Prctica 7: Cromatografa en capa fina

Operaciones Bsicas de Laboratorio

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Aida Laureano Nez

1. Introduccin
En la prctica nmero 7 hemos aprendido acerca de las tcnicas cromatogrficas. La cromatografa es una tcnica que se basa en la separacin de los componentes de una mezcla y es usada en todas las ramas de la ciencia. En las tcnicas cromatogrficas se pueden observar tanto la fase estacionaria que est constituida por un slido finamente dividido o por un lquido viscoso, y tiene carcter polar, como la fase mvil que fluye a travs de los poros de la fase estacionaria por capilaridad, en funcin de su polaridad. Segn la afinidad que tengan los componentes de una mezcla por cada una de las fases se repartirn por ellas de una forma determinada. La separacin de los componentes se da gracias a que la fase estacionaria tiene un efecto de retencin que vara en funcin de la polaridad adems del efecto de desplazamiento que ejerce el eluyente. El efecto de retencin ser mayor cuanto ms polar sea el componente que se quiere separar y, por tanto, ese componente recorrer una distancia menor. La velocidad del efecto de desplazamiento ser mayor a medida que aumente la polaridad de la fase mvil. En este caso la fase estacionaria es una placa cromatogrfica, y la fase mvil sern los diferentes eluyentes. Las dos fases interaccionan de forma que la fase mvil sube a travs de los poros de la fase estacionaria. Segn est dispuesta la fase estacionaria hay diversas tcnicas cromatogrficas, pero la que se utiliza en esta prctica es la cromatografa en capa fina.

2. Desarrollo experimental
Para comenzar la prctica el primer paso realizado fue preparar los cuatro diluyentes en los que se realizaron las cuatro cromatografas. El eluyente 1 era de acetona, etanol y agua en proporciones 3:2:1, el eluyente 2 de acetonitrilo y agua (10:1), el eluyente 3 de acetonitrilo, agua e hidrxido amnico (5:3:5) y el eluyente 4 de acetonitrilo, agua e hidrxido amnico pero en diferentes proporciones (5:1:1). El siguiente paso se trat de marcar en las cuatro placas cromatogrficas una lnea paralela al borde en la que se pintaron cuatro puntos con la misma separacin (equidistantes) en los que despus de aadiran, en el caso de la primera cromatografa, los tres colorantes (Rodamina, Fluorescena y azul de metileno) y la mezcla. Para realizar la primera cromatografa, se coloc una microgota de la mezcla con la ayuda de una pipeta Pasteur en la primera marca sealada anteriormente en la placa cromatogrfica. A continuacin, en la marca de la derecha de la de la mezcla se aadi una gota de colorante R, en la siguiente marca una gota de colorante F y en la ltima una gota de colorante A. Al poner los colorantes en la placa al lado de la mezcla de la que queremos saber cules son sus componentes, nos sirven de patrn para despus averiguarlo comparando las manchas. Una vez secas las manchas, se introdujo en una duquesa el eluyente 1, despus, se coloc en posicin vertical en la duquesa la placa cromatogrfica de forma que quedara apoyada en la

pared y se dej reposar hasta que el eluyente subiera arrastrando los colorantes hasta una altura cercana al borde superior de la placa. El ltimo paso se trat de sealar con un lpiz tanto la altura del frente del eluyente como el contorno de las manchas observadas y despus se midi la altura que haban alcanzado las manchas de los diferentes colorantes as como la que alcanz el frente del eluyente. Para las siguientes tres cromatografas utilizamos una mezcla problema (en mi caso problema 3) y en lugar de colorantes, utilizamos L-arginina, L-alanina y L-prolina, procediendo de la misma forma que en la cromatografa anterior pero en cada cromatografa utilizando un eluyente diferente con distinta polaridad cada uno. El eluyente con menor polaridad es el eluyente 2, el de polaridad intermedia es el eluyente 4 y el eluyente con mayor polaridad es el eluyente 3 ya que contiene mayor cantidad de hidrxido amnico que el 4. Una vez sacadas las placas cromatogrficas de la duquesa hay que usar un agente revelador, en este caso ninhidrina, para poder observar las manchas ya que en este caso a diferencia de los colorantes, no tienen color. Por tanto, se mete la placa en un bote de ninhidrina, se escurre y por ltimo se seca. As se podrn observar las manchas, pudiendo de esta forma sealarlas con un lpiz y medir el desplazamiento de cada componente. Analizando la tabla y observando las placas cromatogrficas concluimos que la mezcla de la primera cromatografa se compone de los tres tipos de colorantes y que muestra problema 3 se compone de prolina y arginina. Los aminocidos son polares, por tanto, el eluyente ms ptimo para separarlos es el ms polar (en la prctica el eluyente ms polar es el de acetonitrilo:agua:hidrxido amnico 5:3:5). Entonces, observando la placa cromatogrfica en la que el eluyente fue el de acetonitrilo:agua:hidrxido amnico 5:3:5 se puede ver que en ella los aminocidos han subido ms que en las otras placas con los otros eluyentes y, se detecta con claridad de qu aminocidos est formada la mezcla problema.

3. Clculos
Los clculos realizados en la prctica de cromatografa en capa fina para poder preparar los distintos eluyentes son: -Primero para preparar los 55mL de acetonitrilo:agua (10:1)

Entonces en los diluyentes restantes se ha calculado con el mismo procedimiento, por tanto, las cantidades necesarias para preparar los volmenes son: -Para preparar los 6mL de acetona:etanol:agua (3:2:1) son 3mL de acetona, 2mL de etanol y 1mL de agua. -Para los 6,5mL acetonitrilo:agua:hidrxido amnico(5:3:5) se necesitan 2,5mL de acetonitrilo, 1mL de agua y 1mL de hidrxido amnico. -En el caso de los 7mL de acetonitrilo:agua:hidrxido amnico(5:1:1) son 5mL de acetonitrilo, 1 mL de agua y 1mL de hidrxido amnico.

Una vez realizado las cuatro cromatografas, se calcul el siguiente forma: Segn esa ecuacin, los clculos de las son:

de cada componente de la

para los componentes de la primera cromatografa

-La mezcla estaba formada por los tres colorantes:

-Ahora se calcula el

de los patrones de los colorantes:

Los clculos de los anteriores.

para las dems cromatografas se hacen de igual forma que los

4. Discusin de los resultados

Despus de realizar la prctica, estos son los resultados obtenidos: Eluyente Componentes Mezcla: -3,9 cm Colorante F Colorante R Colorante A Patrn R Patrn F Patrn A Problema 3 -3,6 cm L-Arginina L-Alanina L-Prolina Problema 3 -3,3 cm L-Arginina L-Alanina L-Prolina Problema 3 -3,4 cm L-Arginina L-Alanina L-Prolina Distancia 3,5 cm 2 cm 0,5 cm 2 cm 3,5 cm 0,5 cm 0,2 cm 0,1 cm 0,2 cm 0,2 cm 1,8 cm 1,2 cm 2,7 cm 2,4 cm 0,4 cm 0,2 cm 0,8 cm 0,6 cm 0,8974 0,5128 0,1282 0,5128 0,8974 0,12820 0,0555 0,2777 0,0555 0,0555 0,5454 0,3636 0,81818 0,72727 0,11764 0,0588 0,23529 0,17647

2 3 4

En el caso de la cromatografa de la mezcla de los colorantes la prctica se ha desarrollado segn lo previsto. Puede observarse como la mezcla inicial, que posea un color morado, al final ha quedado separada entre sus tres componentes (los tres colorantes), y asimismo podemos observar que cada patrn coincide con cada mancha de la mezcla. Entonces, al estar a la misma altura, tienen el mismo Rf, por lo que el Rf de la fluorescena coincide con el de la mancha amarilla y el Rf de la rodamina coincide con el de la mancha rosa. En la segunda parte de la prctica sabiendo que cuanto ms polar es un compuesto, ms retenido queda en el adsorbente polar y menor ser su Rf y que, adems, para un mismo compuesto, un incremento en la polaridad del eluyente aumentar su desplazamiento en la placa, y por tanto el valor de su Rf, hemos obtenido el resultado esperado. El resultado es satisfactorio ya que los Rf aumentan a medida que aumenta la polaridad del eluyente. Asimismo, se ha conseguido averiguar de qu aminocidos se compona la muestra problema 3. Mirando la placa cromatogrfica o haciendo la comparacin de los Rf se observa que est compuesto de prolina y arginina.

5. Conclusin
En esta prctica la fase estacionaria es mucho ms polar que las fases mviles que se han preparado. Entonces, al observar que el aminocido arginina es el que menos se desplaza en las cromatografas se concluye que es el ms polar, es el que tiene ms afinidad por la fase estacionaria. Si observamos la frmula de la arginina y la comparamos con la de los otros dos

aminocidos que se estudian en la prctica la conclusin a la que se llega es la correcta ya que es el nico aminocido que se encuentra cargado positivamente.