ipen

A U T A R Q U I A A S S O C I A D A U N I V E R S I D A D E
D E S O P A U L O
D E T E R M I N A O D E P E S T I C I D A S P I R E T R I D E S E M L E I T E
B O V I N O P O R M E I O D A C R O M A T O G R A F I A A G S
A C O P L A D A E S P E C T R O M E T R I A D E M A S S A S D E
A R M A D I L H A I N I C A - G C / I T M S ( " I O N T R A P " )
A N D R S A S S I N E
D issertao apresentada como parte
dos requisitos para obteno do G rau
de M estre em C incias na rea de
T ecnologia N uclear-M ateriais.
O rientador:
Dr. Jos O scar W. V ega B ustillos
S o P aulo
2002
INSTITUTO DE PESQUISAS ENERGTICAS E NUCLEARES
Autarqua associada Universidade de So Paulo
DETERMINAO DE PESTICIDAS PIRETRIDES EM LEITE BOVINO POR
MEIO DA CROMATOGRAFIA A GS ACOPLADA ESPECTROMETRIA DE
MASSAS DE ARMADILHA INICA -GC/ITMS ("ION TRAP")
ANDRE SASSINE
Dissertao apresentada como parte dos
requisitos para a obteno do Gran
de Mestre em Ciencias na rea de
Tecnologa Nuclear - Materiais.
Orientador:
Dr. Jos Osear W. Vega Bustillos
SAO PAULO
2002
SSSO riA C .G N L DE E ^ t R v i A WUCLEAH/ SP ^
DEDICATORIA
Este trabalho dedicado:
A Vivian Cotait Sassine, pelo total apoio e incentivo.
Aos meus irmos Wadih Sassine Neto e ngela Sassine.
A Deborah Hanae Moria Sassine, pela pacincia e apoio mcondicional.
A Yasuo Kamijo Moria, pelo exemplo de perseverana.
A Margaret Cebara, pelo incentivo e pelas valiosas aulas da lngua Inglesa.
Aos meus amigos, colegas de turma e professores da PUC-SP.
A Nazem Wadih Sassine e Fauze Sassine, em homenagem postuma.
AGRADECIMENTOS
Ao IPEN-SP, em especial a todos os ftmcionrios e pesquisadores do
departamento do Centro de Qumica e Materiais Ambientais - CQMA, sem os quais este
trabalho no poderia ser realizado.
Aos imcionrios e pesquisadores do departamento de resduos de pesticidas do
Instituto Adolfo Lutz-SP, em especial a Dra. Helosa H. B. de Toledo e pesquisadora
Vera R. Lemes, pelas orientaes quanto ao mtodo de extrao utilizado.
Ao Dr. Igor Vassiliefif e pesquisadora Denize Z. Bissacot, do Instituto de
Biocincias da UNESP-CEATOX de Botucatu, pelo estmulo e orientao quanto
extrao de resduos de Piretrides em leite.
Dra. Mitiko Yamaura do IPEN-SP, pelas prestativas discusses quanto ao
mtodo de extrao.
Aos funcionrios da empresa Varan Ind. e Com. Ltda., em especial a Adailton
Silva dos Santos pela orientao tcnica em espectrometria de massa.
pesquisadora Mar Estela de Vasconcellos do IPEN-SP, pelo auxlio quanto
coluna cromatogrfica.
Ao pesquisador Srgio C. Moura do IPEN-SP, pelo suporte s atividades em
laboratrio.
Ao Dr. Jos Oscar W. Vega Bustillos do IPEN-SP, pela orientao permanente
quanto cincia da espectrometria de massa quadrupolar, pelo bom humor e pela
pacincia.
"Quem no l, no pensa, e quem no pensa ser sempre um servo."
Paulo Francis
i OMi SSC W&CCNV..L t . ENh KGl NUCLEAF( / SP WtA
DETERMINAO DE RESDUOS DE PESTICIDAS PIRETRIDES EM LEITE
BOVINO POR MEIO DA CROMATOGRAFLi A GS ACOPLADA
ESPECTROMETRIA DE MASSAS DE ARMADILHA INICA -GC/ITMS ("ION
TRAP")
Andr Sassine
RESUMO
Neste trabalho procurou-se estabelecer as condies necessrias para a
deteco e quantificao de resduos de inseticidas Piretrides em leite bovino. A
eficincia do mtodo foi estabelecida atravs de experimentos de recuperao no qual
foram acrescentadas quantidades conhecidas do Piretride Cipermetrina ao leite bovino.
Para este fim foi apcado o mtodo de extrao com disperso em matriz de fase slida,
seguido de purificao com coluna de slica-gel. O extrato obtido foi anasado por
Cromatografia Gasosa acoplada Espectrometria de Massa - lon-Trap (GC/MS-IT). Com
o auxlio das tcnicas de Armazenagem de ons Selecionados (AIS) e Monitorao de ons
Selecionados (MIS) tomou-se possvel selecionar ons especficos do composto de
interesse que puderam ser separados da matriz orgnica subjacente. Aps o
estabelecimento das condies timas para a deteco dos resduos do Piretride
Cipermetrina, foram coletadas amostras de leite de um animal submetido a tratamento
veterinrio de parasitas utUizando-se um inseticida com um contedo 50g/L de
Cipermetrina em sua formulao. Os dados obtidos indicam contaminao do leite num
contedo mximo de 0,168 mg/kg aps 24 horas da apcao do inseticida. Considerando-
se o limite mximo residual de 0,01 mg/kg para a Cipermetrina em leite, as amostras
coletadas aps 15 e 24 horas da aplicao do inseticida apresentaram concentraes cerca
de dezesseis vezes superiores a este valor e, para a amostra coletada 11 dias aps a
aplicao, cerca de sete vezes superior a este valor. Aps 17 dias do tratamento, a
Cipermetrina no leite no foi detectada.
DETERMINATION OF PYRETHROIDS INSECTICIDES RESIDUES IN THE
MILK OF LACTATING DAIRY COWS BY GAS CHROMATOGRAPHY - ION
TRAP MASS SPECTROMETRY - GC/ITMS
Andr Sassine
ABSTRACT
The aim of this work was to establish the necessary conditions to detect and
quantify Pyrethroid insecticides residues in milk of lactating deiiry cows. The efficiency of
the method was settled through recovery experiments in which known quantities of the
Pyrethroid Cypermethrin were spiked up to mk. For this purpose, it was applied the
matrbc soUd-phase dispersion method followed by clean-up with silica-gel colimm. The
extract obtained was analysed by gas chromatography - ion trap mass spectrometry
(GC/ITMS). With the aid of the Selected Ion Storage (SIS) and the Selected Ion
Monitoring (SIM) techniques. It was feasible to select specific ions fi-om the analite of
interest, which can be separated fi-om the organic matrix. After the stabUshment of the
optimum conditions for the detection of Pyrethroid residues of Cypermethrin, samples of
milk were collected from a cow submitted to a veterinary treatment for elimination of
parasites using an insecticide with 50g/L of the active ingredient in its formula. The data
obtained show milk contamination with a maximum concentration of 0.168 mg/kg after 24
hours of the insecticide treatment. Considering the maximxun residual limit for
Cypermethrin in milk of 0.01 mg/kg, samples collected after 15 and 24 hour of the
treatment shown concentrations about sixteen times above this value and, for samples
collected after 11 days of the treatment, about seven times above this value. After 17 days
of the treatment, Cypermethrin in the milk was undetected.
SUMARIO
Pginas
I. INTRODUO
1
I. 1. Piretrides: Histrico e Desenvolvimento
1
I. 2. Caractersticas fsicas e qumicas de alguns Piretrides
2
I. 3. Uso de Piretrides
6
I. 4. Modo de ao
8
I. 4-1. A clula nervosa
8
I. 4-2. Potencial de repouso
9
I. 4-3. Potencial de ao
11
I. 5. Estreo-especificidade na ao dos Piretrides
13
I. 6. Outros mecanismos de ao de inseticidas Piretrides
14
I. 7. Tipos de Piretrides com relao ao txica
14
I. 8. Metabolismo e sinergismo
16
I. 9. Estudos toxicolgicos
16
I. 10. Resistncia aos Piretrides
17
I. 11. Resduos de Piretrides em alimentos e no meio ambiente
18
I. 12. Mtodos analticos de deteco de Piretrides
19
n. OBJETIVOS
22
III. ANALISADORES E TCNICAS DE MEDIDA
23
III. 1. 0 cromatgrafo a gs e o espectrmetro de massas
23
III. 2. 0 espectrmetro de massa quadrupolar
24
III. 2-1. A armadilha inica quadrupolar
25
III. 2-2. A estrutura da armadilha inica quadrupolar
27
III. 2-3. A teoria de operao da armadilha inica
30
III. 2-4. Um on num campo quadrupolar
30
III. 2-5. A equao de Mathieu
31
III. 2-6. Os potenciais nos eletrodos
34
III. 2-7. A armadilha inica "esticada"
36
i OMi i A vC.C?i/-t. b cUtUihX N C L L A R / S P l*t*
III. 2-8. Regies de trajetrias inicas estveis 37
III. 2-9. Freqncias seculares 40
III. 2-10. Excitao ressonante 42
IV. TCNICAS DE OPERAO DO ESPECTRMETRO DE MASSAS - I.T. 45
IV. 1. Ionizao por impacto de eltrons (lE) 45
IV. 2. Ionizao qumica (IQ) 45
IV. 3. Controle de ganho automtico (CGA) 47
IV. 4. Detector de ons 48
IV. 5. Armazenagem de ons selecionados (AIS) 49
V. METODOLOGIA 52
V. 1. Verificaes e calibrao do espectrmetro de massas 52
V. 2. O impacto de eltrons (lE) e a fimo de controle de ganho automtico-(CGA) 53
V. 3. Ionizao qumica com metano 54
V. 4. O modo AIS (Armazenagem de ons Selecionados) 56
V. 5. O modo MIS (Monitorao de ons Selecionados) 56
V. 6. Os parmetros do cromatgrafo a gs 56
V. 7. Caractersticas do espectrmetro de massas como detector 59
V. 7-1. Limite mnimo de deteco (L.M.D.) e quantificao (L.M.Q.) 59
V. 7-2. Sensibilidade 59
V. 7-3. Rudo 60
V. 7-4. Resposta universal 61
V. 7-5. Resposta linear 61
V. 8. Extrao de Piretrides em leite 61
V. 9. Escolha do solvente 64
VI. RESULTADOS E DISCUSSO 66
VI. 1. Espectros de massas da Permetrina 66
VI. 2. Permetrina e metablitos 75
VI. 3. Espectros de massas da Cipermetrina 77
VI. 3-1. Separao dos componentes da amostra via cromatgrafo a gs 77
VI. 3-2. Impacto de eltrons (lE) 78
VI. 3-3. lorzao qumica com metano (IQ) 81
VI. 4. Extrao: experimentos de recuperao 84
VI. 5. Quantificao 88
VI. 6. Evitando contaminao 95
VI. 7. Recuperao de Cipermetrina em leite em funo do contedo de gua 97
VI. 8. Recuperao de Cipermetrina em leite em fiino da concentrao 99
VI. 9. Limites de deteco e quantificao do Piretride Cipermetrina 104
VI. 10. Determinao de Cipermetrina em leite bovino 110
VI. 11. Limites mximos de resduos 116
VIL CONCLUSES 119
APNDICE 122
REFERNCL\.S BIBLIOGRFICAS 129
i OWSSAC fi&mi DE EMt RI A NUCLEAR/ S P IHu
I. INTRODUO
Os Piretrides sintticos constituem-se numa classe qumica de mais de 1000
compostos de poderosa ao inseticida. Neste captulo abordamos aspectos concernentes a
estes compostos do ponto de vista de seu desenvolvimento histrico, caractersticas fsicas
e qumicas, usos, modos de ao, resduos em alimentos entre outras caractersticas
pertinentes. Alm disso relacionamos as principais tcnicas analticas empregadas na
deteco de resduos de Piretrides, com nise em trabalhos que utilizam espectrmetros
de massas.
I. 1. Piretrides: histrico e desenvolvimento
As propriedades inseticidas das flores de piretro tm sido reconhecidas desde a
metade do sculo XIX, quando se iniciou a comercializao do "p inseticida" derivado
das flores do piretro da dalmcia, pertencente ao gnero Crysanthemum da famlia
compositae. A produo comercial das flores iniciou-se no Japo e sobretudo no leste da
fi-ica. Somado-se sua atividade inseticida, um atrativo a mais das piretrinas era a sua
no persistncia no meio ambiente e a sua rpida atividade de "knock down" pela qual
insetos voadores tomavam-se rapidamente incoordenados e inbeis ao vo.
Anteriormente ao desenvolvimento do DDT (diclorodifenil-tricloroetano), o
piretro era o principal inseticida, tanto para uso domstico como agrcola, apesar de sua
baixa estabilidade luz. Seu uso foi estendido, nos anos 50, pela introduo do butxido
de piperonila e outros compostos sinergistas, que reduziram grandemente o custo unitrio
do tratamento dos gros.
A baixa estabilidade luz e o alto custo continuaram a ser um problema, at o
desenvolvimento do Piretrides sintticos que possuam maior estabilidade e maior
atividade inse'^^icida. . Por exemplo, a Deltametrina que foi desenvolvida pelo Dr. Elliott,
possui estabilidade luz, rapidamente biodegradvel e de 2000 a 5000 vezes mais
txica s moscas domsticas do que a ratos, isto comparado com razes de toxicidade
moscas/ratos de 58,90 para os Piretros ou de 11,30 para o DDT [l ].
iOfeV.SSAC .ACiCWAl. DE ENfcHGIA N U C L E A R / S F IPfc*
As piretrinas naturais so atualmente usadas principalmente como inseticidas
domsticos, enquanto que o uso de Piretrides sintticos, que representavam 20 a 25% do
mercado mundial de inseticidas de folhagem em 1983, vem crescendo em grandes
propores [l ].
O desenvolvimento dos Piretrides dividido em geraes que tm iracio em
1949 com o surgimento da Aletrina que sintetizada a partir da Cinerina I.
Na segunda gerao surgem: Tetrametrina (.1965), Resmetrina (1967),
Biosmetrina (1967) e Bioaletrina (1969). Estes no foram bem sucedidos [2] para uso
agrcola por apresentarem baixa eficcia no combate s pragas ou pela baka estabilidade
luz solar, no entanto, foram bem aceitos para uso domstico por serem mais eficazes que o
Piretro. Estes ainda so utilizados na maior parte dos inseticidas.
Na terceira gerao surgem o Fenvalerato (1972) e a Permetrina (1973), que
so estveis luz solar, e aphcveis na agricultura [2].
Por fim os de quarta gerao que so Cipermetrma, Fenpropatrim, Flucitrinato
e outros, os quais s apareceram no mercado na dcada de 80, tambm utilizados para fins
agrcolas, apresentam eficcia a concentraes mais baixas que os anteriores, so foto-
estveis e tem uma maior durabilidade em sua ao inseticida [2].
Em fiino de sua aparente babea toxicidade ao homem, os Piretrides se
tomaram bnportantes no campo da sade publica, sendo utilizados no controle de pragas
urbanas. Um exemplo seria no combate a dengue, onde utilizada uma mistura de
Piretrides.
As formulaes de Piretrides podem ser encontradas na forma de emulses
concentradas, ps hidratveis, granulados e concentrados.
1. 2. Caractersticas fsicas e qumicas de alguns Piretrides
Na Tabela 1 listamos alguns dados fsico-qumicos de piretrides que so de
extrema importncia no estabelecimento da caracterizao dos mesmos.
Piretride Aspecto fsico Massa
Molecular
Frmula
Qumica
Ponto de
Ebulio
Aletrina Lquido amarelo
e viscoso
302,45 C19H26O3 140C a
0,1 mmHg
Bioresmetrina Lquido alta-
mente viscoso e
amarelado
338,45
C22H26O3 i s r c a
0,1 mmHg
Cialotrina Lquido viscoso
amarelo
449,86
C23H,9C1F3N03 187-191Ca
0,2 mmHg
Ciflutrina Lquido viscoso
amarelo e oleoso
434,29
C22H,8Cl2FN03
Cipermetrina Massa semi-
slida amarelada
416,30
C22HCl2N03
220C
Deltametrina Cristal incolor 505,22
C22Hi9Br2N03
Esfenvalerato Lquido
amarelado
419,9
C22H22N03C1
151-167C
Fenotrina Lquido incolor
ou amarelado
350,46 C23H2603
Fempropratrim Lquido viscoso
amarelado
349,43
C22H23N03
Flucitrinato Lquido viscoso
mbar
451,48
C26H23F2N04 108C a
35 mmHg
Fenvalerato Lquido viscoso
amarelado
419,91 C25H22N03 300 C a
37 mmHg
Permetrina Varia entre
cristais incolores
e lquido viscoso
amarelado
391,24
C21H20C12O3
200C a
0,01 mmHg
Resmetrina Cristais
incolores
338,48 C22H2603 180Ca
0,01 mmHg
Tetrametrina Cristal incolor 331,42
C,9H25N04
180-190C
Quimicamente os Piretrides sintticos (Figura l) so esteres de cidos
especficos, isto , cido crisantmico, cidos crisantmicos com halo-substituintes, cido
2-(4-clorofenil)-3-metilbutrico e lcoois, tais como: aletrolona e lcool 3-fenoxibenzil.
Para certos piretrides os centros assimtricos existem na parte alclica e/ou cida, e os
produtos comerciais algumas vezes consistem da mistura de isomeros pticos (1^/15 ou d/
l) e geomtricos (cis / trans) [3]. Por exemplo, a Cipermetrina um Piretride sinttico
que possui trs centros chirais e , portanto, oito isomeros pticos. A Permetrina possui
dois centros quirais e quatro isomeros pticos. Observa-se que pares de enantimeros
representam diastermeros com diferentes propriedades qumicas, fsicas e toxicolgicas.
A configurao do anel cicloproplico, por exemplo, tem um efeito marcante na toxicidade
da Cipermetrina, com os ismeros \R-cis constituindo-se nos mais txicos.
Grande parte da atividade inseticida dos Piretrides reside em somente um ou
dois ismeros, sendo que em alguns casos (d-Fenotrina, Deltametrina) somente em mn
ismero [3].
Na Figura 1 observa-se a frmula plana da estrutura molecular de algims
Piretrides onde podemos verificar a existncia do anel ciclopropnico ligado a dois
grupos metila (frmula geral da Figura 1). A estrutura fenoxibenzil est presente em
vrios destes compostos como se pode observar pelos substituines R3.
C = CH CH CH C
\ o R 3
Frmula Geral
Composto
Aletrina
C H3 C H3
R2
SuhxtituintfK
CH3 CH3
R3
Permetrina
Cl Cl
Resmetrina
CH, CH3
Fenpropanato CH3 CH3
Cipermetrina
-Cl
Cl
-Br
Deltametrina Br
Figura 1. Formula estrutural de alguns inseticidas piretrides onde visualizamos a
frmula geral e seus respectivos substituintes.
1.3. Uso de Piretrides
Os Piretrides so utilizados no controle de insetos na agricultura, e
especialmente em ambientes domsticos e em sade pblica.
Na Tabela 2 encontram-se algumas aplicaes de Piretrides usados no
combate a pragas agrcolas e na Tabela 3 so mostrados exemplos de formulaes para uso
domiciliar onde so utilizados os inseticidas Piretrides.
Tabela 2. Exemplo do emprego de piretrides na agricultura.
Pragas Inseto/caro Nome tcnico
BRASSICACEAS
Curuquer da Couve
Traa das Cruciferas
Ascia monuste
Pluella xylosella
Permetrina
Permetrina
Deltametrina
CUCURBITCEAS
Broca dos Frutos
Acares
FABCEAS
Minador das Folhas
SOLANCEAS
Tripes
Diaphania spp.
Tetranychus urticae
Polyphagotarsonemus latus
Ceratoma spp.
Liriomyza spp.
Deltametrina
Deltametrina
Deltametrina
Frankliniella schulzei Permetrina
Tabela 3. Formulaes comerciais de inseticidas domsticos contendo Piretrides.
Fabricante Nome do
Produto
Formulao
Reckitt &
Colman
Rodasol (Mata
tudo)
Diclorvos (DDVP) 0,49%, Tetrametrina
0,13%, sinergista solvente derivado do
petrleo.
Reckitt &
Colman
Rodasol (Ao e
Proteo)
d-Fenotrina 0,04%, d-AIetrina 0,29%,
solvente derivado do petrleo, gua.
Reckitt &
Colman
Detefon
Diclorvos (DDVP) 0,45%, Tetrametrina 0,10%,
sinergista,, solventes derivado do petrleo.
Bayer Baygon (Branco)
Transflutrina 0,04, d-Fenotrina 0,10, etano,
emulsificante, solvente e propelente.
Bayer Tugon
Tetrametrina 020%, d-Fenotrina 0,10,
querosene desodorizado, emulsificantes,
solvente e propelente.
Itamaraty
Domin
Tufao
d-Tetrametrina 0,20%, Cifenott-ina 0,075%,
isopar H, span 80, tween 80, nitrito de sdio,
benzoato de sdio, gua.
Poett
San Juan S.A
SBP (Ao
imediata)
Esbiotrina 0,15% (p/p), Permetrina 0,055%
(p/p), solvente, gua.
Poett SBP
d-Aletrina 0,135% (p/p), d-Tetrametrina 0,1%
San Juan S.A
(p/p), Cifenotrina 0,1% (p/p), butxido de
piperonila 0,28% (p/p).
Johnson &
Johnson
Raid (Moscas e
mosquitos)
d-Aletrina 0,1%), Permetrina 0,1%), Tetrametrina
0,35%, solvente derivado do petrleo, gua.
Bayer Baygon Genius
(lquido)
Bioaletrina 3,6%, butxido de piperonila,
querosene desodorizado.
Um dos Piretrides mais consumidos a nvel mundial a Deltametrina que em
1987 atingiu a marca de 250 toneladas. Neste ano, 45% de seu consumo ocorreu
principalmente no combate a pragas no algodo e gros como caf, milho, cereais, fintas e
vegetais, alm da utilizao em produtos armazenados. Dehametrina e Cipermetrina, entre
outros piretrides, so tambm utilizados em sade animal, controle de vetores e sade
pblica [3, 4].
Na fiica, sia e Oceania tm sido utilizadas redes tratadas com inseticidas
Piretrides no combate Malria. Estas redes colocadas em voha das camas propiciam
uma melhor proteo do que a utilizao de "sprays". Cabe salientar que nas dcadas de
1940 a 1960 eram utilizados inseticidas muito mais nocivos a humanos, quais sejam; DDT
e Malation [5]. Outro estudo realizado com triatomneos mostrou que o efeito de excito-
repelncia provocado pelo Piretride Dekametrina sobre estes insetos uma vantagem
adicional ao poder do inseticida, pois dificultaria a instalao de novas colnias a partir de
fmeas que ingressassem nas casas atravs do vo, alm de promover o desalojamento de
exemplares presentes nas fi-estas das paredes e outros esconderijos [6]. Isto
particularmente til no combate ao Triatoma infestam, um dos mais importantes vetores da
doena de Chagas [7].
I. 4. Modo de ao
O Piretro e os Piretrides so basicamente toxinas de canais de sdio, ou seja,
atuam na membrana nervosa de tal forma a manter seus canais de ons sdio abertos,
causando a despolarizao dos neurnios [8]. Os Piretrides so venenos de contato que
penetram rapidamente no sistema nervoso e causam sintomas caractersticos no inseto.
Uma fase de excepcional excitao seguida por distrbios de coordenao de movimento,
paralisia e finalmente morte [9]. Para que esse mecanismo seja compreendido,
necessrio entendermos como ocorrem os estmulos eltricos no neurnio.
I. 4-1. A clula nervosa
Os neurnios so clulas excitveis, ou seja, so capazes de auto-gerarem impulsos
eletroqunicos. So formados basicamente por Soma + Axnio + Dendritos + Sinapse
(Figura 2).
Dendritos
Corpo da clula
Terminais
do axnio
Axni o
Figura 2. Componentes bsico do neurnio: Soma, Axnio, Dendritos e Sinapses.
-Dendritos: recebem os impulsos e os envia para o soma.
-Soma: contm o ncleo e outras organelas.
-Axnio: carrega os impulsos para o soma e dendritos
-Sinapses: pequenos espaos entre os dendritos e axnios pelos quais os
neurotransmissores so liberados.
I. 4-2. Potencial de repouso
Verifica-se atravs de medidas com o axnio gigante da lula. cujo
comprimento o do corpo da lula e a espessura de 1 mm, que existe um potencial
negativo dentro da clula que vale aproximadamente -90 mV. O Potencial de Repouso
originado atravs da diferena de potencial gerada pela bomba Na^ - K^. Esta bomba
move 3 ons de Na^ para fora do neurnio e 2 ons de para dentro (Figura 3).
9
A
K
a -
K
+
c r
Dentro da Clula
t
Fora da Clula
Figura 3. Movimento dos principais ions atravs da membrana de uma clula
nervosa.
A membrana da clula em repouso muito mais permevel a ons do que a
outros ons tais como Cl" e Na"^ [10]. Os ons so movimentados atravs da membrana
celular da seguinte forma: Uma molcula carreadora fragmenta as molculas de ATP
(Adenosina-Trifosfato) e utiliza sua energia para promover a transferncia de ons Na"^ e
K". So chamadas ATPase como por exemplo a Globulina (95.000 u.m.a.) e uma
Glicoprotena (55.000 u.ma.). Uma maneira de se avahar o potencial de repouso (fora
eletromotriz) utilizar a formula de Nemst para o K.*(Equao 1.1), qual seja;
fem(milivolts) - -61.log
Concentrao - Interna
Concentrao - Externa
(1.1)
Por exemplo, para o on potssio (K"^ a concentrao interna = 140 mEq/L e concentrao
externa = 4 mEq/L. Substituindo em (1) temos:
fem - -61. l og
140
(1.2)
fem - -9imV
(1.3)
10
iCwissAO jkcmn dl ENERGI A N U U L E A R / S P IP
Verificamos pela equao (1.3) que a fem obtida um valor aproximado
para o valor do potencial de repouso dentro do neurnio que de -90 mV [11].
I. 4-3. Potencial de ao
Qualquer fator que aumente a permeabilidade da membrana em relao ao
sdio produzir um estmulo nervoso, tais como:
1) Estimulao eltrica
2) Compresso mecnica da fibra
3) Aplicao de compostos qumicos membrana
Existem canais pelos quais os ons Na^ podem se difundir quando
estimulados. So espcies de poros ovalados. Os canais so guardados por um porto
dotado de carga eltrica que pode abrir ou fechar. Em repouso os portes de Na^ esto
quase completamente fechados e os de esto parcialmente abertos (Figura 4).
Mais Canais de Sdio
Abertos
Canais de Sdio
Abertos
Canais de Sdio
Fechados
Canais de Potssio
Abertos
Canais de Potssio
Fechados
-70 mV
Tempo : ( msj
1 ms
Figura 4. Variao do potencial eltrico de uma clula nervosa em funo do tempo.
O potencial regulado pela abertura e fechamento de canais de Sdio e Potssio.
Nestas condies os canais de so cerca de 50 a 100 vezes mais permeveis
que os canais de Na^. No entanto, quando esses portes esto completamente abertos, a
permeabilidade dos canais de Na^ pode aumentar em at 5000 vezes, enquanto que os
canais de podem aumentar em apenas 50 vezes [12]. A ao dos Piretrides ocorre
justamente nos canais de sdio, provocando mudanas sbitas em sua funo. Aps a
11
modificao pelos Piretrides, os canais de sdio continuam com muitas das suas fimes
normais, retendo sua seletividade para ons de sdio. No entanto, a cintica dos canais de
sdio drasticamente alterada. Embora a ativao da corrente de ons sdio pela
despolarizao da membrana seja pouco afetada pebs piretrides, a razo da desativao
desta corrente, a qual pe fim ao potencial de ao, toma-se extremamente lenta nos
canais modificados [1]. Aps o trmino do potencial em ponta (comumente denominado,
impulso nervoso), que dura cerca de 0,4 ms (Fig. 5), o potencial da membrana, que sofi^eu
a ao do Piretride, no retoma totalmente ao seu nvel de repouso durante alguns
milisegundos. Isso particularmente provvel de acontecer quando uma srie de
potenciais de ao so repetidos rapidamente. o denominado ps-potencial negativo [10,
13]. Em altas concentraes do Piretride, este efeito pode tomar-se suficientemente
grande de tal forma a despolarizar completamente a membrana nervosa, btoqueando sua
excitabilidade. Este usualmente um efeito de alta-dosagem, mas a bakas concentraes,
a lenta despolarizao da membrana ainda suficiente para causar uma ao repetitiva.
Portanto, um potencial de ao (normal) leva a uma seqncia de potenciais de ao
anormais. Tal efeito pode ser produzido pela modificao de pouco menos de 0,1% dos
canais de sdio.
12
L 5. Estreo especificidade na ao dos Piretrides
Um fator que leva a complicaes quanto anlise do efeito txico de
inseticidas Piretrides introduzido pela existncia de pelo menos quatro formas
isomricas de Piretrides. A interao com o complexo de canais de sdio altamente
estreo-especfica, com os isomeros IR e IS cis ligando-se competitivamente a um stio e
os ismeros li? e IS /ra5 ligando-se no competitivamente a outro stio. As formas 15
no modificam a fimo do canal mas bbqueiam o efeito dos ismeros li?. Na totalidade
dos mamferos, os isomeros 1^ so portanto ativos e os isomeros 15 so inativos e
essencialmente no txicos. Isomerismo no terceiro carbono do anel ciclopropnico nos d
os isomeros cis e trans os quais apresentam atividade inseticida mas diferem na toxicidade
para mamferos, sendo que isomeros cis possuem por volta de 10 vezes maior potencia do
que os do tipo trans. Um centro isomrico final gerado se um substituinte ciano (CN)
adicionado ao lcool, produzindo oito possveis isomeros. Novamente, a potncia
afetada, visto que somente as formas a-S e no as a-i? serem txicas, tanto para insetos
como para mamferos. Esta estreo-especificidade tem sido explorada na sntese de
ismeros puros (Deltametrina), produzindo assim alto grau de seletividade toxicolgica
[14].
13
L 6. Outros mecanisimos de ao de inseticidas piretrides
A interao com os canais de sdio no o nico mecanismo de ao proposto
para Piretrides. Seus efeitos no sistema nervoso central tem levado vrios autores a
sugerir aes via antagonismo do cido y-aminobutrico (GABA), iibio de mediadores,
modulao da transmisso colinrgica nicotnica, aiunento da liberao de noradrenalina
ou ao nos ons Clcio. Como os agentes farmacolgicos especficos de
neurotransmissores oferecem pequena ou parcial proteo contra envenenamento, pouco
provvel que um desses efeitos represente o mecanismo primrio de ao dos Piretrides e
muitos dos neurotransmissores liberados so secundrios no que diz respeito ao aumento
da entrada de Sdio [1].
1. 7. Tipos de Piretrides com relao ao txica
Para o entendimento de sua ao txica, os compostos Piretrides so includos
em duas classes distintas:
Classe I, representada pela Aletrina, Resmetrina e Permetrina. So compostos que
determinam em ratos, efeitos neurolgicos de origem perifrica, provocando um quadro de
agressividade, tremores espasmos convulsivos, incoordenao e prostao. Estes siriais e
sintomas so conhecidos por Sndrome T (tremores).
Classe II, representada pelos compostos que possuem em comum a estrutura alfe-ciano-
fenoxibenzil (Fenopropanato, Cipermetrina, Dehametrina). Estes compostos determinam
efeitos de origem central, produzindo savao excessiva, movimentos irregulares dos
membros, convulses tnicas e clnicas, e sensibilidade aumentada aos estmulos externos.
A intoxicao pelos compostos da classe II conhecida como sndrome CS (coreoatetose e
salivao) [14].
Nos envenenamentos por ingesto, os sintomas irciais compreendem dores
epigstricas, nuseas e vmitos. Nos casos graves ocorrem fescicukes, especialmente
nos msculos das extremidades, ataques convulsivos, sonolncia e coma. A morte ocorre
por felncia respiratria [10].
Observando a Tabela 4 podemos avaliar quantitativamente a toxicidade de
alguns Piretrides, atravs dos valores de dose letal aguda, DL50. Verifica-se mm grande
variao de DL50 no que diz respeito ao tipo de Piretride e ao modo de apcao do
mesmo [1].
14
Tabela 4. Valores de DLso aguda de inseticidas piretrides em ratos.
Classe do
Composto
Composto
LD50 (mg/kg)
Via Intravenosa
LD50 (mg/kg)
Via Oral
Intermedirio
Intermedirio
Intermedirio
Aletrina
Bart ria
Bioaletrina
Bioresmetrina
Cismetrina
Fenflutrina
rra/FIuorocifenotrina
Kadetrina
Permetrina
Fenotrina
Piretrinal
Resmetrina
Tetrametrina
Cifenotrina
Fenopropanato
Flucitrinato
Ciflutrina
Cialotrina
Cipermetrina
Deltametrina
Fenvalerato
cis Fluorocifenotrina
3,5
4,0
340
6,50
1,00
6,00
0,50
>250
472
5,00
165
2,30
5,00
2,50
5,00
55,00
2,30
75,00
0,60
200
23600
1030
>8000
63
120
1500
>5000
340
1347
>4000
28
67
144
900
52
450
Nas exposies ocupacionais com poeiras finas e aerossis ou quando do
contato drmico, ocorrem ardncia e sensao de formigamento na face e vertigens 4 a 6
horas aps a exposio. Em crianas observam-se acidentes oculares com abraso da
crnea pelo uso inadequado de shampoos contendo Piretrides como, por exemplo, os
usados no combate a piolhos.
15
L 8. Metabolismo e sinergismo
A relativa resistncia dos mamferos aos Piretrides pode ser quase que
totalmente atribuda a sua habilidade de rapidamente hidrolisar os Piretrides. Piretrides
halogenados tais como, Ciflutrina, Cipermetrina e Permetrina so rapidamente
metabosados por cvagem hidroUtica da gao ster, seguido de oxidao, produzindo
os cidos cis- e trans 3-(2,2-diclorovinil)-2,2-dimetilciclopropanocarboxlico (DCCA),
cido fenxibenzico (3-PBA) e cido fluorofenoxibenzico (FPBA). Estes metablitos so
parciahnente conjugados com a ghcina ou como cido gcurnico e finalmente eliminados
atravs dos rins. Os compostos com estrutura alfe ciano-3-fenoxibenzil so excretados
mais lentamente [7, 14].
Na medida em que a eUminao metablica determina largamente a toxicidade,
a inibio da atividade oxidante e hidrohtica com sinergistas como butxido de piperonila
ou DEF (tributilfosforotritioato), um organofosforado usado como desfoliante agrcola,
provocam um grande aumento na toxicidade. O elemento sinergista potencializa o
composto inseticida mas, no entanto, o mesmo no tem necessariamente qualquer atividade
intrnseca. O chamado sinergismo, que foi inicialmente observado numa mistura de Piretro
e leo de ssamo, pode ocorrer com vrios compostos, que so usualmente caracterizados
pela presena do grupo metilenodixido. A extenso do efeito "knock-down" para doses
sub-letais de Piretrides obtido na presena de sinergistas indica que o sinergista tem uma
influncia inibitria no processo de desintoxicao no mseto. O sinergista compete com o
inseticida e degradado oxidativamente pela enzima. O grupo metilenodixido o ponto
favorecido ao ataque. O efeito sinergista altamente dependente da natureza do Piretride
e marcadamente intenso nos Piretrides naturais. Outros exemplos de importantes
sinergistas so: Sesamin, Tropital, Sesamex, Synepirin 500, Safroxan, Propil-isome, entre
outros [13].
L 9. Estudos toxicolgicos
Os Piretrides sintticos so verses modificadas do inseticida natural
piretrina, isolado do crisntemo. Estas modificaes os tomam lipofUcos e persistentes,
aimientando a probabidade de actmiulao nos tecidos animais (incluindo seres
humanos). Estudos foram realizados com o objetivo de se determinar habilidade de
algims Piretrides de interronerem a sinalizao estrognica, em experimentos que
16
utilizaram uma cultura celular de clulas humanas de cncer de mama (MCF-7),
utilizando-se dois ensaios: expresses de proUferao celular de pS2 e MCF-7. O pesticida
Piretride Sumitrina comportou-se como um mmico clssico do estrognio. Ele provocou
induo de pS2 e proUferao celular em nveis muito baixos, mas seu impacto foi
eliminado quando o mesmo foi combinado com um anti-estrognico. Isto indica que o
mecanismo de ao da Sumitrina ocorre via interao com o receptor estrognico. O
Fenvalerato conortou-se de imia maneira distinta. Este pesticida provocou induo de
pS2 em nveis bastante baixos, no entanto, exposies maiores foram necessrias para
causar proliferao celiar. Em nveis de l |aM o Piretride d-trans Aletrina um
bloqueador moderado de estrognio, mas em nveis altos o mesmo provocou respostas
similares ao estrognio [15].
Com o intuito de verificarem-se efeitos toxicolgicos no sistema nervoso
central e em funo da faUa de informao a este respeito, procurou-se estudar os efeitos
da exposio repetitiva da Cipermetrina por meio da monitorao da atividade
eletroence&logrfica em ratos. A Cipermetrina foi adimmistrada diariamente em doses de
300 mg/kg, ababco da LD50. Atividade epiltica paroximal foi observada aps o primeiro e
segimdo dia da administrao de Cipermetrina. Alguns dos eventos p>aroximais se
apresentaram como anomalias comportamentais, tais como fissuras clnicas e tnicas.
Estes efeitos so importantes porque poderiam estar relacionados incidncia de atividade
epiltica em humanos cromcamenle expostos Cipermetrina [16].
Piretrides tais como Permetrina, Ciflutrina e Cipermetrina entre outros, tem se
mostrado ahatnente txicos para pebces e outros organismos aquticos. Verificou-se que
concentraes extremamente pequenas do Piretride Cipermetrina (0,2 (ig/L), utiHzado no
combate a parasitas do Salmo, so letais para larvas de Lagosta e Lagostas adultas [17].
Os autores Sigh e Srivastava estudaram o efeito txico do Piretride Permetrina em pebces
da espcie Chama striatus e os resultados indicam que a Permetrina bbqueia o
metabolismo aerbico e anaerbico dos pebces expostos [18].
L 10. Resistncia aos Piretrides
A longa exposio de populaes de insetos a inseticidas Piretrides tem
levado a resistncia ao "knock-down" que tem sido relacionada a mudanas estruturais nos
canais de Sdio. Os canais de Sdio para moscas domsticas so 100 vezes menos
sensveis a Piretrides do que os das moscas selvagens. Um estudo de H. Vais et aL
17
identificou um amino-cido responsvel pela maior sensibilidade ao Piretride da
variedade de moscas que no sofireu a mutao (metionina) e da variedade menos sensvel
que no mesmo stio sofi^eu a mutao. O amino-cido metionina foi incorp>orado ao
material gentico de canais de sdio de ratos e verificou-se um aumento de 100 vezes na
sensibilidade destes Deltametrina relativamente a variedade de ratos selvagens. Isto
sugere que a babea toxicidade a Piretrides em mamferos pode ser em parte atribuda a
diferenas estruturais entre os canais de sdio de mamferos e insetos e no apenas a
fetores metablicos [19]. Outros estudos mostram evidncias de que mutaes em genes de
canais de sdio tm acarretado aumento na resistncia ao "knockdown" para algumas
espcies de insetos [20, 21, 22].
I. 11. Resduos de Piretrides em alimentos e no meio ambiente
Informaes da WHO (World Health Organization) do conta de que os
inseticidas Piretrides so foto-degradveis tanto em gua quanto no solo. No entanto a
relativamente rpida degradao de Piretrides como Permetrina, Cipermetrina,
Deltametrina entre outros, no impossibilita que os mesmos estejam presentes como
resduos em aumentos e no meio ambiente [23, 24, 25] . Por exemplo, a Deltametrina
degradada em algodo com uma meia vida de 1,1 semanas, e o tempo necessrio para a
eliminao de 90% da sua quantidade de 4,6 semanas. A Permetrina em plantas, se
degrada com uma meia vida de aproximadamente 10 dias, enquanto que no solo a rriesma
possui uma meia vida de 28 dias. A utilizao de inseticidas Piretrides em meio
domstico pode levar acumulao dos mesmos em habitaes. Aps uso interno,
resduos do inseticida Cipermetrina podem ser encontrados na poeira e em carpetes, com
concentraes de at 4 mg/kg. A concentrao no ar, aps tratamento em ambiente
fechado, aumenta rapidamente e posteriormente pode ficar relativamente constante por
meses, em valores nos quais os Piretrides podem causar efeitos adversos (3 a 8 M.g/m^)
[23].
No Brasil os Piretrides so largamente utilizados no rebanho de gado leiteiro,
no combate a carrapatos e moscas-do-chifi-e. Estudos reazados aps apcao drmica
comprovaram a existncia de resduos em leite. Aps a apcao de Cipermetrina, foi
constatada a presena de 0,36 mg/kg (360 ppb) do Piretride no dia da apcao, e de 0,05
mg/kg (50 ppb) 28 dias aps a apcao. Em Dehametrina, constatou-se a presena de
0,51 mg/kg (510 ppb) no primeiro dia e de 0,20 mg/kg (200 ppb) aps 28 dias [26, 27]. De
18
acordo com o Codex Alimentarius [26], os resduos mximos permitidos para
Cipermetrina e Deltametrina em leite de vaca so respectivamente 0,01 mg/kg (10 ppb) e
0,05 mg/kg (50 ppb); no entanto os nveis detectados foram vrias vezes superiores a estes
valores [26].
Informaes da WHO mostram que aps injeo intravenosa de 0,27 g de
Deltametrina marcada com '"^C em vacas Jersey leiteiras, somente 0,4% do congosto foi
encontrado no leite total. Alm disto, nveis de resduos de 0,045 mg/kg (45 ppb) e 0,92
mg/kg (920 ppb) foram encontrados no leite total e na gordura da manteiga,
respectivamente, 1 dia aps a administrao do inseticida [3].
1.12. Mtodos analticos de deteco de Piretrides
Um das tcnicas mais utilizadas na deteco de Piretrides a Cromatografia a
Gs com Detector de Captura de Eltrons (GC-ECD). Foram reportados os seguintes
mtodos:
-Extrao automatizada em fese slida acoplada a um GC-ECD utilizando uma
combinao de extrao e "clean-up"de Piretrides em anlise de guas superficiais [28];
-Extrao seletiva de resduos de pesticidas Piretrides em leite por disperso em matriz de
fase slida em leite [29];
-Mtodo semiautomtico de anlise muhiresidual por cromatografia a gs de 25 pesticidas
organoclorados e Piretrides em vegetais [30];
-Anlise multiresidual de pesticidas em firutas e vegetais por cromatografia de permeao
em gel seguida por deteco por GC-ECD e Espectrometria de Massas [31];
-"Clean-up" de vegetais extrados por partio em matriz slida em resduos de Piretrides
determinados por GC-ECD [32];
-Piretrinas naturais e 12 piretrides sintticos em vegetais, finitas, feyes e folhas de ch
por extrao com acetona ou acetonitrila, partio com hexano, "clean-up" com coluna de
Florisil e deteco com GC-ECD capilar [9];
-Junting Liu et al. determinaram as condies para extrao por fase slida de mistura de
oiganofosfatos e Piretrides sintticos em plasma, urina e sangue humanos com deteo
por Cromatografia a Gs e detector de ionizao por chama (GC-FID) [33].
Outra tcnica bastante utilizada constitui-se na cromatografia hquida de alta
resoluo, HPLC. Foram reportados os seguintes mtodos:
19
-Separao rpida e identificao de composotos organoclorados e Piretrides por HPLC e
deteco UV [34];
-Determinao de Cipermetrina, Fenvalerato e Permetrina no solo e em guas subterrneas
por HPLC utilizando-se regresso por mnimos quadrados e deteco UV [35];
-Determinao simultnea de Tralometrina, Deltametrina e compostos em gua,
sedimentos e tecido de peix.es em nveis de ppb e ppt por HPLC (sca-gel) com deteo
radionttrica [36].
A espectrometria de massas quadrupolar acoplada cromatografia a gs
(GC/MS) tem sido largamente utilizada para a deteco de Piretrides, no s para
confirmao dos resultados de outras tcnicas, mas tambm como um mtodo
independente, sobretudo por sua seletividade e caracterizao inequvoca e simultnea dos
pesticidas a serem analisados. Isto se evidncia na comparao com mtodos puramente
cromatogrficos, visto que estes, fi"eqentemente, dependem da comparao com padres
via tempos de reteno. Ao contrrio, a espectrometria de massas determina os fi-agmenlos
inicos originados da molcula de interesse e os compara com num banco de dados
armazenado em um micro computador e, em alguns casos, determina o pico molecular. O
mtodo bastante adequado determinao de resduos em alimentos e o limite mnimo de
deteco esta geralmente abaixo dos nveis de tolerncia, que variam de 0,1 a 50 ppm [9].
Foram reportados os seguintes mtodos:
-Anlise rpida de uma variedade de classes qumicas de pesticidas em gua por extrao
em fase slida "ofif-line" e GC/MS-IT [37];
-Determinao de inseticidas piretrides por GC/MS-MS [38];
-Estudo interlaboratorial de identificao e quantificao de multiresduos Piretrides em
produtos agrcolas por GC-MS [39];
-Anlise ambiental de Cipermetrina e seus produtos de degradao aps aplicaes
florestais [40];
-Desenvolvimento de anlises simultneas de pesticidas organonitrogenados e Piretrides
com GC/MS [41];
-Otimizao e avaliao da cromatografia a gs de babea presso acoplada a espectrometria
de massas para anlise rpida dt mltiplos resduos de pesticidas em alimentos [42];
-Utilizao da tcnica de ionizao qumica para anlise de Deltametrina por GC/MS [43];
-Extrao de poeira "indoor" ultrasnicamente ou pela tcnica Soxhlet com tolueno e etil-
acetao e deteco via GC/MS [44];
20
Xmi-^KO Nt CCN. . . . Ok t N t K G I A N U C L E &K / S P PCi
-Monitorao de metablitos de Piretrides em urina humana utilizando-se extrao por
fese shda seguida de GC-MS "tandem" [45];
-Estudo comparativo entre as tcnicas de ionizao por impacto de eltrons e ionizao
qumica na anhse do inseticida Permetrina via GC/MS-IT [46];
-anlise de resduos de pesticidas em alimentos utilizando GC-MS tandem [47];
-Desenvolvimento de mtodo anahtico para a determinao de inseticidas Piretrides
smtticos no solo via GC/MS operado no modo de ionizao qumica negativa [48] entre
outros.
21
n. OBJETIVOS
O presente trabalho tem os seguintes objetivos:
1) Estudar compostos Piretrides no que diz respeito a seus espectros de massas formados
por impacto de eltrons e ionizao qumica com metano.
2) Otimizar as condies experimentais de deteco destes compostos via GC/MS-IT tanto
no aspecto cromatogrfico como na utilizao de tcnicas de seleo de ons no intuho de
atingir babeos hmites de determinao e quantificao.
3) Aplicar uma metodologia de extrao de pesticidas Piretrides em leite atravs de
experimentos de recuperao visando deteco dos mesmos em amostras comerciais.
4) Apcar a metodobgia otimizada na verificao da presena do Piretride Cipermetrina
no leite de um animal tratado com um carrapaticida e inseticida comercial que possui em
sua formulao o referido Piretride.
5) Abordar aspectos tericos concernentes fsica dos espectrmetros de massa de c a n ^ s
quadrupolares relacionando-os s solues estveis da equao de Mathieu e a seus
diagramas de estabilidade.
Destacamos o item 4 como de maior relevncia na determinao de inseticidas
usados na combate a parasitas no gado leiteiro. Parte do inseticida apcado pode ser
encontrado no leite e portanto, se constitui numa fonte de contaminao quando da
ingesto do referido leite por seres humanos.
22
III. ANALISADORES E TCNICAS DE MEDIDA
O objetivo deste captulo possibilitar a compreenso da tcnica de
cromatografia a Gs acoplada espectrometria de massas Quadrupolar de Armadilha
Inica, com nfase nos aspectos tericos e experimentais da espectrometria de massas "Ion
Trap" (Armadilha Inica).
IIL 1. O cromatgrafo a gs e o espectrmetro de massas
A Cromatografia a Gs acoplada Espectrometria de Massas (GC/MS)
constitui-se em uma das tcnicas mais efetivas na separao, deteco e caracterizao de
componentes de tuna mistura orgnica complexa. No cromatgrafo a gs a amostra
previamente vaporizada no sistema de injeo e posteriormente separada pela coluna
cromatogrfica [49]. A coluna possui no sei interior um material adsorvente com as
seguintes caractersticas gerais: estabilidade trmica, estabihdade fisica e ligaes
cruzadas. Este material denominado fase estacionria da coluna cromatogrfica. Alguns
exemplos so: Dimetil Siloxana, Pohetileno Ghcol e Dimetil Silarileno entre outros. A
amostra, previamente vaporizada, arrastada por um gs merte (fase mvel) atravs da
coluna (fase estacionria). Os compostos so separados de acordo com suas caractersticas
fsicas e qumicas relativamente fase estacionria e emergem da coluna com tempos
distintos (tempos de reteno). A separao em si baseia-se na adsoro fsica e qumica
das substncias na fase estacionria e de suas volatilidades [50]. Quando uma das
substncias emerge da coluna e ingressa na armadilha inica atravs da hnha de
transferncia (Figura 5), a mesma interage com eltrons acelerados ou ons previamente
ionizados perdendo sua neutrahdade e fi^gmentando-se. Portanto, neste processo, os ons
e fi-agmentos inicos adquirem carga e so aprisionados por um campo eletromagntico
quadrupolar. Posteriormente, atravs do rampeamento da amptude de tenso imposta ao
"lon-Trap", os ons so ejetados axiaknente na ordem crescente de suas relaes
massa/carga. Os ons atingem imi multipUcador de eltrons que produz imi smal
proporcional ao nmero de ons da amostra. O sinal da corrente inica, originrio do
23
multiplicador de eltrons, recebido e amplificado por um sistema eletrnico e ento
enviado a um sistema de aquisio de dados para visualizao "on-line" e posterior
processamento.
Inietor
- J:
Linha de Transferncia
Cromatgrafo
a Gs
Forno
!
i-,
Coluna Capilar
Armadilha
inica
Espectr.
de Massa
Bomba
Turbomolecular
I Bomba mecnica
Figura 5. Principais componentes do sistema GC/MS - Satum 3-Varan.
IIL 2. O espectrmetro de massas quadrupolar
Em espectrometra de massas existem dois tipos de instrumentos
quadrupolares: no primeiro, um campo bidimensional quadrupolar estabelecido,
denominado filtro de massa quadrupolar, e no segimdo um campo tridimensional
quadrupolar estabelecido denominado armadilha inica quadrupolar ou "lon-Trap".
A Figura 6 apresenta graficamente a transformao fsica de irai filtro de
massa quadrupolar para um do tipo armadilha de ons "lon-Trap".
24
Figura 6. Transformao fsica de um quadrupolo bidimensional denominado Filtro
de Massa para um quadrupolo tridimensional denominado Armadilha de ons ou
"Ion Trap".
A teoria a seguir apcvel tanto a filtros de massa quanto a instrumentos de
armadilha inica sendo cada caso diferenciado em relao s condies de contorno e
geometria dos eletrodos.
III. 2-1. A armadilha inica quadrupolar
A armadilha inica quadrupolar, "Ion Trap", um dispositivo extraordinrio
que fiinciona tanto como uma armadilha de ons, na qual podem ser aprisionados ons
gasosos por um perodo de tempo, como um espectrmetro de massas de intervalo de
massas considervel e com resoluo de massas varivel; todos estes efeitos a uma presso
de 1 mTorr de gs Hlio. Funcionando como um dispositivo de armazenamento de ons. o
"lon Trap" atua como um "Tubo de ensaio eltrico", confmando ons gasosos com cargas
positivas ou negativas, na ausncia de solventes. A capacidade de funcionar como um
"Tubo de ensaio eltrico" de campo eltrico surge da formao de um poo potencial
aprisionador, quando so aplicados potenciais apropriados aos eletrodos da armadilha
inica. O aprisionamento de ions gasosos permite o estudo da qumica de ons na fase
gasosa e leva a elucidao das estruturas dos ions pelo uso de fases repetidas de seleo de
massas conhecida, como ocorre na espectrometria de massas "Tandem". Com o advento
de mtodos novos pelos quais ons podem ser formados por intermdio de molculas
polares ou covalentes na fase gasosa e introduzidos subseqentemente na armadillia
inica, o alcance de aplicaes da armadilha inica quadrupolar expandiu-se [51]. No
entanto, nos limitaremos ao comportamento da armadilha de inica de quadrupolo no que
concerne aos mtodos de ionizao.
25
Alm do aprisionamento de ons, a armadilha inica fimciona como um
espectrmetro de massas no qual podem ser medidas as relaes de massa/carga da espcie
de on confinada. A ejeo de ons do poo potencial realizada atravs do aimiento
linear da amplitude do potencial de radiofi-eqncia (RF) apcada a um dos eletrodos da
armadilha inica. Cada espcie inica ejetada do poo potencial por meio de uma
amplitude de RF especfica. Atravs do conhecimento da amptude inicial e da taxa de
rampeamento, a relao de massa/carga pode ser determinada para cada espcie inica
ejetada. Este mtodo para medir relaes de massa/carga de ons confinados, o qual
conhecido como o modo de instabidade axial seletiva de massas, tomou possvel a
comerciazao da armadUha inica quadmpolar. Um pr-requisito deste mtodo de
ejeo seletiva de massas inicas pressupe que os ons estejam agrupados micialmente no
centro da armadilha inica sob a ao de coses que dissipem momentum. Para este
propsito so utiUzados tomos de ho.
A unio da cromatografia Kquida (CL) com ionizao por eletro-spray (ES) e
com espectrometria de massa (MS) no comeo dos anos 80, juntamente com o rpido
avano em tecnologia de armadilha iica, tem levado ao desenvolvmieno de novos
mstmmentos de armadiUia irca para a anlise de compostos no-volteis, polares e
termicamente marcados. Em 1995, novos mstmmentos de armadilha inica (o LCQ e
GCQ da Finrgan, e o Escudeiro da Bruker-Franzen) foram introduzidos. Estes
instrumentos empregam fontes de ons externas com mjeo de ons gerados externamente
dentro da armadUha inica. O objetivo principal para a apcao destes novos
instrumentos utizando-se CL/ES/MS, tem sido a anse de biopomeros de alto peso
molecular tais como protenas, peptdeos, e ogo-desoxiribonucleotdeos. Estes
instrumentos diferem de alguma forma no tamanho do eletrodo, separao dos eletrodos,
fi-eqncia diretora e razo de varredura de massa dos instmmentos de GC/MS comuns.
O feto de que a teoria bsica de operao dos dispositivos de quadmpolo tenha
sido enunciada por volta de 100 anos antes da armadilha inica quadmpolar e do fihro de
massa quadmpolar tivessem sido inventados por Paul e Steinwedel [52] um brilhante
exemplo do valor inerente da saudvel pesquisa bsica. O trabaio pioneh-o dos inventores
foi reconhecido pela conquista do Prmio Nobel de 1989 em Fsica para Wo^ang Paul
[53].
26
IIL 2-2. A estrutura da armadilha inica quadrupolar
A armadilha inica quadrupolar consiste essenciahnente de trs eletrodos de
formato bastante pecuUar os quais so mostrados na Figura 7.
Figura 7. Os trs eletrodos do quadrupolo de armadilha inica.
Dois dos trs eletrodos so virtualmente idnticos e como possuem geometria
hiperbhca, se assemelham a pequenos saleiros invertidos. Estes saleiros so chamados
eletrodos-tampa e na Figura 7 so distinguveis pelo nmero de buracos no centro de cada
eletrodo. O eletrodo-tampa superior tem uma pequena abertura central nica pela qual os
ons e/ou eltrons podem atravessar periodicamente. O eletrodo-tampa inferior tem vrias
aberturas pequenas distribudas centralmente e pelas quais os ons alcanam um detector.
Em instrumentos de armadilha inica com fontes de ons externas, cada eletrodo-tampa
tem uma nica perfurao. O terceiro eletrodo tambm de geometria de hiperboloide,
neste caso de duas folhas, e chamado de eletrodo anel e se assemelha a um toride. O
eletrodo anel posicionado simetricamente entre dois eletrodos tampa como mostrado na
Figura 7. Observa-se na Figura 8 uma fotografia de uma armadilha inica secionada ao
meio ao longo do eko de simetria cilndrica enquanto a Figura 9 uma seco transversal
de uma armadilha inica ideal mostrando as assntotas e as dnenses ro e Z o, onde ro o
27
raio do eletrodo anel no plano central horizontal e 2zo a separao dos eletrodos tampa
medida ao longo do eixo da armadilha inica.
Os eletrodos nas Figuras 8 e 9 so truncados por propsitos prticos mas
teoricamente eles se estendem ao infinito e se encontram com as assntotas mostradas na
figura. As assntotas surgem da geometria hiperbca dos trs eletrodos e, no caso ideal,
so incnadas de um ngulo de 53*^ 34' relativamente ao eixo cilndrico (eixo z) do
conjunto de eletrodos. A geometria dos eletrodos definida de tal forma a produzir um
campo de quadrupolo ideal o qual, por sua vez, produzir um poo potencial parabco
para confinamento de ons. O poo potencial criado pelo campo que existe quando um
potencial de RF apUcado ao eletrodo anel e os dois eletrodos tampa esto aterrados.
Porm, como mostrado na Figura 10, o poo de potencial na direo axial tem
proflindidade D z enquanto que na direo radial a profundidade D ^ o valor de Z) z
por volta de duas vezes o de Z) r de tal forma que o poo potencial se assemelha mais a \xm
vaso de ores do que a uma tigela.
Figura 8. Armadilha inica quadrupobr; fotografia de um corte de uma armadilha
inica ao longo do eixo de simetria ciUndrca.
28
Figura 9. Armadilha inica quadrupolar; um diagrama esquemtico de uma
armadilha inica tridimensional ideal mostrando as assntotas e as dimenes rg e Z O'
Figura 10. Representao dos poos de potencial aprisionadores parablicos Z) z e D r
Para um campo de quadrupolo ideal, a seguinte identidade estabelecida
ri = 2zl
(3.1)
de tal forma que uma vez estabelecida a magnitude de ro, as dimenses dos trs eletrodos e
o espaamento entre os mesmos so fixados. No entanto tem sido alertado que.
29
contrariamente equao (3.1), a razo T J ^ : ro^ no necessariamente restrita a 2.
Desconsiderando o valor desta razo, as dimenses da armadilha inica so largamente
determinadas pela magnitude de ro e, na maioria das armadilhas inicas usadas
comerciahnente, ro pode ter os valores 1,000 ou 0,707 cm.
lU. 2-3. A teoria de operao da armadilha inica
Os movimentos dos ons num aparato quadrupolar diferem totahnente das
Unhas retas e curvas dos ons em regies Uvres de campos e em setores magnticos e
eletrostticos respectivamente, fato este familiar queles que conhecem espectrmetros de
massas setoriais. As armadilhas inicas quadrupolares e os filtros de massa quadrupolares
ou anaUsadores so descritos como instrumentos dinmicos visto que as trajetrias inicas
destes instrumentos so influenciados por um conjunto de foras dependentes do tempo o
que acarreta trajetrias mais difceis de prever matematicamente, comparativamente a
instrumentos setoriais. Instrumentos setoriais so descritos como instrumentos estticos
nos quais o campo mantido em um valor constante para a transmisso do on. Em
instrumentos quadrupolares, um campo de quadrupolo estabelecido quando um potencial
aplicado a eletrodos que tem uma geometria na forma hiperblica. Devemos procurar
por uma teoria de movimento inico que leve em conta o movimento de partculas
carregadas num campo de quadrupolo mas, iniciaknente consideremos as foras atuando
num nico on dentro de um campo quadrupolar.
II. 2-4. Um on num campo quadrupolar
Um on num campo de quadrupolo experimenta uma forte focazao na fora
de restaurao a qual direciona o on de volta ao centro do aparato, aumentando a medida
que o on se desvia do centro do aparato. A busca por uma teoria de movimento inico
no das mais longas na medida em que tem sido observado que o movimento de ons
num campo de quadrupolo pode ser descrito matematicamente pelas solues das equaes
diferenciais de segunda ordem descrita^, origmaknente por Emille Mathieu no ano de
1868 [54]; esta equao conhecida como equao de Mathieu. Pela investigao de
Mathieu sobre a vibrao de membranas tencionadas, foi possvel descrever solues em
termos de regies de estabiUdade e instabihdade. possvel aplicar estas solues e idias
de estabUidade e instabidade na descrio das trajetrias de ons confinados em aparelhos
30
quadrupolares e definir limites para a estabilidade das trajetrias. No intuito de adotar as
solues da equao de Mathieu devemos verificar se a equao de movimento de ons
confinados num aparelho quadrupolar pode ser descrita pela equao de Mathieu. O
caminho que seguiremos ser o necessrio para obteno da expresso para fora (massa x
acelerao) na equao de Mathieu. Esta expresso ser comparada com aquela para a
fora de um on num campo de quadrupolo. Esta comparao, escrita ababco em termos
matemticos permite que expressemos as magnitudes e fi-eqncias dos potenciais
apcados nos eletrodos da armadilha inica, as dimenses da armadUha inica e as razes
massa/carga de ons confinados, em termos dos parmetros adimensionais e qu da
equao de Mathieu. Como base, adotar-se- a idia das regies de estabidade no espao
B c qu com o intuito de discuth-em-se o confinamento e os limites dos ons gasosos nos
aparatos de quadrupolo.
IIL 2-5. A equao de Mathieu
A forma cannica de equao de Mathieu :
^ + (au-2qucos2i^)u = 0 ( 3. 2)
onde u representa os ebcos coordenados x, y e z; um parmetro adimensional igual a
Qt/2 onde Q a fi-eqncia e / o tempo; e 7 e ^ parmetros adimensionais adicionais
conhecidos como parmetros aprisionadores. A introduo de Q no de todo sem
propsito desde que o mesmo reaparece como fi-eqncia radial (em rad/s) do potencial RF
aplicado ao eletrodo anel. Pode ser mostrado que substituindo ^ = Qt/2 da Equao (3.2)
teremos que
(3.3)
Substituindo a Equao (3.3) na Equao (3.2), substituindo QX por 2%, multipcando
todos os termos por m e re-arranjando a equao leva a:
31
m-j = (au-2q^ cos Qt)u (3.4)
ar 4
Notamos que o lado esquerdo da Equao (3.4) pode representar a fora de um on, isto ,
massa vezes acelerao em cada uma das direes x, yez.
Cabe observar que o campo, nos aparelhos quadrupolares, no-acoplado de
tal forma que as foras nas trs direes coordenadas podem ser determinadas
separadamente. Consideremos a fora na direo x, isto Fx, experimentada por um on de
massa m e carga e em qualquer ponto dentro do campo quadrupolar dada pela expresso:
F r = fna = m:r = -e p. s )
Onde a acelerao do on, e a carga eletrnica e (j) o potencial em qualquer ponto
(x,y,z) dentro do campo. Similarmente, as expresses para Fy e Fz podem ser obtidas.
Deve-se observar que a Equao (3.5) relaciona a fora no on com o campo, dentro da
armadilha inica. O potencial quadrupolar (j) pode ser expresso como
(3.6)
' O
onde (t)o o potencial eltrico apUcado (o qual, como veremos mais tarde, um potencial
RF nico ou em combinao com um potencial de corrente contnua), a e y so
grandezas constantes para as coordenadas x, y q z respectivamente, e ro uma constante
que definida separadamente dependendo se o aparelho quadrupolar uma armadilha
inica ou um filtro de massas. Pode ser visto pela Equao (3.6) que o potencial aumenta
quadraticamente com x, y q z. Em qualquer campo eltrico essencial que a condio de
Laplace, que requer que o segundo diferencial do potencial num ponto seja igual a zero,
seja satisfeita; a condio de Laplace assegura que o campo nas direes x, y Qz linear e
no muda. Quando isto feito, verifica-se que
+ <J + Y = 0 (3.7)
Para a armadilha inica temos y = a =1 e X = -2, enquanto que para o filtro de massa
quadrupolar A, = CT=leY = 0. Substituindo os valores dey = CT=leA, = -2na Equao
32
(3.6) se obtm para o potencial em qualquer ponto dentro do campo de quadrupolo na
armadilha inica quadrupolar a segumte expresso:
<l>..y.. = -2(x' + / - (3.8)
ro
Esta equao pode ser transformada em coordenadas cilindricas, pelo emprego das
transformaes padro x = rcosO, y = rcosO, z = z. Ento a Equao (3.8) toma-se:
<^r.z = ^(r^cos^ ^ + rhm^ e-2z^) (3.9)
Quando apUcamos a identidade trigonomtrica cos^9 + sen^6 = 1, obtemos
' ro
O potencial eltrico <j)o, apcado ao eletrodo anel pode ser um potencial de RF,
VcosQt, ou uma combinao deste com um potencial de corrente contnua U, da forma
(/f^ = U + VcosQ.t (3.11)
onde O a freqncia angular em rad/s do campo RF. Note que Q igual a 2nf onde f a
freqncia em Hertz.
Quando as expresses para <|)o, dadas na Equao (3.11) e A, ^ 1 so substhm'das
na Equao (3.6) e (j) diferenciado com respeito a x, obtemos a seguinte expresso para o
gradiente de potencial:
-^ = (U + VcOslt) (3.12)
x ri
Substituindo a Equao (3.12) na Equao (3.5) produz-se uma expresso para a fora de
um on
m^= ~-^(U + V coslt)x (3.13)
dr ri
Pode-se comparar diretamente os termos do lado direito das Equaes (3.4) e
(3.13), relembrando que u representax obtendo:
33
8eU -4eV
Quando esta derivao repetida para a obteno da fora num on na direo
y, obtemos qx = -qy; esta relao obtida desde que X = o = -\. Para a armadilha inica
quadrupolar verifica-se que qx = qyl esta igualdade encontrada desde que A, = CT = 1 e y =
-2.
-8eU 4eV
mrir mriOr
Ignorando a- (que proporcional a U, isto , um potencial CC) inicialmente,
visto que muitos dos instrumentos de armadilhas inicas comerciais no oferecem a
flexibidade de apcao de um potencial CC aos eletrodos; desta forma az igual a zero,
o que corresponde ao modo mais comum de operao da armadUha inica correspondente
a operao no ebco q^. A expresso de qz na Equao (3.15) contm a razo massa/carga
para um dado on, as dimenses da armadUha inica, ro, a amptude V do potencial de RF
e a fi-eqncia radial Q, isto , todos os parmetros necessrios para o entendimento das
varias operaes da armadUha inica. As solues da equao de Mathieu so agora
acessveis e podem ser interpretadas em termos de estabUidade de trajetrias (e
instabidade) em cada uma das direes x, y (ou r) e z, do confinamento quando as
condies correspondem simultaneamente a trajetrias estveis em mais de uma direo, e
a trajetrias caractersticas tais como as fi-eqncias seculares fimdamentais do movimento
inico nas direes radial (r) e axial (z).
IIL 2-6. Os potenciais nos eletrodos
Pode-se agora verificar os potenciais no eletrodo anel e eletrodos-tampa da
seguinte maneira, com referncia a Figura 9b e a Equao 3.10. Considere a interseco
do plano radial central com a superfcie do eletrodo anel onde 2 = 0 e r = ro;o potencial no
eletrodo-anel dado por :
r O
34
Considere a interseco do eixo central com simetria cilndrica com a
superfcie dos eletrodos tampa onde r = O e z = zo. Reconsiderando a identidade da
Equao (3.1) e o potencial da Equao (3.10), o potencial de cada eletrodo de tampa
dado por:
No entanto, nenhuma armadilha inica quadrupolar opera desta maneira, pelo
contrrio, os eletrodos tampa so mantidos nxmi potencial de aterramento exceto pela
imposio de potenciais oscilantes de baixa amplitude, de centenas de mivolts a poucos
voks. A apcao de (j) ao eletrodo anel e aos eletrodos de tampa aterrados, acarreta no
corte, pela metade, do intervalo de massas da armadUha inica, como um espectrmetro de
massa.
Com o objetivo de verificar os potenciais do eletrodo-anel e eletrodos-tampa
em armadUhas inicas comerciais, uim equao alternativa para a Equao (3.10) deve ser
usada; esta equao :
, <^o(r' -2z' ) ,
^r.z = T I + ^ (3.18)
onde c tuna constante. O potencial do eletrodo-anel (Equao 3.18 com z = O, r = ro)
dada por:
pela qual obtemos c = (j)o / 2. O potencial nos eletrodos-tampa (r = O e 2 = zo) dado por:
= ^ + = 0 (3.20)
Ento a equao 3.18 se reduz a:
35
Os tennos constantes no mudam as equaes de movimento, derivadas de
diferenciais parciais, mas os potenciais ao longo das assntotas das hiprboles so
mudados. Deve ser observado qiie um on no centro de uma armadilha inica comercial
experimenta um potencial ^qI2 e "v" um potencial -^qI2 nos eletrodos-tampa e imi
potencial (|)o/2 no eletrodo-anel.
m. 2-7. A armadilha inica "esticada"
Como foi discutido acima, os eletrodos da armadilha inica so truncados de
forma a obter um instrumento de trabalho prtico, mas esta tnmcagem introduz
componentes de muhipolo como mostrado na Equao (3.22)
(t>r, = C"o + + C"2
3 .
' 2 2
r - z
+
C"z
^2 2
r - z
\2 )
U )
:> 2 2 ,
- J r z +
z
+ ..
)
(3.22)
Os coeficientes Cn, onde n = 0,1,2,3, e 4, correspondem s componentes de
monopolo, dipolo, quadrupolo, hexapolo e octopolo, respectivamente, do potencial <(r.
Para a armadilha inica quadrupolar pura, somente os coeficientes correspondentes a n = O
e n = 2 no tem o valor zero.
Para compensar estas componentes de muhipolo de ordem maior, os eletrodos
de aparelhos comerciais a partir de 1995 so construdos de tal forma que as distncias
entre os eletrodos-tampa tem sido aumentadas ou "esticadas"; os valores aumentaram cerca
de 10,6%. No entanto no h correspondente modificao das formas dos eletrodos, o que
poderia ser requerido de forma a manter uma geometria quadrupolar pura.
As conseqncias imediatas so que as assntotas dos eletrodos-tampa no
mais coincidem com quelas do eletrodo-aneL Alm disso, ro^ ^ li^. Com intuito de
compensar, em parte, o alargamento da armadilha inica os parmetros de aprisionamento
so agora calculados usando os valores reais de Zo e ro como se segue:
8elJ -4eV
36
-16eU 8eV
Quando ro^ = 2zo^ substitudo na Equao (3.24), obtm-se os parmetros de
aprisionamento da Equao (3.15). Deve ser observado que para a armadilha inica nos
instrumentos LCQ e GCQ, ro = 0,707 cm e zo - 0,785 cm de tal forma que a
geometria foi esticada para aproximadamente 57%.
IIL 2-8. Regies de trajetrias inicas estveis
A operao de armadilhas inicas quadrupolares leva em conta o critrio que
governa a estabilidade e instabihdade da trajetria de um on dentro de um campo, isto ,
as condies experimentais que determmam se um on ser estocado dentro de um
aparelho ou ser ejetado, e dessa forma perdido ou detectado externamente.
As solues da equao de Mathieu possuem duas formas: (i) peridica mas
instvel, e (ii) peridica e estvel As solues do tipo (i) so chamadas fimes de
Mathieu de ordem integral e formam as fi-onteiras das regies instveis no diagrama de
estabidade. As fironteiras que so referenciadas como curvas caractersticas ou valores
caractersticos, correspondem aos valores de um novo parmetro de aprisionamento, Pz,
que so nmeros inteiros, isto , 0,1,2,3,....; Pz uma fimo complexa de a^ Q . No
Apndice deste trabalho foram calculadas as solues da equao de Mathieu no caso
particular em que p =1. As regies de estabUidade correspondentes a solues estveis da
equao de Mathieu na direo z esto sombreadas e marcadas estveis-z na Figura 1 l(a).
37
(b) r = est v el
Figura 11. Vrias regies de estabilidade de Mathieu para o campo de quadrupolo
tridimensional, a) diagramas para a direo z no espao (az, qz); b) diagramas para a
direo r no espao (az, qz).
As regies de estabihdade correspondentes s solues estveis da equao de
Mathieu, na direo r, esto sombreadas e marcadas como estveis r na Figura 1 l(b); pode
ser visto que elas so dobradas em magnitude ao longo da ordenada e invertidas. Pelas Eq.
(3.23) e (3.24) pode ser visto que az = -Iq^ e qz = -2qr, isto , os parmetros de estabidade
para as direes rez diferem por um fator -2.
Os ons podem ser armazenados na armadilha inica contanto que suas
trajetrias sejam simultaneamente estveis nas direes r e z; tais trajetrias so obtidas na
regio mais prxima origem, isto , a regio A na Figura 12 a qual deneada
graficamente no espao ( U, qu)-
38
Z estvel
Figura 12. Diagrama de estabilidade de Mathieu no espao (az, Qz) para a armadilha
inica quadrupolar em ambas as direes r e z . As regies de sobreposio
simultnea so marcadas como A e B.
As regies A e B so referenciadas como regies de estabidade. A regio A
a de maior importncia no momento e mostrada em maiores detalhes na Figura 13. A
regio B permanece por ser explorada. As coordenadas da regio de estabUidade na Figura
13 so os parmetros de Mathieu Z e qz. Nesta figura coloca-se Uz versus qz visto que u
fimo de r e z. Na Figiu-a 13 a fi-onteira de estabUidade Pz = 1 intercepta o ebco q^, em ^ z =
0,908 ; este ponto de trabalho o do on de menor razo massa/carga (isto , massa de
corte inferior) que pode ser armazenado na armadilha inica.
39
a .
0.2
q. = 0,908
- 0. 7
0.2 0.4. 0.6 3.8 'i.O !.2 l . . 1.5
Figura 13. Diagrama de estabilidade no espao ( az, qz) para a regio de estabilidade
simultnea em ambas as direes rez prximo origem para a armadilha inica
quadrupolar tridimensional; as linhas iso-Pr e iso-Pz so mostradas no diagrama. O
eixo qz intercepta a fronteira Pz = 1 em qz = 0,908, o qual corresponde ao qmax no
modo de instabilidade seletiva de massa.
IIL 2-9. Freqncias seculares
Uma representao tridimensional de uma trajetria inica, na armadilha
inica, como visto na Figura 14, tem a aparncia geral de uma curva de Lissajous ou
smbolo de infinito, composto de duas componentes das fi-eqncias fimdamentais cOro e
(xh,o do movimento secular A descrio fundamental significa que existem outras
fireqncias de maior ordem (n) e a famlia completa de fi-eqncias descrita por cor^n e
:0^;SSAC NAC;C^;/^L UE energ a NCLEA,R./,Sf . P
40
Figura 14. Trajetria de um on aprisionado com m/z = 105. A posio iniciai foi
selecionada randomicamente de uma populao com uma distribuio inicial
Gaussiana; z = 03; velocidade inicial zero. A projeo sobre o plano x-y ilustra o
movimento planar no espao tridimensional A trajetria desenvolve uma forma que
se assemelha a um bumerangue achatado.
Estas freqncias seculares so dadas por
C0u,n = (rt + ^fij^, 0<n<co
(3.25)
COu,n = - ( ^ ^ - ^ / ^ J ^ ' -^<n<0 (3.26)
onde
41
B
i
au
+ (3.27)
V
para < 0,2 e qz < 0,4, Deve ser observado que enquanto a freqncia secular axial
fimdamental, C0z,o , usualmente dada em unidades de Hertz na literatiu-a e referida
simplesmente como cOz , a mesma deveria ser dada em rad/s. At este momento, as
freqncias de ordens mais altas so de pequena significncia prtica.
O movimento oscilatrio do on resultado das ondulaes na superfcie
potencial que pode ser visualizada como a rotao da superfcie potencial (Figura 15).
Figura 15. Campo de quadrupolo puro, ou superficie de potencial, para a armadilha
inica quadrupolar.
III. 2-10. Excitao ressonante
Da mesma forma que o movimento de ons confinados em urna armadilha
inica quadrupolar caracterizado por duas freqncias seculares, axial e radial, o
movimento do on pode sofrer excitao por irradiao ressonante por uma das freqncias
citadas ou ambas [55]. Tal irradiao pode ser efetivada pela apcao de um pequeno
potencial oscUatrio suplementar de algiunas centenas de mivolts atravs dos eletrodos
tampa, isto , no modo dipolar. A excitao ressonante, que utiliza freqncias seculares
axiais de ons confinados, tem se transformado nimia poderosa tcnica na espectrometria
de massa de armadUha itca quadrupolar devido a utUizao de formas de onda pr
42
determinadas de freqncias especficas ou intervalos de freqncia. Anteriormente
excitao ressonante das trajetrias inicas, os ons so focalizados em direo s
vizinhanas do centro da armadilha inica sob a influncia de coses com mn fluxo de
tomos de gs ho. Este processo descrito como esfriamento inico no qual a energia
cintica dos ons reduzida a aproximadamente 0,1 eV, correspondente a
aproximadamente 800 K como calculado por 3RT/2 = 0,1 eV. O distanciamento dos ons
com respeito ao centro da armadUha inica menor do que 1 mm.
A excitao ressonante de ons resfiiados sob a influncia de imi potencial
oscUante suplementar, da freqncia secular axial de irnia espcie inica especfica e com
amptude de umas poucas centenas de mivolts fez com que estes ons se movam para
longe do centro da armadilha iica, de tal forma a experimentarem um forte campo de
aprisionamento. Este processo de excitao inica freqentemente referido como
ccegas ou "tickling". Os ons sofrem uma acelerao adicional devida ao campo de
aprisionamento de tal forma a adqurem energias cinticas de dezenas de eltron-voks
[56].
A exchao ressonante utUizada de vrias formas: (i) Para remover ons
durante a ionizao de forma a isolar voa. intervalo estreito de razes massa/carga; neste
caso, freqncias de bandas de onda so apcadas aos eletrodos-tampa de mane-a a
excitar e ejetar muhas espcies iidcas simuaneamente, dentando imia ica espcie
inica ou um pequeno intervalo de razes massa/carga isolado dentro da armadUha inica.
() Para aimientar a energia cintica itca promovendo reaes on/molcula
endotrmicas, (i) Para aumentar a energia cintica de forma a depositar energia interna
em ons atravs de coses com troca de momentum com tomos de Ho que, no mite,
dissociam ons. (iv) Para aumentar a energia emtica de forma a movimentar ons para a
proximidade do eletrodo tampa onde uma corrente imagem possa ser detectada. Este modo
permite imia mensurao no destrutiva e uma nova mensurao das razes massa/carga
dos ons confinados, (v) Para aumentar a energia emtica de forma a causar o escape de
ons do potencial aprisionador e desta forma causar a ejeo dos mesmos. Este modo pode
ser usado tanto para a ejeo de ons desnecessrios como no isolamento de ons ou para
ejeo de ons seletivamente selecionudos quando a freqncia apcada varrida, (vi) Para
ejetar ons quando a amptude V da RF rampeada. Este modo, conhecido como
modulao axial, usado em coiyimto com o rampeamento de RF com o intuito de levar
os ons ressonncia com a freqncia fixada em aproximadamente 6 V(p,p) vmi pouco
antes de suas trajetrias se tomarem instveis. Neste caso, ons de pequena razo
43
massa/carga so removidos da influncia perturbadora de ons de razes massa/carga
maiores e so detectados com resoluo adicionaL Na modulao axial, a fi-eqncia
ressonante imi pouco menos da metade da fi-eqncia principal f.
44
rV. TCNICAS DE OPERAO DO ESPECTRMETRO DE MASSA "lON-
TRAP"
Neste captulo so abordadas as tcnicas de operao da espectrometra de
massas "lon-Trap" no que se refere ao sistema disponvel modelo Satum-3, marca Varan,
expUcitando as tcnicEis de ionizao por impacto de eltrons (lE) e ionizao qumica
(IQ), bem como o modo de armazenagem de ons selecionados (AIS) que se constitui num
caso particular de excitao ressonante. Tambm so abordados o controle de ganho
automtico (CGA) e a deteco inica via multipUcador de eltrons.
rV. 1. Ionizao por impacto de eltrons (lE)
Um mtodo tradicional de ionizao tem sido o de hnpacto por eltrons (lE),
onde as molculas da amostra so ionizadas por eltrons acelerados por uma diferena de
potencial de usuahnente 70 V. Esta tcnica tem sido amplamente utiUzada, sendo o
espectro de massas produzido, caracterizado por um considervel grau de fragmentao do
on molecular miciahnente formado [57]. O on molecular no necessariamente
observado, no entanto, vrios ons de menor massa o so. Estes ons so formados por
reaes de cvagem simples ou rearranjos mais complexos. Esses dois processos
introduzem um fetor de dificuldade em muhos espectros de ionizao por impacto, mas
estes ons decompostos revelam tuna considervel quantidade de informao estrutural
sobre a molcula.
IV. 2. Ionizao qumica (IQ)
Este mtodo de criao de ons normahnente denominado de ioidzao
suave" quando comparada ionizao por impacto de eltrons. A Ionizao Qumica
(IQ) produz ons da amostra neutra sem depositar considervel quantidade de energia nos
ons formados. Em contrapartida, a extensiva fragmentao dos ons criados no modo lE
resultante do excesso de energia interna (imia tcnica de ionizao "forte"). Embora os
padres de fragmentao sejam de considervel utilidade analtica, o on molecular de
45
extrema importncia. No entanto, muitos dos espectros de lE contem apenas um trao do
on molecular ou o mesmo est ausente do espectro de massa observado [50]. Em
oposio, os espectros de IQ fornecem, em muitos casos, um intenso on molecular e um
padro de fragmentao muito mais simples. Na prtica, um gs reagente (metano,
isobutano, amnia etc.) introduzido na armadilha inica. O gs ento ionizado por lE e,
em seguida, as molculas da amostra so ionizadas pela interao com os ons resuhantes
da ionizao do gs reagente. Na ionizao qumica de ons positivos, uma das reaes
mais utilizadas tem sido a transferncia de prtons dos ons reagentes (BH^ para a
molcula da amostra (M) (Reao 4.1), onde AH corresponde diferena de protoafinidade
de B menos a protoafinidade de M [58]. Para que tal reao ocorra, a mesma deve ser
exotrmica (AH negativo). Isto impUca que a protoafinidade do on reagente (BH^ deve
ser menor que a protoafinidade da molcula de interesse M A extenso da firagmenta-
BH^ + M ^ MH^ + B, AH (4.1)
co do on molecular (MH^ ser tanto maior quanto mais negativa for AH, a
exotenrcidade da reao de transferncia protnica, pois mais energia ser depositada
como energia interna disponvel para a fragmentao da molcula de interesse. A
magnitude de AH e, em conseqncia, a extenso da fragmentao de MH*
freqentemente pode ser controlada pela escolha correta do gs reagente.
Conceituahnente, a proto-afnidade de uma molcula pode ser entendida como a
quantidade de energia liberada quando da adio de um prton a esta. Portanto, imia
grande proto-afinidade significa que mais energia liberada quando da adio de um
prton e, desta forma, a adio de um prton se toma energeticamente mais favorvel.
Cabe saentar que as reaes de transferncia protnica so ahamente eficientes,
ocorrendo virtuahnente em todas as coses. Caso a protoafinidade do on reagente seja
maior do que a da molcula de interesse, ou seja, na medida em que a reao (4.1) se toma
termoneutra, a eficincia da reao cair e se tomar muito baixa para reaes endotrmica
ou endoenergticas [51].
46
rV. 3. Controle de ganho automtico (C.G.A)
Apesar das melhorias trazidas pelo uso do gs "bufifer" (gs de arraste, que
dimirmi a energia dos ons no interior da armadilha inica atravs de choques elsticos com
suas molculas), da geometria "esticada" (Captulo III, item 3.10) e das fimes de
varredura segmentadas, os prime-os espectros de massa reportados com o "lon-Trap"
mostravam significantes distores na medida em que a concentrao da amostra mudava.
Claramente, estas distores eram msatis&trias para aplicaes analticas, onde a
integridade quantitativa dos dados obtidos era essencial. Em particular, poderia haver uma
significante distoro entre o espectro de massas IE obtido com o "Ion-Trap", comparado
com aqueles obtidos por outros instrumentos e mantidos no banco de dados do "software".
O problema essencialmente duplo. Por um lado, altas concentraes da
amostra combinada com significantes tempos de aprisionamento (vrios milisegundos),
levam ocorrncia de reaes on/molcula, e portanto, mudam a identidade dos ons a
serem analisados e tambm causam uma perda quantitativa de resposta. Em segimdo lugar,
o aumento da densidade de ons dentro do "lon-Trap" pode acarretar efeitos de carga
espacial, modificando substancialmente o campo eltrico no qual os ons esto sujeitos,
causando portanto mudanas nas posies das fi-onteiras do diagrama de estabilidade,
resuhando em mudanas nas razes massa/carga associada aos ons [51]. O modo mais
fcil de evitar estes dois efeitos alterar o tempo de ionizao de uma maneira controlada
fazendo uso do mtodo do controle de ganho automtico (CGA). A funo de varredura
tem a misso de controlar os trs processos que ocorrem na armadilha inica: ionizao,
anhse de massas e deteco. A funo CGA se constitui de uma pr-varredura e quatro
segmentos de varredura, onde se utiliza um gs padro, com vistas cabrao dos quatro
intervalos de massa do espectrmetro. Os quatro segmentos de varredura correspondem s
quatro pores de intervalos de massa: 10 a 99 m/z, 100 a 249 m/z, 250 a 399 m/z e 400 a
650 m/z. O "software" da rotma de CGA seleciona automaticamente um tempo de
ionizao de 10 ps a 25 ms para cada um dos segmentos de varredura da micro-varredura,
dependendo da quantidade de amostra na armadilha inica. Uma estnativa do nmero de
ons formados na armadilha de ons realizada com urua varredura curta que consiste de
um perodo de ionizao de 0,1 ms. Para picos de baka intensidade selecionado um
teno de ionizao mximo de 25 milisegimdos, que oferece mais de 25 vezes maior
sensibidade que na operao padro da armadilha de ons sem CGA. Enquanto a
47
quantidade da amostra aumenta, o tempo de ionizao decresce automaticamente de modo
a prevenir a saturao de ons dentro da armadilha.
IV. 4. Detector de ons
Os detectores de ons mais utilizados nos espectrmetros de massas de
armadilha inica so denominados multiphcadores de eltrons. O multiplicador
posicionado abaixo do eletrodo-tampa inferior. Ele detecta os ons positivos qtiando so
ejetados atravs de buracos na parte inferior do eletrodo-tampa. O multipUcador de
eltrons no espectrmetro de massa "Ion Trap" do tipo dmodo contnuo e constitudo de
xido de chumbo (grafite/vidro), um resistor em forma de fimil (o ctodo) e um copo (o
nodo) no fim do ctodo (Figura 16).
Uma vohagem negativa (entre -800 e -3000 V) apUcada no topo do ctodo.
A sada do ctodo esta nimi potencial nulo. Os ons positivos ejetados da cavidade da
armadilha inica so atrados para o ctodo, pela voltagem negativa apcada ao mesmo.
Estes otis codem no ctodo com suficiente velocidade para desalojar eltrons da
superficie curva interna do ctodo. Os eltrons ejetados so acelerados para o interior do
multipUcador de eltrons, direcionados pelo crescente gradiente de potencial positivo.
Como resultado da curvatura do multipUcador de eltrons, os eltrons ejetados no viajam
murto longe antes que os mesmos atinjam novamente a superfcie interna do multipUcador,
dessa forma causando a emisso de mais eltrons. Portanto, uma cascata de eltrons
criada e acelerada em direo ao potencial nulo no fim do ctodo. Os eltrons so
coletados pelo nodo, e o sinal de corrente inica resultante passado a um eletrmetro na
placa de controle analgico. O smal da corrente irca proporcional ao nmero total de
eltrons ejetados da armadUha imca. Tipicamente, a voltagem apcada ao nmltipUcador
de eltrons ajustada para dar um ganho de 10^, isto , para cada on que entra no
multipUcador de eltrons, aproximadamente 10^ eltrons so gerados.
48
on entrando no
multiplicador
de eltrons
Eltrons secundrios
Fig 16. Detector multiplicador de eltrons do espectrmetro de massa "Ion Trap".
IV. 5. Armazenagem de ons selecionados (AIS)
Normalmente a varredura de massas o resultado da aplicao de um nico
campo dipolar suplementar nos eletrodos-tampa (direo axial-z) do "lon Trap", e de um
aumento linear da voltagem de radio-freqncia. Na medida em que a voltagem aumenta,
as freqncias seculares dos ons aumentam at que as mesmas se igualam freqncia
suplementar aplicada. Neste ponto, ocorre a ressonncia, e o on absorve energia do
campo eltrico externo. A ejeo ressonante pode ser usada para ejetar mltiplos ons num
campo bo de radio freqncia. Isto realizado pela aplicao de freqncias mltiplas
nos eletrodos-tampa do "lon Trap". Explicitamente, sabe-se que cada on armazenado na
armadilha inica tem valores Oz e qz associados. Estes ons tm trajetrias cuja freqncia
de oscilao aproximadamente [59],
Q Q
(4.2)
Considerando o caso particular em que 7 = O (os espectrmetros de massas de
armadilha inica comerciais normalmente operam nesta condio) na equao (3.24), ou
seja flz = O na equao 4.2, temos:
49
qn42
^' 0 4 (4.3)
Substituindo qz (eq. 3.24) na equao 4.3 temos:
eV2^/2
"^^'^ ~ ~ T ^ T 7 ^ (4-4)
A equao (4.4) nos mostra que a cada massa inica temos associada uma
freqncia secular onde o ndice zero corresponde s freqncias de primeira ordem
Considerando este fato, podemos aplicar uma forma de onda suplementar que utilize as
freqncias caractersticas de cada massa na direo z. Este campo eltrico auxiliar
aplicado nos eletrodos-tampa, atua nos ons que possuem a mesma freqncia de oscilao
de tal forma que ocorre transferncia de potncia deste para os ons, desencadeando o
processo de ressonncia. Em conseqncia, os ons adquirem suficiente energia cintica,
da ordem de 10 a 30 eV e so ejetados [60]. O modo de "Armazenagem de ons
Selecionados" - AIS (Selected lon Storage-SIS) leva exatamente este fenmeno em conta,
acumulando ons seletivameme na armadilha inica e ejetando os ons ressonantes. Um
mtodo conveniente de aplicar mltiplas freqncias utilizar uma forma de onda
multifreqncia de banda larga. As formas de onda multifreqncias usadas no AIS
incluem aquelas freqncias requeridas para ejeo dos ons indesejados do "lon-Trap",
sem afetar os ons a serem armazenados. A modulao da radio-frequencia de
armazenamento aumenta e diminui as freqncias seculares dos ons no "lon-Trap"; dessa
forma, os ons indesejados podem ser movimentados dentro e fora da ressonncia com as
freqncias da forma de onda suplementar, levando ejeo dos ons indesejados e
acumulando os ons ue interesse (Figura 17).
50
Varredura
Poo de Massas Injbrior ^
I
Fadio-frequ^ncia
Poo de Massas
Superior
Porta
Eletrnica
Forma da on-
da atahar
Ttmpo
Figura 17. Diagrama temporal do modo AIS. A RF, porta eletrnica e forma de
onda auxiliar so acionadas ao mesmo tempo. A amplitude da RF do campo
aprisionador modulada para variar as freqncias seculares.
51
V. METODOLOGIA
Neste captulo exposta a metodologia desenvolvida para este trabalho no que
diz respeito calibrao, tcnicas de deteco e aspectos prticos necessrios deteco e
caracterizao de pesticidas Pketrides via GC/MS; alm disso abordamos a tcnica de
extrao de pesticidas em leite utilizando-se coluna cromatogrfica preenchida com sHca-
geL
V. 1. Verificaes e calibrao do espectrmetro de massas
Previamente ao procedimento de cabrao, algumas verificaes devem ser
executadas de forma a garant- a integridade do mesmo. No pamel de controle do
cromatgrafo a gs, posiciona-se o valor da presso de entrada de gs Ho a 12 psi na
coluna DB5 com 30m de comprnento, 0,25 mm de dimetro interno e espessura da fase
estacionria (dimetU-soxana, 5% fena) de 0,2 jim. O fluxo mdio no interior da coluna
posicionado a 1 ml/min. Verifica-se a existncia de vazamentos no sistema GC/MS
monitorando-se a quantidade de ar e gua atravs do software de controle "Satum-3"
mstalado no micro-computador. Atravs do mesmo "software" de controle, verifica-se se
o sistema de vcuo est trabalhando nimia presso negativa adequada ao fimcionamento do
"Ion-Trap"(<lO-''Torr).
A cabrao em si um procedhnento automtico no qual o software de
controle "Satum-3" executa algumas tarefes que levam otimizao da forma e
intensidade dos picos cromatogrficos. Este procedhnento faz uso, em algumas etapas, do
composto Perfluortributilamina (PFTBA), C12F27N, tambm denominado Fluorcarbono-43
(FC-43), utilizado como substncia de cabrao pelo espectrmetro de massas. As
seguintes funes so reazadas no procedimento de cabrao:
a) Verifica-se se as concentraes de gua e ar esto em nveis aceitveis no interior da
armadUha inica.
52
b) Verifica-se se sinal do circuito integrador est um pouco acima do zero quando o
filamento est desligado. A mdia do sinal do rudo eletrnico ajustada para que esta
condio.
c) Estabelece-se a voltagem do multiplicador de eltrons. A voltagem ajustada de tal
forma que haja um ganho de 10^ eltrons por on.
d) Estabelece-se a corrente de emisso de filamento. O filamento de Rnio emite eltrons
a partir de uma certa temperatura. O sistema de dados estabelece o melhor valor de
corrente de fiilamento, que pode variar de 5 a 100 pA.
e) Ajusta-se a presso do gs de cabrao. O filamento, o multipUcador de eltrons e a
vohagem de radio-freqncia (RF) so acionados; a vlvula solenide da ampola que
admite o gs de cabrao aberta; o mtervalo de varredura estabelecido de forma a
exibir no micro-computador os picos que esto presentes no intervalo de massa/carga que
vai de 45 a 165 u.m.a. O programa determina se a presso do gs de cabrao est babea,
aha ou adequada.
f) Ajusta-se a funo de Controle de Ganho Automtico (CGA) (descrita no item V. 2).
g) Reaza-se a cabrao de massa. O programa automaticamente determina a relao
entre ao amptude de voUagem de RF e os picos de massa do composto de cabrao.
Cabe saentar que quaisquer parmetros determmados pela cabrao
automtica podem ser aherados manualmente, conforme a necessidade da anlise em
questo.
V. 2. O impacto de eltrons (I) e a funo de controle de ganho automtico (CGA)
Como foi visto na seco IV. 1, as molculas da amostra, no modo de operao
lE, so introduzidas na armadUha irca onde as mesmas interagem com eltrons
energticos provenientes do filamento de rnio aquecido, formando ons positivos. Neste
modo de operao, a fimo CGA controla a ionizao, a anlise de massas e deteco na
armadUha inica (seco IV. 3). A armadiia inica tem uma capacidade mxima de
armazenamento alm da qual a resoluo de massas e a capacidade espectral se deterioram.
A funo de varredura CGA est baseada na relao near entre o tempo de ionizao e a
quantidade de ons criada e subseqentemente armazenada na armadUha irca. O febce de
eltrons do filamento gera ons por coliso com as molculas introduzidas na armadilha
irca; o software controla o tempo de ionizao de tal forma que a quantidade de ons
53
pode ser mantida num nvel timo. Alm disso, o nmero de ons formados na armadilha
tambm fimo da corrente de emisso do filamento; tanto a ionizao como a mtensidade
do febce de eltrons controlam diretamente o nmero de ons formados. O melhor
desempenho da armadilha inica, ou seja, o que produz a melhor quadade espectral com
boa resoluo, ocorre quando uma quantidade thna de cargas est presente no interior da
armadilha inica.
V. 3. Ionizao qumica com metano
Nesta tcnica o gs metano miciahnente ionizado por lE. Subseqentemente,
as molculas da amostras so ionizadas pela interao destas com os ons origkirios do
gs metano. Neste caso, a maior parte dos ons primrios formados por impacto de eltrons
constituda dos ons CH4 *, CH3 * e CH2 *. Estes reagem conforme radicado ababco para
formar a maioria dos ons observados segundo as seguintes reaes:
CH4* + CH4 - >CH5 * + CH3 (5. 1)
CH3* + CH4 ^ C2H5* + H2 (5. 2)
CH2* + CH4 - > C2H4* + H2 (5. 3)
^ C2H3* + H2 + H- (5. 4)
C2H3* + CH4 ^ C3H5* + H2 (5. 5)
A ionizao qumica s ocorrer se os ons de Metano possurem proto-
afinidades menores que a proto-afirdade da molcula de interesse (5. 6), ou seja:
P^melano P^molcula (5- 6)
Os principais ons formados a uma presso de 1 torr (reaes 5.1 a 5.5) e suas
respectivas abundancias so: CHs"^ (48%), C2H5* (41%) e C3H5* (6%), que possuem
pro to-afinidades iguais a 131,6 kcal/mol, 162,6 kcal/mol e 175,8 kcal/mol respectivamente
[57, 58]. Se a condio 5.6 for satisfeita, ocorrer interao e protonizao entre os ons de
Metano e a molcula de rateresse em quase todas as colises. Na medida em que a reao
de transferncia de prtons toma-se termo-neutra, a eficincia da reao cai e toma-se
muito baixa para reaes endotrmicas. A possvel molcula protonada formada (M-H^
54
em muitos casos, pode possuir excessiva energia interna e fragmentar-se em ons menores
[ 58] . Nestas condies, quanto menor a diferena de proto-afinidade entre a molcula de
interesse e o on reagente, melhor ser observado o on M-H* (Tabela 5) .
Tabela 5. Proto-afindades dos principais ons dos gases reagentes utilizados em
Gs Reagente Ion Reagente Proto-afinidade (kcal/mol)
H2 H3*
101. 2
N2/H2 NJ FT 118. 2
CO2/H2 C02H* 130. 8
N2O/H2 N20Fr'' 138. 8
CO/H2 HCO* 142. 4
CH4 CH5* 131. 6
C2H5* 162. 6
H2O H:*(H20) 166. 5
CH3OH H*( CH30H) 181. 9
C3H8 C3H7* 179. 5
i-C4H,o C4H9" 195. 9
NH3
ir(NH3)n
204. 0
a- on NO tambm observado
Uma condio necessria para que espectrmetro de massas opere no modo
de ionizao qumica (IQ) de o que o mesmo esteja caUbrado no modo lE. Tipicamente,
o modo IQ deve ser preparado de acordo com as seguintes etapas:
a) Estabelece-se a corrente de emisso de filamento, tipicamente 1 0 pA. A temperatura da
cavidade inica deve estar shuada entre 150 e 175 C;
b) Seleciona-se o gs metano como gs reagente;
c) Ajusta-se a presso do gs. Isto realizado comparando-se o espectro do Metano,
fornecido no maiuial do febricante, com o espectro obtido experimeiitahnente quando se
modifica a presso do Metano atravs de uma vlvula tipo agulha.
55
V. 4. O modo AIS (Armazenagem de ons Selecionados)
Como foi apresentado na seco IV. 5, o modo AIS utiliza freqncias
seculares caractersticas dos ons no campo quadrupolar, impondo a estes uma forma de
onda de multifreqncia, que exclui ons indesejados e armazena seletivamente os ons de
interesse. Isto realizado especificando-se o intervab de massas dos ons a serem
armazenados. Como cada massa tem uma nica freqncia secular a uma dada RF
(equao 4.4), possvel se construir uma forma de onda que no inclua freqncias
prximas s freqncias seculares dos ons a serem armazenados. A forma de onda
resultante consistir de uma distribuio de freqncias discretas com freqncias
ausentes, os chamados ns, correspondentes s freqncias dos ons armazenados.
V. 5. O modo MIS (Monitorao de ons Selecionados)
Em oposio ao modo AIS, o modo de Monitorao de ons Selecionados no
diz respeito ao isolamento fsico de ons no interior da armadilha inica mas sim se
constitui num procedimento "ofF-Une" reahzado com a ajuda do "software" do sistema
Satum-3 no qual escolhem-se ons do espectro de massa total que so utilizados na
"reconstmo" do cromatograma levando-se em conta apenas suas respectivas
contribuies para a intensidade total e dessa forma eminando as contribuies advindas
do substrato. A rotma do programa Satum-3 possibihta a seleo de um nico on, soma
de at 3 ons ou intervab inico na reconstmo do Cromatograma e desta forma, analilos
no identificveis no Cromatograma total podem s-los, na medida que os mesmos se
destacaro do substrato total e sero passveis de caracterizao.
V. 6. Os parmetros do cromatgrafo a gs (CG)
O cromatgrafo a gs (Figura 18) composto das seguintes partes fsicas:
1) CiLidro de gs de arraste. 6) Detector.
2) Controlador de fluxo do gs. 7) Registro digital.
3) Injetor da amostra.
4) Termostatos da colima.
5) Coluna cromatogrfica capilar.
56
Figura 18. Esquema do Cromatgrafo a Gs mostrando seus principais componentes.
A insero da amostra lquida ou gasosa realizada manualmente atravs de
uma seringa graduada em micro-litros. Em geraL apenas 1 pL da amostra necessrio
para a aquisio de dados. A amostra, imediatamente aps a insero, vaporizada no
iryetor, que possui um controlador de temperatura, e arrastada atravs da colima pelo gs
de arraste que tem a fimo de levar as substncias presentes na amostra para fora da
coluna, em direo ao detector, quando elas no estiverem interagindo com a ise
estacionria. Vrios tipos de detectores podem ser utilizados no sistema de um
cromatgrafo a gs. Entre eles podemos citar o detector por condutividade trmica, o
detector por ionizao em chama, o detector por captura de eltrons, o detector
termoinico e o espectrmetro de massas, entre outros.
A coluna capilar utilizada neste trabalho, DB5, tem como fase estacionria a
dimetil-sibxana (5% fenil), que mterage com os componentes da amostra na medida em
que sua polaridade concorda com as polaridades dos componentes da mesma. Quando a
concordncia boa, a ordem da eluio determinada pelos pontos de ebuo dos
componentes. Tipicamente, os tempos de reteno e as intensidades dos picos
cromatogrficos so controladas pela programao de temperatura da coluna. A
temperatura dever ser suficient mente alta para que a anhse se efetue num prazo
razovel e suficientemente baixa para efetuar a separao desejada. Segundo uma
aproximao feha por Giddings [62], o tempo de reteno se dupca a cada 30 "C que se
dninui a temperatura da cohma. Na maioria das colunas, quanto menor a temperatura
melhor a separao dos picos cromatogrficos. No entanto, quando se consideram os
57
pontos de ebulio dos compostos Piretrides (Tabela 1), verifica-se ser inconveniente
trabalhar, na maioria dos casos, com tenyjcraturas ababco de 170 C, visto que a maioria
dos pontos de ebuUo destes pesticidas est acima deste valor.
Classificam-se as anUses cromatogrficas em dois tipos: Anses isotrmicas
e anlises de temperatura programada. Nas anlises isotrmicas se utiliza uma nica
temperatura de coluna. A operao isotrmica umita a anse a amostras com pontos de
ebuo pouco amplos. A tenperaturas constantes, os picos iniciais, que representam os
componentes com baixo ponto de ebuo, saem da coluna com tal rapidez que vrios
picos se superpe e os compostos com maior ponto de ebulio saem com muito atraso e
sofirem um alongamento na forma dos picos (Figura 19). Em alguns casos os componentes
de aho ponto de ebulio no so eludos e podem aparecer numa anse
I SOTEKMI CO
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Figura. 19. Cromatograma no modo isotrmico e com programao de temperatura
de coluna.
posterior como rudos na unha de base ou como inexpcveis picos fantasmas.
Com a programao de temperatura, utiza-se uma temperatura ircial babea e
asshn os picos miciais saem bem resolvidos. Na medida em que se aumenta a temperatiu-a,
cada condnente de maior ponto de ebuo eludo em fimo do aumento de
58
temperatura. Os compostos com ponto de ebulio menor saem mais rapidamente e com
picos melhor definidos. Os componentes traos aparecem como picos bem definidos e
podem fecihnente serem distmguidos da hnha de base e o tempo total de anhse mais
curto. Em resumo, a temperatura programada permite a seleo apropriada de uma
temperatura que dar picos bem resolvidos, de forma bem definida e num tempo total de
anlise mais curto do que na operao isotrmica.
V. 7. Caractersticas do espectrmetro de massas como detector
O espectrmetro de massa pode ser visualizado como imi outro detector para
cromatografia a gs, tais como os detectores de condutividade trmica, de ionizao por
chama, por captura de eltrons, entre outros. Desta forma podemos star algumas
caracteristicas tpicas atribudas a este aparato.
V. 7-1. Limite mnimo de deteco (L.1VLD) e quantificao (L.M.Q.)
Os hmites mmnos de deteco e quantificao podem ser definidos como se
segue:
S
N
S
= 3 (L.M.D.) (5.7)
= 10 (L.M.Q.) (5.8)
Nas equaes 5.7 e 5.8, o smal (S) definido como a resposta medida como
diferena entre a amostra e a linha de base (mdias), e o rudo (N) definido como o
desvio padro das flutuaes da resposta do instrumento com relao unha de base. O
L.M.D. (limite mrmo de deteco) denota a menor concentrao que pode ser detectada
com uma determinada tcnica e o L.M.Q. (mite mimo de quantificao) se refere a
menor concentrao que pode ser quantificada.
V. 7-2. Sensibidade
A sensibidade denota a quantidade de smal gerada para uma determinada
concentrao da amostra. O espectrmetro sensvel gerar imi smal eltrico substancial e
proporcional a uma determinada concentrao da amostra.
59
V. 7-3. Rudo
O rudo se refere resposta do espectrmetro aos sinais aleatrios
determinados pelas propriedades do detector em si e dos circuitos eltricos adjacentes. O
rudo determina como detectar uma amostra pequena. Em geral se define como quantidade
mnima detectvel (Q.MD.) ou limite mnimo de deteco (L.M.D.) quela amostra
suficientemente grande para gerar um sinal trs vezes maior que seu nvel de rudo.
Observe que tanto a sensibilidade, o rudo e a Q.MD. do sistema GC/MS dependem
grandemente das condies cromatogrficas e do modo de deteco que venha a ser
utilizada no espectrmetro. Relativamente s condies cromatogrficas (vide item V. 6),
aUos pontos de ebuo combinados com pesos moleculares aUos, necessitam de akas
temperaturas de coluna, gerando linhas de base altas e picos alargados. Um dos principais
fatores que geram Unhas de base altas o chamado "sangramento de coluna" no qual
componentes da ase estacionria da coluna so arrastados pela fese mvel. Quanto maior
a temperatura da fase estacionria maior a quantidade de componentes que se desprendem
de sua superfcie, acarretando aumento na Unha de base. Depreende-se deste fato, que a
quantidade mnima detectvel depender fortemente do ponto de ebuo e do peso
molecular do composto a ser analisado visto que altos pontos de ebuo e grande peso
molecular acarretam tempos de reteno mais longos. Por outro lado, a utUizao do modo
AIS diminui de peb menos uma ordem de grandeza a Q.M.D., devido emmao de ons
da matriz interferente, acarretando um aumento substancial das relaes sinal/rudo dos
picos cromatogrficos. Em geral pode-se afirmar que, para compostos orgrcos, quanto
maior o peso molecular e o ponto de ebuo maior ser a quantidade mmima detectvel.
Observe que quanto maior o tempo de reteno maior o efeito acumulativo do
"sangramento de coluna" levando a uma degradao na Q.M.D.e a alargamento dos picos
para compostos que eluem mais lentamente. Por exemplo, o composto
hexaclorodibenzeno (HCB) possui uma Q.M.D. e um linte de deteco da ordem de
partes por trilho (ppt). No entanto, o Piretride Cipermetrina possui L.M.D. da ordem de
33 ppb (partes por bilho) nas mesmas condies de concentrao da amostra (ver captulo
V), ambos determinados no modo AIS com iotzao por impacto de eltrons (lE). Cabe
saentar que, alm dos fatores acuna citados, a resoluo dos picos cromatogrficos e os
tempos de reteno dependem fortemente da estrutura qumica do anato e da fase
iOWiSSAC r JA C i C ? ; L DE ENc RG A N CLEAF / S P FB
60
estacionaria da coluna. Fatores como a polaridade da coluna, do solvente e da amostra
afetam diretamente a anlise cromatogrfica.
V. 7-4. Resposta universal
O espectrmetro de massas de armadilha inica, utilizado neste trabalho,
responde a todos os componentes da amostra detro do intervalo de massa estipulado de 40
a 650 u.m.a.
V. 7-5. Resposta linear
Cabe ao espectrometrista determinar qual a fabca de resposta Unear do GC/MS
relativamente s concentraes a serem determinadas; a nearidade das intensidades
inicas (alturas ou reas) ve rs us concentraes essencial no sentido de estabelecer uma
curva de caUbrao extema ou interna, necessrias quantificao dos compostos
presentes na amostra.
V. 8. Extrao de Piretrides em leite
O estmulo inicial para a realizao dos experimentos de extrao de residuos
Piretrides em leite foi dado pela constatao da presena destes resduos em leite de vaca
[26, 27]. Estes animais, que foram submetidos a tratamento com Piretrides com o mtuito
de combater moscas-de-chifi:e e outros parasitas, apresentaram um contedo de
Cipermetrina em leite que variou de 360 ppb, no primeh"o dia aps a apcao, a 60 ppm
aps 28 dias. O mtodo de extrao utUizado nesse trabalho foi o segumte: A amostra de
leite (10 g) foi acidificada com 1.0 N de HCl com pH 4 e adicionada a 50 ml de acetonitra
grau HPLC, agitada por 30 mmutos e ento filtrada num fiiml de vidro com papel de filtro.
O procedimento foi repetido com 25 ml de acetirtrila por 15 minutos. O fihrado foi
transferido para um fiin de separao; 15 ml de n-hexano grau HPLC foi adicionado e a
mistura foi ento homogeinizada. O procedmiento foi repetido duas vezes e a fase em n-
hexano foi descartada. A fese acetortrUa foi levada evaporao [26, 27].
Em fimo do excesso de etapas do mtodo achna descrito optou-se pelo mtodo
desenvolvido por Stemwandter [63] e utUizado, com modificaes para Piretrides, pelo
instituto Adolfo Lutz, So Paulo, na Seo de Aditivos e Pesticidas Residuais a partir de
61
1991 devido a sua simplicidade no que tange ao nmero de etapas e sobretudo porque a
extrao e a purificao so realizadas simultaneamente prevenindo-se contaminaes no
processo. Um estudo comparativo foi realizado por esse instituto [64], no qual comparou-
se o mtodo da Association of Official Analytical Chemists (A.O.A.C), que consiste em
extrao da gordura com partio em trs solventes e cromatografia de adsoro com
Florisil (mtodo este utiUzado desde 1969), com o mtodo Steinwedter [64]. Constatou-se
que ambos apresentavam recuperaes satisfatrias. No entanto, optou-se pelo mtodo
Steinwandter em fimo do menor tempo gasto, menor quantidade de solventes utilizada e,
como conseqncia, menor custo da anhse [63].
O mtodo descrito a seguir conveniente para todas as amostras que so
solues aquosas, isto , leite ou amostras que podem ser homogeneizadas com gua, tais
como: leite em p, cacau, ovos, etc. O mtodo em questo faz uso da extrao e
purificao por coluna cromatogrfica dos pesticidas Phetrides extrados da matriz
orgnica (Figura 20).
Etuente
^ Sflica-gel + Leite
Sulfato de Sdi o Anidro
- Sffica-gd
Amostra extrada
Figura 20. Esquema do mtodo de extrao de Piretrides em leite; utiliza-se uma
coluna cromatogrfica preenchida com slica-gel.
O leite e produtos lcteos aquosos so homogeneizados num ahnofariz com
sUca gel. Estas amostras, que podem conter at 40% em peso de gua, so colocadas no
interior de uma coluna previamente preenchida com shca-gel (70 a 230 mesh) ativada
(10% H2O destilada), necessria purificao. A extrao e purificao dos Piretrides
62
ocorrem simultaneamente com uma mistura de diclorometano/n-hexano 50+50 (VfV). Os
pesticidas se movem com o solvente da parte superior da sflica-gel para a parte inferior da
coluna onde so purificados. A sica-gel deve ser previamente aquecida a 450 C por 3
horas e, aps o resfiamento, estocada num fi-asco selado. A coleta do eludo ferta num
balo de vidro que pode ser prontamente adaptado a um rotovapor, evitando perdas e
contaminaes devidas troca de vasos. A coleta do eludo deve ser encerrada quando o
gotejamento ca- a 1 gota a cada trs segtmdos. Subseqentemente, o solvente evaporado
no roto-vapor at que se reduza a uma quantidade de 5 a 10 mL. A temperatura de
evaporao, na medida em que no se utiliza imia bomba de vcuo, deve ser de 71 C.
Esta temperatura garantir que todo o diclorometano seja evaporado (PE = 40,10 C) e
ocorra a concentrao da amosta apenas em n-hexano (PE = 68,74 C). Em qualquer caso
a amostra coletada deve ser completada com n-hexano at 10 mL, para fins de
quantificao.
Apenas 1 pL de amostra necessrio para a determmao dos pesticidas
phetrodes no GC/MS (Figura 21). Aps a evaporao e lavagem cuidadosas, a
mostra pode ser transferida para um balo volumtrico de 10 mL. Estudos mostram
que
Figura 2L Etapas de extrao e determinao de piretrides em leite que consistem
na extrao, purificao, separao no cromatgrafo gasoso e anlise no
espectrmetro de massa.
os pesticidas saem nos primehos 10 mL do eludo quando se utiliza petrleo
leve/diclorometano na proporo 4:1 como eluente [63]. Esta concentrao de pesticidas
na parte fi-ontal do solvente ocorre somente se sflica-gel estiver desativada. A sflica-gel
com contedo aquoso menor que 40% em peso tem propriedades que fazem com que
rpidas transies cinticas sejam possveis. Extraes mcompletas ocorrero se o
contedo de gua na sflica-gel for muho alto ou muito baixo.
63
V. 9. Escolha do solvente
A escolha adequada do solvente ou mistura de solventes essencial na
eficincia da extrao, sendo a polaridade do mesmo um fetor primordial nesta escolha.
Considerando-se este critrio de seleo, a utilizao de diferentes solventes pode ser
baseada na classificao dada por Snyder [65, 66], que se refere a dados de solubihdade de
solventes em 3 compostos com diferentes caractersticas: Etanol (bom receptor de prtons),
Dioxano (bom doador de prtons) e Nitrometano (boa mterao com momentos de dipolo).
O ndice de polaridade (P') definido a partir de:
F =
dioxano + 1 0 g ( ^ g )itrometano (5.9)
onde Kg se refere constante de solubilidade do soluto corrigida para os pesos
moleculares do soluto e do solvente. Em algumas aplicaes til distinguir-se a fora do
solvente de sua seletividade. A fora do solvente depende de sua polaridade ou seja, a
habihdade de preferenciahnente dissolver compostos mais polares tais como nitrilas e
lcoois. A seletividade do solvente refere-se habUidade de um dado solvente de
dissolver seletivamente um composto em oposio a outro, onde as polaridades dos dois
compostos no so obviamente diferentes. Dessa forma um dos dois solventes dever
preferenciahnente dissolver nitrilas, e o outro, lcoois. Na procura pela polaridade
adequada de uma determinada mistura de solventes para a extrao de Phetrides , o ndice
de Polaridade pode ser calculado pela relao:
P' = <t>aPa + <l>, Pl, (5.10)
onde (^a e (pb so as fi-aes dos volumes dos solventes A e B na mistura e os valores Pa e
Pb so os ndices de polaridade para os solventes puros A e B respectivamente. Baseando-
se nos valores fomecidos por Snyder, a mistura de diclorometano e n-hexano (1:1)
utilizada neste trabalho, pode ser calculada da segumte forma:
P ~ (j^ dicloromet Pdicloromet ^ n - hexano Pn - hexano (5-11)
P = (0,5X3,1)+ (0,5X0,l) = 1,6 (5.12)
64
o estudo da otimizao de P' foi realizado misturando-se vrios propores
dos solventes, por exenqjio (1:1, 2:1, 1:2, 1:4 de diclorometano e n-hexano) e verificando-
se a eficincia na extrao do pesticida. Uma vez estabelecido o valor tno de P' , o
efeito da solubihdade do solvente pode ser explorado utihzando-se solventes com valores
similares de P', mas com seletividades diferentes. Por exemplo, poder-se-ia utilizar uma
mistura de Hexano/Tolueno 60/40 (V/V) que proporciona um valor de 1,56 para o ndice
de polaridade. A miportncia das interaes de dipolos e pontes de hidrognio que, por
sua vez determmada pela presena de grupos fimcionais dentro da molcula do solvente,
est d-etamente hgada sua seletividade e portanto constitui-se num fator a ser
considerado quando da escolha dos solventes adequados ao procedimento de extrao.
A utihzao do coeficiente de Snyder leva a etapas experimentais cansativas e
dispendiosas pois em geral, no h dados disponveis para o ndice de Polaridade de
pesticidas. Uma medida mais atual e dispom'vel quanto solubilizao de um
determmado anahto em uma determinada mistiu-a de solventes o chamado logartno do
Coeficiente de Partio n-octanol/gua, ou mais propriamente logP, sendo P definido
como:
onde C o concentrao do soluto na fase n-octanol e Ca a concentrao do soluto na fase
aquosa. Analogamente ao coeficiente de Snyder, escolhe-se logP o mais prximo possvel
do valor de logP para o anahto de interesse, desta forma maximizando a possibihdade de
solubilizao e separao do solvente utilizado relativamente ao anato de mteresse. Para
o Piretride Cipermetrma, logP tem um valor calculado de 2,44. Para a mistura de
solventes utizada, o valor mdio de logP dado por:
0g^ . - / . ^ . o+i 0g^ ^ ,c / on>^ e r 3,90 + 1,25
^ = z = 2 , 5 7 ( 5. 14)
Este valor bastante prximo do valor de logP para a Cipermetrina, o que indica que a
mistura de solventes 1:1 de n-hexano/diclorometano satisfetria no que diz respeito
capacidade de extrao do anato de mteresse.
65
VI. RESULTADOS E DISCUSSO
O estudo dos espectros de massas, no que se refere aos seus padres de
fragmentao, tem grande relevncia em termos de informaes estruturais advindas dos
mesmos. Muitos dos compostos orgnicos possuem potenciais de ionizao que variam de
7 a 15 eV [57] e, conseqentemente, quando estes so atingidos por eltrons de 70 eV
(modo lE), poder-se-ia esperar que estes compostos fossem facilmente ionizados e
realmente o so. No entanto, quando observamos seus espectros de massas,
freqentemente o on molecular esta presente de forma bastante reduzida ou no pode ser
observado de todo. Isto ocorre porque as energias de ligao dos tomos no interior da
molcula so menores que os prprios potenciais de ionizao. A energia fornecida por
eltrons de 70 eV, transferida s molculas fragmentando-as em vrios pedaos. No caso
de pesticidas Piretrides, este fato particularmente verdadeiro e mesmo fazendo-se uso
do mtodo de ionizao qumica, que envolve energias da ordem de l a 7 eV, o pico
molecular obtido, em muitos casos, no passa de um trao. Correlacionando-se os
espectros de fragmeruao e os principais caminhos pelos quais ocorre cvagem molecular
possvel avaar-se qualitativamente quais gaes covalentes possuem menor energia de
gao. Portanto, se ocorrer cvagem de uma determinada gao qunica em condies
de ionizao qumica no espectrmetro de massas, podemos afirmar que tal gao possui
energia menor que 7 eV, que corresponde mxhna energia transfervel s molculas da
amostra por este processo. Com estas informaes possvel prever-se quais stios
sofrero cvagem quando a molcula de interesse sofrer a ao metabca nos orgarsmos
de seres vivos ou quando a mesma for degradada no solo e em aumentos.
VL 1. Espectros de massa da Permetrina
O cromatograma total obtido atravs do GC/MS por ionizao por hnpacto de
eltrons para a Permetrma com 15 mg/L, apresentado na Figura 22. O composto foi
identificado via "software" do sistema, onde o espectro de massa obtido foi comparado
com espectros fomecidos por um banco de dados NIST-1992.
66
inie ns ids it e idUyi
trans
TOT
as
zzm
1 8. 3 3
Z 4 8e
1 9 . 9 9
26BB 2BBB
2 1 . 6 6 2 3 . 3 3
Tempo de re te no (mm)
2 4 . 9 9
Figura 22. Cromatograma do Piretride Permetrina obtido no modo de impacto por
eltrons (lE). Obseva-se a existncia de isomeros denominados respectivamente cis e
trans.
A programao de coluna realizou-se da seguinte forma: Inicialmente variou-se
a temperatura da coluna de 50 a 240 *^C por 8,01 minutos. A mesma foi mantida a 240 "C
por 9,00 minutos; em seguida a temperatura foi elevada de 240 "^C a 260 *^C em 3,22
minutos e mantida a 260 "C por 8,00 minutos. As temperaturas do Injetor, Linha de
Transferncia e Detector foram respectivamente 260, 270 e 170 "^C. Os dois picos
cromatogrficos observados correspondem aos isomeros do tipo cis e trans que eluem pela
coluna cromatogrfica DB5 com tempos de reteno distmtos, respectivamente 21,79 e
22,18 minutos. Com respeito intensidade relativa dos dois isomeros calculada em rea,
observamos uma proporo de aproximadamente 1:2,5. Os picos cromatogrficos
observados na Figura 22 correspondem varredura dos ons formados no mterior da
armadilha inica onde se observam Imhas caractersticas correlacionadas com os
fragmentos inicos do composto molecular em questo (Figura 23).
67
intensidsae (eiatwa
183
snp
BKG
163
91
77
127
115
153
255
f l | ' | i T i " f i i" i-| ' " i-v
BB 180 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 480
Relao massa/carga
223
273 290
311
365
Figura 23. Espectro de fragmentao do Piretride Permetrina no modo lE.
A fragmentao preferencial ocorre na ligao ster, processo no qual ocorre a
formao dos ons com m/z 183 e 207. O on com m/z 207. por sua vez. fragmenta-se de
duas maneiras: 1) D origem aos ons com m/z 163 e 44 (o on com m/z 44, no
observado no espectro pois o limite inferior da varredura de massa utizado esta acima
deste valor). 2) Pode dar origem ao on com m/z 127 atravs do processo de fragmentao
e recombinao no qual ocorre a perda de CljC e recombinao do carbono com trs
hidrognios formando um substituinte CH3. O on com m/z 183 tambm se fragmenta nos
ons com m/z 106 e 77. O on com m/z 106 perde seu tomo de oxignio originando o on
com m/z 91. A presena do on com m/z 165 se deve a existncia a contribuio do
istopo "ci. Todos estes processos so representados na Figura 24.
68
163 +
/
127^
/
CH^
. o
207+
O
44+
, 0
+
Permetrina (390 u.m.a.)
C21H20CI2O3
+
+
O
106^
77^
91
Figura 24. Sugesto para a origem do espectro de fragmentao da Permetrina no
modo lE.
Num segundo processo, obtivemos os picos cromatogrficos no modo de
ionizao qumica com gs Metano (Figura 25) no qual ocorre o processo a que
denominamos de "ionizao suave" pois as energias envolvidas no processo de ionizao e
transferncia protnica so da ordem de 1 a 7 eV.
69
600 708 888 388 1888 1188
10.00 11. 66 13. 33 14.99 16. 66 18. 33
Tempo de reieno (min.)
Figura 25. Picos cromatogrfcos da Permetrina no modo de ionizao qumica, onde
se observa os ismeros cis e trans.
O espectro de fragmentao da Permetrina, no modo de ionizao qumica com
metano, pode ser observado na Figura 26.
70
L iM iS iA C ) Wf lC iG N ^ i L E t M t R G I A N U C L E A R / S P \rtj!
Intensidade relativa
lBa> 183
SMP
BKG
113
145
211
Ifi, I I |'^v^l^'. I ! I i''|V"!'''
195
223
365
254
277
331 389 418
I i.|i4[i,l|..t.|.,.|ii|ii|V|ti.,i,...|lvil|i
180 120 140 160 18B 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 440
Relao msssa/caraa
Figura 26. Espectro de fragmentao de um dos isomeros da Permetrina no modo IQ
utilizando-se Metano como gs reagente.
Observamos que neste processo a fragmentao bsica ocorre tambm na
ligao ster na qual so produzidos os ons com m/z 183 e 211. O on com m/z 211
resultado da formao de um "cluster" entre o on C2H5^ , produzido pelo metano, e o
fragmento 183. O processo de formao do espectro apresentado na Figura 27.
71
+
C2H5
Permetrina (390 u.m.a.)
C21H20CI2O3
211
+
Figura 27. Sugesto para a origem do espectro de fragmentao da Permetrina no
modo IQ.
Ainda no espectro de massa no modo de IQ (Figura 26) observa-se a existncia
do ion com m/z 365. Este ion provavelmente originrio da formao de um dmero
protonado, ou seja, o dmero em questo seria formado por dois fragmentos 183*
subtrados de um VC (Figura 28).
72
Figura 28. Possvel dmero, de m/z 365, formado pela unio de dois fragmentos de
massa 182 e um prton no espectro de massa da Permetrina (modo IQ).
Comparando-se os espectros de lE e IQ referentes s Figuras 23 e 26
respectivamente, observa-se um aumento de intensidade medida em CIR (Corrente Inica
Relativa) para a Ionizao Qumica relativamente ionizao por Impacto de Eltrons. No
on com m/z 183, que corresponde ao pico base (pico mais intenso) em ambos os
espectros, observamos um aumento de intensidade na proporo 10:1. No pico molecular
(390 u.ma.) observamos um aumento de um fetor 26:1 no qual as intensidades foram
respectivamente IIQ = 11321 CIR e IIE = 440 CIR (Tabela 5).
73
Tabela 5. Comparao entre ons mais intensos para dois espectros em modos de
aquisio diferentes (lE e IQ).
Massa Inica Intensidade lie (cir) Intensidade liq (cir) liq / lie
Impacto de Eltrons Ionizao Qumica
(rea) (rea)
i r 32504 348827 10,73
163+ 7319
165+ 6748
91+ 6518
127* 5133
77+ 5061
184* 4943 44576 9,02
128* 2665
153* 2580
168* 2580 6368 2,47
211* 79 162031 2051,02
223* 249 31840 127,87
182* 27595
181* 1431 16274 11,37
543+ 16981
365* 164 14151 86,29
209+ 466 18397 39,48
210* 105 16981 161,72
Na aquisio de dados, foram estudados vrios parmetros experimentais tais
como: programao da coluna cromatogrfica, temperatura de injetor, temperatura do
detector, modo de ionizao entre outros. De maneira geral observa-se grandes variaes
de intensidade em fimo da programao de temperatura cromatogrfica, temperatura de
injetor, temperatura da linha de transferncia, temperatura de detector, presso do gs de
arraste e presso do gs reagente. Fbcando-se estes parmetros, verificamos que o modo de
Ionizao Qumica fornece picos mais intensos relativamente ao modo por Impacto de
Eltrons. No entanto a relao sinal/rudo muito mais favorvel no que diz respeito ao
modo por Impacto de Eltrons em relao Ionizao Qumica como se pode observar
pela Tabela 6.
74
Tabela 6. Dados obtidos para concentraes de 100 ppm de Permetrina dissolvida
em diclorometano.
Modo de
ionizao
Volume I Ismero
cis (cir)
Ismero
trans (cir)
Relao
Sinal/Rudo
Relao
Sinal/Rudo
rea rea Ismero cis Ismero trans
IQ
1 2839731 2845949 34,5
IQ
1 5013144 5604084 44,2 76
IQ
1 2760945 2932386 23,5 8,7
lE 1 213518 265830 646,6 95
lE 0,5 145295 227220 705,3 21,4
lE 0,25 28095 32476 127,3 11,7
As intensidades (reas) da Tabela 6 foram obtidas considerando-se apenas os
trs ons mais caractersticos da Permetrina e fazendo-se uso da Monitorao de ons
Selecionados (MIS) de maneira a diminuir a influncia do substrato da matriz inica
coeluente. Para Ionizao Qumica foram selecionados os ons com m/z 183, 211 e 365
enquanto que na Ionizao por Impacto de Eltrons foram selecionados os ons com m/z
127, 163 e 183.
VI. 2. Permetrina e metablitos
A constatao de que o limiar de clivagem na ligao ster bastante babeo,
inclusive ocorrendo no modo de ionizao qumica, nos leva a supor que a Permetrina,
quando metabolizada, sofi-e clivagem preferencialmente nesta ligao. Isto pode ser
verificado, observando-se os prmcipais produtos metablicos resultante da clivagem
eletroltica da ligao ster seguida por oxidao (Figura 29), processo no qual so
produzidos o cido rans-3-(2, 2 diclorovin)-2,2-dimet-ciclopropanocarboxilato
(DCCA) e o cido 3-fenoxibenzoico (3-PBA). Estes metablitos so parcialmente
conjugados pelo cido glucurnico e finahnente eliminados renahnente [67].
75
Figura 29. Principais metablitos do Piretride Permetrina.
Portanto, o espectro de massas nos d mna clara indicao do stio no qual
ocorrer a reao, mesmo em condies qumicas distintas das quais foi obtido o espectro
de massas. Note ainda que em ambos os espectros de massas, lE e IQ, o pico molecular
no observado. Este fato compatvel com a fcil metabolizao da Permetrina,
processo no qual a molcula no preservada aps a ingesto por mamferos em fimo da
firagilidade da ligao ster. Isto explica a baka toxicidade deste composto para
mamferos relativamente aos insetos, pois os ltimos no possuem um mecanismo
biolgico capaz de degradar rapidamente a Permetrina antes que a mesma atinja o sistema
nervoso e altere a permeabilidade das clulas nervosas no que concerne aos canais de
sdio.
76
VI. 3. Espectros de massa da Cipermetrina
Neste item apresentamos os cromatogramas e espectros de massa do Piretride
Cipermetrina nos modos de ionizao por impacto de eltrons e ionizao qumica com
Metano, bem como os possveis caminhos de fragmentao que levam formao destes
espectros. Indicamos amda a correlao existente entre cUvagem preferencial da Ugao
ster e a fcil metabozao do P-etride Cipermetrina em mamferos.
VI. 3-1. Separao dos componentes da amostra via cromatgrafo a gs
Independentemente da deteco dos fragmentos inicos pelo espectrmetro de
massas de armadilha inica, o processo de eluio de crucial hnportncia na separao
adequada dos componentes da amostra. A temperatura do mjetor constitui-se num
parmetro de grande importncia, sendo imprescindvel que a mesma tenha um valor
prximo ou acima do ponto de ebuho do componente molecular de mteresse. A
otimizao das intensidades inicas nos levou a utilizar a seguinte programao de
temperatura de coluna: Iniciahnente manteve-se a temperatura a 50 C por 2 minutos; em
seguida elevou-se a temperatura de 50 a 240 C por 8,01 nnutos; manteve-se a
temperatura a 240 C por 9 nnutos; elevou-se a temperatura de 240 a 260 C em 3,22
mmutos e manteve-se a temperatura a 260 C por 8 nnutos. As temperaturas de Injetor,
Lmha de Transferncia e Detector foram 260, 270 e 170 C respectivamente. O resultado
da separao cromatogrfica para Cipermetrina concentrada a 253 mg/L pode ser
visualizado na Figura 30 sendo a aquisio de dados reahzada no modo de ionizao por
hnpacto de eltrons (lE). O composto foi identificado via "software" do sistema, onde o
espectro de massa obtido foi comparado com espectros fomecidos por um banco de dados
NIST-1992.
77
Intensidade relativa
B
TOT
D
...
2988
24. 16
3888
25. 88
3188 3288 3388 3488 3588
25. 83 26. 66 27. 49 28. 33 29. 16
Tempo de reteno (min )
Figura 30. Cromatograma do Piretride Cipermetrina no modo lE. Assinala-se a
presena de quatro diasternimos: cis-J (A), cis-2 (B), trans-l (C) e trans-2 (D).
Os diasternimos A, B, C e D (Figura 30) foram eludos em tempos de
reteno respectivamente 26,41; 26,84; 27,12 e 27.29 minutos. Como fase mvel utilizou-
se o gs Hlio com uma presso de entrada na coluna de 12 psi. Os diasternimos
observados correspondem a quatro pares de enantimeros designados respectivamente por
cis-l, cis-2, trans-l e trans-2 [45]. A boa resoluo observada dos picos cromatogrficos
foi atingida atravs da diminuio do intervalo de tempo de varredura que , neste caso, foi
de 0,5 segundos.
VI. 3-2. Impacto de eltrons (lE)
Na Figura 31 observa-se o espectro de massa correspondente a um dos
ismeros do Piretride Cipermetrina no modo lE. Verifica-se que a fragmentao mais
intensa se d na ligao ster, dando origem aos ons com m/z 207 e 208. Por sua vez, o
on, com m/z 207, perde CO2 formando o fragmento com m/z 163. O on, com m/z 207,
78
pode seguir um outro processo de fragmentao perdendo CI2C e incorporando H2
formando o on com m/z 127. O on com m/z 208 pode se fragmentar de dois modos:
perda do grupo ciano e fragmentao da estrutura fenoxi-fenila, levando formao dos
ons com m/z 91 e 77; perda de CN e Oxignio e rearranjo estrutural levando formao
de um anel ciclopentnico (Figura 32).
Intensidade relativa
imy. 163
snp
BKG
91
127
77
115
152
181
289
225 243 288 298 315 353 379 415
| i-| i ' | ' T | TT' ' " i 1 I ' " 1' r'T''r''['' f''' T' V ' P v | -n'i"r' 1 '"i
80 100 120 140 160 180 280 220 240 260 280 300 320 340 360 380 408 420 440
Relao massa/csrga
Figura 31. Espectro de massa correspondente ao Piretride Cipermetrina, obtido no
modo lE.
79
p
O -
C22H, 9CL2N03
- Cl
415 uma.
2 0 7 +
1 6 3 ^
- Cl
- Cl
127+
4 4 +
O
O
- C N
- O
+ H
9 1 ^
IOS-*
- C N
i s r
o .
7 7 +
Figura 32. Sugesto para o espectro de fragmentao da Cipermetrina no modo lE.
80
. Ms S S A C WACi CNAL DE ErJtKGlA N U C L E A H / S P SiPtS
VI. 3-3, Ionizao qumica cora metano
Na Figura 33 podemos observar o espectro de massa do composto
Cipermetrina no modo de ionizao qumica no qual os principais ons reagentes formados
pela ionizao e recombinao do CH4 so os ons CH5 * e C2H5*. Verifica-se neste
processo que a molcula de Cipermetrina se fragmenta nos ons com m/z 207 e 208. Por
sua vez o on com m/z 207 perde um oxignio produzindo o on com m/z 191 e o on com
m/z 193, correspondente contribuio isotpica do "Cl. Uma frao do on com m/z 207
forma um "cluster" com o ction C2H5*, formando o on com m/z 236 (Figura 34). Apesar
da excessiva exotermicidade da reao, ainda podemos observar o on molecular da
Cipermetrina, com m/z 415 [58].
IBBX
Intensidade relativa
288
snp
BKG
191
163
181
Z36
248
282
334
37B388
I ' f' I ''1 ' I ' I ''1 ' I ' I ' 1'
I ' I ' I ' I
BB IBB IZB 140 168 188 288 228 246 26B 280 388 328 340 36R 388 488 428 440
Relao massa/carga
Figura 33. Espectro de massa da Cipermetrina, obtido no modo Ionizao Qumica
(IQ) cora metano como gs reagente.
81
O-
207^
191+
-Cl
- 0 +
C22H19CI2NO3
415 u. m. a.
C2H5 c
208+
236+
Figura 34. Sugesto para o espectro de fragmentao da Cipermetrina no modo IQ
com metano como gs reagente.
82
A fragilidade da ligao ster pode ser constatada analogamente ao que ocorre
com o Piretride Permetrina. Similarmente, a Cipermetrina quando metabolizada [67]
sofre cvagem na gao ster produzmdo os mesmos metabtos da Permetrina (Figura
29) com a abstrao do grupo ciano (CN) analogamente ao que ocorre na fragmentao por
impacto de eltrons (Figura 31), e que produz o on com m/z 181. Neste caso possvel
tambm se prever quais sero os stios de cvagem pela observao do espectro de massas
do composto. A perda do grupo ciano bastante conveiente, no que diz respeito
atividade dos Piretrides que contm este grupo, relativamente a mamferos, visto que a
presena deste grupo mtensifica a atividade do Piretride que o possue, provocando um
prolongamento dos blocos de impulsos nervosos. Inversamente, o efeito sobre insetos, que
se constituem nos alvos destes inseticidas, provoca um aumento do efeito txico destes
pela induo de atividade repetitiva nos neurnios provocada pela presena do grupo ciano
[68].
83
VL 4. A extrao: experimentos de recuperao
No captulo V item 8 foi exposta a metodologia utilizada na extrao e
purificao de Piretrides em leite e produtos correlatos. Este mtodo (cromatografia de
adsoro), baseia-se na adsoro dos solutos sobre o material da colima. Os solutos so
eluidos por uma fase mvel sendo que os componentes menos facilmente adsorvidos so
eludos primeiramente enquanto que os mais prontamente adsorvidos so eludos mais
lentamente, efetuando-se assim a separao [69, 70]. Dois pontos so de especial
importncia na homogeneizao da shca-gel ativada com tuna amostra de lehe: a) O
contedo de gua deve ser otmiizado. Se o contedo de gua for excessivo o mesmo
uhrapassar a capacidade de adsoro da coluna e portanto, parte do pesticida no ser
adsorvida causando perda do analito quando da ehaio com o solvente. Por outro lado se
o contedo aquoso for pequeno, as foras de adsoro superaro parcialmente a capacidade
de extrao da fese mvel (solvente); b) A amostra no deve conter mais do que 500 mg de
gordura, correspondente capacidade de purificao (clean-up) de 15 gramas da sHca gel
com 10% em peso de gua. Cabe aqui saentar que o leite um sistema bastante
complexo no qual a maior parte do contedo de gordura se constitui em trigcrides (98%)
ocorrendo como glbulos emulsificados que possuem dimetros que vo de 3 a 4 pm Os
glbulos so circundados por tuna fina membrana que contm protenas, fosfopdios,
enzhnas, colesterol etc. No entanto, pode haver coalescncia entre estes glbulos
provocando o surgimento de caroos. Estes caroos devem ser rompidos atravs da
homogeneizao em ahnoferiz pois existe a possibidade de parte dos pesticidas pouco
polares ou apolares ficarem retidos na fase pofilica destes agregados globulares [71].
Nos experimentos de recuperao foram utizados os leites tipo B integral
pasteurizado da marca LECO e em p integral marca Great Value comerciazado pela
WaU Mart. O experimento consiste em misturar ao leite e a sca-gel, uma quantidade do
Piretride dissolvido em 2 n de n-hexano de mancha quantitativa. A amostra eluida
com o solvente diclorometano-n-hexano (1:1), ocorrendo neste procedhnento a extrao e
a purificao. A amostra resuhante no fim da coluna (Solventes + Piretride)
concentrada (evaporada) atravs de um roto-vapor e completada a 10 ml com n-hexano.
Estabelece-se uma temperatura de cerca de 71 C no rotovapor sem a utUizao de vcuo.
O fi-asco no qual mtroduzida a amostra deve ghar a cerca de 30 rotaes por nnuto, o
que garante o aquechnento homogneo da amostra e prevhie a ocorrncia de "exploses
ocasionais". Dessa forma, todo o diclorometano evaporado e a amostra concentrada em
8 4
cerca de 8 ml someme em n-hexano. Expernentos reazados mostram que o rendimento,
considerando-se apenas a etapa de evaporao em roto-vapor, de 100%, no sendo
possvel atribuh a esta etapa uma possvel meficincia no rendimento da extrao e
purificao. A amostra completada, com este mesmo solvente, a 10 mL A concentrao
terica ser igual massa micial mtroduzida, dUuda num volume 10 ml de n-hexano. O
eluente utUizado levemente polar em vista da necessidade de se extrair Phetrides que
so compostos, em geral, pouco polares. Isto fica evidenciado para a Cipermetrina
(utilizada neste procedhnento de extrao), pela presena do grupo ciano. A etapa de
purificao essencial, visto que todos os elementos levemente polares e apoiares so co-
extrados ocasionando interferncias quando da anse por GC/MS. A coluna de
purificao reter compostos de alto peso molecular, sobretudo compostos gordurosos e
pofcos. O quido resuhante, quando suprimida a etapa de purificao, fortemente
amarelado pois pode conter lipdios, lactoses e/ou protenas co-extradas. Expernentos
reaUzados com leite em p, suprhnindo-se a etapa de purificao, mostram a presena de
um mtenso pico de colesterol (Figura 35), composto este no especificado pelo fabricante,
entre outros interferentes. Alm disso tambm se observa um aumento substancial da
mtensidade da unha de base. De maneira geral, quanto menos mtensa a colorao
amarelada mais eficiente a purificao.
85
" *e ns idade Re lativa
Cipe rme trina
TOT
Cole s te rol
2088 2488
19. 99
2888
23. 33
3288
26. 66
3680
29. 99
T e moQ de Re te no {minuto?)
Figura 35. Cromatograma de resduo da extrao de cipermetrina em leite em p
realizado sem a etapa da purificao onde se observa a presena de colesterol, entre
outros interferentes . Neste cromatograma, o contedo de Cipermetrina de 130
mg/L.
Fizemos uso, nos experimentos de extrao, de alguns procedimentos e etapas,
nos quais foram acrescentadas pequenas quantidades do analito ("spiked") de maneira a
verificar a eficincia no procedimento de extrao e purificao ("clean-up").
Os experimentos de recuperao foram realizados de acordo com as seguintes
etapas:
a) Mistura do Eluente Diclorometano + N-Hexano. na proporo v/v de 1 para 1. Utiliza-
se na eluio um total de 200 ml do eluente.
b) Calcinao da slica-gel 60 (70 a 230 mesh) a 500 C por 2 horas e armazenamento em
mufla a 130 C.
c) Para o "clean-up", prepara-se uma mistura de 13,5 g de slica-gel com 1,5 g de gua
destUada, ou seja, aproxhnadamente 10% em peso.
86
d) A coluna na qual deve ser realizada a extrao deve conter 15 g de slica-gel desativada,
cerca de 6 a 10 g de leite (no caso de leite em p o mesmo j deve estar diludo em gua e
deve ser aquecido para melhor diluio) e uma certa quantidade do phetride ("spike")
previamente pesada em balana analtica e posteriormente diluda em n-hexano.
e) Homogeneza-se com ahnofariz e pistilo a amostra achna at que se forme imi p hvre
fino.
f) Opcionahnente, pode se utilizar Sulfeto de Sdio Anidro Granulado com o mtuito de se
absorver quantidades excessivas de umidade. Neste caso o Na2S04 deve ser aquecido a
300 C por 18 horas de tal forma que o mesmo seja ativado.
g) A coluna de vidro, que tem aUura de 52 cm e dimetro interno de 2 cm, deve ser
preenchida na segumte ordem: Inicialmente coloca-se uma pequena quantidade de l de
vidro na base da mesma de modo a preverr que a sica-gel no mtercepte os buracos
pelos quais o extrato passar; a seguh coloca-se a sflica referente ao "clean-up";
posteriormente coloca-se o Sulfato de Sdio Anidro granulado; por fim coloca-se a coluna
de extrao. Deve-se garanth que a coluna esteja bem empacotada de tal foram que o
eluente no seja retido em espaos porventura existentes.
h) Aps a eluio, que leva cerca de 2,5 horas, o frasco de phex, no qual foi coletado o
extrato, deve ser levado ao roto-vapor. No roto-vapor, com temperatura de 71 C e giro de
30 rotaes/minuto, o eludo evaporado e concentrado at um volume de cerca de 8 ml.
i) Aps a concentrao o eludo completado com n-hexano at imi volume de 10 ml de
tal forma que se possa quantificar a concentrao do analito.
j) Em seguida insere-se IpL do extrato no GC/MS e coletamos os dados mdividuais.
UtUizamos as condies cromatogrficas especificadas na Tabela 7.
87
Tabela 7. Condies cromatogrfica utilizadas na anlise do Piretride
Inicio Fim Velocidade Tempe
("C) (C) (C/min) (min)
50 50 0,00 2,00
50
240 23,70 8,01
240 240 0,00 9,00
240 260 6,20 3,22
260 260 0,00 8,00
Com tais condies, foram obtidos os picos cromatogrficos mais intensos nmn
tempo razovel de anlise (30,23 minutos). As temperaturas de injetor, linha de
transferncia e detector foram respectivamente 260, 270 e 170 C com o cromatgrafo no
modo "sphtless" e utilizando-se gs Hho como gs de arraste, com uma presso de 12 psi
e fluxo de 30 ml/min na sada do cihndro. No Espectrmetro as razes massa/carga
mmna e mxhna detectvel foram estabelecidas em 65 e 450 u.rrua., respectivamente. A
razo de varredura foi de 500 ms e a voltagem do muhiphcador de eltrons foi posicionada
a 1500 Vohs. Utihzou-se uma voUagem de modulao axial de 4 V e a uma fi-eqncia de
485 kHz que cerca da metade da radio fireqncia de armazenamento que tem o valor de
1,1 MHz . A vohagem de modulao axial tem como fimo fecihtar a ejeo inica e
asshn, melhorar a resoluo. Isto ocorre pois quando o on esta para ser ejetado o mesmo
entra em ressonncia com esta voltagem e se move para longe do centro da armadilha
inica escapando do efeito da excessiva carga espacial no centro da armadilha.
VI. 5. Quantificao
A quantificao foi realizada utilizando-se padres externos unitrios ("single-
pomt"). Estes padres, que consistem no mesmo composto extrado e correspondem a uma
extrao terica de 100% de rendhnento. Exemphficando para a Cipermetrina, o clculo
feho da segumte forma: Parte-se de uma concentrao de, digamos, 550 ppm, que
corresponde a 0,55 mg/ml, contida num balo de 10 ml. Retha-se com uma pipeta uma
aUquota de 2 ml, que corresponde em massa a 1,1 mg de Cipermetrina. Aps a extrao e
concentrao o contedo terico, supondo um rendhnento de 100%, ser de 1,1 de
Cipermetrma por 10 ml de n-hexano. Portanto, obteremos no final uma concentrao de
88
1,1 mg/10 ml ou 0,11 mg/ml do analito em n-hexano. Tanto os padres como as amostras
dos extratos coletados so anasadas de 4 a 5 vezes com o GC/MS e so calculadas, em
todas as anlises, as mdias e desvios padro das medidas. Os cromatogramas totais que
so obtidos no modo de hnpacto por eltrons, carregam contagens de elementos coeluentes
da matriz, tanto na lmha de base como em picos. Para que o efeito da matriz coeluente seja
mmnizado utilizou-se a tcnica cognominada monitorao de ons selecionados (MIS) na
qual, atravs da manipulao de dados "ofif-line", obtido um cromatograma formado pela
contribuio apenas dos trs ons mais mtensos do anahto considerado. O cromatograma
gerado com este recurso, tem a propriedade de ehmmar a maioria dos ons dos compostos
coeluentes. No caso do Phetride Cipermetrina este recurso essencial na aquisio dos
dados de mtensidade dos picos cromatogrficos visto que possvel se isolar o composto
de mteresse, por exemplo o ismero A da Cipermetrina, de um composto mterferente tal
como o Esqualeno (C30H50), no totalmente eliminado na purificao do leite, que elui
com um tempo de reteno de 26,49 mm, praticamente comcidente com o primeiro
ismero do analito (t, - 26,51 min.) (Figura 36). No caso da Cipermetrina pode-se escolher
os ons com m/z 127, 163 e 181, que correspondem aos ons mais intensos no espectro de
massa por hnpacto de eltrons (Figura 37). Tambm o mterferente Esqualeno pode ser
perfeitamente separado do espectro total selecionando-se os ons com m/z 69, 81 e 95
(Figura 38). A parth do Cromatograma no modo AIS, possvel obter-se as reas dos
respectivos picos e correlaciona-las com suas respectivas concentraes.
89
nl' unsiccid' j Pcialivo
3 z e 0
2 & . &&
3 - B e
2 8 . 3 3
3 & a a
2 9 . 9 3
12- ?
1 6 3
R
6 9
8 1 -
r
^ -.^v .
3 2 0 0
2 & - r.f> 2 3 . 9 9
Fig. 36. No cromatograma A observamos a varredura total, correspondente
extrao de Cipermetrina em Leite (110 ppm). No cromatograma B observamos
apenas a contribuio dos ons 163+, 127* e 181*(Figura 37). No cromatograma C
observamos apenas o interferente Esqualeno considerando as contribuies apenas do
ons com m/z 69, 81 e 95* (Figura 38).
90
Intensidade relativa
163
snp
BKG
91
127
77
1 1 5
152
181
289
225 243 288 298 315
| I'I ''Vr'"ri"i' p ' I '"I ' nv')'['! r
353
+-r
379
V , lll-,
415
88 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 328 340 360 380 480 420 4^ 0
Figura 37, Espectro de Massa do Piretride Cipermetrina no modo lE, onde se
observam os ons do espectro de fragmentao por impacto de eltrons cujos ons
mais intensos so os com relao m/z 127, 163, 165 e 181.
9 1
inie ns iaaoe Re iUva
BI
snp
BKG
l l l ' |l l l ' |l l l ' |i i l :|l l |i |MI! |i l l i |l l l l |l i i i |l l |i |l l |i |i i i | l l l l | l l l ! | l l l ! | l l l l | l ni | i l l l | i i l i | i i i ' | i i r | nr | i n I
78 80 98 10B 110 12B 3B 140 150 160 17B 18B 19B 2B0 21B 22B 230 240 25B
Mas s a Moie cuiar Daltons '
95
121
10?
136 149
161 175
191 203
217 231 243
Figura 38. Espectro de Massa do composto Esqualeno no modo lE, onde se observam
os 3 ons mais intensos, com m/z 69, 81 e 95.
Observa-se que este recurso difere do modo AIS (seco III.5), no qual ons
indesejveis so eliminados da armadilha inica durante a aquisio dos dados. A
quantificao no modo MIS feka calculando-se, atravs de recursos computacionais de
mtegrao, as respectivas reas do pico de melhor separao, no caso de existhem
isomeros. Neste procedimento, a linha de base determmada manuahnente e a rea do
pico calculada pelo programa mtegrador (Figura 39).
92
inle ns idade Re ialiva
TOT
29561783
V
V
I I I ' I ' I ' I ' I ' I
I ' 11 I I I I 1 1 I I I ' I ' I I I I I I 1 11 I I I 11 I ' I I I 11 I I I I
3288 3258 3388 335B
26. 66 Z7. B8 27. 58 27. 91
3188
25. 83
3158
26. 24
Figura 39. Exemplo do clculo da rea do ismero A do Piretride Cipermetrina. A
linha de base determinada manualmente e a rea (29561783 CIR) calculada pelo
programa integrador. A unidade CIR definida como a corrente inica relativa.
A recuperao mdia em experimentos de extrao, calculada em porcentagem
pode ser definida como:
7 ^ = ^ . 1 0 0 %
A (6.1)
p
Onde R= Recuperao
A E = Mdia das reas do Pico do Extrato e
Ar, = Mdia das reas do Pico do Padro
Podem existh algumas fontes de erro quando da quantificao dos compostos
Phetrides, quais sejam:
93
a) A alterao do fluxo do gs de arraste altera a eficincia da eluio no
Cromatgrafo Gasoso, levando a modificaes nas intensidades dos picos e nos
tempos de reteno;
b) A injeo manual de difcil reprodutibilidade; existem incertezas na visualizao
de 1 pL, quando medido manualmente com uma seringa graduada;
c) Existem variaes nas condies termodinmicas do sistema GC/MS;
d) A presena de umidade no interior do sistema leva a aumentos da linha de base e
m resoluo dos picos. Os dois hbnos kens nos levam a reahzar os expernentos
de quantificao de extrato e padro num mesmo dia e alternadamente de tal forma
a minimizar estes efehos.
Para que a quantificao externa do tipo "single-poit" seja vlida, necessrio
que o comportamento da resposta do espectrmetro em fimo da concentrao do analito
seja linear. Em vista deste fato, procedemos aquisio de dados para o Phetride
Cipermetrma em vrias concentraes (11, 44, 88, 110, 165, 220, 550 mg/L) do anahto
diludo em n-Hexano HPLC, e verificamos a resposta em rea, ou mais propriamente, a
Corrente Inica Relativa (CIR) (Figura 40).
3 0 0 0 0 0 0 _
^ 2 5 0 0 0 0 0
O
> 2 0 0 0 0 0 0
CC 1 5 0 0 0 0 0

<0 1 0 0 0 0 0 0
(D
S 5 0 0 0 0 0 -
o
o
o -
~~l ' 1 ' 1 ' 1
i O 2 0 3 0 0 4 0 0
Conce ntrao (mg/L)
5 0 0 5 0 0
Figura 40. Comportamento Unear da resposta do Espectrmetro de Massa em funo
da concentrao do Cipermetrina.
94
o ajuste relativamente aos dados obtidos foi realizado atravs do mtodo de
mnimos quadrados pelo qual ajustou-se imia reta. A reta de interpolao nos d um
coeficiente de correlao de Pearson de 0,99822, valor este que demonstra una correlao
linear altamente positiva . A reta de regresso dada pela equao:
C IR = -1070,92 +(4492,3 l)C (6.2)
onde C IR a corrente inica relativa e C a concentrao da amostra em unidades de
massa por volimie.
VI. 6. Evitando contaminao
Para que os dados experimentais sejam confiveis, especialmente no que diz
respeito constatao da presena do pesticida no leite e sua quantificao, a limpeza da
vidraria consiste numa etapa essencial. A vidraria deve ser escrupulosamente lavada,
especialmente quando usada para anlise de traos. Deka-se a vidraria de molho em uma
soluo de detergente no fosfrico. Lava-se bem com uma escova, mpa-se com gua de
tomeha e, logo depois, hmpa-se com gua destilada algumas vezes. Sendo a vidraria no
graduada, aquecemo-la em tuna mufla a 110 durante pelo menos 12 horas. Um
procedhnento mais efetivo a lavagem com sulfiicrmica, que consiste em 1 L de H.iS04,
100 mL de H2O e 200 de K2Cr207. Neste caso a vidraria deve ser submersa em banho num
periodo de 1 a 2 dias de tal forma que todas as hnpurezas sejam removidas.
Outro fator que pode provocar contammao da amostra consiste no uso de
seringas. Procedemos ao estudo do resduo deixado na seringa aps a mjeo de 1 pL de
imi padro de Permetrina (50 mg/L) diludo em n-hexano. A Tabela 11 mostra a variao
da concentrao do anahto aps rinsagens contnuas com n-hexano. Dos dados da
Tabela 8.
95
Tabela 8. Variao da eliminao de Permetrina em funo do nmero de lavagens
Nmero de Lavagens Concentrao restante de Permetrina (mg/L)
50 1.1
50 0,36
50 0,23
50 0,20
100 No detectado
deduz-se que so necessrias pelo menos 300 lavagens para eliminar o analito da
micro seringa em questo.
Para a quantificao do Piretride procedemos construo da curva de
calibrao para a Permetrina utilizando as concentraes 0,51; 5,1; 15,3 e 51 mg/L. A
curva em questo (Figura 41) foi construda utilizando-se dados de reas no cromatograma
os quais foram quantificados monitorando-se 3 ons extrados do cromatograma total, quais
sejam: 127*, 163* e 183*.
10000000^
8000000-


- 2
6000000-
CC
. 2
'S
4000000-
5
c

Q
2000000-
O
0 -


1 ' 1 1 1 1 1 ' 1 ' 1 ' 1
u
Concentrao (mg/L)
50

Figura 41. Comportamento linear da resposta do Espectrmetro de Massa em funo
da Concentrao do Permetrna.
96
o ajuste da reta atravs do mtodo de mnimos quadrados nos d irai
coeficiente de correlao de 0,99991, sendo a reta de regresso calculada pela equao:
CIR = -25500,81 + (l 60103,77)C (6.3)
onde C IR a corrente inica relativa e C a concentrao da amostra em unidades de
massa por volume. O desvio padro tem o valor de 0,4236. Com base nesta equao
linear calculamos as concentraes desconhecidas de Permetrina.
Outro procedhnento essencial e que deve ser reahzado antes de qualquer
aquisio de dados do extrato a ser analisado, consiste na anse via GC/MS do solvente
puro, de forma a garanth que no existam contammaes no mesmo. A extrao em si ,
deve ser previamente realizada com o leite puro, sem o acrscimo do Phetride. O extrato
asshn obtido, deve ser anasado pelo sistema GC/MS de tal foram que se obtenha imi
cromatograma que represente o "branco" do sistema e no qual possam ser observados os
componentes mterferentes.
VI. 7. Recuperao da Cipermetrina em leite em funo do contedo de gua
Nesta etapa realizamos expernentos de recuperao de Cipermetrina em lehe
em p. O leite em p nos d a possibidade de realizar experimentos nos quais possvel
controlar a quantidade de gua na mistura e com isto verificar a variao deste parmetro
em relao eficincia da extrao. Na Tabela 9 stamos os dados de recuperao do
Phetride Cipermetrina (253 mg/L) em fimo do contedo de H2O no lehe.
Tabela 9. Recuperao do Piretride Cipermetrina em funo do contedo de
Contedo de H2O (gramas) Recuperao (%) Desvio Padro (%)
n = 4
4 51,83 18,17
6 50,54 20,60
7 56,58 17,32
8 46,21 24,84
9 40,55 10,63
10 3,75 1,44
97
Observa-se que existe um mximo na curva (Figura 42) que corresponde a um
valor de 7g de gua na mistura de p mais gua. Este valor equivale a 31,18% em peso de
gua em relao ao contedo a soma da slica-gel (15 g) e gua (7 g). Podemos concluir
7g corresponde ao valor timo de adsoro de 15 g de slica-gel (70 a 230 mesh). Aps
este valor, a recuperao cai gradativamente em fimo do contedo de gua e, ao atmgh
10 gramas (o que representa 40% em peso relativamente soma shca-gel + gua) o
rendhnento da extrao cai a 3,75% (Figura 41). Neste valor a colima de shca-gel atmge a
saturao em termos de capacidade de adsoro, sendo este valor exatamente a
porcentagem representativa da capacidade mxima de adsoro atribuda comumente
sca-gel e, desta forma, o Piretride no ser adsorvido com eficincia sendo adsorvido
em parte na gordura do lehe. Isto pode ser verificado no processo de macerao da sca
com o leite izendo-se uso de ahnoferiz e pisto. Verifica-se neste procedhnento a
formao de caroos que no so facilmente transformados em p. Este fato leva a uma
separao pobre da fese aquosa do lehe em relao gordura, a qual necessria para que
a extrao do Phetride seja bem sucedida. Em conseqncia, os Phetrides apoiares ou
pouco polares so adsorvidos preferenciahnente no contedo de protema do lehe.
98
Figura 42. Variao da Recuperao na extrao do Piretride Cipermetrina (253
mg/L) em funo do contedo de gua no leite.
VL 8. Recuperao da Cipermetrina em leite em funo da concentrao
Como se depreende do item anterior, as recuperaes na concentrao de 253
mg/L so insatisfatrias no que diz respeito ao rendimento da extrao (cerca de 50%). No
entanto, a diminuio da concentrao da Cipermetrina leva a recuperaes quantitativas.
Para que isto pudesse ser verificado experimentamente, procedeu-se medida da
recuperao em quatro concentraes, quais sejam: 253, 110, 44 e 22 mg/L. Foram
utilizadas as condies experimentais correspondentes ao melhor desempenho de extrao
relativamente ao contedo de gua (7 gramas), quais sejam:
Coluna de extrao 7g de H2O + 2g de Leite em P +Cipermetrina
+15 g de shca-gel desativada
Coluna de purificao (clean-up) ^ 13,5 g de slica-gel + 1,5 g de H2O
99
Os constituintes da coluna de extrao devem ser homogenizados em almofariz
at que se forme um p fino; este procedimento leva cerca de 20 minutos. A Cipermetrina
diluda em n-hexano deve ser adicionada na hhna etapa antes da introduo da mistura na
coluna e anteriromente a homogeneizao em ahnofariz, de modo a minimizar perdas do
analito. Os constitumtes da coluna de purificao devem ser homogeneizados por cerca de
15 minutos em um Becker utizando-se um basto de vidro. Aps a extrao e a
purificao, que leva cerca de 2,5 horas, cerca de 160 mL do eluente (Diclorometano + N-
Hexano) passa atravs da coluna e 40 mL do eluente retido na mesma. Entretanto, como
a maior parte do Piretride extrada no incio da eluio, este fato no constitui nenhum
inconveniente, mas sim, mostra que a cintica da extrao bastante rpida. Os 160 mL
do eluente so coletados num balo de vidro que , por sua vez, acoplado dhetamente a
um roto-vapor cuja temperatura de banho-maria (71 C) mantida hgeiramente achna do
ponto de ebuho do n-hexano (68,7^C) a presses atmosfricas com uma rotao de roto-
vapor de 30 rotaes por mmuto. Dessa forma todo o diclorometano, que possui um ponto
de ebuUo de 39,8 "C, evaporado. O procedimento interrompido quando o volume
restante no balo atmge cerca de 8 mL. O volume introduzido num balo volumtrico de
10 mL e completado a 10 mL com n-hexano de forma a quantificar-se a concentrao da
Cipermetrina presente na amostra.
Para a quantificao da recuperao foram obtidas, para cada extrao, quatro
varreduras cromatogrfica fazendo-se uso do GC/MS no modo lE-MIS selecionando-se os
ons com m/z 127, 163 e 181. Da mesma forma, quatro medidas foram obtidas para
padres correspondentes a recuperaes tericas de 100%. Este procedimento foi utilizado
pois foi estabelecida a hnearidade da resposta do espectrmetro de massas. As respectivas
reas foram calculadas com o auxho do programa mtegrador e com estes dados foram
calculadas as mdias de recuperao (Tabela 10).
100
Tabela 10. Condies experimentais e recuperaes para 14 extraes de
Tipo de Leite Concetrao de Presena Presena Recuperao Desvio
Cipermetrina de de Leite mdia (%) Padro
(mg/L) gua (g) em P (g) (n = 4)
(%)
Leite B-3 253 8,9
50,29 13,67
Lehe B-10 253 8,9 52,57 24,24
Lehe P 21* 253 4 6
51,83 18,17
Lehe P 23 253 6 2
50,54 20,60
Lehe P 24 253 7 2 56,58 17,32
Lehe P 27* 253 7 2 44,32 10,33
Lehe P 25 253 8 2 46,21 24,84
Lehe P 26 253 9 2 40,55 10,63
Lehe P 29 110 7 2 60,03 9,72
Lehe P31 110 7 2 66,14 5,67
Leite P 28 44 1 2 72,62 i 9,71
Lehe P 30 44 7 2 90,79 30,51
Leite P 32 22 7 2 92,91 21,14
Lehe P 33 22 7 2 94,70 31,48
Foi utilizado o absorvedor Na^04 apenas nas anwstras 21 e 27.
Considerando as mesmas condies de extrao para o Lehe em P Integral,
obtivemos os dados de recuperao mdia listados na Tabela 11.
101
Tabela 11. Dados mdios de recuperao na extrao de Cipermetrina em leite em
p em funo da concentrao do analito.
Concentrao (|ig/nil) Recuperao Desvio Padro (%) Coeficiente de
Mdia (%) Variao (%)
(n = 4)
22 93,80 1,25 1,33
44 81,71 12,86 15,74
110 63,08 4,33 6,86
253 50,93 5,13 10,07
A representao grfica da recuperao versus concentrao nos leva a ajustar
o grfico resultante (Figura 43) a uma fimo exponencial da forma:
r-c
(6.4)
onde R = Recuperao Mdia e C = Concentrao da Cipermetrina so variveis
e = 49,02 0,97 /l = 59,75 1,26 e = 74,79346 4,83797 so constantes.
102
Figura 43. Varao da recuperao na extrao do piretride Cipermetrna em
funo da concentrao.
A interpolao observada na Figura 43 fornece um valor do coeficiente de
correlao de 0,99961, o que mostra que os dados experimentais esto perfeitamente
ajustados a uma equao do tipo exponencial. A queda exponencial pode ser explicada
pelo alargamento do pico cromatogrfico na medida em que se aumenta a concentrao do
Piretride. Este alargamento provoca uma m separao cromatogrfica do Piretride
relativamente a outros compostos coeluentes e , em fijno da sobreposio do analito
relativamente a estes compostos da matriz coeluente presente no leite, parte do analito fica
retida na coluna.
103
VI. 9. Limites de deteco e quantificao do Piretride Cipermetrina: Comparao
dos modos de aquisio AIS, MIS e AMIS.
Os modos de Armazenamento de ons Selecionados (AIS) e Monitorao de
ons Selecionados (MIS), embora possam ser acilmente confundidos, dizem respeito a
procedimentos completamente distintos no sistema do espectrmetro de massa de
armadilha inica. No modo AIS, ons escolhidos previameiite so isolados no mterior da
armadilha inica atravs do campo quadrupolar tridnensional. Isto reahzado ejetando-
se todos os outros ons no pertencentes ao conjimto de ons escolhidos para
armazenamento atravs da apcao de uma forma de onda no senoidal contendo lun
espectro de freqncias [51]. Neste mtodo, as espcies ircas so ejetadas
shnukaneamente. Formas de onda so criadas por mtodos numricos. Estas formas de
onda dighais so ento convertidas em sinais analgicos atravs de um conversor dighal /
analgico de alta velocidade (DAC). Na readade uma forma de onda de muhifreqncia
hnposta de tal forma a se excluh as freqncias correspondentes aos ons a serem
isolados. A amptude de tenso auxiar (Vaux), utilizada para a ejeo dos ons, variada
de forma a se maxhnizar a corrente de ons das espcies no ejetadas e ejetar o restante dos
ons. Entretanto, a ejeo de uma ica massa isolada s possvel para valores pequenos
(Figura 44) pois existe uma dependncia no near entre o valor m/z da espcie isolada e a
janela de massa reahnente isolada.
40
Janela Mnima de Massa (u.m.a.)
35
Janela Mnima de Massa (u.m.a.)
30
25
20
15
10
5
n .
Massa Isolada
u ^
I 50 100 ISO 200 250 300 350 4C m 450
Figura 44. Massa especificada para isolamento em fiino da janela mnima de massa
realmente isolada.
m
Observa-se pelo grfico da Figura 44 que quanto maior a massa especificada
para isolamento, maior o intervalo de massa que de feto isolado. Por exemplo, se
especificarmos o on 100* para armazenamento, na realidade sero isolados os ons que
variam de 98* a 102* ou se especificarmos o on 224*, sero isolados os ons que variam
entre 220* e 228*. Por outro lado, o modo NDS se constitui num recurso computacional
atravs do qual escolhem-se at trs ons ou um mtervalo de ons escolhidos de um
cromatograma j obtido anteriormente. Portanto esta tcnica diz respeho apenas a imi
tratamento de dados reahzado a posteriori e no a um isolamento fsico de ons na
armadilha inica.
Com o objetivo de comparar as duas tcnicas e, mclusive utiliza-las
shnultaneamente, e verificarem-se os hmhes de deteco e quantificao para o composto
Cipermetrina, procedemos obteno de dados, onde foram obtidos os espectros de
Varredura Inica Total (VIT), MIS, com AIS e AIS e AMIS (modos AIS e MIS
combmados) onde, no modo AIS, foram especificados para armazenamento os ons com
m/z 91, 127, 152, 163 e 181, que se constituem nos ons mais mtensos do espectro de
massa da Cipermetrina, e no modo MIS foram selecionados os ons com m/z 127, 163 e
181. Para este fim, foram computados os valores smal / rudo para os picos A e B do
cromatograma referentes aos dois primehos isomeros da Cipermetrma utUizando padres
(93%) nas concentraes 4,4; 2,2; 1,1; 0,22; 0,10; 0,066 e 0,033 mg/L. Estes dados esto
stados na Tabela 12.
105
Tabela 12. Relaes sinal/rudo para dois isomeros da Cipermetrina nos modos de
aquisio VIT, MIS, AIS e AMIS. ^
Modo Concent.(M.g/nil) Sinal/Rudo- A Sinal/Ruido-B
VIT 4,4 3,3 No detectado
MIS 4,4 10,6 7,6
AIS 4,4 13,5 18,0
AMIS 4,4 19,2 20,3
VIT 2,2 2,7 No detectado
MIS 2,2 7,1
6,2
AIS 2,2 13,3 18,3
AMIS 2,2 21,6 14,3
VIT
1,1
3,7 No detectado
MIS
u
15,4 9,1
AIS
1,1
8,2 13,5
AMIS
1,1
8,6 11,3
VIT 0,220 No detectado No detectado
MIS 0,220 3,2 3,8
AIS 0,220 7,1
10,9
AMIS 0,220 7,7 15,9
VIT 0,100 No detectado No detectado
MIS 0,100
AIS 0,100 6,1
5,9
AMIS 0,100 6,6 7,2
VIT 0,066 No detectado No detectado
MIS 0,066
AIS 0,066 7,6 7,9
AMIS 0,066 7,0 7,2
VIT 0,033 No detectado No detectado
MIS 0,033
t
AIS 0,033
AMIS 0,033 3,7 2,6
106
Observa-se nas figuras 45 e 46 e pelos dados da Tabela 12 que a utilizao dos
recursos MIS e AIS provoca um aumento substancial das relaes sinal/rudo
relativamente ao modo VIT.
1, 5 2 , 0 2 , 5 3, 0 3 , 5
Conce ntrao (ug/ml)
Figura 45. Variao da relao sinal/rudo em funo da concentrao da
Cipermetrna nos vrios modos de aquisio de dados no espectrmetro de massa
para o ismero A.
107
o
o
O
22 -
20 -
18 -
16 -
14 -
o
'CO
o
10 -
8 -
6 -
4 -
2 -
Ismero B
MIS
AIS
AMIS
1 2 3
Conce ntrao (ug/ml)
4
Figura 46. Variao da relao sinal/rudo em funo da concentrao da
Cipermetrina nos vrios modos de aquisio de dados do espectrmetro de massa
para o Ismero B.
Para o ismero A, abaixo de 0.1 pg/mL, s possvel detectar-se o analito
fazendo-se uso do modo AIS. Isto mostra que a ejeo fsica dos ons na armadilha inica
leva a m'veis de deteco menores do que a utilizao apenas do recurso computacional
MIS. Isto explicado pelo fato de que a ejeo de grande parte da matriz inica dhnmui
consideravelmente efehos de carga espacial no interior da armadilha inica pois a interao
destas com os ons do anato leva a perdas das molculas de interesse que em parte so
arremessadas para fora da ao do potencial aprisionador e em dheo s paredes
hiperblicas da armadiUia inica, desta forma, atmgem-se Ihnites de deteco menores do
que fazendo uso apenas da tcnica MIS. Como no modo AIS a especificao de um rco
on leva ao isolamento de uma janela de ons, ocorre que possvel remediar este efeito
utilizando shnultaneamente os modos AIS e MIS como pode ser visto na figura 47 onde os
ons com m/z 126, 151, 161, 162,179 e 180 so eliminados da varredura. Tambm os ons
m/z 91 e 152 so euminados pois s possvel, com o software disponvel, emmarem-se
3 ons shnultaneamente, a menos que se escolha um intervalo de ons e portanto este fato
se consthui numa limhao da tcnica.
108
s n p
B i c e
AIS
R R S 0 1B 0
13 B 140 1 5 I f i n
y vf s < f } lnicfi (II m a )
AMTS
1 V B 1B B
Figura 47. Espectros de Massa no modo AIS e AMIS do Piretride Cipermetrna
obtido por ionizao com impacto de eltrons.
Para o ismero A do Piretride Cipermetrina, o limite de determinao de
0,033 pg/mL s atingido com a utilizao do modo AMIS. Com base nestes dados o
limite de quantificao pode ser estimado como 0,330 pg/mL. No entanto, se a amostra for
concentrada a um dcimo do volume inicial do solvente, o limite de quantificao cai a
0,033 pg/mL. Verifica-se que a partir de 4,4 pg/mL no possvel detectar-se o ismero B
utilizando-se o modo total. Mais uma vez, o limite de determinao s atingido com a
utilizao do modo AMIS. Em termos gerais as relaes sinal/rudo so amplamente
superiores quando da utilizao do modo AIS ou do modo de AMIS relativamente aos
espectros VIT e MIS.
109
VI. 10. Determinao de Cipermetrina em leite bovino
Nesta etapa procuramos determinar Piretrides em leite bovino aps aplicao
via drmica do inseticida ALATOX que utilizado no combate a beme (larvas da
Dermaobia hominis), moscas-do-chifre, carrapatos e piolhos. O inseticida em questo
um concentrado emulsonvel, contendo 450 g/L de Diclorvos (Dimetil-2,2-diclorovinil
fosfato) e 50 g/L de Cipermetrina (Alfa-ciano 3-fenoxibenzila -2,2-dimetil-3-(2,2
diclorovinil) ciclopropano carboxilato). Foi utilizado, em conformidade s instrues de
uso, 10 mL do referido inseticida diludo em 4 litros de gua, perfazendo uma
concentrao inicial de 125 mg/L para a Cipermetrina. Os 4 Ihros do inseticida contendo
0,5 g de Cipermetrina, foram pulverizados sobre o corpo do animal, sobretudo nas partes
mais intensamente infestadas tais como barbelas, axilas, ventre, virilhas, entre-membros e
insero de cauda. Aps a coleta das amostras de leite, procedemos s extraes e
purificaes, com os resduos resultantes sendo concentrados a 10 mL de n-hexano. Na
obteno de cada cromatograma, 1 pL de cada extrato foi injetado no GC/MS e obtiveram-
se 4 cromatogramas para cada extrato, referentes s extraes de amostras de leite
coletadas em 15 horas, 24 horas, 11 dias e 17 dias aps a aplicao do ALATOX. Os
principais compostos obtidos na extrao e provenientes do ALATOX esto listados nas
Tabelas 13, 14 e 15, referentes aos perodos de extrao 15 h, 24 h e 11 dias
respectivamente. O experimento descrito acima foi realizado numa fazenda de criao de
gado leiteiro, localizada no municpio de Piratininga-SP.
10
Tabela 13. Principais compostos estrados do leite coletado aps 15 horas da
aplicao e originados do inseticida ALATOX.
Tempo Composto
de reteno
(mm.)
Massa Frmula
(u.ma) Molecular
Intensidade Modo de
inica mdia aquisio
(rea) n = 4
5,84 Diclorvos 220
7,53 Butilato de 220
Hidroxitolueno
24,89 Cipermetrina 416
C4H7CI2PO4 4023 Total
CsHz O 123210 Total
C22H19CI2NO3 12999 AIS
Tabela 14. Principais compostos extrados do leite coletado aps 24 horas da
aplicao e originados do inseticida ALATOX.
Tempo Congosto
de reteno
(mm.)
Massa Frmula
(u.ma) Molecular
Intensidade Modo de
inica mdia aquisio
(rea) n = 4
5,84 Diclorvos 220
7,53 Butilato de 220
Hidroxholueno
24,89 Cipermetrina 416
C4H7CI2PO4
C,5H240
4205
227354
C22H,9Cl2N03 13177
Total
Total
AIS
Tabela 15. Principais compostos extrados do leite coletado aps 11 dias da aplicao
e originados do inseticida ALATOX.
Tempo Composto
de reteno
(mm.)
Massa Frmula
(u.ma) Molecular
Intensidade
inica mdia
(rea) n = 4
Modo de
aquisio
5,84 Diclorvos 220 C4H7CI2PO4
7,53 Butilato de 220 C15H24O 20003
Hidroxholueno
24,89 Cipermetrina 416 C22H,9Cl2N03 6149
Total
Total
AIS
111
Nestas tabelas observa-se a presena dos compostos Diclorvos e do Butilato de
Hidroxitolueno originalmente contidos na composio do inseticida ALATOX. O
Diclorvos se constitui num inseticida organofosforado presente na formulao do
ALATOX e co-extrado com o Piretride alvo (Cipermetrina). O Butilato de
Hidroxitolueno, no especificado pelo febricante, se constitui num composto qumico de
propriedades conservantes, tambm presente no inseticida e co-extraido com a
Cipermetrina. Aps o 11 dia, o inseticida Diclorvos no detectado pelo GC/MS e o
composto Butilato de Hidroxitolueno tem a sua intensidade diminuda de um fetor onze
aproximadamente, em relao amostra colhida depois de 24 horas.
As intensidades inicas obtidas para a Cipermetrma foram adquiridas no modo
AIS no qual foram selecionados os ons com m/z 127, 152 e 181 (Cipermetrma). A
intensidade inica obtida corresponde mdia de 4 picos cromatogrficos. Foi escolhido o
ismero B da Cipermetrina para a correspondente quantificao em funo da mexistncia
de picos mterferentes eluindo com o mesmo tempo de reteno, contrariamente ao que
acontece com o ismero A (Figura 48). O on com m/z 163, em que pese ser o on mais
intenso da Cipermetrma, no foi escolhido pois existe um coeluente que produz o mesmo
on e portanto poderia haver uma sobreposio de intensidades levando a uma
quantificao errnea do analho. O modo AIS foi utUizado pois o cromatograma total,
mesmo com a utilizao do recurso MIS produz picos com relaes sinal/rudo menores
que 10 e portanto os mesmos esto fora do Ihnhe de quantificao. Os compostos
Diclorvos e Butilato de Hidroxitolueno foram concentrados a 10 mL e suas respectivas
reas foram calculadas com base nesta concentrao , enquanto a quantificao da
Cipermetrina s foi possvel graas a uma concentrao do analho a 1 mL o que nos
forneceu relaes sinal/rudo compatveis com os nveis de quantificao desejados. O
ismero B foi escolhido para a quantificao pois o ismero A possui co-eluentes que
mterferem excessivamente na anlise na medida que as concentraes do analho a ser
determinado so extremamente babeas. Alm disso o pico B constitui-se no ismero mais
intenso do cromatograma.
112
Inte ns idade Re lativa
SBy.
B
TOT
2868
23. 32
3eee 3200
24. 99 26. 65
3486
28. 32
Figura 48 . Cromatograma do Piretride Cipermetrina originado da extrao de leite
bovino coletado aps 15 horas da aplicao veterinria do inseticida ALATOX. O
cromatograma foi obtido no modo AIS, onde foram selecionados os ons com m/z 127,
152 e181.
As concentraes de Cipermetrina no lehe foram obtidas com a utihzao de
uma curva de cahbrao externa construda com os padres do referido composto em
concentraes que variaram entre 0,4 e 4,4 mg/L. Cada concentrao mdividual foi obtida
em triplicata sendo, os dados obtidos, ajustados atravs de uma reta com a utilizao do
mtodo dos mnhnos quadrados (Figura 49).
113
50000 -
4 0000 -
-1 1 , 1 r
2 3
Concentrao (mg/L)
Figura 49. Curva de calibrao do Piretride Cipermetrina no modo AIS.
O coeficiente de correlao obtido de 0,948 e a reta de regresso tem a
seguinte equao:
RIC = 6 5 2 , 1 2 + ( 7 4 7 5 , 3 4 ) C (6.5)
onde RIC a corrente inica relativa e C concentrao da Cipermetrina.
Tomando-se como base a equao de regresso 5.5, podemos calcular as
concentraes de Cipermetrina para as amostras coletadas aps 15, 24 horas e 11 dias da
aplicao do ALATOX (Tabela 16).
Tabela 16. Concentraes obtidas aps extrao de Cipermetrina em leite. As
amostras foram concentradas a 1 ml no solvente.
Tempo de Coleta Mdia das .reas
(Contagens)
Concentrao Desvio Padro
mdia (mg/L) n=4 (mg/L)
15 horas 12999 1,65 0,08
24 horas 13178 1,68 0.36
11 dias 6149 0,74 0,09
17 dias No detectado
114
No entanto, a Tabela 16 fornece as concentraes a 1 mL do solvente. Dessa
forma os dados acima devem ser dividos por 10 para que se mantenha a relao 10
gramas de leite 10 mL de n-hexano, utUizada para fins de quantificao. Portanto a
concentrao real do anaUto no lehe ser dada pelos valores mostrados na Tabela 17.
Tabela 17. Concentrao de Cipermetrna por kg de leite para quatro tempos
distintos de coleta: 15 horas, 24 horas, 11 dias e 17 das.
Tempo de Coleta Concentrao Desvio Padro Coeficiente
(mg/kg) (mg/kg)
n = 4
de
Variao (%)
15 horas 0,165 0,008 4,85
24 horas 0,168 0,036 21,43
11 dias 0,074 0,009 12,16
17 dias No detectado
Conhecendo-se a concentrao inicial apUcada (125 mg/L) e medmdo-se as
reas correspondentes Cipermetrina nos cromatogramas obtidos possvel avaar-se a
porcentagem do Piretride secretada no leite aps a aplicao drmica. A quantidade
secretada relativamente quantidade aplicada foi de 0,0066%, 0,0013% e 0,0004:5%
respectivamente para 15h e 24h e 11 das. Dados fomecidos pela WHO do conta de que o
piretride Cipermetrmei, quando aplicado drmicamente na forma de spray ou banho, no
combate a parasitas, origmou um valor mximo de residuos de 0,01 mg/L [72].
Obviamente estes dados contrariam este estudo e o realizado no CEATOX (UNESP-
Botucatu) pelos pesquisadores VassUieff e Bissacot que constataram a presena de 0,36;
0,15; 0,14; 0,11 e 0,06 mg/kg de Cipermetrina em lehe bovmo respectivamente nos dias 1,
7, 14, 21, 28 aps a aplicao de 0,35 gramas do mseticida por animal. Em parte, esta
incongruencia pode ser justificada em funo da relativa antigidade dos dados fomecidos
pela WHO cujas referencias datam dos anos 70 e inicio dos anos 80, e pela escassez de
estudos recentes sobre o tema. Por outro lado, aps os anos 80, houve uma grande
evoluo no que concerne aos mtodos de extrao e purificao, bem como das tcnicas
115
analticas utilizadas, sobretudo quanto sensibilidade, fato este que permitiu nveis de
quantificao menores.
cali2-5b.ms RIC
rriJSsia.rri RIC
V
FutI
=rev
Figura 50. Sobreposio dos cromatogramas do Piretride Cipermetrina originados
do extrato coletado em 24 horas aps a aplicao (1,68 mg/L) e do padro
concentrado a 2,5 mg/L no modo AIS. O cromatograma amarelo corresponde ao
padro e o verde corresponde ao extrato.
Como se observa na Figura 50, onde esto sobrepostos um cromatograma do
padro de Cipermetrina 2,5 mg/L e um cromatograma do extrato obtido de uma amostra
coletada aps 24 horas (1,68 mg/L), existe uma clara concordncia no que diz respeito aos
tempos de reteno e resoluo dos ismeros do inseticida Cipermetrina. Os espectros
foram obtidos no modo AIS no qual foram selecionados em ambos os ons com m/z 127,
152 e 183 como representativos do espectro de massa no modo de ionizao por impacto
de eltrons do analito estudado. Portanto, em funo dos dados acima expostos, a
identidade do composto analisado conclusiva, corroborando desta forma os estudos
previamente realizados [26, 27].
VI. 11. Limites mximos de resduos
No Brasil os limites de tolerncia, limites mximos de resduos (LMRs), so
competncia do Ministrio da Sade. No entanto, em funo da inexistncia de legislao
pertinente a resduos de Piretrides em leite bovino, utilizam-se normas do Codex
116
Alimentarius, FDA (Food and Drugs Administration-EUA) ou Diretivas da Unio
Europia.
De maneira geral, os nveis de resduos de pesticidas permissveis em
alimentos variam de 0,05 a 2 mg/Kg. Alguns destes limites mximos de resduos so
mostrados na Tabela 18 , sendo os dados fomecidos pela Codex Alimentarius Conmiission
(EUA).
Tabela 18. Resduos mximos permissveis em alguns alimentos, segundo dados do
Codex Alimentarius.
Colheita Lhnite mxt de resduos (mg/kg)
Ctricos 2
Alfece 2
Gros oleosos (exceto amendohn) 0,2
Ervilhas 0,05
Turbrculos e Razes 0,05
Tomate 0,5
Gros de Trigo 0,2
Mais especificamente, os resduos de Cipermetrma podem tambm ser
encontrados em alimentos de origem animal (lehe, produtos lcteos, ovos e carnes) atravs
de aplicaes tpicas em criaes, visando o controle de ectoparashas ou atravs da
presena de resduos em raes. Nos EUA, os resduos reais em carne e lehe so
esperados serem presumivelmente menores que os nveis de tolerncia de 0,05 mg/Kg por
litro produzido (Tabela 19) [72].
Tabela 19. Resduos mximos permissveis para Cipermetrna em alimentos de
origem animaL
Mercadoria Lhnite Mxhno Residual (mg/kg)
Carne 0,2
Ovos 0,05
Lehe 0,01
117
Considerando o LMR de 0,01 mg/kg para o leite, verificamos que os dados
obtidos so cerca de 16 vezes superiores a este limite nas amostras coletadas em 15 e 24
horas aps a aplicao do inseticida e cerca de 7 vezes superior para a amostra coletada
aps 11 dias da aplicao.
Os dados apresentados na Tabela 19 mostram que a ingesto do lehe coletado
at o 11 dia da coleta, aps a aplicao do mseticida, levar a contammao de quaisquer
mdivduos que venham a consumir este alhnento. Apesar da assinalada baixa
concentrao, o consumo constante do leite, sobretudo no meio mral, no qual o leite no
sofre qualquer interveno mdustrial, pode levar a anomalias no sistema nervoso ou outras
aheraes fisiolgicas que no foram suficientemente compreendidas ou estudadas.
Cabe assinalar a presena do organofosforado Diclorvos (Tabelas 14 e 15). As
exposies crnicas a babeos nveis de Diclorvos e outros composotos organofosforados
tm sido reportadas em alguns estudos como associadas insnia, irrhabilidade, dores de
cabea e tonturas. O Diclorvos afeta primarimiente o sistema nervoso, atravs da mibio
da colinesterase, o bloqueador da enzhna requerida para o fimcionamento apropriado das
clulas nervosas [73]. Notemos que a no deteco do Diclorvos a partir do 11 dia indica
sua rpida metabolizao no organismo do anhnal submetido ao tratamento vetermrio.
118
Vn. CONCLUSES
Com base no estudo terico e experimental realizado e nos resuhados obtidos
neste trabalho podemos concluir que:
1 - As duas tcnicas de ionizao utilizadas (Ionizao Qumica e Impacto por Eltrons)
so viveis na anlise de Piretrides via GC/MS. Em ambas tcnicas de ionizao
observa-se preferencialmente a clivagem da Ugao ster. Na ionizao qunnica existe
uma possft)iUdade maior de se observar o pico molecular. No entanto, no caso dos
inseticidas Permetrina e Cipermetrma houve grande fragmentao do pico molecular, fato
este que denota a grande diferena de protoafinidade entre os prmcipais ons reagentes
(CH5* = 131,6 kcal/mol e C2Hs^ = 162,6 kcal/mol) e as molculas de interesse na qual a
dhrena de entalpia se dissipa como energia de fragmentao. Cabe saentar que na
medida em que exista a disponibilidade de uso de gases reagentes com protoafinidades
maiores que a do gs metano (amnia, isobutano, etc), a diferena de protoafmidade entre
a molcula de interesse e o gs reagente dhnmui, aumentando-se a probabidade de se
observar o on molecular em funo da dhnmuio da fragmentao molecular.
2 - A temperatura de injeo da amostra que deve ser maior que o ponto de ebulio da
molcula de interesse de tal forma a se garanth que toda a amostra seja vaporizada no
momento da introduo da mesma no GC/MS. No entanto, a temperatura inicial da coluna
cromatogrfica deve estar pelo menos 20''C abaixo da temperatura de ebulio do solvente
de tal forma que ocorra uma separao eficiente entre o solvente e o soluto (amostra).
3 - Constatou-se que o solvente mais adequado para diluio e anse de Piretrides o n-
hexano, o qual proporciona uma relao sinal/rudo mais favorvel que outros solventes.
4 - A cvagem preferencial da ligao ster, observada nos espectros de massa, est
diretamente relacionada com a fcil metabolizao dos Piretrides em mamferos em
funo da baixa energia requerida para que a mesma ocorra, t Jito no mterior do lon-Trap,
119
com os ons na fase gasosa, quanto no processo de metabolizao destes composotos
inseticidas em mamferos, nos quais ocorre clivagem eletroltica da ligao ster seguida
por oxidao.
5 - O modo AIS uma ferramenta necessria na deteco e quantificao de Piretrides via
GC/MS, pois aumenta as relaes sinal/rudo, acarretando em um aumento de sensibilidade
e diminuio do limite de determinao e quantificao do mtodo.
6 - O mtodo de extrao com disperso em matriz slida seguido de purificao via
coluna cromatogrfica preenchida com slica-gel, bastante satisfatrio no que diz respeho
recuperao de Piretrides acrescentados ao lehe bovino. Foram atmgidos nveis de
recuperao maiores que 90%.
7 - Existe uma dependncia entre o contedo de gua na amostra e o nvel de recuperao
da extrao. Na coluna de extrao, para o leite em p, o nvel de recuperao mximo
ocorre com um contedo aquoso de 31,18% em peso de H2 O em relao ao contedo a
soma da slica-gel (15 g) e gua (7 g).
8 - A Recuperao do Piretride Cipermetrina cai exponencialmente em fijno do
aumento da concentrao de Cipermetrina no leite.
9 - 0 limhe mnimo de deteco (L.M.D.) para o analho s atingido com a utilizao dos
recursos AIS e MIS. Para a Cipermetrina foi obtido um L.M.D. de 33 pg/mL numa
amostra concentrada a 10 mL de n-hexano.
10 - As concentraes do Piretride Cipermetrina, obtidas em leite bovino, aps a
aplicao do inseticida ALATOX, nas amostra coletadas 15 horas, 24 horas, 11 dias depois
da aplicao, foram respectivamente 0,165; 0,168 e 0,074 mg/kg. No 17 dia aps a
aplicao o piretride Cipermetrina no foi detectado.
120
Cnv^ sS f i G NACiOr-iAl t EPJhHGIA Ti UCLEAf / SP U*S
11 - Alm do inseticida Cipermetrina, foram detectados o organofosforado Diclorvos e o
composto conservante Butilato de Hidroxitolueno. Estes compostos tambm provm do
inseticida ALATOX.
12 - Os dados obtidos mostram que a concentrao do Piretride Cipermetrina cerca de
16 vezes superior ao limite mximo residual (LMR = 0,01 mg/kg) nas amostras coletadas
em 15 e 24 horas aps a aplicao do inseticida e cerca de 7 vezes superior para a amostra
coletada aps 11 dias da aplicao.
13 - Com as amostras concentradas a 1 mL do solvente, pode-se atingh nveis de deteco
de 0,0033 mg/kg e portanto possvel detectarem-se concentraes da ordem 0,01 mg/kg,
que se consthui no LMR para o lehe bovhio.
121
APNDICE
Clculo das solues da equao de Mathieu para p =1.
Nosso objetivo neste apndice calcular solues para a equao de Mathieu
para um caso particular. Esta equao diferencial lineir de segunda ordem, com
coeficientes peridicos, tem grande aplicabilidade em problemas fsicos variados tais como
o pndulo invertido, oscilaes foradas num circuho LC, movhnento de membranas
vibrantes etc.
Quando os coeficientes de uma equao diferencial tm um nico valor, so
contnuos e peridicos, digamos com perodo TI, a soluo no necessariamente possui
tambm perodo n. De fato pode no admhir (e em geral no admhe) solues peridicas
[74].
Ento a equao
dy/dx + (a + qcos2x) y = O (A. 1)
no tem soluo peridica a menos que a = O
Por exemplo, verifiquemos a soluo da equao ababco:
d^/dx- + ny = O (A.2)
se
y = e'"'' (A.3)
obtemos
dy/dx = in e'"" (A.4)
e amda
dVdx' = i W" = -n'e'^ (A.5)
substituindo (A.3) e (A.5) em (A.2) temos:
122
-n^e"^+ n^^= O (A.6)
Observa-se que temos associada a solues peridicas, fimes exponenciais
complexas cujo perodo no ser n a menos que n seja inteiro.
Consideremos agora a equao de Mathieu,
dVd^^ + (a-2q.cos2^)u = 0 (A.7)
lembrando que no caso da armadilha inica ^ = Qt/2
onde Q = freqncia angular da RF aplicada (O = Inf).
O teorema de Floquet [75] afirma que a soluo geral da equao (A.6) tem a
forma:
u = A.u() + B.u(-^) (A.8)
onde
u(4) = e*^.H/(^) (A.9)
ou seja
u(^) = A. v|/(4).e*^ + B. M/(-^).e-^^ (A. 10)
onde u(4) a soma de solues mpares e pares. A e B so constantes arbhrrias e n/()
uma funo peridica de , .
O coeficiente p pode ser expresso como:
p = a + ip (A.11)
se a for diferente de zero, os termos ou e"**^ na equao (A. 10) tendero ao infmho
conforme ^ aumenta e portanto as solues sero instveis.
Portanto as solues da equao devem ser necessariamente imaginrias.
Explicitamente temos que,
{%) = ^M^) (A.12)
123
u(^) = e*'P.vi/() (A.13)
Pelo teorema de Fourier, uma funo peridica, tal como pode ser
expressa como uma soma infinita de termos exponenciais da forma:
+00
u(^) = e"*'P.X Cne'^ '""'*'^ (A-14)
00
onde n na somatria varia de -oo a +oo .
Utilizando a identidade
e* = cose + senG (A. 15)
teremos
u(^) = D.f; CnC0s(2n + P) ^ + E. f ; CnSen(2n+P) (A.16)
oo GO
onde D e E = E.i so constantes arbitrrias
Considerando a velocidade inicial do on nula [76], a equao (A.16) se reduz
ao termo em coseno. Alm disso, consideremos que a somatria em n vare de O a oo, e
que p e D sejam iguais a unidade, ou seja:
u ( ) = CnCos(2n+l)^ (A.17)
0
Vamos substituir esta srie na equao (A.7) e igualar os termos de mesmo
coeficiente com o intuito de obter relaes de recorrncia que conectem os tennos c,, a e
q. Inicialmente para n =1 temos:
c,(^) = cocos4 + cicos3^ (A.18)
tomando a segunda derivada dos c (^) para n =1 temos:
+00
Cn = - X c(2n - 1 f cos(2n +1 )^ (A. 19)
124
p/ n =1 temos
c I = - (cocos4 + Ci9cos3^) (A.20)
substituindo (A.18) e (A.20) na equao de Mathieu,
ul^ + (a - 2q.cos2^)u = O temos
- cocos^ - Ci9cos3^ + (a - 2q.cos2^)( Cqcos^ + CiCos3^) = O (A.21)
Co co&l - ci9cos3^ + Co a cos + Cia cos3^ - cq 2q cos^cos2^ -
c, 2q cos2^cos34 = O (A.22)
mas podemos fezer as seguintes substhuies trigonomtricas:
2 cos3^cos2^ = cos4 + cos5^ (A.23)
2 cos2^cos4 = cos4 + cos3^ (A.24)
substhumdo (A.23) e (A.24) em (A.20) obtemos:
cocos^ - ci9cos3^ + Coa cos + Cia cos3^ - Co q (cos^ + cos3^) -
c, q (cos^ + cos5^) = O (A.25)
agrupando os coeficientes Co e Ci temos:
Co(-cos4 + acos4 - qcos^ -qcos3^ )+Ci(-9cos3^ + acos3^ -qcos^ - qcos54)=0
(A.26)
desprezando os termos em coseno de ordens superiores temos:
Co cos(a - 1 - q) + c, cos^ (-q) = O (A.27)
(a-l-q)co- qci = O (A.28)
que se constitui na primeira relao de recorrncia.
Em seguida calculamos a relao de recorrnch para n = 2 onde:
C2() = Cocos^ + cicos3^ + C2COS54 (A.29)
125
c 2( ) = - (cocos + Ci9cos34 + C2 25cos5^) (A.30)
substituindo (A.29) e (A.30) na equao de Mathieu (A.7) temos:
-Cocos4-Ci9cos3-C225cos5^ + (a-2qcos2^)(cocos4 + cicos3^ + c^cosS^) = O
(A.31)
-Cocos,-Ci9cos3-C2 25cos54 + acocos^ + aciC0s3^ + ac2COs5^ - 2qcos2^cocos^ -
2qcos24ci C os3^ - 2qcos2c2COs5 = O (A.32)
fazendo as substimies trigonomtricas.
2 cos34cos2^ = cos^ + cos5^
2 cos2^cos4 = cos4 + cos3
2 cos2cos5^ = cos3 + cos7^
e agrupando os tennos de mesmo coeficiente temos:
(A.33)
(A.34)
(A.35)
cocos^ (l-a-q) - qcicos3^ + CiCOs3(-9+a) -qcicos^ - qciCOsS^ + C2COs5^(-25 +a)
qC2Cos3 - qc2Cos7^ = O (A.36)
da primeira relao de recorrncia (eq. A.28) temos que (a -1 - q)co - qci = O e
eihninando os termos em coseno de ordens superiores temos:
-qcocos3^ + CiCos3^(a - 9) -qc2(cos3^ ) = O
cos3^[-qco + c,(a - 9) - C2q] = O
(A.37)
(A.38)
portanto o termo entre colchetes deve ser nulo,
-qco + Ci ( a- 9) - C2q = 0 (A.39)
re-arranjando os termos temos:
-qco + (a - 9)ci - qc2 = O (A.40)
126
a relao acima se constitui na segunda relao de recorrncia.
Generalizando temos:
{(2n+ l ) 2- a}c + q(c^,+c .,) = 0 (A.41)
onden= 1, 2, 3, . . .
ou seja
{a- ( 2n+l ) 2}c - q( c^, +c^, ) = 0 (A.42)
As eqs. (A.28) e (A.42) devem ser consistentes e a condio de sua consistncia :
Aia,q) =
a-\-q
-q
0 0
-q
a-9
-q
0
0
-q
a-25 -q ... = 0
0

0

-q
m
a-49 ...

(A.43)
Portanto para que possam existir solues peridicas, as constantes a e q
devem ter um dos valores determinados pela equao determinantal:
{a, q)=0
(A.44)
Os valores de a e q so conhecidos como valores caractersticos; se a e q forem
conhecidos, os coeficientes Cn podem ser obtidos pelas relaes de recorrncia e so
determinados unicamente, a no ser por um fator constante. Em geral as relaes de
recorrncia so normalizadas [55] com a condio C o = 1. Assumindo esta condio e
zendo uso das relaes de recorrncia (A.28) e (A.42), podemos calcular expchamente
127
os coeficientes Cn o que nos leva soluo da equao de Mathieu para o caso considerado,
ou seja:
+00
u ( ^ ) =X c cos(2n+l)4 =
o
Cq c o s ^ + c , c o s 3 ^ + C2 c o s 5 ^ + C3 c o s 7 < J + . . . = (A.46)
{a-l-q) - {a-9\a-\-q) . {<l + ^-^)s^c V n \ i \ - r e .
cos ^ + -^^ cos 34 + - ^ cos 5^ + 5 ^ {(25 - a]{a - 9) + 1 jcos 7^ + ...
9 9
(A. 47)
A expresso achna nos d a posio de um on dentro de um campo
quadrupolar a cada mstante, considerando as condies referidas anteriormente para P =1.
Como vimos anteriormente, as constantes a e q no caso esp)ecfico da armadilha
inica, so determinadas por parmetros fsicos conhecidos como observamos abako onde
u representa um dos ebtos coordenados:
SeU 4eV
Observe que a condio p = 1, ou seja, um valor mteiro de p, nos leva, segundo
Dawson [77] ao caso das solues que nada mais so do que as fi-onteiras entre as regies
instveis e estveis do diagrama de estabilidade e so referidas como curvas caractersticas
ou valores caractersticos, ou seja:
p = ip onde p um nmero inteiro.
No caso em que p = ip onde p um nmero no inteho, teremos solues
peridicas e estveis para a equao de Mathieu.
128
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