares, incubado. Las plantas obtenidas in vitro se trasplantaron a bandejas de plstico de 72 celdas con los siguientes tratamientos: T1: 0% humus de lombriz +100 % tierra T2: 20 % de humus de lombriz + 80 % tierra T3: 40 % humus de lombriz + 60 % tierra T4: 60 % humus de lombriz + 40 % tierra T5: 80 % humus de lombriz + 20 % tierra T6: 100 % humus de lombriz + 0 % tierra A los 60 das se pasaron a macetas de plstico de 9,5 x 10 cm. Se emplearon 24 macetas (1 planta / maceta) por tratamiento. El diseo experimental empleado fue factorial totalmente al azar, con 5 repeticiones. Los factores fueron: tratamiento y tiempo (cuatro fechas de medicin). Cada 20 das se evalu nmero, altura de plantas (desde cuello hasta longitud final de la hoja ms desarrollada) y longitud
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de races. Se realizaron contrastes polinomiales para determinar la tendencia en el tiempo. Se realiz anlisis de la varianza. En este trabajo se eligi el lombricompuesto o humus de lombriz como componente de la mezcla del sustrato porque rene estos requisitos: sirve de sostn a la planta, permite el intercambio de aire, facilita la absorcin de agua por las races y el drenaje, favorece la nutricin y en consecuencia, el crecimiento de la planta. Segn la bibliografa consultada, existen pocos antecedentes de trabajos realizados sobre el uso de lombricompuesto como sustrato para la aclimatacin de plantas micropropagadas. Tampoco hay referencias sobre el uso de lombricompuesto como sustrato en caas micropropagadas. Respecto de esto, para favorecer la adaptacin de plantas de caa de azcar provenientes de micropropagacin, evaluaron el uso de la zeolita ms cachaza como sustrato. Por otra parte los resultados obtenidos por Medina et al. (2003) muestran el aporte de importantes cantidades de macro y micronutrientes en la composicin de lombricompuesto de distinto origen. Como as tambin se determin la presencia de bacterias fijadoras de nitrgeno (Medina et al., 2001). En la etapa de aclimatacin es fundamental que los plantines sean de buena calidad, porque de ello depende el porcentaje de supervivencia, la velocidad de crecimiento y la produccin final de estos en la fase de campo. La aireacin del suelo es necesaria para favorecer la mxima absorcin de nutrientes por las races. Un suplemento inadecuado de oxgeno influencia la absorcin de los elementos esenciales para el crecimiento como N, P, K, Ca, Mg, Cl, B, Zn, Cu, Mn e Fe. Por tal razn, estos efectos sobre el crecimiento tambin estn estrechamente relacionados con la composicin qumica del tipo de lombricompuesto usado que contiene en este caso alto % de N (1,75), P (2,4), K (3,5) (Medina et al., 2003), nutrientes fundamentales para el desarrollo de la caa de azcar. CONCLUSIONES El uso de humus de lombriz, como componente del sustrato utilizado en invernculo, en la aclimatacin de plantas micropropagadas de caa de azcar, favoreci el crecimiento en longitud de las races y nmero final de plantas. No se alcanz la misma respuesta con respecto al crecimiento en altura de la parte area. Desde el punto de vista de la eleccin del sustrato, se logr la adaptacin del material obtenido por micropropagacin porque se alcanz un crecimiento autotrfico. En la adaptacin de plantas micropropagadas de caa de azcar, el lombricompuesto puede ser usado en diferentes proporciones con resultados satisfactorios.

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Bibliografa

Alpi, A.; Tognoni, F. 1991. Cultivo en Invernadero. Ediciones Mundi-Prensa. Madrid. Espaa. Bernat Juanos, C.; Vitoria, J. J. A.; Martnez Ros, J. 1990. Invernaderos: Construccin, manejo, rentabilidad. Editorial Aedos. Barcelona. Espaa. Baixauli, C. 1996. Aspectos prcticos del control ambiental para hortalizas en invernadero. Ed. Fundacin Cultural y de Promocin Social. Caja Rural Valencia. Daz, L.; Sopena, R.; Rago, A. 2002. Implantacin de semilleros de caa de azcar. Revista Horizonte Agroalimentario. Ediciones Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria ( INTA),Vol.6:13-14. Serrano, Z. 1983. Invernaderos. Instalacin y manejo. Ed. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentacin. http://www.fca.unl.edu.ar/intensivos

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