SciELO Books / SciELO Livros / SciELO Libros

DIAS, JCP., and COURA, JR., org. Clnica e teraputica da doena de Chagas: uma abordagem
prtica para o clnico geral [online]. Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ, 1997. 486 p. ISBN 85-85676-
31-0. Available from SciELO Books <http://books.scielo.org>.



All the contents of this work, except where otherwise noted, is licensed under a Creative Commons Attribution-Non
Commercial-ShareAlike 3.0 Unported.
Todo o contedo deste trabalho, exceto quando houver ressalva, publicado sob a licena Creative Commons Atribuio -
Uso No Comercial - Partilha nos Mesmos Termos 3.0 No adaptada.
Todo el contenido de esta obra, excepto donde se indique lo contrario, est bajo licencia de la licencia Creative Commons
Reconocimento-NoComercial-CompartirIgual 3.0 Unported.





Typanosoma cruzi:
morgologia e ciclo evolutivo

Zigman Brener
2
T Y P A N O S O M A C R U Z I :
M O R G O L O G I A
C I C L O E V O L U T I V O
Zigman Brener
S U M R I O : 1 . I n t r o d u o . 2 . M o r f o l o g i a . 3 . V a r i a e s i n t r a e s p e c f i c a s . 4 . C i c l o e v o l u t i v o d o T.
c r u z i n o v e t o r . 5 . C i c l o e v o l u t i v o d o T. c r u z i n o h o s p e d e i r o v e r t e b r a d o . 6 . I n t e r a o . cruzi-
c l u l a h o s p e d e i r a .
1 . I n t r o d u o
O Trypanosoma cruzi um flagelado da Ordem Kinetoplastida, Famlia
Trypanosomatidae, caracterizado pela existncia de um nico flagelo e do cinetoplasto,
uma organela contendo DNA e localizada na mitocndria. A identificao do T.cruzi
no oferece problema, pelo fato de o seu cinetoplasto ser volumoso, excedendo os
limites da membrana parasitria, detalhe morfolgico que o diferencia do outro nico
tripanossomo que infecta o homem em alguns pases da Amrica do Sul e Central, o
Trypanosoma rangeli.
Em seu ciclo, o T.cruzi apresenta trs formas evolutivas, as quais so identificadas
morfologicamente pela posio do cinetoplasto com relao ao ncleo da clula e
emergncia do flagelo. No tripomastigota (estgio infectante do parasito) o cinetoplasto
situa-se na parte posterior do flagelado, em posio terminal ou subterminal, e o flagelo
emerge da chamada bolsa flagelar, de localizao prxima ao cinetoplasto; nos epimastigotas
(formas de multiplicao do parasita no vetor ou em cultura) o cinetoplasto e a bolsa
flagelar esto em posio anterior ao ncleo; por fim, os amastigotas (estgios evolutivos
que se multiplicam dentro das clulas hospedeiras) so organismos arredondados que
apresentam inconspcuos flagelos.
2 . M o r f o l o g i a
O T.cruzi possui organelas, que normalmente so encontradas em clulas
eucariticas, e algumas outras estruturas que lhe so prprias. A mitocndria tubular e
apresenta as tpicas cristas e DNA que so caractersticas dessa estrutura. Uma especificidade
do T.cruzi que, ao contrrio do que acontece nas clulas eucariticas, o DNA no est
distribudo ao longo da mitocndria e se concentra no cinetoplasto (k-DNA). Cerca de 20-
25 % do total de DNA da clula mostra-se como rede fibrosa constituda por molculas
organizadas em mini-crculos e maxi-crculos. Embora cerca de 20.000-25 .000 mini-crcu
los estejam presentes no cinetoplasto, o papel desenvolvido pelo k-DNA no bem
conhecido, ainda que sua presena seja essencial viabilidade dos estgios evolutivos do
T.cruzi.
O flagelo do T.cruzi similar queles encontrados em outros tripanossomatdeos
e se exterioriza atravs do reservatrio ou bolsa flagelar, uma peculiar invaginao por
meio da qual o parasita ingere nutrientes do meio externo. A sua adeso membrana
celular faz-se mediante um mecanismo peculiar que envolve a justaposio de "clusters"
de partculas presentes nas superfcies de contato do flagelo com o corpo do parasita. Um
citoesqueleto formado por micro-tbulos subpeculiares participa de funes importantes,
tais como o processo de diferenciao dos diferentes estgios evolutivos e motilidade.
Como foi mencionado, alm das organelas que lhe so prprias, tambm se encontra no
T.cruzi outras estruturas presentes em clulas eucariticas, tais como o complexo de
Golghi, retculo endoplasmtico e ribossomos.
3 . V a r i a e s i n t r a - e s p e c f i c a s
O T.cruzi no uma populao homognea e est constituda por diferen-
tes cepas que circulam, na natureza, entre o homem, vetores, animais domsticos
e reservatrios silvestres. Os tripanossomos sangneos, por exemplo, apresentam
fenmeno de polimorfismo, caracterizado pela existncia de formas delgadas e
largas que, respectivamente, predominam em diferentes cepas do T.cruzi. Essas
populaes possuem comportamento diverso no que se refere a curvas de
parasitemia, interao com clulas hospedeiras e resposta imune do hospedeiro.
Estudos experimentais mostraram a existncia, na natureza, de cepas resistentes
e sensveis s drogas nitroheterocclicas, que esto sendo utilizadas no tratamento
especfico de pacientes chagsicos. Alm desses parmetros biolgicos, mais re-
centemente foram introduzidos mtodos que permitem caracterizar cepas de T.cruzi
ao nvel molecular. Assim, tm sido empregados, na taxonomia do T.cruzi, m-
todos baseados em lectinas com diferentes especificidades de carboidratos, carac-
terizao de isoenzimas (zimodemas), clivagem de mini-crculos de k-DNA por
enzimas de restrio (schizodemas).
4 . C i c l o e v o l u t i v o d o T . c r u z i n o v e t o r
Os transmissores do T.cruzi so insetos estritamente hematfagos. Ao ser ingerido
pelo vetor, o T.cruzi passa por uma seqncia irreversvel de transformaes ao longo do
tubo digestivo do inseto. Desse modo, as formas sangneas ingeridas transformam-se em
formas arredondadas e em epimastigotas; passando ao intestino mdio, processa-se a
multiplicao dos epimastigotas, que em geral se perpetua por toda a existncia do
vetor; finalmente, os epimastigotas atingem o reto, onde se diferenciam em tripomastigotas
metacclicos, que so eliminados com as dejees do inseto.
O processo de eliminao dos tripomastigotas pelo vetor tem sido estudado atra-
vs de microscopia eletrnica. Essas investigaes evidenciaram que, ao atingirem o reto,
epimastigotas e tripomastigotas ficam frouxamente aderidos ao epitlio da glndula retal,
sendo expulsos junto com as fezes e a urina durante ou aps o repasto sangneo. Essa
eliminao dos estgios evolutivos do T.cruzi faz-se pelo fluxo da fase lquida do sangue
ingerido pelo inseto, que, segundo alguns autores, participaria tambm do processo de
diferenciao de epimastigotas para tripomastigotas.
O ciclo evolutivo do T.cruzi no vetor influenciado por vrios fatores, tais como:
a espcie do inseto, a cepa do parasita, nmero de parasitas ingeridos e fatores ambientais.
Alguns triatomneos so, parcial ou totalmente, refratrios infeco pelo T.cruzi, fen-
meno que tem sido atribudo presena, no tubo digestivo do inseto, de um fator
hemoltico, que lisa as hemcias e reduz a populao parasitria. Os triatomneos trans-
missores do T.cruzi podem ser infectados ocasionalmente com um tripanossomatdeo
monoxnico (flagelado encontrado em insetos e que possui um nico hospedeiro), o
Blastocrithidia triatomae, o qual transmitido atravs de formas csticas por coprofagia
ou canibalismo. Esses flagelados atingem o trato digestivo e as glndulas de Malpighi dos
insetos, aumentando a sua mortalidade e diminuindo de modo significativo a reproduo.
A implicao prtica desse parasitismo que a contaminao de criaes de triatomneos
pela Blastocrithidia afeta o desenvolvimento da colnia e, em certas circunstncias, d
origem a falsos positivos xenodiagnsticos.
5 . C i c l o e v o l u t i v o d o T.cruzi n o h o s p e d e i r o v e r t e b r a d o
Qualquer que seja o mecanismo de transmisso do T.cruzi no hospedeiro verte-
brado, o tripomastigota tem necessariamente de penetrar uma clula a fim de cumprir o
seu ciclo evolutivo. Esse estgio infectante do T.cruzi bastante ubiqitrio e se introduz
em uma gama de clulas e tecidos: musculatura lisa e estriada, macrfagos, clulas epiteliais,
fibroblastos. Aps a penetrao na clula hospedeira, o tripomastigota se diferencia em
amastigota, que, aps perodo de latncia de 20 a 30 horas, inicia o seu processo de
diviso binria intracelular, o qual ocorre a cada 12 horas. O nmero de amastigotas
intracelulares varia entre limites de 5 0 a 5 00, dependendo do tamanho da clula hospe-
deira, das caractersticas da cepa do T.cruzi e do nmero de tripomastigotas que
concomitantemente se interioriza na clula. Uma vez esta preenchida, os amastigotas
transformam-se em tripomastigotas. A existncia de um estgio intermedirio no proces-
so de diferenciao amastigota/tripomastigota controverso, embora j exista na literatu-
ra referncia ao encontro atravs de microscopia eletrnica de epimastigotas.
A clula parasitada rompe-se e libera os tripomastigotas que infectam clulas vizi-
nhas ou caem na corrente circulatria, disseminando-se para peneirar em clulas de dife-
rentes rgos e tecidos, repetindo-se nelas o ciclo acima descrito. Esse aumento
exponencial do nmero de tripomastigotas circulantes e de clulas parasitadas pode
levar morte do hospedeiro ou, como ocorre na grande maioria dos pacientes, instala-se
uma resposta imune que controla gradativamente a proliferao parasitria. Portanto, a
parasitemia patente detectvel pelo exame de sangue a fresco d lugar fase crnica, na
qual a parasitemia subpatente e s detectvel por exames parasitolgicos. A fase crni-
ca se caracteriza, alm da parasitemia subpatente, pela ausncia de cura espontnea e
inexistncia de reagudizao. O recrudescimento da parasitemia nessa fase pode, entre-
tanto, ocorrer em circunstncias que induzam imunossupresso no hospedeiro, tais como
administrao de imunossupressores para tratamento de enfermidades no relacionadas
doena de Chagas, transplante de rgos e AIDS.
Um aspecto particular do ciclo evolutivo do T.cruzi em gambs (Didelphis
marsupialis), importantes reservatrios silvestres desse parasita, foi recentemente des-
coberto pela Dra. Maria Deane da Fundao Oswaldo Cruz. O estudo detalhado desses
animais mostrou a presena de epimastigotas e tripomastigotas metacclicos na luz das
glndulas anais, semelhana do que ocorre no tubo digestivo dos vetores de T.cruzi.
Como os parasitas esto situados em um stio no qual se encontra a substncia odorfera
ejetada pelos gambs em situaes de estresse, tem sido sugerida a possibilidade de que
esses animais possam ter participado de vrios surtos de doena de Chagas aguda, nos
quais a infeco por via oral foi implicada. Nesse particular, existem slidas evidncias de
que a transmisso tenha acontecido atravs de alimentos contaminados por dejees de
triatomneos ou da substncia odorfera dos marsupiais.
6 . I n t e r a o T . c r u z i - c l u l a h o s p e d e i r a
Tripomastigotas de T.cruzi so ubiqitrios e invadem inmeras clulas in vitro e
in vivo. Uma interao peculiar ocorre entre estgios evolutivos do parasita e macrfagos.
Epimastigotas fagocitados por macrfagos so destrudos, ao passo que tripomastigotas
oriundos do sangue do hospedeiro vertebrado, vetor ou cultura de tecido so interiorizados
e cumprem o ciclo evolutivo j descrito. No entanto, quando os macrfagos esto ativados
e os tripomastigotas esto opsonizados (ou seja, apresentam anticorpos especficos na
membrana) processa-se tambm a destruio dos parasitas. Isso significa que macrfagos
tm dualidade de comportamento, podendo ser, segundo as circunstncias, clulas hos-
pedeiras na quais o T.cruzi se multiplica, ou clulas da resposta imune, que controla a
proliferao do parasita.
Embora no seu conjunto o T.cruzi apresente a possibilidade de ser considerado
como um parasita ubiqitrio, algumas cepas mostram preferncias ou "tropismos" por
diferentes clulas, como tem sido demonstrado em animais inoculados com diversas ce-
pas e examinados na fase aguda da infeco. Estudos experimentais revelaram que algu-
mas cepas de T.cruzi parasitam preferencialmente macrfagos do bao e fgado do
hospedeiro, ao passo que outras populaes "no-macrofagotrpicas" multiplicam-se
predominantemente na musculatura lisa e estriada, inclusive do corao.
A interiorizao dos tripomastigotas de T.cruzi em macrfagos processa-se por
fagocitose mediada por receptores da membrana plasmtica da clula hospedeira. A
penetrao nas demais clulas tambm ocorre por um complexo processo de endocitose,
que culmina na formao intracelular de um vacolo fagocitrio, no qual est contido o
parasita. Curiosamente, mecanismo idntico de interiorizao foi descrito para clulas
musculares cardacas expostas ao T.cruzi, nas quais esse processo tambm acompa-
nhado de formao de vacolos fagocitrios, onde esto seqestrados os parasitas. Expe-
rimentos de microscopia eletrnica mostram a existncia de fagolisosomas resultantes da
fuso do vacolo fagocitrio com lisosomas, inclusive nas clulas musculares.
Os tripomastigotas transformam-se em amastigotas e somente iniciam sua multi-
plicao na clula aps escaparem do vacolo fagocitrio e passarem ao citosol. Experi-
ncias in vitro mostram que, duas horas aps a infeco, cerca de 7 0% dos parasitas j
romperam a membrana do vacolo e esto livres no citosol. Uma srie de trabalhos
extremamente interessantes identificou o mecanismo pelo qual se rompe a membrana
do fagolisosoma, liberando os amastigotas e estgios intermedirios do T.cruzi. Baseados
no fato de que amastigotas secretam in vitro uma hemolisina ativa em pH 5 .5 e que o
pH dos vacolos de onde se liberam esses estgios evolutivos do T.cruzi normalmente
abaixo de pH 6.0, os pesquisadores sugeriram que essa substncia poderia estar envolvi-
da no processo de escape dos parasitas. Experimentos in vitro em cultura de tecido
mostraram que a adio de substncias bsicas s clulas infectadas inibia o escape dos
parasitas quando o pH dos fagolisosomas era elevado para 6.2. A protena citotxica foi
isolada (Tc-TOX) no seu processo de caracterizao, verificando-se que sua estrutura
apresenta certa homologia com a perforina, substncia presente em linfcitos citotxicos.
Na clula hospedeira, a interiorizao do T.cruzi no fenmeno puramente
aleatrio e depende, pelo menos em parte, do mtuo reconhecimento mediado por
receptores e molculas presentes na membrana. Curiosamente, componentes da mem-
brana parasitria podem, ao invs de facilitar a interiorizao, inibir a interao com a
clula parasitria. Por exemplo, a tripsinizao de formas sangneas do T.cruzi remo-
ve uma glicoprotena de 90 kDa, que resulta de um significativo aumento da infeco
por macrfagos, fenmeno caracterstico da presena de um "fator anti-fagocitrio" nos
tripomastigotas circulantes que permitiria a evaso dos parasitas da resposta imune
celular. A presena de receptores para tripomastigotas de T.cruzi em clulas no-
fagocitrias foi detectada quando se demonstrou que anticorpos contra uma glicoprotena
de 85 kDa (Tc85 ) inibia parcialmente a penetrao dos parasitas nas clulas. Outros
receptores foram identificados, inclusive fibronectina, uma glicoprotena presente em
membranas celulares.
Aspecto interessante da biologia celular do T.cruzi sua capacidade de produzir
enzimas que participam do processo de infeco das clulas. Parcela significativa da
populao de tripomastigotas sangneos, que emerge das clulas, produz neuroaminidase,
enzima que remove cido das membranas celulares. Os parasitas podem ser classificados,
portanto, como Na
+
e Na
-
, de acordo com a presena da neuroaminidase na sua membra-
na. Curiosamente, a neuroaminidase aparenta exercer controle negativo em relao
interao dos parasitas com clulas, j que as formas sangneas do T.cruzi Na
+
so
significativamente menos interiorizadas que as Na
-
. Dados publicados mostram que o
cido silico desempenha papel importante na interiorizao do T.cruzi em clulas no
fagocitrias. Interessa observar que os tripomastigotas no sintetizam cido silico, suge-
rindo assim que a sializao dos parasitas depende de fonte exgena. Trabalhos mais
recentes demonstraram que, no processo de multiplicao e ruptura da clula hospedei-
ra, uma trans-sialidase presente na superfcie dos tripomastigotas retira cido silico de
macromolculas, oriundas provavelmente da destruio celular, e o transfere para um
receptor na membrana do T.cruzi (Ssp-3).
Esses dados, sobretudo os relacionados ao papel da neuroaminidase e trans-sialidase,
revelam que o ciclo evolutivo do T.cruzi no hospedeiro vertebrado constitui processo
complexo de mtuo reconhecimento entre a clula hospedeira e o estgio infectante.
R e f e r n c i a s B i b l i o g r f i c a s
ALVES, M.J.M., ABUIN, G., KUWAJIMA, V.Y. & COLLI, W., 1986. Partial inhibition of trypomastigote
entry into cultured mammalian cells by monoclonal antibodies against a surface protein of
Trypanosoma cruzi. Molecular and Biochemical Parasitology, 21: 82-85 .
ANDREWS, N.W., HONG, K., ROBBINS, E.S. & NUSSENZWEIG, V., 1990. Stage-specific surface
antigens related to the complement component C9: evidence for membrane pore-forming
activity at low pH. Cell, 7 1: 127 7 -1287 .
BRENER, Z., 197 3. Biology of Trypanosoma cruzi. Annual Review in Microbiology, 27 : 347 -382.
BRENER, Z., 1980. Immunity to Trypanosoma cruzi. Advances in Parasitology, 18: 247 -292.
BRENER, Z., 1985 . General review of Trypanosoma cruzi classification and taxonomy. Revista
da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, 18: 1-8.
BRENER, Z., 1992. Trypanosoma cruzi: taxonomy, morphology and life cycle. In: Chagas
Disease (American Trypanosomiasis): its impact on transfusion and clinical medicine (Wendel,
S., Brener, Z., Camargo, M.E. & Rassi, ., eds.), p. 13-29, So Paulo: ISBT Brazil'92.
CHAGAS, C, 1909. Nova tripanozomiase humana. Estudos sobre a morfologia e o ciclo
evolutivo do Schizotrypanum cruzi n.gen., s.sp. agente etiolgico de nova entidade mrbida
do homem. Memrias do Instituto Oswaldo Cruz, 1: 15 9-218.
DEANE, M.P., LENZI, H.L. & JANSEN, A.M., 1984. Trypanosoma cruzi vertebrate and invertebrate
cycles in the same mammal hosts, the opossum Didelphis marsupialis. Memrias do Instituto
Oswaldo Cruz, 7 9: 5 13-5 15 .
GARCIA, E.S. & AZAMBUJA, P., 1991. Development interactions of Trypanosoma cruzi within
the insect vector. Parasitology Today, 7 : 240-244.
MEIRELLES, M.N.L., ARAJO-JORGE, T.C., DE SOUZA, W., MOREIRA, A.L. & BARBOSA, H.S.,
1987 . Trypanosoma cruzi: phagolysosomal fusion after invasion into non professional phagocytic
cells. Cell Structure and Function, 12: 387 -393-
SCHENKMAN, S., JANG, M., HART, G.W. & NUSSENZWEIG, V., 1991. A novel cell surface
trans-sialidase of Trypanosoma cruzi generates a stage-specific epitope required for invasion
of mammalian cells. Cell, 65 : 1117 -1125 .
DE SOUZA, W., 1984. Cell biology of Trypanosoma cruzi. International Review of Cytology, 86:
197 -283.
ZELEDON, R., BOLANOS, R. & ROJAS, ., 1984. Scanning electron microscopy of the final
phase of the life cycle of Trypanosoma cruzi in the insect vector. Acta Tropica, 41: 39-43.
ZINGALES, B. & COLLI, W., 1985. Trypanosoma cruzi: interaction with host cells. In: Current
Topics in Microbiology, Immunology, p. 129-152, Springer-Verlag Berlin-Heidelberg.