Membrana (I parte)

Introduccin
La estructura y funcin de las clulas dependen de las membranas, las cuales no slo separan el interior de la clula de su medio ambiente sino tambin definen los compartimentos internos de las clulas eucariticas, incluyendo el ncleo y los organelos citoplasmticos. Todas las membranas comparten una estructura comn : una bicapa de fosfolpidos. A esta bicapa se asocian protenas y carbohidratos. Las protenas participan en los procesos de transporte y los carbohidratos en procesos de reconocimiento celular.

Prof. Ivn Rebolledo

En 1935, Hugh Davson y James Danielli propusieron que la membrana plasmtica era una bicapa de lpidos sobre la cual quedaban adheridos una capa de protenas globulares en ambas interfases lpido-agua. Ellos fueron los primeros en intentar explicar las propiedades fisiolgicas de la membrana sobre bases estructurales. El modelo de Davson-Danielli es un modelo laminar, es decir, sus componentes lipdicos y proteicos se encuentran dispuestos en lminas o capas continuas. Estas lminas forman un plano en dos dimensiones de protenas separadas por un plano de lpidos : un emparedado lipo-proteico. De esta manera, las propiedades hidroflicas de la membrana se explicaban por las cubiertas proteicas asociadas a los residuos fosfatos de los fosfolpidos y las propiedades hidrofbicas a su centro lipdico.

Modelos moleculares de la membrana

A. Modelo de Davson-Danielli Los principales problemas que se plantearon al inicio de los aos 30 eran los relacionados con la permeabilidad y las tensin superficial de las membranas naturales. Si la membrana era una bicapa lipdica, cmo es que poda ser atravesada por el agua? y cmo disminua la bicapa lipdica la tensin superficial frente al medio acuoso?.

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B. Modelo de unidad de membrana o de Robertson En los aos 50, la resolucin del ME ya permita observar la composicin estructural celular, utilizando tetrxido de osmio (OsO4) como fijador. Las membranas celulares se vean como lneas gruesas muy teidas de negro. Una dcada despus, David Robertson utilizando permanganato de potasio (KMnO4) como fijador encontr que las lneas gruesas en realidad eran estructuras trilaminares. Todas las membranas que l examin (animales, vegetales, microrganismos) mostraban la misma estructura trilaminar. Esto deduca que la imagen no era un artefacto. Adems, la misma imagen apareca aunque se cambiara de fijador. As, Robertson introdujo el concepto de unidad de membrana para describir una estructura que estaba presente en membranas procarticas y eucariticas.

El modelo de Robertson considera a la membrana como compuesta de dos lneas electrnicamente densas de 20 de espesor con un espacio interlnea de 35 , lo que hace un espesor total de la membrana de 75 . Aunque las dos lneas densas eran de 20 de espesor podan observarse diferencias entre las capas externa e interna, es decir, haba una asimetra con respecto a sus mitades externa e interna.

La pregunta aqu es: qu se tie de negro en la membrana? Cuando se tiieron membranas a las que se extrajeron los lpidos, se mantena la estructura trilaminar y cuando se tean membranas lipdicas sin protenas la observacin de la estructura trilaminar no se haba alterado. Estas conclusiones sugieren que las protenas y las terminaciones hidroflicas de las molculas lipdicas se tien con el osmio y se convierten en una lnea electrnicamente densa al ME:

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Las variaciones de grosor que pueden existir entre las membranas pueden ser explicadas por la relacin protena : lpido. Ejemplos:
Membrana Mielina Membrana hepatocito Membrana clula. intestinal Membrana externa mitocondr Membrana interna mitocondr Lminas cloroplasto Prot:Lipi 0.25 1.00 4.60 1.20 3.60 0.80

Por esto, la revisin crtica de este modelo est basada en las siguientes observaciones: (a) en cortes muy finos se aprecia la existencia de puentes que atraviesan la bicapa lipdica (ver figura ms abajo); (b) por criofractura se revel la existencia de numerosas partculas en el plano de clivaje de la membrana; y (c) la aplicacin de fijadores que evitan la extraccin de protenas ofrece un aspecto granular a la membrana.

Estas diferencias en la relacin protena : lpido puede correlacionarse con las funciones particulares que desempean cada una de estas membranas. Por ejemplo, la membrana interna de la mitocondria posee gran cantidad de protenas enzimticas que intervienen en el metabolismo respiratorio y produccin de ATP. La membrana presente en las vainas de mielina contienen altas concentraciones de lpidos para lograr un aislamiento elctrico que permita una eficiente conductibilidad nerviosa. En la actualidad, el modelo de la unidad de membrana representa una acentuada simplificacin de la ultraestructura de la membrana y no toma en cuenta las protenas que atraviesan dicha membrana.

C. Modelo del mosaico fludo El modelo del mosaico fludo es el que hasta ahora tiene una aceptacin general y enfatiza las caractersticas dinmicas de la organizacin de la membrana, ya que incluye la movilidad e interaccin entre las protenas y los lpidos en la membrana.

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Este modelo descrito en 1972 por S.J. Singer y G.L. Nicolson, considera a la doble capa de lpidos como el esqueleto aglutinante de la membrana, en la cual se encuentran incluidos las protenas que interactan con los lpidos y tanto los lpidos como las protenas pueden realizar movimientos de traslacin dentro de la bicapa. Esta posibilidad de movimiento presupone que entre las molculas de lpidos y protenas deben existir interacciones dbiles, principalmente de carcter hidrofbica.

de movimientos: a) rotacional: en torno a un eje perpendicular a la superficie de la membrana, b) lateral: desplazamiento en el plano de la membrana, y c) transversal: pasar de una cara de la bicapa a la otra, promovido por una protena translocadora denominada flipasa. Las protenas tambin experimentan movimientos: la rotacional y la lateral, nunca transversal. Este modelo contempla 2 categoras grandes de protenas: las integrales y las perifricas. Las protenas integrales o intrnsecas son de difcil extraccin, ya que estn mantenidas firmemente en la bicapa por interacciones hidrofbicas y/o hidroflicas. Como se muestra en el esquema, algunas de ellas atraviesan toda la membrana (transmembranales), en cambio otras estn asociadas a la capa externa o interna de la bicapa. Como se mencion en la seccin de protenas, las caractersticas qumicas de los radicales laterales de los aminocidos determinan la estructura terciara de la protena. As, las porciones de la protena que estn incluidas en la bicapa lipdica tendrn sus radicales hidrofbicos orientados hacia las cadenas hidrocarbonadas de los lpidos y los radicales hidroflicos se orientan

Como puede observarse en el dibujo de arriba, una bicapa de lpidos es la base fundamental de la membrana, en ella se encuentran dispersas varias protenas, algunas atravesando toda la membrana pero otras solo ocupan una mitad de la misma. El estado fluido de la membrana implica la movilidad de sus componentes. Recordamos el tema de los lpidos que poseen tres tipos

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hacia el exterior o interior de la membrana. La protena transmembranal dispondr sus radicales hidrofbicos en la seccin que cursa por la membrana y sus radicales hidroflicos se orientan hacia el interior y al exterior de la membrana, como se muestra en la figura de abajo.

Las actividades diferentes de los distintos tipos de membranas parecen ser el reflejo de las diferentes clases de protenas presentes en la membrana o en alguna regin de ella. Adems las diferencias en el espesor de la membrana pueden estar relacionado con la presencia de cantidades importantes de ciertas protenas. Por ejemplo, en membranas gruesas predominan las protenas perifricas en cambio, en las membranas delgadas predominan las protenas integrales. C. Anlisis por criofractura La aplicacin de la tcnica de criofractura al estudio de las membranas ha aportado muchos conocimientos sobre la estructura de las membranas y ha apoyado el modelo de mosaico fluido. La tcnica de la criofractura se inicia congelando el tejido. Para evitar la formacin de cristales de hielo que pudieran destruir las estructuras celulares, la muestra se infiltra con glicerol y se congela rpidamente en fren lquido (o nitrgeno lquido). En corto tiempo el tejido queda congelado y duro. En un borde del mismo se golpea con una cuchilla muy fra, producindose un plano de fractura que abarca toda la muestra y que corresponde a regiones de menor unin molecular.

Las protenas perifricas o extrnsecas son de fcil extraccin, ya que estn asociadas a la membrana por enlaces electroestticos dbiles, ya sea a las cabezas hidroflicas de las molculas lipdicas o a las porciones hidroflicas de las protenas integrales que sobresalen fuera de la membrana. Estas protenas no llegan a formar una capa continua sobre los lpidos.

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En el caso de las membranas (plasmticas e intracitoplasmticas) el plano de fractura se produce entre las 2 capas monomoleculares de la bicapa lipdica, es decir, entre la hoja interna y externa de la membrana. Luego, sobre estas superficies se deposita una fina capa de un metal pesado a fin de producir una rplica la cual pueda observarse al ME. La imagen producida muestra una superficie llena de partculas pequeas que representan componentes moleculares de la membrana, que por lo menos se extienden hasta la mitad del grosor de la membrana. (ver figura de abajo).

As, pueden aparecer partculas de diferentes tamaos en una o en ambas caras, deduciendo la presencia de protenas en dichas mitades de la membrana.

Doble capa de lpidos Desde los tiempos de Irving Langmuir (1800) se iniciaron los estudios tendientes a averiguar la estructura qumica de la membrana Langmuir encontr que los lpidos forman capas (monocapas) sobre una superficie hidroflica, ordenndose los grupos hidrofbicos hacia el aire y los hidroflicos hacia el agua. Como el plano de fractura pasa por el centro de la doble capa de lpidos, podrn mostrarse 2 tipos de caras: la cara P de la fractura o cara protoplasmtica y la cara E o cara ectoplasmtica.

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Luego, Gorter y Grendel en 1926 hicieron estudios cuantitativos sobre los lpidos existentes en la membrana de eritrocitos y otras clulas, encontrando siempre una relacin de superficie igual a dos, lo que sugera la existencia de una doble capa de lpidos. Concluyeron que los grupos polares (hidroflicos) de los lpidos estaban orientados hacia el exterior y los grupos no polares (hidrofbicos) hacia el interior de la membrana. Sus experimentos y conclusiones ya establecieron las propiedades anfipticas de las molculas de lpidos. bicapa

Componentes qumicos Las membranas plasmticas e intracitoplasmticas estn constituidas por lpidos, carbohidratos y protenas, en diferentes proporciones que varan segn los diferentes tipos celulares, como puede observarse en la siguiente tabla.
Protenas % Eritrocito hum. Hepatocito rata Mielina SNC Mitocondrias Lpidos %

60 59 20 70

39 40 79 29

Lpidos Las principales molculas lipdicas encontradas en la membrana son: fosfolpidos, colesterol y galactolpidos en proporciones variables segn la clula y organelo. A pH neutro, los fosfolpidos pueden ser cidos o neutros. La gran mayora (80-90 %) son neutros, dentro de los cuales se destacan la fosfatidilcolina, la fosfatidiletanolamina y esfingomielina. El restante 10-20 % son fosfolpidos cidos que generalmente se encuentran asociados a las protenas de la membrana, dentro de los cuales mencionamos la fosfatidilserina y fosfatidilglicerol.

En conclusin: la organizacin de los lpidos en doble capa, la formacin espontnea de la bicapa y la cohesin de las molculas dentro de la bicapa, determinan que las membranas sean estructuras contnuas, sin rupturas, solo desplazndose para acomodar las molculas de protenas. Adems, son estructura deformables que se adaptan a diferentes procesos celulares: locomocin, reproduccin, citosis, etc.

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Los gliceroesfingolpidos son minoritarios en las membranas, aunque hay excepciones: 10 % en los eritrocitos, 25% en la vaina de mielina y 30 % en la membrana de las microvellosidades de las clulas absortivas del epitelio intestinal. Un fosfolpido importante en los procesos de sealizacin celular es el fosfatidilinositol, que solo se encuentra en la mitad interna de la membrana. Este lpido suele encontrarse asociado con la fosfatidilserina y ambos estn cargados negativamente, lo que confiere a la mitad interna de la membrana su caracterstica carga negativa (ver pgina 61 de Lpidos). Un componente lipdico muy importante en la membrana es el colesterol. Como se mostr en el captulo de lpidos, esta molcula posee un extremo polar muy reducido y uno apolar muy amplio. Este ltimo extremo le permite ubicarse entre los extremos hidrofbicos de la bicapa lipdica. Dependiendo de la temperatura, el colesterol tiene efectos sobre la fluidez de la membrana. A temperaturas altas, el colesterol interfiere con el movimiento de las cadenas de cidos grasos de los fosfolpidos de la capa externa de la membrana, aumentando la rigidez y haciendo que sea menos permeable a pequeas molculas.

Por el contrario, cuando la temperatura es baja, el colesterol interacta con los cidos grasos promoviendo la fluidez. Este comportamiento es vital en las membranas de los animales que hibernan. Un hecho interesante sobre el colesterol es que est ausente de las membranas de los procariontes y tambin de la membrana interna de las mitocondrias: una relacin muy reveladora para precisar el origen de las mitocondrias (ver captulo Mitocondria) Por ltimo, el colesterol se requiere para el crecimiento y diversas funciones celulares, pero sus altos contenidos contribuyen al desarrollo de enfermedades cardiovasculares. Carbohidratos Al igual que los lpidos, su distribucin en la membrana es asimtrica, ya que los glucolpidos y glucoprotenas slo se encuentran en la capa externa de la membrana. As, las clulas estn cubiertas por una capa de carbohidratos, que suele llamarse glucoclix, el cual es muy evidente en la superficie de las clulas que conforman el epitelio del intestino. Los oligosacridos del glucoclix tienen doble funcin: por un lado sirven de proteccin a las clulas y, por otro lado, desempean

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funciones de reconocimiento celular, como por ejemplo, los leucocitos (glbulos blancos) en ocasiones deben abandonar los vasos sanguneos, las clulas de los vasos llamadas clulas endoteliales deben reconocer a los leucocitos para dejarlos atravesar la pared de los vasos. La membrana de las clulas endoteliales poseen una protena llamada selectina que es capaz de reconocer los carbohidratos de las glucoprotenas en la membrana de los leucocitos.

Como se explic antes, las protenas se clasifican en extrnsicas o intrnsicas, llamadas tambin perifricas o integrales, respectivamente. Las protenas perifricas representan el 30 % de las protenas de membrana, pueden aislarse con tratamientos qumicos suaves y como ejemplo estn la espectrina de los eritrocitos y el citocromo C en la mitocondria. En estas protenas, los aminocidos hidroflicos se ubican en la superficie y los hidrofbicos se ocultan en su interior. Las protenas intrnsicas representan el 70 % de las protenas de membrana, para aislarlas se requiere de tratamientos drsticos y estn asociados a carbohidratos y lpidos. En estas protenas los aminocidos hidrofbicos estn inmersos en la capa lipdica y los hidroflicos se exponen hacia las superficies exterior y citoplasmtica. La porcin hidrofbica tiende a rodearse de un tipo determinado de lpidos, llamados lpidos anulares cuyas funciones son restringir su difusin lateral, actuar como cofactor de su funcin y evitar escape de solutos por dicha interfaz. Algunas de estas protenas intrnsicas se ubican hacia la superficie citoslica y otras hacia el exterior. Esta ubicacin demuestra la disposicin asimtrica de las protenas en la membrana.

Protenas Ya que los lpidos son los elementos estructurales fundamentales de la membrana, las protenas constituyen las molculas que desempean las funciones especficas de las membranas, tales como transporte, endocitosis, reconocimiento, etc.

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Una forma de estudiar las protenas en la membrana ha sido la utilizacin de eritrocitos, que al ser puestos en soluciones hipotnicas, se hinchan y revientan, quedando trozos de membrana. Una pregunta previa: cmo saber en este trozo cul superficie es la citoslica y cul la exterior? Algunas de las protenas caracterizadas en estos trozos son: a) glucoforina: es una protena transmembrana, cuya secuencia de 131 aminocidos forman una simple cadena polipeptdica. La porcin amino terminal extracelular es hidroflica proyectndose hacia el exterior. Unidas a este dominio existen unas 16 cadenas de oligosacridos, los cuales estn unidos a la serina o treonina. La porcin intramembranal corresponde a la secuencia lineal de 23 aminocidos dispuestas en alfa hlice con propiedades hidrofbicas. La porcin carboxilo terminal es intracelular.

Los carbohidratos de la glucoforina determinan los antgenos de los grupos sanguneos. El sistema ABO son cadenas de oligosacridos ya explicados en el captulo de Carbohidratos (pgina 50). Otro punto interesante es que en los carbohidratos de la glucoforina predomina el cido silico (cido Nactilneuramnico), cuya prdida progresiva a travs de la circulacin durante los 120 das de sobrevida, va convirtiendo al eritrocito en clula extraa, la cual ser eliminada por los macrfagos existentes en el bazo. b) protena de la banda 3: se llama as por su posicin en una columna de gel de poliaacrilamida. Es una protena transmembrana con pocos carbohidratos hacia el exterior.

Como se observa en la figura superior, est conformada por dos unidades (un dmero), cada uno con una larga cadena que atraviesa 12 veces la membrana. Los extremos N y C terminales se ubican en el lado citoslico.

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La protena de la banda 3 se contribuye con las funciones respiratorias del eritrocito. As, a medida que los eritrocitos fluyen a travs de los capilares pulmonares intercambian aniones bicarbonatos (H CO3) por aniones cloruros (Cl-). Este intercambio se realiza a travs del poro transmembrana que dejan las dos molculas de la banda 3. c) espectrina: es una protena perifrica conformada por dos cadenas largas entrelazadas de unos 100 nm de largo. Este dmero se convierte en tetrmero unindose con la ancrina y sta a la protena de la banda 3.

glucoforina Banda 3

Ancrina

espectrina

Por ltimo, una alteracin de este citoesqueleto del eritrocito conduce a una alteracin de la forma. Sirva como ejemplo la esferocitosis que producindose una espectrina anormal tiene una unin defectuosa con la protena banda 4.1. Estos eritrocitos transportan menos oxgeno y son destruidos de manera preferencial en el bazo, ocasionando una anemia. Otras protenas de membrana que se consideran en posteriores captulos son: a) acetilcolinesterasa: en superficie externa postsinptica b) adenililciclasa: en superficie interna de clulas transportadoras c) ATPasa Na+K+: protena transmembrana que moviliza sodio hacia el exterior celular y potasio hacia el interior.

Por otro lado, la protena 4.1. se une a la glucoforina por un lado y a la espectrina por el otro. De esta forma se establece un enrejado subyacente a la membrana, como lo muestra la figura superior.

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1. Anotar 3 evidencias de la asimetra mostrada por las molculas constituyentes de la membrana : a) __________________________________________________ b) __________________________________________________ c) __________________________________________________ 2. Nombrar los movimientos que presentan las siguientes molculas en la membrana a) fosfatidiletanolamina ________________________________________ b) transportador de glucosa ________________________________________ 3. Anote 2 razones moleculares por las cuales se dice que la membrana plasmtica es asimtrica: a) ____________________________________________________________ b) ____________________________________________________________ 4. A qu se refiere el modelo de la unidad de membrana ? ______________________________________________________________ ______________________________________________________________ 5. Si Ud. quisiera obtener una membrana que permanezca fluda en un ambiente con calor y otra flua con ambiente fro, qu molculas utilizara en cada caso? a) calor ________________________ b) fro _________________________ 6. Cules seran las consecuencias de una mutacin en las siguientes protenas (anote solo una para cada protena) a) glucoforina ___________________________________________________ b) protena banda 3 ______________________________________________ c) ATPasa Na-K _________________________________________________ 7. Cul es la funcin del colesterol en la membrana? _______________________________________________________________ _______________________________________________________________