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3B 2
GUIA DE PRACTICAS
Unidad acadmica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ASIGNATURA. : BIOQUIMICA I

Autor:

F CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

INTRODUCCION
La bioqumica , esencialmente estudia la base molecular de la vida . La clula es un sistema
muy complejo y altamente organizado, constitudo fundamentalmente por determinadas
estructuras celulares que forman unidades especficas que reciben el nombre de organelas.,
las reacciones que ocurren en ella y que son catalizadas por las enzima,

constituyen el

metabolismo
El plan general de la gua de prctica contempla la referencia a los fundamentos tericos de
la qumica y metabolismo de las biomoleculas y bioelementos en estudio. Debido a que el
alumno deber presentar un

informe para cada prctica, se describe el anlisis en una

manera lo ms completa posible, con la finalidad de que el alumno tenga un amplio margen
de independencia, y facilitar el desarrollo de competencias en el mismo. Se enfatiza acerca
de la finalidad del anlisis, con lo que se pretende re forzar la enseanza de la materia.
Las prcticas se llevarn a cabo en equipo, lo que posibilita la participacin armnica de los
alumnos. La capacidad de liderazgo se utilizar en forma ptima para realizar los diversos
pasos de la prctica.

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I. PRACTICA N 1
1. AGUA. DETERMINACIN DEL PK
11. Marco terico.
Diversas son las definiciones que pueden proponerse para el concepto de Bioqumica,
pero, como Ciencia de la Vida que es, empieza a mostrar su complejidad y relatividad
desde el primer momento en que intenta ser definida. Algunos la definen como la ciencia
que estudia los constituyentes qumicos de los seres vivos, sus funciones y
transformaciones; otros la involucran, como la ciencia que usa el lenguaje molecular
para estudiar la composicin qumica, la conformacin espacial y la funcin de los seres
vivos; la Real Academia Espaola la define como parte de la qumica que estudia la
composicin y transformaciones de los seres vivos. En cualquier caso, lo que queda claro
en las distintas definiciones ,es que la Bioqumica puede y debe ser considerada como la
Ciencia de la Vida.
El agua es el compuesto ms abundante en los organismos vivos. Sus diversas e
importantes propiedades biolgicas son el resultado de sus propiedades fisico qumicas,
tales como las fuertes atracciones intermoleculares en forma de puentes de hidrgeno,
entre molculas de agua vecinas. Su polaridad covierte al l agua en el disolvente
universal para muchos compuestos inicos y molculas neutras. El agua se ioniza
ligeramente formando los iones hidronio[H3O+] e hidroxilo [OH-].
Los cidos se definen como dadores de protones y las bases como aceptores protones. La
tendencia de un cido, HA, a ceder protones se expresa por su constante de disociacin
K o mediante la funcin pK, definida como log K. El pH de una disolucin de un cido
dbil se halla relacionado cuantitativamente con su pK y con la relacin de las
concentraciones de sus especies dadoras y aceptoras de protones mediante la ecuacin
de Henderson-Hasselbalch.
1.2. Competencias.
Brinda al estudiante el fundamento formativo para adquirir el adecuado dominio de las
tcnicas experimentales, la familiaridad con los instrumentos de medida, y tambin
os fundamentos tericos para una correcta labor en el laboratorio de anlisis o control.
1.3. Materiales y equipos.
1.3.1. Reactivos .
a. Solucin de: cido actico 0.1N.
b. Acido Oxlico 0.1 M.
c. Acido benzoico 0.1M.
d. cido succinico 0.1 M.
e. Acido lctico 0.1 L.
f. Hidrxido de potasio 0.1 M y 0.2M.
g. Indicadores: rojo de fenol, rojo de metilo,fenoftaleina y azul de timol
1.3.2. Equipo y materiales.
a. Potenciometro.
b. Buretas de 25 mL; pipetas de 5 y 10 mL.

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c. Beaker de 50 mL
d. Soporte universal; pinzas de nueces, baguetas.
1.3.3. Acidos y sus respectivos pK.
ACIDO

PESO
MOL

pK

Pk1

Pk2

INDICADOR

COLOR del
INDICADOR
ACIDO
BASE

Actico

60.05

4.8

Azul Timol

Rojo

Amarillo

Benzoico

122.12

4.2

Rojo metilo

Rojo

Amarillo

Lctico

90.08

3.9

Rojo Fenol

Amarillo

Rojo

Fenolftaleina

Incoloro

Rojo

Oxlico

1.3

4.3

1.4. Procedimiento.
a. Depositar en un beaker de 100mL, 10 mL de cido actico 0.1, luego neutralizar
con una solucin de KOH 0.2 N. ( Adicionar II gotas de fenolftalena al 02% )
Anotar el nmero de mL. de KOH 0.2N gastados. Primer gasto.
b. A otra porcin de 10 ml de cido actico, adicionar la mitad de ml de KOH 0.2N
gastados en la anterior titulacin. ( Primer gasto ).
c. Medir el pH de la solucin del paso b.
1.5. Resultados.
El pH obtenido en el paso c, es el pK del cido actico.
1.6. Cuestionario.
a. Qu es el pK?. Importancia biolgica
b. Los amortiguadores fisiolgicos Cmo actan en el organismo?
c. Elabore un mapa conceptual de los transtornos del quilibrio cido bsico
d. En una acidosis respiratoria. Qu es lo ms importante? Restaurar el pH la
pCO2. Por qu?
1.7. Fuentes de Informacin.
a. Devlin Thoms
M.
Bioqumica con Aplicaciones Clnicas. Tomo I y II.
Barcelona. Edit. Revert Colombiana. S. 2000.
b. Luque L, Hermoza A. Biologa Molcular e Ingenieria Gentica. Barcelona.Edit.
Hartcourt. 2001.
c. Martin D W. Bioqumica de Harper. Mxico .Edit Manual Moderno. 2000.
d. Rawn M. Bioqumica. Madrid McGraw- Hill .Interamericana. 2003.

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II.PRACTICA N 2

2.SEPARACION E IDENTIFICACION CROMATOGRAFICA DE LOS AMINOACIDOS.

2.1. Marco terico
La cromatografa en capa fina permite la separacin de mezclas en sus componentes, a
base de las diferencias especficas en sus propiedades fsicas. El diferente coeficiente de
reparto de los distintos aminocidos, entre una fase mvil y una fase estacionaria
permite su separacin por cromatografa en capa fina. La separacin ocurre a causa de
diferencias de solubilidad, polaridad del disolvente, polaridad de la sustancia problema y
velocidad de difusin. La identificacin y cuantificacin de los aminocidos se realiza
utilizando la ninhidrina. Los grupos amino de los aminocidos reaccionan con la
ninhidrina dando un color prpura .Simultneamente.con la muestra problema se corren
soluciones standard de aminocidos
2.2. Competencias.
Identifica y cuantifica los aminocidos de una muestra biolgica empleando la silica gel
para la cromatografa en capa fina.
2.3. Materiales y equipos.
2.3.1. Reactivos.
a.
b.
c.
d.
e.
f.

Nninhidrina 0.02 % en butanol cido actico.

Etanol absoluto.
Metionina, lisina. Tirosina , fenilalanina, valina etc.
Butanol.
Acido actico glacial.
Agua destilada.

2.3.2. Equipos y materiales.

a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.

Estufa regulada a 50 C.
Cmara de cromatografa.
Pulverizador.
Secadora de mano.
Cromatoplacas de silicagel de 120 x 40 mm.
Tubos de prueba de 13 x100mm.
Pera de decantacin.
Pipetas de 2 , 10 mL y pipetas Pasteur.

2.4. Procedimiento.

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a.

Preparacin de la cmara cromatogrfica:

En una pera de decantacin se mezclan : butanol: cido actico: agua, en la
proporcin de 4: 1: 5 se agita suavemente por rotacin y luego se deposita en la
micro-cmara, se tapa y se deja en reposo por 15 minutos, o hasta saturacin de la
cmara.

b.Preparacin de la solucin de ninhidrina

Se disuelven 0.02 g de ninhidrina en butanol cido actico 2N. 19 : 1. Esta solucin
debe manejase con guantes y en campana extractora.
c.Preparacin del soporte.
Se prepara una cromatoplaca de 12 x 4 cm, a unos cm del borde se traza con lpiz
una lnea recta. Sobre esta lnea se marcan puntos , a distancia de 1 cm , donde se
depostar la muestra problema y los standard.
d.Preparacin del cromatograma
Utilizando micropipetas se van depositando en uno y otro de los puntos marcados ,
la mezcla de 3 aminocidos, as como una muestra de material biolgico. Tras cada
aplicacin se seca la mancha utilizando una secadora de mano.
e.Desarrollo del cromatograma.
El cromatograma asi preparado se introduce en la cmara previamente saturada,
cuidando que el solvente impregne el silica gel, pero no cubra las gotas de
muestras aplicadas. Cuando el solvente ha ascendido hasta la parte superior de la
placa, se saca sta de la cmara, y se seca bien con un secador.
f.Revelado del cromatograma
A continuacin la cromatoplaca se pulveriza con la solucin de Ninhidrina , y se
seca en estufa a 100 C. A los pocos minutos aparecern las manchas de
aminocidos, que se pueden identificar por su Rf ( distanciaa origen- mancha /
distancia origen - frente del disolvente ).
2.5. Resultados.
Una vez que se revela el cromatograma, se procede a determinar el Rf de cada mancha
correspondiente a un aminocido. El Rf permite determinar que aminocido se
muestra en la muestra problema.
2.6. Cuestionario.
a. Considera que la cromatogradia en capa fina, en silica gel, es la ms apropiada para
la identificacin y, separacin de los aminocidos?
b. Describa como realizara la separacin de los aa. Por HPLC.
c. Cmo investigara la presencia de aa. En orina?
d. Describa los dominios y de cinco ejemplos.
2.7. Fuentes de Informacin.
a. Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias
Graw- Hill- Interamericana de. 2001 .

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de la

Salud . Espaa . Edit. Mc

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b. Luque L
y
Hermoza
A. Biologa
Molcular
e
Ingenieria
Gentica. Barcelona. Edit. Hartcourt. 2001.
e. Matheus Van Holde. Bioqumica. Mxico. Edit. Mc Graw Hill.2000.
f. Martin D W. Bioqumica de Harper. Mxico. Edit. Manual Moderno. 2000.
g. Lehninger A. Bioqumica. Barcelona .Edit. Omega. 2001.

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III.PRACTICA N 3
3. IDENTIFICACION DE LOS CARBOHIDRATOS POR
REACCIONES FISICAS Y QUIMICAS
3.1. Marco terico.
Los carbohidratos, glcidos, azcares o sacridos son compuestos orgnicos cuyos
principales componentes son carbono, hidrgeno y oxgeno, aunque alguno de ellos
contienen nitrgeno y azufre.Qumicamente son polihidrooxialdehidos (aldosas ) o
polihidrooxiceetos ( cetosas )
Los carbohidratos constituyen la principal fuente de energa de la dieta. Los
monosacridos son las unidades ms sencillas abundan en las frutas y en la leche, en
cambio sus polmeeros
abundan en legumbres, tubrculos y cereales ( almidn )
carnes
( glucgeno ).
La glucosa es el principal azcar
utilizado por todas las clulas como fuente de
energa, el almidn en los vegetales y el glucgeno en los animales constituyen el
material energtico de reserva para ser utilizado cuando las clulas lo requieren. La
celulossa y otros azcaaress cumplen funciones estructurales.
Es importante
destacar que
los azcares intervienen en la estructura de
otras biomolculas, tales como
los glicolpidos, glicoproteinas de membrana,
fosfolpidoss, cidos nuclicos etc.
3.2.Competencias
Identifica muestras problemas utilizando diversos reactivos que permiten determinar la
presencia de carbohidratos.
3.3.Materiales y equipos.
3.3.1. Equipos y materiales
a. Microscopio.
b. Bao Mara .
c. Mechero Bunsen.
d. Trpode.
e. Rejilla de asbesto.
f. Tubos de prueba 13 x 100 mm.
g. Pipetas de 1 y 5 mL.
3.3.1.Reactivos
a. Reactivo
b. Reactivo
c. Reactivo
d. Reactivo
e. Reactivo
f. Reactivo

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de
de
de
de
de
de

Benedict
lugol.
Molish.
Selivanoff.
orcinol.
lorh. De fenilhidrazina.

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g.
h.

Monosacridos, disacridos y polisacridos.

Alcohol etlico absoluto y H2SO4 de densidad 1.84.

3.4. Procedimiento.
3.4.1. En una gradilla disponer seis tubos de prueba, y realizar en cada uno de ellos
las siguientes reacciones.
Tubo N 1 Reaccin de Molish.
a. Colocar 2 ml. de muestra problema.
b. Luego adicionar II gotas de reactivo de Molish , mezclar.
c. Lentamente deslizar por las paredes del tubo, 1 mL. de cido sulfrico
concentrado, ( reaccin exotrmica ).
d. La formacin de un anillo de color violeta o prpura indica presencia de
glcidos.
Tubo N 2. Reaccin de Lugol.
a. Depositar 5ml de muestra problema.
b. Adicionar III gotas de lugol. El desarrollo de un color azul indica reaccin
positiva para el almidn.
Tubo N 3. Reaccin de Benedict.
a. Depositar 2.5 ml de Reactivo de Benedict , calentar hasta ebullicin
por 2 minutos.
b. Si no hay cambio de color se adicionan V gotas de Muestra problema,
luego se coloca en Ba.M. hirviente durante 3 minutos, luego se deja
enfriar.
c. La aparicin de una coloracin o, precipitado, amarillo anaranjado o,rojo,
indica presencia de glcidos reductores.
Tubo N 4. Reaccin de Bial. Para las Pentosas.
a. En un tubo de prueba se coloca 5 ml. de Reactivo de orcinol, se
calienta hasta ebullicin y en este momento se adiciona gota a gota 1 mL
de solucin problema.
b. La aparicin de un color verde oliva , soluble en alcohol amilico, indica
presencia de pentosa.
Tubo N 5. Reaccin de Selivanoff.
a. En un tubo de prueba se coloca 3 ml de solucin clorhdrica de
resorcinol y 6 ml de Muestra problema.
b. Luego se coloca en Bao de Mara hirviente por unos minutos.
c. El desarrollo
inmediato
de una coloracin anaranjado rojiza indica
presencia de pentosa.

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Formacin de osazonas.
a.
b.
c.
d.
e.

En diferentes tubos de prueba colocar 10 ml de solucin 0.05 M de

glucosa, fructuosa, galactosa y maltosa.
Disolver en dichas soluciones, 100 mg declorhidrato de fenilhidracina y
200 mg de acetato de sodio.
Colocar los tubos en B.M hirviente durante 30 minutos, luego dejar
enfriar por varias horas.
Centifugar y observar el sedimento en el microscopio.
Los glcidos forman cristales caractersticos.

3.5. Resultados.
Reaccin de Molish
Reaccin de lugol
Reaccin de Benedict
Reaccin de Selivanoff
Reaccin de Bial
Ozazonas

positivo anillo violeta a prpura.

positivo color azul.
positivo amarillo anaranjado a rojo ladrillo.
positivo color rojo.
positivo color azul verde.
presencia de cristales caractersticos dependiendo del
glcido analizado.

3.6. Cuestionario.
a. Describa el fundamento de la reaccin de Benedict y, en que casos es positiva.
b. Elabore un mapa conceptual de la clasificacin de los carbohidratos.
c. Fundamente la importancia de los oligosacridos en la existencia de los grupos
sanguneos
d. Explicite acerca de la fibra soluble. Ventajas y desventajas.
3.7. Fuentes de Informacin.
a. Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias de la
Salud. Espaa . Edit. Mc
Graw- Hill- Interamericana de. 2001 .
b. Luque L
y
Hermoza
A. Biologa
Molcular
e
Ingenieria
Gentica. Barcelona.Edit. Hartcourt. 2001.
h. Matheus Van Holde. Bioqumica. Mxico. Edit. Mc Graw Hill.2000.
i. Martin, D.W. Bioqumica de Harper. Mxico. Edit. Manual Moderno. 2000.
j. Lehninger, A.. Bioqumica. Barcelona .Edit. Omega. 2001.
k. Claros MG, Avila C. Gallardo F. Madrid .Edit. ISBN. 2001

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IV.PRACTICA N 4

4. IDENTIFICACION Y SEPARACION DE
ACIDOS GRASOS POR CROMATOGRAFIA
4.1. Marco terico.
Los lpidos son compuestos , estructurablemente heterogneos , de naturaleza
antiptica, semejantes desde el punto de vista de sus propiedades fsicas, son
insolubles en el agua , solubles en solventes orgnicos.cumplen multiples funciones,
entre las que destacan la formacin de las membranas biolgicas, que no solo
separan los compartimientos celulares, sino que juegan un papel importante en la
nutricin , procesos de excrecin y transporte de nutrientes y de frmacos.
Los esteroides y las vitaminas liposolubles se consideran tambin como lpidos, pues
presentan caractersticas similares, de solubilidad y se conocen con el nombre de
lpidos derivados. Muchos de estos compuestos son, sin embargo, alcoholes y no
steres y por lo tanto no pueden saponificarse.
Algunos de los lpidos actan en microcantidades como agentes reguladores o
activadores del metabolismo, tal es el caso de las vitaminas liposolubles, las
prostaglandinas o las hormonas esterodeas.
La cromatografa es una tcnica analtica que hace posible la separacin e
identificacin de sustancias semejantes, aprovechando su diferente capacidad de
ser retenidas por una fase estacionaria o fija, y de ser arrastradas por una fase
mvil .
Las tcnicas cromatogrficas ms utilizadas en la separacin cromatogrfica de
lpidos son las de capa fina y fase gaseosa. Para la cromatografa en capa fina se
utiliza un soporte de silicagel, extendido sobre una placa de vidrio o aluminio. La
fase mvil consiste en una mezcla de disolventes ms o menos polares, segn la
mayor o menor polaridad de los lpidos que se deseen separar.
4.2. Competencia.
Identificar
las grasas
que
contienen cidos insaturados de una muestra
biolgica empleando la silica gel para la cromatografa en capa fina.
4.3.Materiales y equipos.
4.3.1. Equipos y materiales.
a.
b.
c.
d.
e.

Cmara cromatogrfica.
Mortero.
Cocinilla elctrica.
Apsula de porcelana mediana
Pulverizador.

f. Cromatoplacas de silica gel de 140 x 40 mm.

g. Secadora de mano.
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h.
i.
j.
k.

Pipetas Pasterur.
Homogenizado de tejido.
Pipetas Pasteur. Probetas x 50 ml.
Pera de decantacin x 50 mL.

4.3.2. Reactivos.
a. Cloroformo
b. Metanol.
c. Vapores de yodo.
d. Agua destilada.
e. HCL 0.1M.
f. Alcohol etlico de 95.
4.4. Procedimiento.
a. En un mortero homogeneizar 20 g de tejido graso. con 10 mL de
una
mezcla de
cloroformo-metanol y cido clorhdrico, en la proporcin
de
200 : 100 :1 respectivamente.
b. Adicionar el doble de su volumen de HCL 0.1M, agitar y centrifugar.
c. Extraer la fraccin clorofrmica (inferior) que contiene
los
lpidos
y
evaporar
hasta unos 2 mL.
d. Aplicar el extracto lpdico sobre la cromatoplaca de silicagel G.
e. Colocar la placa dentro de la cmara cromatogrfica saturada con
una mezcla
de cloroformo - metanol - agua ( 65:25:4), hasta que
el
lquido de desarrollo alcance 1 cm del borde
superior.
f. Secar bien la placa cromatogrfica y luego exponerla a vapores de yodo.
g. Se observan una serie de
manchas
que
corresponden por orden
creciente
de
Rf
a
lisoderivados,
fosfatidilserina,
esfingomielina fosfatidilinositol , fosffatidilcolina
cardiolipina y lpidos
neutros.
Los
lpidos
menos
polares
tienen
el
Rf
ms
alto.

4.6. Cuestionario.
a. A qu se debe el que el cido linolico se le considere como un cido graso
esencial.
b. Mencione 5 mtodos para la determinacin de colesterol, reseando la ms
importante , por su exactitud y precisin.
c. Indique las ventajas y desventajas de los omega 3 y los omega 6, desde el punto
de vista de la nutricin y desde el punto de vista qumico.
d. Esquematice la biosntesis de colesterol.
4.7. Fuentes de Informacin.
a. Claros MG, Avila C. Gallardo F. Madrid. ISBN. 2001
b. Devlin, Thoms M. Bioqumica con Aplicaciones

Clnicas. Tomos I y II .

Barcelona . Revert Colombiana. S 2000

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c. David L N. Cox M M y Lehninger A. Principios de Bioqumica. Barcelona .
Omega. 2001.
d. Lozano - Galindo.
. Bioqumica
para Ciencias de la Salud. Espaa .
McGraw-Hill-Interamericana de. 2001.
e. Luque L y
Hermoza A. Biologa Molcular e Ingenieria Gentica.
Barcelona. Hartcourt. 2001.

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V. PRACTICA N 5

5 . EFECTO DE CONCENTRACIONES SATURANTES DEL SUSTRAATO SOBRE

UNA CONCENTRACION
CONSTANTE DE ENZIMA MICHAELIS Y MENTEN
5.1. Marco terico.
A las reacciones que ocurren en los seres vivos, y que son catalizadas por protenas
especificas llamadas enzimas se les denomina reacciones enzimticas. En estas
reacciones las molculas sobre las que acta la enzima en el inicio del proceso se
llaman sustratos, y estas los convierte n en diferentes molculas, los productos.
La actividad enzimtica se expresa en unidades de micromoles de sustrato
convertido en producto por minuto, Cada reaccin requiere de un enzima apropiado,
la ausencia de enzima trae como consecuencia , que la reaccin no se realice, que
lo haga lentamente, hecho que lo vincula con la velocidad de la reaccin que
cataliza, es importante anotar que el enzima incrementa la velocidad de la reaccin
sin cambiar el proceso, no modifica la constante de equilibrio de la reaccin y lo que
es fundamental el enzima no se consume.
En una reaccin enzimtica, los productos se forman a expensas de la desaparicin
de los correspondientes sustratos, en tanto la enzima (E) no se modifica.
El mecanismo de reaccin enzima-substrato se expresa as:
(E) + (S)

(ES)

(E) + (P)

Los factores que modifican la actividad enzimtica son :

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Concentracin de substrato (S).

Concentracin de enzima (E).
pH del medio de reaccin.
Influencia de la temperatura.
Efecto de inhibidores y activadores.
Presencia de cofactores y coenzimas.
Modulacin alostrica de la A.I.
Efecto de la modificacin covalente.
Activacin proteoltica de la A.I.

5.2. Competencias.

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Determinar el Km experimental de la pepsina , usando como sustrato la albmina, a
partir de una grfica de vi contra [S] (Ecuacin de Michaelis-Menten) y/o en una
grfica de dobles recprocas 1/vi vs 1/[S] (Ecuacin de Lineweaver-Burk).
5.3. Materiales y equipos.
5.3.1. Equipos y material.
a.
b.
c.
d.
e.
f.

Espectrofotmetro.
B.M. a 37C.
Bao de hielo.
Tubos de prueba de 16 x 150mm.
Pipetas de 1 y 10 mL.
Gradillas.

5.3.2. Reactivos.
a.
b.
c.
d.

Solucin de albmina al 2 %.
Solucin de pepsina al 1%.
Acido clorhdrico 1N.
Agua destilada.

5.4. Procedimiento.
a. En una gradilla disponer 7 tubos de prueba de 13 x 100 mm. y proceder
como sigue:
TUBOS

Agua destilada ml.

8.0

7.0

6.0

5.0

4.0

3.0

2.0

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

7.0

HCl 1N

ml.

Albmina ml.

b. Leer en el espectrofotmetro a 440 nm ,el contenido de los tubos 1, 2, 3, 4,

5, 6 7 y Anotar las absorbancias ( Lectura inicial ).
c. Incubar los 7 tubos a 37C durante 5 minutos.
d. Adicionar 0.5 ml de la pepsina , a cada uno de los tubos del 1 al
7 e Incubar a 37 C por 10 minutos.
e. Retirar del Bao a 37C y llevar a bao de hielo.
f. Leer en el espectrofotmetro a 440nn, nuevamente el contenido de los
tubos
1,2,3, 4, 5, 6 y 7. ( lectura final ).
5.5. Resultados. La Actividad enzimtica se obtiene:
Actividad enzimtica = Lectura inicial Lectura Final.

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5.6. Cuestionario.
a. Esquematice los factores que afectan la actividad enzimtica.
b. Explicite en que consiste la cooperatividad en los enzimas
c. Grafique la bomba de sodio y potasio y describa su importancia biolgica.
d. Elabore un mapa conceptual acerca de los transportes que se realizan a travs de
e. los ionferos.
f. Explicite las aplicaciones clnicas de la ecuacin de Linewaber y Burk.
.
5.7. Fuentes de Informacin.
a. Devlin Thomas M. Bioqumica
con Aplicaciones
Clnicas. Tomos I y II.
Barcelona. Revert Colombiana. S. 2000.
b. Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias de la Salud. Espaa. McGraw - HillInteramericana. 2001.
c. David L N, Cox M M. y Lehninger A. Principios
de Bioqumica. Barcelona.
Omega. 2001.
d. Luque L y
Hermoza A. Biologa
Molcular e
Ingenieria
Gentica.
Barcelona. Hartcourt. 2001.

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VI. PRACTICA N 6
6. SEMINARIO SOBRE INHIBICIONES ENZIMATICAS

6 I. Marco terico.
La actividad enzimtica puede ser disminuda o eliminada por la accin
de
ciertas sustancias llamados inhibidores que actun sobre el centro activo del
enzima, u otros centros especificos ( alostricos ).
Los inhibidores son de dos tipos:

INHIBIDORES

Isotricos

Irreversibles

Competitiva

Alostricos

Reversibles

No competitiva

Acompetitiva

Los Inhibidores istericos actan sobre el centro activo del enzima, mientras que los
alostricos actan
sobre
otra parte de la molcula, generando un cambio
conformacional, que ocasiona un efecto negativo en la actividad enzimtica.
Los inhibidores isotricos a su vez son de dos tipos : Irreversibles y reversibles , los
primeros modifican qumicamente al enzima, forman un enlace covalente con las
enzimas cerca del centro activo. Un ejemplo son los gases nerviosos, como el
fluorofosfato de di isopropilo (DFP) que forma un complejo con la enzima
acetilcolinesterasa. Los animales envenenados con este gas quedan paralizados,
debido a la imposibilidad de transmitir adecuadamente los impulsos nerviosos.

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18
Mediante el uso de inhibidores enzimticos se ha obtenido informacin muy
valiosa sobre la conformacin del centro activo de algunas enzimas
Inhibicin Reversible: Es de tres clases.

Inhibicin competitiva. Es aquella en que el inhibidor compite con el sustrato,

por el centro activo del enzima, se fija al enzima cuando se encuentra en
mayor concentracin que el sustrato. Esta inhibicin puede eliminarse
incrementando la concentracin del sustrato.
En la Industria farmacutica se utiliza esta inhibicin para la fabricacin de
ciertos frmacos como por Ej. La sulfanilamida ( bactericida ) compite con el
cido p-aminobenzoico por el enzima folato sintetasa, impidiendo que las
bacterias puedan
producir cido flico necesario para su crecimiento y
desarrollo.

Inhibicin no competitiva. El inhibidor no se fija al centro activo del enzima,

sino en otro centro ( alostrico ) independientemente, no impide la unin del
substrato al enzima, pero si impide la actividad cataltica.
Inhibicin acompetitiva. El inhibidor se fijas al complejo enzima
substrato formado, e
impide
la actividad cataltica .

6.2. Competencia.
Conoce las propiedades estructurales y funcionales de los enzimas que le
permitan comprender la importancia de la inhibicin enzimtica tanto en los
procesos metablicos, como en el estudio de la actividad farmacolgica de los
frmacos
6.3. Materiales.
a.
b.
c.
d.
e.
f.

Bibliografa del silabo de Bioqumica I.

Bibliografa de carcter cientfico (revistas, manuales, etc.).
Retroproyector.
vides, VHS, etc.
Libros, revistas, folletos.
CD. Power point.

6.4. Procedimiento.
Se realizar de acuerdo a las normas de aprendizaje establecidas por la
Universidad, donde los alumnos harn una exposicin de los temas, los cuales sern
discutidos y analizados junto con el docente.
6.5.

Resultados.
Formular las conclusiones alcanzadas en el seminario.

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19
6.6. Cuestionario.
a.
b.
c.
d.

De tres ejemplos de inhibiciones irreversibles, graficando cada una de ellas.

Cmo utiliza la Industria farmacutica las inhibiciones enzimticas?
Elabore unmapa conceptual de las inhibiciones enzimticas.
Cmo actn los gases lacrimgenos?

6.7.Fuentes de Informacin.
a. David LN, Cox M.M. y Lehninger A. Principios de Bioqumica. Barcelona. Omega
2001.
b. Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias de la Salud .Espaa. McGraw-Hill Interamericana. 2001.
c. Luque L, Hermoza A. Biologa Molcular e Ingenieria Gentica. Barcelona. Hartcourt.
2001.
d. Martin DW . Bioqumica de Harper. Mxico. Manual Moderno. 2000.
http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/enzimas/index.html
http://www.uv.es/rjover/medicina/
http://soko.com.ar/Biologia/Enzimas.htm

VII. PRACTICA N 7
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7. PASO DE MOLECULAS A TRAVES DE MEMBRANAS

SEMIPERMEABLES DIALISIS EFECTO DE DONNAN
7.1. Marco terico.
Las membranas biolgicas son semipermeables, es decir permiten el paso a ciertas
molculas e impiden el paso a otras, por ejemplo puede darse el caso ,de que la
membrana tenga poros de un dimetro pequeo, los cuales permiten solo la difusin
de aquellas sustancias que tengan poros de un dimetro menor a estos. Cuando
existen molculas de gran tamao que no difunden a travs de la membrana
semipermeable como las proteinas, pero estas tienen carga , su presencia cambia la
distribucin de las particulas inicas, como ocurre con la proteina intracelular,
cargada negativamente, atra a los iones de K+ y repele a los iones de Cl-, originando
una gradiente elctrica ( simbolizado por las cargas + y a ambos lados de la
membrana ) y grandes gradientes de concentracin de K y Cl, iguales y de signo
opuesto. En el equilibrio se tiene.

Esta situacin se vuelve ms compleja si las substancias en solucin poseen carga

neta, porque entonces la difusin tender a reducir tambin la diferencia de cargas a
ambos lados de la barrera. Cuando la diferencia de potencial elctrico se establece se
alcanza un equilibrio en el cual existe una diferencia de potencial constante, llamado
Potencial Donnan.
La concentracin de partculas a ambos lados de la membrana es desigual (en el
interior estn adems de los iones las protenas) de forma que se produce un
gradiente osmtico hacia el compartimento que contiene estas ltimas.
Debido a la naturaleza semi-permeable del endotelio capilar, las protenas
plasmticas son retenidas en el compartimento vascular y su influencia sobre la
actividad osmtica es capital para los movimientos de fludos entre los
compartimentos capilar e intersticial. El equilibrio de Gibbs-Donnan establecido a
travs del epitelio por la existencia de protenas no difusibles aade un pequeo pero
significativo incremento a esta actividad osmtica. Las protenas del plasma originan

una presin osmtica de unos 20 mm de Hg y la originada por las partculas cargadas

producidas en el equilibrio de Gibbs-Donnan es de unos 6-7 mm de Hg. La suma de
ambas es la presin onctica o sea la atraccin hacia el agua que ejercen las
protenas del plasma.
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21
7.2. Competencias.
Aplicar los conceptos biofsicos para comprender los procesos de transporte que
tienen lugar a travs de las membranas biolgicas.
Conceptuar la dilisis y el equilibrio de Donan y sus aplicaciones clnicas
7.3. Materiales y Equipos.
7.3.1. Materiales.
a.
b.
c.
d.
e.

Tubos de dilisis.
Pipetas de 1, 5 y 10 mL.
Cocina elctrica.
Embudo de espita corta.
Beaker x 50 mL.; baguetas, pinzas de madera y gradillas.

7.3.2. Reactivos.
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
h.
i.
j.

Almidn al 2%.
Solucin de gelatina al 1%.
Reactivo de Benedict.
Solucin amaortiguadora de fosfato sdico.
Muestra de saliva.
HCl0.1M; NaOH 0.1M.
Acidos grasos (esterico, olico).
Lecitina, colesterol.
Indicador de azul de timol y azul de metileno en butanol al 0.25%
Cloruro de sodio en cristales

7.4. Procedimiento.
A. Demostracin del equilibrio de Donan:
a.

En un beaker de 50 mL, colocar II gotas del indicador azul de timol , 10ml

de gelatina , luego agregar NaOH 0.1 M, gota a gota, hasta la aparicin
de un color verde (pH aprox. 9). Colocar esta solucin en un tubo de
dilisis. (Tubo A ).

b. En otro beaker colocar 20 ml de agua destilada , II gotas de

indicador de azul de timol y luego agregar NaOH 01 M hasta coloracin
verde. En esta
solucin colocar invertido el Tubo A del paso a.

c. Dejar en reposo durante unos minutos y luego observar el cambio de color

de la solucin dentro y fuera del tubo de dilisis.
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22

d. Repetir el experimento, pero ajustando el pH inicial de la gelatina a pH 2 y

un viraje a amarillo- rosado. Explique el cambio de color en ambos casos.
B. Paso de molculas a travs de una membrana de dilisis.
a. En una gradilla disponer dos tubos de prueba de 16 x 150mm. (Problema y
Blanco ), adicionar a cada uno de ellos: 5 ml de solucin de almidn al 1% y
4 ml. de la solucin amortiguadora.
b.

Aadir 1ml de saliva al tubo de prueba ( P ) ,y 1 ml de agua al

tubo control ( C ), dejar en reposo 10 minutos, luego colocar en el
extremo abierto de los tubos, una membrana semipermeable.

c.

Sumergir invertidos los tubos ( P ) y ( C ) dentro de sus respectivos

Beaker que contienen solucin amortiguadora.

d.

Dejar en reposo por 10 minutos .

e.

Luego investigar presencia de maltosa y almidn.

7.5. Resultados.
El experimento A es aplicacin del efecto de Donnan y el B es el de la dilisis.
7.6. Cuestionario.
a. Explique a que se debe que el color azul que produce el almidn con el reactivo de
lugol, desaparezca, por el calor
b. Mencione las aplicaciones de la dilisis.
c. El efecto de Donnan es mayor cuanto mayor es la carga del coloide.
e. En el siguiente cuadro anote las reacciones que dan la maltosa y el almidn
con los reactivos indicados.

CARBOHIDRATOS

REACTIVO DE
BENEDICT

REACTIVO DE LUGOL

SACAROSA
ALMIDON
GLUCOSA

7.7. Fuentes de Informacin.

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23
a. Devlin, Thomas M. Bioqumica con Aplicaciones Clnicas. Tomos I y II Barcelona.
Revert Colombiana. S. 2000.
b. David LN, Cox M.M. y Lehninger A. Principios de
Bioqumica .Barcelona .
Omega. 2001.
c. Lozano Galindo. Bioqumica para Ciencias de la
Salud. Espaa. McGraw Hill- Interamericana . 2001.
d. Luque L y
Hermoza A. Biologa Molcular
e
Ingenieria
Gentica.
Barcelona. Hartcourt.2001.
e. Martin DW. Bioqumica de Harper . Mxico. Manual Moderno.2000.

VIII.PRACTICA N 8
F CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

24

8.

MAPA CONCEPTUAL CADENA DE TRANSPORTE

ELECTRONICO Y FOSFORILACION OXIDATIVA

8.1.Marco terico.
La fosforilacin oxidativa consiste en una serie de eventos qumicos que conducen a la
sntesis del ATP: Este proceso se lleva a cabo, en la membrana interna mitocondrial,
en la membrana plasmtica bacteriana y en los tilacoides de los cloroplastos.
Es importante destacar que en los seres vivos la oxidacin de las molculas orgnicas
ocurre como resultado del movimiento de protones (H+) del interior de la matriz
mitocondrial al espacio intermembranal en mitocondrias. La cadena de transporte de
electrones y la fosforilacin oxidativa de acuerdo a Peter Mitchell quien propuso la
hiptesis quimiosmtica, segn la cual el intermediario energtico necesario para la
formacin del ATP (o fosforilacin del ADP), era una diferencia en la concentracin de
protones a travs de la membrana.
El metabolismo celular produce compuestos reducidos en todos los compartimentos
principales de la clula eucariota, especialmente tienen lugar
en la matriz
mitocondrial. La reoxidacin de los transportadores electrnicos reducidos, NADH y
FADH2 ocurre, acoplada a
la produccin simultanea de ATP, por las proteinas
transportadoras de la cadena respiratoria, que se encuentran fuertemente embebidas
en la membrana interna de la mitocondria, principalmente los citocromos.
Estas protenas se ensamblan en cinco complejos multiprotecos:s I, II, III, IV
y V Las reacciones globales de los complejos I, II, III y IV son exoergnicas y la energa
liberada en ellas crea un gradiente de protones a travs de la membrana interna
mitoncondrial al resultar
los protones bombeados al espacio intermembrana.
Este
gradiente
de protones libera la energa suficiente para que tenga lugar la
sntesis de ATP por la ATP sintasa.
8.2.Competencia.
Conceptualiza la produccin de energa en forma de ATP a travs de la cadena de
transporte electrnico. o cadena respiratoria , elaborando un mapa conceptual.
8.3. Materiales.
a.
b.
c.
d.
e.
f.

Bibliografa del silabo de Bioqumica I.

Bibliografa de carcter cientfico (revistas, manuales, etc.).
Retroproyector.
Videos VHS, etc.
Libros y revistas.
C D .Power point.

8.4.Procedimiento.

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25
Se
realizar siguiendo
la tcnica para
elaborar los mapas conceptuales ,
teniendo en cuenta los elementos que intervienen en la elaboracin de un mapa
conceptual .
8.5. Resultados.
Una vez que los alumnos han elaborado su mapa conceptual, se proceder a la
exposicin y debate entre todos los alumnos.
8.6.Cuestionario.
a. Grafique el ciclo de Krebs indicando la reaccin
fosforilacin a nivel del sustrato
b.

en la que tiene lugar una

Indique cuantas reacciones de descarboxilacin ocurren en el ciclo de Krebs .

c. Realice un grfico en el que se visualice la interrelacin del ciclo de Kres, la

cadena respiratoria y la fosforilacin oxidativa
d. Grafique a la ATPasa de la cadena respiratoria, indicando como acta
8.7.Fuentes de Informacin.
a.

b.
c.
d.
e.

acruz@campus.cem.itesm.mx
www.cip.es/netdidactica/articulos/mapas
spie@spie.com.ar
Segovia@hotmail.com
http:www.conceptmaps.it/KM.DidacticUseOfMaps-esp.htm

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26
IX. PRACTICA N 9
9. REPRESENTACIONES ESQUEMATICAS DE GLUCOLISIS
Y GLUCONEOGENESIS
9.1. Marco terico.
La glicolisis o ruta de Embder-Meyerhof-Parnas, es la ruta que utilizan las clulas
para obtener energa qumica de la molcula de la glucosa , se lleva a cabo en todas
las clulas , Para muchos tejidos la glicolisis es una ruta de emergencia para obtener
energa, ya que es capaz cuando el suministro de oxgeno se para todava se puede
obtener ATP mediante la glicolisis, aunque por poco tiempo, como en el caso tipico
que ocurre en el nacimiento. Con la excepcin del cerebro, la circulacin de la
sangre disminuye significativamente en todo el organismo durante el parto. En este
caso, el cerebro emplea glucosa y otros tejidos cambian a la glicolisis para que al
cerebro no le falte en este momento, hasta que la respiracin y la circulacin de la
sangre vuelvan a ser normales.
El oxgeno no es necesario para la glicolisis pero an as el oxgeno suprime
indirectamente la glicolisis, un proceso denominado efecto Pasteur. An as, la
glicolisis ocurre y a buen ritmo en clulas con suficiente cantidad de oxgeno. Si las
clulas contienen mitocondrias, el producto final de la glucolisis es el piruvato y no
el lactato, y el piruvato se puede oxidar completamente a CO2 y H2O por enzimas
localizados en la mitocondria.
La importancia de la glicolisis como una ruta preparatoria est muy bien
representada en el cerebro. Este tejido solo necesita glucosa y la procesa casi toda
ella por la glicolisis, para posteriormente oxidar el piruvato en las mitocondrias. Un
cerebro de un humano adulto emplea normalmente 120 g de glucosa cada da para
proporcionar el ATP necesario. Otros tejidos como los eritrocitos de la sangre, que
carecen de mitocondrias, producen ATP por la glicolisis. La crnea, la lente y ciertas
regiones de la retina tiene un suministro de sangre algo limitado y tambin no
tienen mitocondrias (las mitocondrias absorberan la luz) y dependen de la glicolisis
como fuente principal de ATP. El rin, la medula, los testculos, los leucocitos de
la sangre y las clulas musculares blancas tambin dependen casi exclusivamente de
la glicolisis para la obtencin de la energa, ya que las clulas de estos tejidos
tienen pocas mitocondrias. Los tejidos que dependen principalmente de la glucosa
para la obtencin de ATP consumen unos 40 g de glucosa por da en un adulto
normal.
La sntesis de la glucosa de novo, es decir, la gluconeognesis, es una funcin del
hgado y del rin. En contraste a la glicolisis, que produce ATP, la gluconeognesis
consume ATP y es por lo tanto una ruta que requiere energa para su realizacin.
Por lo tanto solamente unos pocos pasos de ambas rutas metablicas pueden ser
comunes a ambas rutas.
9.2. Marco terico.

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27
Conceptualiza la produccin de energa en forma de ATP a travs de la cadena de
transporte electrnico o cadena respiratoria , elaborando un mapa conceptual.
9.3. Materiales.
a.
b.
c.
d.
e.
f.

Bibliografa del silabo de Bioqumica I.

Bibliografia de carcter cientfico (revistas, manuales, etc.).
Retroproyector.
Videos VHS, etc.
Libros y revistas.
C D .Power point

9.4. Procedimiento.
Se realizar de acuerdo a la tcnica para elaborar los esquemas, teniendo en cuenta
los
elementos que intervienen en la elaboracin de los esquemas
metodolgicos.
9.5. Resultados.
Realizado el esquema, se proceder a la exposicin de los esquemas elaborados por
grupos.
9.6. Cuestionario.
a. Ela bore un grfico de la interrelacin de la gluclisis y la gluconeogensis
b. Explique como se mantienen normales las concentraciones de glucosa en la sangre
en perodos de ejercicio y ayuno.
c. Elabore un esquema de las reacciones de la glucolisis anaerbica
d. Describa como se realiza la regulacin de la gluclisis
9.7. Fuentes de Informacin.
a. http://habitat.aq.upm.es/boletin/n27/backup/1.pdf
b. http://www.camposytorozos.com/entidad.htm
c. http://www.tdx.cesca.es/TESIS_UB/AVAILABLE/TDX-1223104122502//5.capitulo04.pdf

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X. PRACTICA N 10
10. AISLAMIENTO DE GLUCOGENO DEL HIGADO DE POLLO
10.1. Marco terico.
El glucgeno como sustancia de reserva, se encuentra en muchos tejidos animales,
especialmente en el hgado y msculos. El hgado de gran nmero de especies
animales tiene la capacidad de almacenar la glucosa bajo la forma de glucgeno.
El glucgeno puede ser extrado por varios mtodos, uno de los cuales es la hidrlisis
alcalina del tejido, la que degrada a las protenas y otros constituyentes de la clula
dejando al glucgeno, posteriormente puede ser precipitado por su baja solubilidad
en alcohol.
Si una persona es sometida a un perodo de ayuno durante 24 horas, el glucgeno
heptico disminuye ya que tiene que cubrir las necesidades de glucosa.
La va de sntesis y degradacin de este polisacrido, denominadas glucognesis y
glucogenlisis respectivamente, estn integradas en el conjunto de reacciones de la
red metablica celular a travs de un metabolito comn la glucosa-6-fosfato.
10.2. Competencia.
Aisla glucgeno del higado de pollo
contenido en el hgado.

y determina

el porcentaje de glucgeno

10.3. Materiales y equipos.

10.3.1. Equipos y materiales.
a.
b.
c.
d.
e.
f.
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.

Espectrofotmetro.
Centrifuga.
Bao Mara 37C.
Cocina elctrica.
Mortero y piln.
Balanza.
Gradilla.
Pipeta de y 10 ml.
Micropipeta de o a 50 uL
Tubos de prueba de 13 x 100mm y de 16 x 150 mm.
Micropipetas de oa 50Ul con punteras.
embudo mediano; baguetas y punteras amarillas.
Pinzas de madera y bola de vidrio de 100 mm de dimetro

10.3.2.Reactivos.

a. Solucin saturada de sulfato de sodio.

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b.
c.
d.
e.
f.
g.

Set completo de reactivos enzimticos para determinacin de glucosa.

KOH al 30% ; NaOH O.5M.
HCl 1.2 M
Alcohol etlico absoluto
Indicador rojo de fenol.
Agua destilada.

10.4. Procedimiento.
A. Aislamiento de glucgeno
a. En un tubo de prueba de 16 x 150 mm, depositar 5g. de higado ( triturado)
, adicione 4 mL de KOH al 30% luego colocar el tubo en Bao Mara
hirviente durante 20 minutos, agitando de vez en cuando.
b. Retirar los tubos y colocarlos en un recipiente con agua helada.
d. Adicionar 0.4 mL de solucin saturada de sulfato de sodio y mezcle
enrgicamente
e. Adicione luego 8 mL de alcohol absoluto ( para pp el glucgeno ), deje en el
bao de hielo durante 5 minutos.
f. Centrifugue por 5 minutos a 3,000 g.
g. Elimine el sobrenadante y disuelva el glucgeno pp en 5 mL de agua
destilada, (caliente suavemente para disolver ).
B. Hidrlisis y determinacin del glucgeno.
a. En una gradilla disponga dos tubos de prueba, y adicione a cada tubo 2mL de la
solucin anterior.
b. Adicionar a cada tubo 2 Ml de HCL 1.2 M., tape la boca de los tubos con una
bolita de vidrio, y luego coloque los tubos a B.M. por 2 hrs.
c. Agregue a cada tubo I gota de rojo de fenol y neutralice con NaOH 0.5 M hasta
que el indicador vire de rosa a anaranjado y luego a amarillo.
d. Deje enfriar y luego complete a 5 ml con agua destilada.
e. Determine luego glucosa por el mtodo de la glucosa oxidasa.
10.5. Resultados.
El glucgeno se expresa en mg/dL de glucosa.
10. 6. Cuestionario.
a. Grafique la cascada glucogenoltica
b. Fundamente la causa por la que la glucosa no se almacena en el organismo
como glucosa, sino bajo la forma de glucgeno.
c. Describa como actan las enzimas que intervienen en la glucogenolisis.
d. Cmo se realiza la regulacin de la glucogenogensis?
10.7. Fuentes de Informacin.

a.
F CV3-3B-2

Lehninger, A. Bioqumica. Barcelona . Omega. 2002.

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b.

Devlin TM. Bioqumica con aplicaciones clnicas. Barcelona.

Revert Colombiana S.A. 2000.
c.
Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias de la Salud.
Espaa McGraw - Hill- Interamericana. 2001.
d.
Luque L. y Hermoza A. Biologa
Molcular e
Ingenieria
Gentica. Barcelona. Hartcourt. 2001.
e.
Martin DW . Bioqumica de Harper.. Mxico. Manual
Moderno.2000.

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Rev. Junio 2007

31

PRACTICA N 11
11. ESQUEMATIZAR EL CICLO DE KREBS
12.1. Marco terico.
El ciclo del cido ctrico desempea un papel central en el metabolismo energtico.
Este ciclo, ms llamado tambin ciclo del cido tricarboxlico o ciclo de Krebs, es la
ruta central de la respiracin oxidativa; en l se originan una serie de reacciones en
la matriz mitocondrial que implican la oxidacin de unidades de acetilo CoA que
contina su proceso de oxidacin hasta convertirse en CO2 y H2O ,mediante un
conjunto de reacciones que constituyen el ciclo de Krebs punto central donde
confluyen todas las rutas catablicas de la respiracin aerobiaa CO2 con la produccin
de equivalentes reductores y ATP
En este ciclo se consigue la oxidacin total de los dos tomos de carbono del resto
acetilo, que se eliminan en forma de CO2; los electrones de alta energa obtenidos en
las sucesivas oxidaciones se utilizan para formar NADH Y FADH2, que luego entrarn
en la cadena respiratoria .

11.2. Competencia
Conceptualiza la produccin de energa en forma de ATP a travs de la oxidacin
de unidades de acetil CoA.
11.3. Material y equipos
a. Bibliografa del silabo de Bioqumica I.
b. Bibliografa de carcter cientfico (revistas, manuales, etc.).

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32
c.
d.
e.
f.

Retroproyector.
Videos VHS, etc.
Libros y revistas.
C D .Power point.

11.4. Procedimiento.
Se realizar de acuerdo a la tcnica para elaborar el esquema del ciclo de Krebs,
teniendo en cuenta los elementos que intervienen en la elaboracin de un esquema
metodolgico.
11. 5. Resultados.
Al finalizar la clase los alumnos presentarn sus esquemas respectivos
11.6. Cuestionario.
a. Explicite a que se debe , que el ciclo de Krebs se considerado como una ruta
anfiblica.
b. Grafique la interrelacin de los principios inmediatos y el ciclo de Krebs.
c. Describa las 10 reacciones del ciclo de Krebs
d. Elabore un esquema del metabolismo oxidativo de los principios inmediatos.

11.7. Fuentes de Informacin.

a. Lehninger, A. Bioqumica. Barcelona. Omega. 2002.
b. Luque L y
Hermoza A. Biologa Molcular e Ingenieria Gentica.
Barcelona. Hartcourt. 2001.
c. Martin DW. Bioqumica de Harper. Mxico. Manual Moderno.2000.
d. http://www.arrakis.es/~lluengo/ciclokrebs.html
e . http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/krebs.html
f. http://es.wikipedia.org/wiki/Ciclo_de_Krebs
http://marc.pucpr.edu/facultad/santos/bioquimica446/CAP11%20Ciclo%20de
%20Krebs.pdf

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Rev. Junio 2007

33
PRACTICA N 12
12. DETERMINACION DE TRANSAMINASAS
12.1. Marco terico.
Las transaminasas son dos: la alaninoaminotransferasa (ALT
-GPT) y la
aspartatoaminotransferasa( AST GOT ). La elevacin de transaminasas se produce
por una alteracin en la permeabilidad celular, con salida de las enzimas desde el
hgado al torrente circulatorio. La concentracin de ellas en el hepatocito es muy
elevada y cada vez que se altera difusamente la permeabilidad de la membrana
citoplasmtica, sea por necrosis o por inflamacin, las transaminasas experimentan
un aumento de actividad en sangre perifrica.
La actividad en plasma es importante en presencia de un dao heptico agudo,
donde la inflamacin y la necrosis celular son un fenmeno
masivo (sobre 500
mU/ml y habitualmente sobre 1000 mU/ml).
En el dao heptico crnico, el incremento de transaminasas es comn, pero no es
nunca de gran magnitud, llegando por lo general a niveles de alrededor de 200
mU/ml. Esto ocurre porque el dao es difuso, pero no es agudo. Esta alteracin de
la permeabilidad se produce en parte por el efecto detergente de las sales biliares
que se retienen y en parte por el proceso inflamatorio crnico, presente en la mayor
parte de las cirrosis.
Las transaminasas requieren la coenzima piridoxal-fosfato, que se convierte en
piridoxamina en la primera fase de la reaccin, cuando un aminocido es convertido
en un cido ceto. La piridoxamina enlazada a la enzima reacciona con alanina,
oxalacetato o alfa-cetoglutarato, dando piruvato, cido asprtico o cido glutmico,
respectivamente.
Cuando los niveles de glucosa en sangre son bajos, el organismo debe romper las
protenas en aminocidos, a expensas del tejido muscular. La preferencia de las
transaminasas del hgado por el oxalacetato o el alfa-cetoglutarato desempea un
papel fundamental en la canalizacin del nitrgeno desde el metabolismo de los
aminocidos a asparagina y glutarato, para la conversin a urea que sirve como
excrecin del nitrgeno. Del mismo modo sucede en los msculos, donde el uso del
piruvato en la transaminacin produce alanina, que es llevada por la corriente
sangunea al hgado. All, otras transaminasas regeneran el piruvato, que
proporciona un valioso precursor para la gluconeognesis.
12.2. Competencia.
Determina la concentracin en
suero ,
de
alaninoaminotransferasa y aspartatoaminotransferasa.

las

transaminasas

12.3. Material y equipos.

12.3.1. Equipos y material.

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a. Espectrofotmetro.
b. Centrifuga.
c. Bao Mara regulado a 37C.
d. Jeringas descartables.
e. Micropipietas de 0 a 50 uL
f. Tubos de prueba de 13 x 100mm.
g. Gradilas, algodn, ligadura.
12.3.2. Reactivos
a.
b.
c.
d.

Sustrato GOT.
Sustrato GPT.
Standard de Piruvato.
Reactivo de color de 2, 4- dinitrofenilhidrazina

12.4. Procedimiento.
12.4.1. Hacer la curva de calibracin de acuerdo al siguiente esquema.
REACTIVOS

TUBOS
1

Agua destilada ( mL )

02

02

02

02

02

02

Standard (mL.)

01

02

03

04

05

Sustrato GOT (mL )

1.0

1.0

0.8

0.7

0.6

0.5

Reactivo de color mL

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

Mezclar e incubar a 37 C x 20 minutos a la temperatura del cuarto

NaOH 0.4 N mL

1.0

1.0

1.0

1.0

Mezclar. Reposo 5 minutos . Leer a 505 nn contra el blanco que es el tubo N 1

UNIDADES

U /L

U /L

U /L

U /L

U /L

U /L

GOT

22

55

95

150

215

GPT

25

50

83

126

Graficar en papel milimetrado las unidades de transaminasa en el eje X y las

absorbancias en el eje Y.

12.4.2. Determinacin de transaminasas en suero.

a.

En una gradilla disponer tres tubos marcados B (blanco; P1 (GOT ) y P2

(GPT ) y proceder como sigue:
Blanco

P1 GOT

P2 GPT

Sustrato GOT mL

0.5

0.5

Sustrato GPT mL

05

Incubar a 37 C x 5 minutos
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Agua destilada mL
Suero
Incubar a 37C
Reactivo de color mL

0.1

0.2

0.2

60 min

60 min

30min.

0.5

0.5

0.5

Incubar a temperatura ambiente x 20 minutos

NaOH 0.4 N mL

5
Mezclar por inversin y leer a 505 nn

12.4.3. Clculos.
Interpolar las lecturas obtenidas para GOT y GPT en la curva de calibracin
para obtener las unidades respectivas de transaminasas.
12.4.4.Valores de transaminasas referenciales.
GOT De 5 a 40 U/L
GPT de 5 a 45 U/L
12. 6. Cuestionario.
a. Qu ocurre , si una persona consume ZCCcor en forma permanente.Porqu?
b. El dosaje de las transaminasas , se puede llevar a cabo sin la presencia del
piridoxal fosfato
c. Cmo dosara Ud un suero que de antemano le indican , que tiene ms de mil
unidades de TGO
d. Explique a que se debe que para calcular las unidades de aminotransferasas
no se utilice factor.
e. Considera Ud, que un suero hemolizado , no se puede utilizar para determinar
aminotransferesas.
12.7. Fuentes de Informacin
a. Reitman and Frankel. Am. J. Clin. Path. 28 ( 56 ), 1957.
b. Lehninger, A. Bioqumica. Barcelona . Omega. 2002.
c. Luque L y Hermoza A.Biologa Molcular e Ingenieria Gentica. Barcelona.
Hartcourt. 2001.
d. Martin DW. Bioqumica de Harper. Mxico. Manual Moderno. 2000.

PRACTICA N 13
13. DETERMINACION DE UREA

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13.1. Marco terico.

La rea es el metabolito final del metabolismo de las proteinas ,es excretada en
grandes cantidades por la orina. Su excrecin es la funcin principal del rin,
representando por s sola bastante ms de la mitad del residuo slido de la orina.
Usualmente constituye del 80 al 90% del nitrgeno total; El cuerpo produce en
promedio 25 a 30 gramos de urea al da algo ms en personas que comen dieta rica
en protenas, menos en personas con dieta pobre en protenas Toda esta urea debe
eliminarse por orina; de lo contrario se acumular en lquidos corporales.
Los dos factores principales que establecen el ritmo de excrecin de urea son: 1) la
concentracin de urea en el plasma, y 2) la intensidad de filtracin glomerular.
Estos factores aumentan la concentracin de rea.
En general, la cantidad de rea que pasa por los tbulos y va a la orina es
aproximadamente proporcional a la carga de rea que penetra en los tbulos
proximales, en promedio 50 a 60%. Sin embargo, esto solo es cierto cuando la
intensidad de filtracin glomerular es normal.
Cuando la intensidad de filtracin glomerular es muy baja, el filtrado persiste en los
tbulos por largo tiempo, antes de acabar en la orina.
Como todos los tbulos son por lo menos ligeramente permeables a la urea, cuanto
ms tiempo persista el liquido tubular en los tbulos, mayor reabsorcin de rea
hacia la sangre; la proporcin de rea filtrada que llega a la orina disminuye
considerablemente.
Por otra parte, cuando la filtracin glomerular es muy intensa, el liquido pasa a
travs del sistema tubular tan rpidamente que se reasorbe muy poca rea. Por lo
tanto con intensidad de filtracin glomerular muy elevada, casi el 100% de rea pasa
a la orina.
Es importante destacar que en aquellos pacientes con insuficiencia renal se debe
conservar la intensidad de filtrado glomerular en valores altos, debido a que cuando
esta disminuye demasiado, se incrementa la rea en sangre.
13.2. Competencia.
Determinar rea en sangre por el mtodo enzimtico de la ureasa.
13.3. Materiales y equipos.
13.3.1. Equipos y materiales.
a.
b.
c.
d.

Espectrofotmetro.
Centrifuga.
Bao Mara regulado a 37.
Jeringas descartable x 5 mL; ligadura y algodn.

e. Tubos de prueba de 13 x 100 mm.

f. Micropipetas de 0 a 50 uL., pipetas de 1 , 5 y 10 ml.
g. Gradillas, baguetas.

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13.3.3.2.Reactivos.
a. Reactivo 1: contiene fenol y nitroprusiato de sodio.
b. Reactivo 2: contiene una solucin concentrada de hipoclorito de sodio e
hidrxido de sodio.
c. Ureasa en solucin.
d. Standard de rea solucin de rea 60 mg / dL.
13.4. Procedimiento.
a. En una gradilla disponer 3 tubos de prueba de 13 x 100 ml., marcarlos con las
letras S (standard ); P (problema ) y B (blanco ) y proceder como sigue :

Standard

20ul

Suero

20ul

Ureasa

I gota

I gota

Igota

Mezclar por agitacin suave e incubar x 5 minutos a 37C Luego

agregar
Reactivo N 1 mL.

Reactivo N 2 mL.

Mezclar por agitacin suave e incubar x 5 minutos a 37C Luego

agregar
Agua destilada mL

10

10

10

b. Mezclar por inversin . Reposos 10 minutos y leer a 540 nn.

c. Calcular la concentracin de rea en mg/dL aplicando la siguiente frmula
mg / dL = lectura del problema

60

lectura del Standard

13.4.1. Valores de referencia. De 20 a 45 mg / dL.
13.6. Cuestionario.
a. Explique porque para obtener mg/dL, se multiplica por 60.
b. Cmo se convierte el N urico en urea y, viceversa
c. Grafique la interrelacin del ciclo de la 3rea con el ciclo de Krebs.

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d. Indique que enzimas actan en la mitocondria, y cules en el citoplasma, en el
ciclo de la rea.
e. Se requiere de ayuno para realizar la determinacin de rea en sangre.

13.7. Fuentes de Informacin.

a. Devlin T homas M. Bioqumica con Aplicaciones Clnicas. tomos I y II.
Barcelona. E Revert Colombiana. S A. 2000.
b. David LN , Cox M M, Lehninger Principios de Bioqumica . Barcelona.
c. Omega. 2001.
d. Lozano Galindo. Bioqumica para Ciencias de la Salud. Espaa. McGraw Hill- Interamericana.
e. Luque L y
Hermoza A. Biologa Molcular e Ingenieria Gentica.
Barcelona. Hartcourt. 2001.

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39
PRACTICA N 14
14.MAPA CONCEPTUAL AMINOACIDOS RELACIONADOS
CON CICLO DE KREBS
14.1. Marco terico.
Los aminocidos son los componentes bsicos de las protenas, sin embargo en cada
protena, la secuencia, es decir el orden en que van ordenados los aminocidos, es
diferente. El nmero de secuencias posibles es tan grande que se explica la gran
cantidad de protenas diferentes
La gran mayora de los aminocidos que consumimos estn en forma de protenas,
no obstante slo los aminocidos pueden incorporarse a las diferentes rutas
metablicas, pero para ello, los pptidos y las protenas consumidas deben ser
hidrolizadas por medio de enzimas proteolticas (secretadas por el estmago,
pncreas e intestino delgado) en el tracto gastrointestinal, liberndose como
consecuencia de ello los aminocidos, que al quedar libre son absorbidos y
transportados a la corriente sangunea a travs de la que llegan al hgado donde
ocurre su metabolismo , distribuciny utilizacin
Las protenas endgenas tambin se degradan despus de un tiempo y adquieren
unas seales que van a indicar a las enzimas de degradacin cuando deben comenzar
su proceso.
Cuando el organismo atraviesa crisis funcionales, tales como :desnutricin aguda o
crnica, traumatismos o trastornos articulares y/o musculares, alteraciones en el
tracto gastrointestinal, hepatitis, afecciones renales, deficiencias cerebrales o
nerviosas, etc. o demandas extras por razones mecnicas (atletas, etc.) o cerebrales
(estrs, exmenes, etc.) se produce aumento en el consumo de los aminocidos,
donde se hace necesrio la administracin exogna de los mismos .Un recurso
preventivo es la la ingesta de alimentos que contengan aminocidos, sobre todo en
los casos de decadencias de las funciones orgnicas derivadas de la edad
Es importante destacar que el organismo no almacena el exceso de aminocidos que
provienen de la dieta, lo que ocurre es que los transforma en intermediarios
metablicos comunes como son el piruvato, oxalacetato y
a-cetoglutarato, es
decir, que los aminocidos van a ser precursores de la glucosa, cidos grasos y
cuerpos cetnicos, es decir, actan como combustible y precursores metablicos
14.2. Competencia.
Conceptualiza la importancia de los aminocidos como precursore de la glucosa, cidos
grasos y cuerpos cetnicos.
14.3. Materiales.
a. Bibliografa del silabo de Bioqumica I.

b. Bibliografa de carcter cientfico (revistas, manuales etc.).

c. Retroproyector.
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d. Videos,VSH.
e. Libros y revistas.
f. CD. Power point.
14.4. Procedimiento.
Se realizar de acuerdo a la tcnica para elaborar los mapas conceptuales ,
teniendo en cuenta los elementos que intervienen en la elaboracin de un mapa
conceptual.
14.5. Resultados.
El alumno habr elaborado el mapa conceptual de la interrelacin de determinados
aminocidos con los intermediarios del ciclo de Krebs.
14.6. Cuestionario.
a.
b.

Elabore un mapa conceptual del catabolismo de los aminocidos

Elabore un grfico del destino de los aminocidos en relacin con el ciclo de
Krebs.
c. Indique los transtornos del ciclo de la rea.
d. Elabore un mapa conceptual de las hiperamoniemias.
14.7. Fuentes de informacin.
a. Lehninger A. Bioqumica. Barcelona . Omega. 2002.
b. Luque L y
Hermoza A. Biologa Molcular e Ingenieria Gentica.
Barcelona. Hartcourt. 2001.
c. Devlin TM. Bioqumica con aplicaciones clnicas. Barcelona. Revert Colombiana
S.A. 2000.
d. Lozano - Galindo. Bioqumica para Ciencias de la Salud. Espaa McGraw
- Hill- Interamericana. 2001.
e. Martin DW . Bioqumica de Harper.. Mxico. Manual Moderno.2000.

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