DIAGNOSTICO IN VIVO E IN VITRO DE LA

TUBERCULOSIS BOVINA


Med. Vet. Sergio Garbaccio
Instituto de Patobiologa - INTA Castelar.
Las Cabaas y Los Reseros (1712). Buenos Aires.
E-mail: sgarbaccio@cicv.inta.gov.ar


La tuberculosis bovina (TBB), cuyo agente etiolgico es Mycobacterium bovis, es una
enfermedad infecciosa de carcter zoontico, que ocasiona serios problemas en la salud pblica
(1).
En el sector ganadero es protagonista de graves problemas de salud y disminucin en la
capacidad de produccin de carne y leche, ocasionando prdidas econmicas (2), como as
tambin, convirtindose en una barrera comercial para la exportacin de productos y
subproductos de origen animal.

DIAGNOSTICO IN VIVO
El diagnstico de la TBB es motivo de numerosos trabajos cientfico-tcnicos (3), cuyo fin es
mejorar el entendimiento en esta temtica y la bsqueda de nuevas metodologas para un
efectivo control de la enfermedad. Desde 1999 y a travs de la resolucin 115/99, qued
establecido en nuestro pas el Programa Nacional de Control y Erradicacin de la Tuberculosis
y Brucelosis Bovina. En el caso de la tuberculosis, la prueba de referencia tanto internacional
(utilizada por aquellos pases considerados libres de TBB:EE.UU, Cuba y Canad) como
nacional, es la intradermo-reaccin o prueba tuberculnica-PPD (Derivado Proteico Purificado).
Este prueba, es una de las ms viejas y ampliamente utilizada en el mundo como test screening
primario para el diagnostico in vivo, dependiendo enteramente de una apropiada respuesta
inmune celular por parte del hospedador durante las diversas fases que abarcan la patognesis de
la enfermedad.
Esta tcnica es propuesta para el saneamiento, control y erradicacin; utilizando esta herramienta
para la identificacin y posterior eliminacin de aquellos bovinos reactores, acompaado esto de
medidas correctivas en el manejo de los rodeos problemas.
Diversos trabajos le otorgan a la prueba tuberculnica distintos valores de efectividad, oscilando
los mismos en un rango de 70% al 90% y del 75% al 99.8%, para la sensibilidad y especificidad
respectivamente (4, 5). La posibilidad de un resultado negativo en un animal infectado est
asociado a diversas causas, como por ejemplo: el tiempo de exposicin al agente infeccioso,
desensibilizacin pos-tuberculinizacin (6), estados avanzados de la enfermedad asociados a un
cuadro generalizado e inmunosupresin (animal anrgico), inmunosupresin ocasionada por
mala nutricin o durante el posparto y otras causas propias de la aplicacin de la tcnica tales
como: incorrecta dosificacin o lectura, baja potencia del reactivo, etc. De todas maneras,
contina siendo la herramienta diagnstica por excelencia a la hora de intentar mejorar el estado
sanitario de nuestros rodeos.



DIAGNOSTICO IN VITRO
Teniendo en cuenta que la respuesta inmune a la enfermedad es fundamentalmente celular,
fueron desarrolladas diversas metodologas capaces de evidenciar la respuesta de los linfocitos T
ante la presencia de antgenos micobacterianos. Tal es el caso del ensayo de Linfoproliferacin
en el cual se analiza la proliferacin de linfocitos, previamente sensibilizados, ante una nueva
exposicin a antigenos del bacilo.
Por otra parte, a comienzos de la dcada del noventa, fue descripto el ensayo de Interfern
Gamma ( IFN) (7). Esta es una tcnica diagnstica indirecta donde se cuantifica la liberacin de
una citoquina (-IFN) por parte de los linfocitos naturalmente sensibilizados, tras ser estimulados
in vitro con un antgeno especfico (PPD bovina, PPD aviar o diversas fracciones antignicas.
Este ensayo fue presentado como una tcnica prometedora, segn un trabajo australiano donde se
report un valor de sensibilidad del 93.6% y 96.2% de especificidad, sugiriendo los autores su
utilizacin como alternativa diagnstica (8). Sin embargo, la principal desventaja radica en los
problemas logsticos para su realizacin, fundamentalmente el tiempo que debe transcurrir entre
la obtencin a campo de la muestras de sangre y su estimulacin en el laboratorio
(preferentemente no mayor a las 8 horas) (9). Adems, debe considerarse el costo del ensayo por
tratarse de un kit comercial importado.

La respuesta inmune mediada por anticuerpos ha sido estudiada durante varias dcadas con el
objetivo de establecer un sistema, confiable, econmico, y de fcil automatizacin; capaz de
complementar a la prueba tuberculnica. La produccin de anticuerpos en las diferentes etapas
de la enfermedad es muy variable, pudindose presentar de forma ms acentuada en etapas
avanzadas de la enfermedad, asociada a una respuesta inmune celular insuficiente o negativa
debido al estado de anergia del animal. Motivos como el mencionado impulsaron el desarrollado
del test serolgico ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), para el diagnstico de esta
enfermedad. Esta tcnica ha sido llevada a cabo y evaluada en diferentes trabajos (10,11,12),
presentando resultados variables (sensibilidad y especificidad). Por tal motivo, esta alternativa
diagnstica es considerada insuficiente para ser incorporada an como herramienta vlida en un
programa de saneamiento.

La Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR) es un mtodo molecular que permite la
identificacin de un organismo mediante el anlisis de su cido nucleico. Realizado a partir de
muestras clnicas, este ensayo fue capaz de diagnosticar TBB con resultados comparables al
cultivo, pero en un tiempo significativamente menor: 2-3 das para PCR versus 4-8 semanas
necesarias para el desarrollo en cultivos (13,14,15). Asimismo, no es una limitante la viabilidad
del microorganismo en la muestra a analizar, ya que se basa en la identificacin y amplificacin
de un segmento especfico del ADN micobacteriano. Esta tcnica no reemplazara a la
metodologa confirmatoria tradicional, sino que colaborara en la resolucin de situaciones que
se presenten dudosas durante los ensayos convencionales.

Por otro lado, el cultivo de Mycobacterium bovis en medios de cultivos especficos (Stonebrink,
Middlebrook, entre otros), es usado rutinariamente como apoyo clave para el diagnstico, al
procesar diferentes muestras clnicas (tejidos, leche, hisopado nasal) (16). De esta manera, es
considerada como tcnica estndar de oro para arribar al diagnostico definitivo. Sin embargo, el
cultivo, en estas condiciones, es un proceso extremadamente lento, llegando a insumir entre 2 y 3
meses. Es tambin conocido, que la sensibilidad del cultivo no es del 100%, pudiendo ocurrir
resultados falsos negativos. Dicha variable est sujeta a la calidad de la muestra remitida, ya que
en caso de la presencia de microorganismos no viables (por falencias de transporte o en la
remisin y acondicionamiento del material), dar un resultado negativo.

El estudio histopatolgico es una posibilidad rpida, que permite aportar datos valiosos al
diagnstico. Presenta como desventaja, de que otros agentes etiolgicos son capaces de inducir
un cuadro semejante a aquellos vistos en la TBB (17).

La deteccin microscpica (baciloscopa), a travs de la coloracin cido alcohol resistente
(Ziehl Neelsen), es un complemento importante en la caracterizacin de un desarrollo
micobacteriano en medios de cultivos, o bien, a partir de un frotis directo de muestras clnicas.
Por otro lado, debemos tener en cuenta que presenta escasa sensibilidad y puede detectar
micobacterias en concentraciones mayores a 10.000 clulas por mililitro (18).

De esta manera y a modo de resumen, queda expuesto un posible abanico diagnstico que nos
permitira complementar o reforzar las capacidades tcnicas ya establecidas (bacteriologa,
tuberculinizacin, histopatologa, baciloscopa), brindando, as, alternativas al trabajo
diagnstico, tanto a campo como en los laboratorios.

La finalidad del trabajo en nuestro laboratorio junto a otros grupos de investigacin es optimizar
y evaluar diversas tcnicas diagnsticas, tanto como PCR a partir de muestras de hisopado nasal,
leche y tejidos, como as tambin -IFN y ELISA, evaluando diversos antgenos candidatos.
Adems, se determina la asociacin entre los resultados obtenidos en estas tcnicas en
comparacin a los resultados de la tuberculinizacin, el cultivo tradicional, la histopatologa y
presencia o ausencia de lesiones compatibles con esta enfermedad durante la necropsia.

De esta forma se intenta contribuir al dinmico trabajo de saneamiento de nuestros rodeos a
partir de la generacin de herramientas tiles para enfrentar las dificultades de la TBB, y reforzar
las capacidades diagnsticas en el marco del Programa Nacional de Control y Erradicacin de la
enfermedad.

La necesidad de continuar la evaluacin, aumentando la casustica y el nmero de muestras
procesadas y analizadas, nos permitir arribar en un futuro cercano a conclusiones ms claras y
contundentes que redundarn de forma significativa en un efectivo control de esta zoonosis.

Referencias bibliograficas:
1) Grange JM. Mycobacterium bovis infection in human beings. Tuberculosis. 2001; 81(1/2):
71-77.
2) Nader A. Estimacin de las perdidas en la produccin por tuberculosis en un rodeo lechero.
Rev. Med. Vet. 1998; 69:36-40.
3) Adams LG. In vivo and in vitro diagnosis of Mycobacterium bovis infection. Rev. Sci. Tech.
Off. Int. Epiz. 2001; 20(1): 304-3024.
4) Francis J, et al. The sensitivity and specificity of various tuberculin tests using bovine PPD
and other tuberculins. Vet Rec. 1978; 103:420-425.
5) Costello E, et al. Performance of the single intradermal comparative tuberculin test in
identifying cattle with tuberculous lesions in Irish herds. Vet. Rec. 1997; 141(9):89-95.
6) Doherty ML, et al. Effect of a recent injection of purified protein derivate on diagnostic test
for tuberculosis in cattle infected with Mycobacterium bovis. Res. Vet. Sci. 1995; 58:217-
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tuberculosis based on the production of gamma interferon. Res. Vet. Sci. 1990; 49(1): 46-49.
8) Wood PR, et al. Field comparison of the interferon gamma assay and the intradermal
tuberculin test for the diagnosis of bovine tuberculosis. Aust. Vet J. 1991; 68:286-290.
9) Gormley E, et al. The effect of the tuberculin test and the consequences of a delay in blood
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bovis infection in cattle. Vet. Immunol. Immunopathol. 2004; 102(4): 413-420.
10) Amadori M, et al. Antibody test for identification of Mycobacterium bovis infected bovine
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11) Gaborick CM, et al. Evaluation of a five antigens ELISA for diagnosis of tuberculosis in
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12) Ritacco V, Kantor IN, Barrera L, Errico F, Nader A. Reciprocal cellular and humoral
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13) Antognoli MC. A one tube Nested PCR for the detection of Mycobacterium bovis in Spiked
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15) Miller JM, et al. Detection of M bovis In formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of cattle
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16) Kantor IN. Bacteriologa de la Tuberculosis Humana y Animal.CEPANZO,OPS/OMS, Serie de
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17) Vitale F, et al. Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex in Cattle by
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1998; 36:1050-1055.
18) Wards BJ, et al. Detection of Mycobacterium bovis in tissues by polymerase
chain reaction. Vet Microbiol. 1994; 43:227-240.