Espectroscopia Raman Espectroscopia Raman

Thiago Jos Thiago Jos Fatobene Fatobene

Especialista de Produto Especialista de Produto
PerkinElmer do Brasil PerkinElmer do Brasil
Introdu Introdu o Te o Te rica rica
Hist Hist rico rico
Primeiro Primeiro postulado postulado por por Smekal Smekal
em em 1923 1923
Dr. Dr. Chandrasekhara Chandrasekhara Venkata Venkata
Raman Raman
Primeiro Primeiro a a observar observar o o
espalhamento espalhamento Raman Raman em em
1928 ( 1928 (junto junto com K.S, com K.S,
Krishnan) Krishnan)
Raman Raman ganhou ganhou o o pr pr mio mio
Nobel de Nobel de F F sica sica em em 1930 1930
Raman Raman
Quando uma molcula irradiada, a energia pode ser transmitida, absorvida, ou
espalhada. A espectroscopia Raman baseada na deteco da luz espalhada.
No espalhamento Rayleigh (elstico), a interao da molcula com o fton no
provoca mudanas nos nveis de energia vibracional e/ou rotacional da molcula.
Assim as freqncias da luz incidente e espalhada so as mesmas.
O efeito Raman pode ser explicado pela coliso no-elstica entre o fton incidente e
a molcula. Isto muda os nveis das energias vibracional e/ou rotacional da molcula
por um incremento ( E). Pela lei de conservao de energia, isto significa que as
energias dos ftons incidente e espalhado sero diferentes, ou seja
incidente


espalhada
. Se a molcula absorve energia, E positiva,
incidente
>
espalhada
., estas so
as linhas Stokes do espectro (regra de Stokes de fluorescncia,
incidente
>
fluorescncia
).
Se a molcula perde energia, E negativa,
incidente
<
espalhada
, linhas anti Stokes do
espectro.
O O que que os os eletrons eletrons fazem fazem
O O que que espalhamento espalhamento Raman? Raman?
Raman Raman
As linhas Stokes e anti-Stokes correspondem a vibrao
molecular da amostra em estudo
Raman Raman
O espectro de Raman plotado em cm
-1
, mas esta
unidade no um valor absoluto como no IR e as medidas
no so feitas no MID-IR.
O espectro Raman o comprimento de onda da radiao
espalhada em relao ao da radiao de excitao (laser).
As leituras so feitas na regio do visvel e do NIR.
OBS: laser = 785nm
1600cm 1600cm
- -1 1
898nm = 11139cm 898nm = 11139cm
- -1 1
1000cm 1000cm
- -1 1
852nm = 11739cm 852nm = 11739cm
- -1 1
0cm 0cm
- -1 1
785nm = 12739cm 785nm = 12739cm
- -1 1
Espectro Raman Espectro Raman Radia Radia o Detectada o Detectada
Linhas Linhas Stokes e Anti Stokes e Anti- -Stokes Stokes Espectro Espectro
Raman do Raman do Cyclohexano Cyclohexano
Perda Perda de de
energia energia
Ganho Ganho de de
energia energia
Sem Sem
mudan mudan a a
de de
energia energia
Energy Energy
Loss Loss
Energy Energy
Gain Gain
No No
Energy Energy
Change Change
Espectro Espectro Raman Raman
Linhas Linhas Stokes e Anti Stokes e Anti- -Stokes Stokes Espectro Espectro
Raman do Raman do Cyclohexano Cyclohexano
O O espalhamento espalhamento da da luz luz esta esta ao ao nosso nosso redor redor .. ..
O sol O sol a fonte de todos os comprimentos de onda da luz vis a fonte de todos os comprimentos de onda da luz vis vel. vel.
A luz azul A luz azul espalhada pelas mol espalhada pelas mol culas da atmosfera mais que a luz vermelha, culas da atmosfera mais que a luz vermelha,
porque essas mol porque essas mol culas so menores que os comprimentos de onda da luz. culas so menores que os comprimentos de onda da luz.
Isso explique o porque o c Isso explique o porque o c u u azul e que no por do sol vemos uma luz vermelha. azul e que no por do sol vemos uma luz vermelha.
H H part part culas grandes de culas grandes de gua nas nuvens que promovem um espalhamento gua nas nuvens que promovem um espalhamento
igual em todos os comprimentos de onda e com isso dando um efeit igual em todos os comprimentos de onda e com isso dando um efeito branco o branco
a nuvem. a nuvem.
Efeito Efeito dos dos comprimentos comprimentos de de onda onda
Intensidade Intensidade de de espalhamanto espalhamanto = Kl(Pol) = Kl(Pol)
2 2
v v
4 4
K K uma uma constante constante
l l o o caminho caminho ptico ptico
Pol Pol a a polarisabilidade polarisabilidade da da mol mol cula cula e e nica nica para para cada cada mol mol cula cula. .
V V a a freq freq ncia ncia da da radia radia o o incidente incidente. .
Isso Isso significa significa que que o laser o laser azul azul d d um um sinal sinal mais mais intenso intenso que que o o vermelho vermelho
ou ou NIR. NIR.
No No entanto entanto, a , a fluorescencia fluorescencia compete com o compete com o espalhamento espalhamento e se e se estiver estiver
presente presente ser ser mais mais forte forte que que o o espalhamento espalhamento e e ir ir mascarar mascarar o o
espectro espectro Raman. Raman.
Esse Esse o o motivo motivo do do porque porque alguns alguns laborat laborat rios rios usam usam NIR FT NIR FT- -Raman. Raman.
Fluorescncia Fluorescncia
Red laser
Green laser
785nm laser
Espectro Espectro de de uma uma tampa tampa de de caneta caneta
532 nm 532 nm
785 nm 785 nm
1064 nm 1064 nm
Lasers Lasers usados usados pela pela PE PE
O laser de 785nm O laser de 785nm aceito como o melhor, porque: aceito como o melhor, porque:
a) bom espalhamento Raman a) bom espalhamento Raman
b) alta sensibilidade com o detector CCD b) alta sensibilidade com o detector CCD
c) redu c) redu o ou sem efeito da fluorescncia o ou sem efeito da fluorescncia
Quando a fluorescncia Quando a fluorescncia um problema usa um problema usa- -se o NIR laser se o NIR laser
(1064nm). (1064nm).
a) pouco ou nenhum efeito de fluorescncia a) pouco ou nenhum efeito de fluorescncia
b) por b) por m, fraco espalhamento e detectores menos sens m, fraco espalhamento e detectores menos sens veis. veis.
Outras Outras t t cnicas cnicas: RR, SERS and SERRS : RR, SERS and SERRS
RR: RR: Resonance Resonance Raman Raman
Ocorre quando a energia de um f Ocorre quando a energia de um f ton do laser coincide com o de ton do laser coincide com o de
uma transi uma transi o eletrnica de um grupo crom o eletrnica de um grupo crom foro do sistema em foro do sistema em
estudo. estudo.
SERS: Surface Enhanced Raman Spectroscopy
O espectro Raman de uma molcula que absorvida sobre uma
superfcie de ouro ou prata pode ter o sinal significamente
aumentado.
SERRS: Surface Enhanced Resonance Raman Spectroscopy
Similar ao SERS, mas usa um laser com energia que coincide
com o grupo cromforo da molcula em estudo.
SERS / SERRS podem aumentar o sinal em at bilhes de vezes.
1000 1200 1400 1600 1800
Raman Shift cm
-1
1000 1200 1400 1600 1800
Raman Shift cm
-1
80 fmol 0.8 fmol
Rhodamine labelled oligonucleotide (SERS)
Resonance Raman Resonance Raman
Espectrmetros Dispersivos Espectrmetros Dispersivos
Czerny Czerny- -Turner Turner
Sistema requer cerca de 10s para 1s de aquisio do espectro.
Diferentes partes do espectro so adquridas em diferentes tempos.
Grande problema para anlise de sistemas dinmicos.
Exemplo Exemplo
Espectro Espectro Raman Raman adquirido adquirido em em 7 7
etapas etapas. .
Echelle Echelle
Aquisio do espectro instantaneamente.
Todos os comprimentos de ondas analisados simultaneamente sem
movimentao de nenhuma parte ptica..
3500 cm
-1
1500
1000
500
95 cm
-1
500
1000
Grating #1
CCD Detector
Grating #2
Espectrmetros Dispersivos Espectrmetros Dispersivos
Exemplo Exemplo
3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500
NH
O S O
O
OH
N
N
N
N
S H
FT FT- -Raman Raman
Ocasionalmente a amostra pode apresentar fluorescncia. Ocasionalmente a amostra pode apresentar fluorescncia.
Neste caso, para um espectro limpo usa Neste caso, para um espectro limpo usa- -se um laser se um laser Nd Nd:YAG (NIR :YAG (NIR
1064nm). 1064nm).
Para sistemas YAG usa Para sistemas YAG usa- -se detectores se detectores InGaAs InGaAs ou ou Germanio Germanio. Estes . Estes
possuem uma sensibilidade de at possuem uma sensibilidade de at 20x menor que o de s 20x menor que o de s lica. lica.
Para compensar a baixa sensibilidade usa Para compensar a baixa sensibilidade usa- -se lasers de 1 se lasers de 1 - - 2w de potncia. 2w de potncia.
Por Por m, deve m, deve- -se tomar cuidado para no queimar a amostra. se tomar cuidado para no queimar a amostra.
Benef Benef cios cios
A espectroscopia Raman A espectroscopia Raman uma t uma t cnica complementar ao Infravermelho. cnica complementar ao Infravermelho.
Assim como o infravermelho, o espectro Raman pode ser usado par Assim como o infravermelho, o espectro Raman pode ser usado para a
identifica identifica o ( o (finger finger print print). ).
Fornece informa Fornece informa es sobre vibra es sobre vibra es homo es homo - - nucleares sim nucleares sim tricas como tricas como
os estiramentos os estiramentos - -C=C C=C- - e e S=S S=S- - que so fracas ou inativas no infravermelho. que so fracas ou inativas no infravermelho.
Os an Os an is arom is arom ticos possuem bandas fortes. ticos possuem bandas fortes.
As amostras precisam de pouca ou nenhuma prepara As amostras precisam de pouca ou nenhuma prepara o. o.
uma t uma t cnica no destrutiva. An cnica no destrutiva. An lise lise in in situ situ . .
O vidro O vidro um bom material para ser usado como janelas para medidas por um bom material para ser usado como janelas para medidas por
Raman. Raman.
No requer acess No requer acess rios especiais rios especiais
No h No h interferncia de umidade. interferncia de umidade.
Raman Raman
Espectro Espectro de IR e Raman do de IR e Raman do cido cido Benz Benz ico ico
IR IR
Raman Raman
Aromatic Ring Stretch
Carbonyl Ring Stretch in !R
Aromatic Stretch in Raman
Compara Compara o o Raman, Mid IR, e Near IR Raman, Mid IR, e Near IR
Low wavenumber no problem
Libraries +000 - 16000 B!G!!
ATR..not bad
Raman Raman
Raman Raman
Raman Raman
Raman Raman
Touch Button
Compartimento
para vrios tipos de
amostras
Raman Raman
Raman Raman
Raman Raman
Raman Raman
Raman Raman
RamanMicro RamanMicro 200 200
785nm laser 785nm laser
95 95 3200 cm 3200 cm
- -1 1
range range
10cm 10cm
- -1 1
FWHM resolution, 3cm FWHM resolution, 3cm
- -1 1
pixel resolution. pixel resolution.
10 micron spot 10 micron spot
CT CT
RamanMicro 200 RamanMicro 200
Raman Optical Head
Spectrometer
Raman / Visible Image
selector
100W Halogen
Lamp
Fiber Optic
Connectors
RamanMicro RamanMicro 200 200
Sample Holder Sample Holder
RamanMicro 200 Laser Spot Size RamanMicro 200 Laser Spot Size
200 m
100 m
20 m
10 m
Spot Size
600 m 5x
250 m 20x
40 m 50x
20 m 100x
Depth of Field Objective
5X 5X
10X 10X
40X 40X
100X 100X
50 Micron
Pinhole
Laser Spot
Compara Compara o o de de Resolu Resolu o o
10cm 10cm
- -1 1
4cm 4cm
- -1 1
Compara Compara o o de de resolu resolu o o
10cm 10cm
- -1 1
4cm 4cm
- -1 1
RamanMicro RamanMicro 400 400
785nm laser 785nm laser
95 95 3200 cm 3200 cm
- -1 1
range range
4cm 4cm
- -1 1
FWHM resolution, 1cm FWHM resolution, 1cm
- -1 1
pixel resolution. pixel resolution.
10 micron spot 10 micron spot
ECHELLE ECHELLE
Raman Microscope Raman Microscope
Laser
Spectrograph
High
Performance
TE cooled CCD
Detector
Optical Head,
detailed block
diagram below
Objective Lens
Dentro Dentro do do RamanMicro RamanMicro 200 & 400 200 & 400
Objective Lens
RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe
Laser
Spectrograph
Laser
Switch
Optical Head,
detailed block
diagram below
Objective Lens
Optical Head,
detailed block
diagram below
Objective Lens
RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe RamanMicro 200F e 400F com Fibre Probe
Laser
Spectrograph
Laser
Switch
Objective Lens
Laser
Optical Head
Motorized
XYZ Stage
Video
Head
Spectrograph
Laser
Switch
Optical Probe Head,
detailed block diagram below
Objective Lens
Objective Lens
Dentro Dentro do do RamanStation RamanStation 400F 400F
Aplica Aplica o o
Auto subtrao do
espectro do frasco
An An lise lise num num frasco frasco ambar ambar de 4L de 4L
Spectrum of
Bottle
Raw Material
(Liquid)
Spectrum with
glass removed
Micro Raman Micro Raman
Mapeamento
Mapeamento de um comprimido de 18mm x 8mm.
Raman Raman
Imagem Imagem Qu Qu mica mica
3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500
As cores representam a composio
qumica
Acetoaminophen
Caffeine
Aspirin
Imagem Imagem Qu Qu mica mica e e Mapeamento Mapeamento
RamanStation RamanStation 400 400 ou ou MicroRaman MicroRaman
Opes de amostragem:
- 1. Single point,
- 2. Super-Macro (large spot),
- 3. Grid sampling,
- 4. Line scan,
- 5. Depth profile.
1 2 5 4 3
Passo Passo da da XYZ stage < 1micron XYZ stage < 1micron
Tintas Tintas de de uma uma brochura brochura comercial comercial
Identificao de narcticos e substncias de abuso
Raman Raman
Raman Raman
Amphetamine
Methamphetamine
Cocaine
Heroin
Raman Raman
Raman Raman
Anlise de leos e gorduras
Polimorfismo Polimorfismo
Polimorfismo so diferentes formas cristalinas
para uma mesma substncia.
O espectro Raman espcies de polimorfismo
so similares, mas diferenas pode ser
observadas.
Form A
Form B
Raman Raman
3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500
C+
(Plastic Explosive)
3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500
Gasoline
(Nolotov Cocktail)
3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500
Sodium Nitrate
(Fertilizer bomb)
3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500
TNT
(Dynamite)
Raman de Tecido Canceroso Raman de Tecido Canceroso
3000 2500 2000 1500 1000 500 3000 2500 2000 1500 1000 500
Diferen Diferen as as
Canceroso Canceroso
Tecido Tecido saud saud vel vel
Alimentos Alimentos
Sem interferncia da Sem interferncia da gua gua
Raman de Pol Raman de Pol meros meros
PVC
PEAD
Nylon 11
PET
Hidrogenao do Fenil Acetileno
A hidrogenao do Fenil Acetileno para a formao do Estireno
e do Etil Benzeno um reao que envolve altas presses e
altas temperaturas.
A tcnica tradicional de anlise por CG. O que necessrio
uma amostragem de tempos em tempos provocando uma
alterao da presso e uma alterao do equilbrio da reao.
Com Raman isso no ocorre, uma vez que a reao
monitorada atravs de uma probe.
Raman Raman
O reator consiste de:
Uma roda de ao inoxidvel impregnada de catalisador
Uma soluo de reao: Heptano (solvente) e Fenil Acetileno
Alta presso de H
2
Raman Raman
A cada 10 minutos foi coletado um espectro Raman
Mais de 50 espectros foram coletados durante todo o experimento
Atravs dos espectros visvel o consumo de Fenil Acetileno atravs
da queda da tripla ligao em 2115 cm
-1
Raman Raman
CC
C=C
Hidrogenao
Raman Raman
Starting Material CC
Desired Product C=C
Reaction Overshoot C-C
Correla Correla o o entre entre Raman e CG Raman e CG
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Time / mins
0
20
40
60
80
100
%

C
o
m
p
o
s
i
t
i
o
n
Solido - CG Sem preenchimento - Raman
Raman Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
A rigidez e a resistncia ao
impacto de um polmero esta
diretamente associada ao seu grau
de cristalinidade.
Um melhor entendimento do
processo de cristalizao do
polmero pode resultar em frascos
de menor espessura e de mesma
resistncia.
Menos material mais economia e
menor o impacto sobre o meio
ambiente.
Raman Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
Amostras cristalinas apresentam um pico em 1096 cm
-1
.
Material amorfo apresenta apenas um ombro em 1119 cm
-1
.
Raman Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
Amostras cristalinas apresentam um pico estreito em
1730 cm
-1
.
Raman Raman
Estudo da cristalinidade de polmeros
O grfico abaixo mostra a variao da cristalinidade
(1096/1119) em funo do comprimento do frasco.
O material essencialmente amorfo no topo e na base do
frasco e apresenta uma certa cristalinidade no resto do frasco.
PerkinElmer do Brasil Ltda. PerkinElmer do Brasil Ltda.
Obrigado pela aten Obrigado pela aten o! o!
Thiago Fatobene
Especialista de Aplicao
thiago.fatobene@perkinelmer.com
PerkinElmer PerkinElmer do Brasil do Brasil
Perdizes Perdizes - - So Paulo So Paulo