4

a
u
l
a
OBJETIVOS
Conhecer a estrutura do envoltrio nuclear.
Correlacionar a estrutura do envoltrio com sua
dinmica no ciclo celular.
Conhecer a estrutura do complexo do poro.
Conhecer as principais caractersticas do transporte
entre ncleo e citoplasma.
Pr-requisitos
Compartimentalizao
celular (Aula 15 de Biologia
Celular I).
Filamentos Intermedirios
(Aula 22 de Biologia
Celular I).
Controle do ciclo celular
(Aula 1 de Biologia
Celular II).
Diviso celular (Aula 2
de Biologia Celular II).
Transporte ncleo-citoplasma
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 60
INTRODUO Voc aprendeu na ltima aula que o envoltrio nuclear est encarregado
de estabelecer o limite fsico e qumico entre os ambientes nuclear e
citoplasmtico, alm de funcionar como suporte adicional para a prpria
organizao do genoma durante a intrfase. Seu aparecimento foi um passo
evolutivo importantssimo porque separou, espacial e temporalmente, a
transcrio da traduo. Se o envoltrio muito til durante a intrfase, em
contrapartida, pode ser um estorvo durante a mitose, j que necessrio
que os microtbulos do fuso mittico possam fazer contato com os
cromossomos. Assim, na maioria dos eucariotos, o envoltrio se desarranja
no incio da mitose, sendo novamente montado ao redor do genoma nas
clulas-lhas. Nesta aula, vamos examinar a estrutura do envoltrio nuclear,
que permite a segregao entre ncleo e citoplasma, mas tambm promove
as trocas necessrias entre os dois compartimentos, e que caractersticas do
envoltrio garantem que ele se rearranje corretamente nas clulas-lhas.
ORGANIZAO ESTRUTURAL DO ENVOLTRIO NUCLEAR
O envoltrio nuclear (Figura 4.1), tambm chamado envelope
nuclear ou carioteca, formado por duas membranas concntricas
separadas pelo espao perinuclear e sustentadas no lado nuclear por
estruturas lamentosas. A seguir, descrevemos as principais caractersticas
dos componentes do envoltrio nuclear.
Figura 4.1: Esquema bsico do compartimento nuclear,
mostrando as duas membranas que formam o envelope.
Membrana nuclear
interna
Membrana nuclear
externa
Membrana do
retculo
Lmen do retculo
Lmina nuclear
Poros nucleares
Espao perinuclear
Ncleo
CEDERJ 61
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
Membrana nuclear externa contnua com o retculo
endoplasmtico rugoso, tendo freqentemente ribossomos aderidos,
capaz, portanto, de sintetizar protenas.
Espao perinuclear contnuo com o lmen do retculo
endoplasmtico.
Membrana nuclear interna a bicamada lipdica dessa membrana
tambm semelhante do retculo endoplasmtico, sendo contnua com
a membrana externa em alguns pontos, porm seus lipdios e protenas
no se difundem livremente pela membrana externa e pelo retculo.
Por isso, a membrana nuclear interna tem composio especial. Entre
as molculas mais importantes dessa membrana, destacam-se receptores
que vo ancorar a lmina nuclear, que est abaixo dela, e molculas
envolvidas com a homeostase de clcio (veja boxe).
UM NOVO COMPARTIMENTO: O RETCULO NUCLEOPLASMTICO
Manter a concentrao de clcio baixa no citoplasma e aument-la repentinamente
faz parte dos mecanismos de sinalizao celular, como voc aprendeu nas Aulas 13 e 14
de Biologia Celular I. O estoque intracelular de clcio ca no lmen do retculo, que o
libera quando molculas de IP3 ligam-se a seus receptores na membrana do retculo.
Muitos eventos intranucleares dependem de sinais de clcio, mas a regulao desses sinais
ainda no tinha sido descrita. Recentemente, foram observados pers de membrana
contnuos com o envelope nuclear e com o retculo endoplasmtico que constituem um
depsito intranuclear de clcio (Figura 4.2).
Figura 4.2: Clula epitelial marcada com
um traador uorescente especco para
retculo endoplasmtico, o ER tracker.
A seta aponta um segmento do retculo
nucleoplasmtico. (Foto: Echevaria
et al., Nature Cell Biol, 5: 440, 2003.)
Embora seja contnuo com o retculo, a liberao do clcio desse compartimento no
regulada pelo retculo, tendo mecanismos independentes. O novo compartimento recebeu
o nome de retculo nucleoplasmtico.
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 62
Lmina nuclear uma rede de filamentos entrecruzados
(Figura 4.3), classicados como lamentos intermedirios por causa
de sua espessura e caractersticas de polimerizao e despolimerizao
(reveja Aula 22 de Biologia Celular I).
Figura 4.3: Microscopia eletrnica
da lmina nuclear do ovcito de
Xenopus, preparada por congela-
mento rpido e rplica. (Foto: Ueli
Aebi, J. Cell Biol. 119:1429, 1992.)
Os lamentos da lmina so formados por protenas chamadas
laminas (a palavra assim mesmo, paroxtona quando se refere
s protenas e proparoxtona quando se refere ao conjunto dos
lamentos). As laminas so expressas nas clulas de quase todos os
metazorios, com exceo dos fungos e dos vegetais. Nos mamferos
existem cerca de 60 laminas, que podemos classicar em dois diferentes
grupos: laminas A e B. A lmina nuclear ca sempre logo abaixo da
membrana nuclear interna, porque um de seus componentes, a lamina
tipo B, est preso a esta membrana por um receptor. J as laminas do
tipo A tm anidade pela cromatina interfsica. Reveja o esquema da
Figura 3.5, na aula passada.
As laminas tm um papel importante na manuteno da forma e do
tamanho do ncleo. Isso cou demonstrado com o seguinte experimento:
o gene da lamina B3 de camundongo, que expresso em espermatcitos,
foi transfectado para clulas somticas. Depois da transfeco, as clulas
somticas, cujo ncleo era arredondado, passaram a apresentar ncleo
em forma de gancho, caracterstico dos espermatcitos.
As laminas tambm esto envolvidas em suportar as deformaes
que o ncleo sofre quando empurrado pelas outras organelas. Clulas
mutantes que tiveram os genes de laminas deletados no so mais
capazes de consertar deformaes do ncleo, que continua deformado
at a prxima mitose.
TRANSFECTAR
UM GENE
coloc-lo,
usando recursos
de laboratrio, em
uma clula de outro
organismo, ou mesmo
em uma clula do
mesmo organismo,
com o objetivo de
forar sua expresso.
DELETAR UM GENE
retir-lo do genoma
de uma clula, usando
recursos de laboratrio,
substituindo-o por
outro no relacionado,
que poder at ajudar
na seleo das clulas
que realmente tiveram
o gene deletado.
J existem tcnicas
de laboratrio que
impedem que um gene
seja expresso sem que
seja necessrio
delet-lo. Voc vai
aprender em Biologia
Molecular.
1 m
CEDERJ 63
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
Cromatina aderida Existe uma camada de heterocromatina logo
abaixo da lmina que permanece associada ao envoltrio nuclear durante
toda a intrfase. Esse posicionamento da cromatina importante para a
prpria organizao do genoma e mantido pela associao das laminas
do tipo A com a cromatina.
Voc pode perceber que o posicionamento dos componentes do
envoltrio nuclear mantido pela interao da lmina com a membrana
interna (atravs das laminas tipo B) e com a cromatina aderida
(atravs das laminas tipo A).
Complexos do poro O envoltrio nuclear possui poros
estruturados que atravessam as duas membranas nucleares, constituindo,
assim, uma comunicao direta entre os ambientes citosslico
e nuclear (Figura 4.4).
Figura 4.4: Esquema simplificado do complexo do poro. Repare que as membranas externa
e interna so contnuas, mas se mantm isoladas porque protenas transmembrana que fazem
parte da estrutura do poro bloqueiam a livre movimentao de protenas e lipdios entre elas.
Na regio dos complexos do poro a lmina e a cromatina esto
afastadas (reveja as Figuras 3.4 e 3.5 na aula passada). A estrutura
dos complexos do poro tem sido alvo da ateno de microscopistas
eletrnicos h vrios anos. O modelo desses estudos o ovcito de
Xenopus, por ser uma clula grande e que est sintetizando muitas
protenas, necessitando, assim, enviar grandes quantidades de mRNA
para o citoplasma e importar muitas protenas para o ncleo, para
trabalhar nas etapas da transcrio e montagem de ribossomos. J foi
constatada a relao direta entre o nmero de complexos do poro e a
intensidade da sntese de protenas, que aumenta obrigatoriamente o
transporte entre ncleo e citoplasma. Isto , quanto maior a quantidade
de protenas sintetizadas, maior o nmero de complexos do poro.
Citoplasma
Membrana externa
Espao perinuclear
Membrana interna
50nm
Ncleo
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 64
Anel citoplasmtico
Estacas radicais
Anel distal
Cesta
Lmina
nuclear
Fibrilas
Membrana externa
Membrana interna
Anel nuclear
CITOPLASMA
NCLEO
O modelo que est na Figura 4.6 foi idealizado a partir de micrograas
como as da Figura 4.5.
Figura 4.5: Complexos do poro preparados
por congelamento rpido e rplica metlica.
Em A, a face citoplasmtica do envoltrio
nuclear, em que se pode distinguir as partcu-
las que formam o anel citoplasmtico.
Em B, a face nuclear do envoltrio, permitindo
observar as cestas nucleares. Em C, um corte
ultrafino atravs do envoltrio nuclear em
preparao convencional para microscopia
eletrnica. Fotos: Fahrenkrog & Aebi,
Nature Rev Mol Cell Biol, 4: 757, 2003.
Figura 4.6: Modelo
do envoltrio nuclear
com dois complexos
do poro inseridos.
A estrutura de cada poro formada por trs anis: o anel
citoplasmtico, exposto na membrana externa; o anel nuclear, exposto
na membrana interna, e um anel mediano na regio do espao perinuclear.
Cada anel formado por oito partculas. As partculas do anel mediano
so transmembrana, sendo por isso chamadas estacas radiais, e formam
a barreira que limita a uidez de protenas e lipdios entre as membranas
externa e interna. Do anel citoplasmtico projetam-se longas brilas
envolvidas com o reconhecimento das molculas que podero atravessar
o poro. Do anel nuclear, projetam-se outros lamentos que se prendem
a um anel distal, parecendo uma cesta de basquete. O conjunto desses
lamentos mais o anel distal chamado cesta nuclear.
100nm
100nm
(b) (a)
(c)
100nm
CEDERJ 65
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
Alguns complexos do poro possuem uma partcula central
(tambm chamada plug central), que parece obstruir a passagem.
Depois que os complexos do poro foram observados por tomograa,
o plug passou a ser considerado, na maioria dos casos, uma projeo
do anel distal. Em algumas micrografias, no entanto, o plug
realmente era formado por material (RNA ou protena, ou ambos)
em trnsito pelo poro.
Agora voc h de concordar que o complexo do poro realmente
merece esse nome! Em mamferos, ele formado por cerca de trinta
cadeias proticas, coletivamente denominadas nucleoporinas. Ainda
no se conhece a funo particular de cada uma delas, mas o conjunto
certamente est encarregado do controle do transporte de molculas
entre ncleo e citoplasma.
TRANSPORTE ENTRE NCLEO E CITOPLASMA
Os complexos do poro mantm abertas passagens diretas entre
os ambientes citoplasmtico e nuclear. Assim, era de se esperar que a
composio dos dois compartimentos fosse semelhante, mas no o
que se observa. A estrutura do complexo sustenta uma abertura que
deixaria passar livremente protenas de at cerca de 50.000 daltons.
Se examinarmos o tamanho das protenas que funcionam dentro
do ncleo, constatamos que grande parte delas bem maior do que
isso. Pensando bem, qualquer molcula de mRNA que precise sair
do ncleo tem massa maior do que 50.000 daltons. Pensando ainda
melhor, uma subunidade ribossomal saindo do ncleo maior ainda!
Em contrapartida, existem protenas citoplasmticas menores do que
50.000 daltons que deveriam transitar sem diculdade entre os dois
ambientes, como os monmeros de actina, por exemplo. No entanto,
a actina nunca encontrada dentro do ncleo.
Portanto, evidente que existem mecanismos de transporte
especializados, tanto para promover a passagem de molculas maiores
do que o poro quanto para evitar a passagem de molculas menores.
Ainda h muitos mistrios sobre esse assunto, mas algumas
caractersticas desse transporte foram descobertas experimentalmente.
Foi escolhido como modelo de estudo o transporte da protena
nucleoplasmina, j que ela funciona exclusivamente no ncleo e grande
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 66
demais para passar pelo complexo do poro por difuso. A protena ntegra
ou parcialmente digerida foi marcada com uorocromo, microinjetada no
citoplasma e observada em microscpio de uorescncia (Figura 4.7).
A nucleoplasmina formada por vrios domnios, uma cabea
globular e vrias caudas lineares, iguais entre si. Quando essa protena
injetada no citoplasma de uma clula interfsica, em poucos minutos
de incubao ela entra no ncleo. Se a nucleoplasmina for submetida
a uma digesto com enzimas proteolticas, de modo a separar a cabea
das caudas, e depois estas forem injetadas separadamente, observa-se
que as cabeas permanecem no citoplasma, enquanto as caudas entram
no ncleo. Esse experimento mostrou que as caudas da nucleoplasmina
possuem algum sinal especco que permite a entrada no ncleo.
Figura 4.7: Experimento realizado
com a nucleoplasmina para estudar as
caractersticas do transporte de uma
protena entre o ncleo e o citoplasma.
Os experimentos seguintes procuraram determinar qual era
a menor seqncia de aminocidos contida nas caudas da nucleoplasmina
necessria e suciente para a entrada no ncleo. Assim se chegou
seqncia de localizao nuclear (NLS nuclear localization sequence),
uma seqncia reconhecida no envoltrio nuclear para permitir a entrada
no ncleo. Do ponto de vista molecular, houve surpresas: a) em cada
protena nuclear estudada havia variaes na seqncia; assim, no se pde
apontar uma seqncia de localizao nuclear, mas vrias possveis com
Nucleoplasmina Cabeas Caudas
Microinjeo no citoplasma
Incubao a 37C
Observao da uorescncia
Entram
no ncleo
Ficam no
citoplasma
Entram
no ncleo
Cauda
Cabea
Protelise limitada
CEDERJ 67
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
caractersticas comuns; b) a seqncia no est na ponta da cadeia, como
as seqncias j conhecidas para entrada no retculo endoplasmtico (a
primeira seqncia sinal descoberta, lembra? Se no, reveja a Aula 16 de
Biologia Celular I) ou nas mitocndrias; portanto, no pode ser cortada
depois da entrada no ncleo. Essa caracterstica teria alguma importncia?
Muita importncia! Espere s um pouquinho que voc j vai ver!
Muitos anos depois, experimentos semelhantes ao da
nucleoplasmina foram feitos com a actina: o gene que codica para
essa protena foi manipulado, resultando em vrios genes modicados,
cada um codicando actina sem uma parte da cadeia. Os vrios genes
foram transfectados em clulas diferentes e observou-se em qual delas a
actina conseguia entrar no ncleo. Na nica clula em que a actina foi
encontrada no ncleo, observou-se que o gene transfectado correspondia
a uma actina sem a seqncia de aminocidos que especicamente era
excluda do ambiente nuclear, denindo, assim, a primeira seqncia de
excluso nuclear (NES - nuclear exclusion sequence). Ainda continuam
sendo assunto de investigao se a seqncia de excluso tambm
est presente em outras protenas e o significado biolgico dessa
descoberta.
Voc tambm j deve estar curioso para saber como, com aquela
morfologia do complexo do poro, as protenas entram no ncleo. Esta
tambm uma dvida dos biologistas celulares: ser que as protenas
passavam mesmo pelos complexos do poro? S por eles? Passavam com
a conformao nativa ou eram desenoveladas? Se no desenovelam,
os poros dilatam? Esse transporte gasta energia? Precisa de protenas
auxiliares? Calma! Uma pergunta de cada vez! Vamos l!
As protenas nucleares passam pelos complexos do poro?
A passagem de protenas s ocorre atravs dos complexos do
poro. Isso foi demonstrado acoplando a nucleoplasmina com partculas
de ouro coloidal e observando essas clulas ao microscpio eletrnico
de transmisso (Figura 4.8).
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 68
Esses experimentos responderam ainda a outras perguntas:
o acoplamento com ouro coloidal impede que as protenas mudem de
conformao; assim, cou demonstrado que as protenas atravessam
o complexo do poro em sua conformao nativa. Alis, se voc estava
imaginando como uma protena maior do que o dimetro do poro
pode atravess-lo, repare (Figura 4.8.a) que, no acoplamento com
ouro coloidal, vrias protenas se associam a uma mesma partcula
(o tamanho da partcula de ouro usada no experimento era
de 10nm). Portanto, vrias protenas e mais uma partcula de
10nm passam ao mesmo tempo pelo poro!
E a sada do mRNA?
Para estudar o transporte de mRNA, foram realizados experimentos
equivalentes aos realizados com protenas nucleares, j esquematizados na
Figura 4.8. Partculas de ouro coloidal foram acopladas a molculas de
mRNA e microinjetadas no ncleo de uma clula. Depois de alguns minutos
de incubao a 37
o
C, a preparao foi xada, processada, e observada em
microscpio eletrnico de transmisso. O resultado que as molculas de
mRNA saem do ncleo exclusivamente atravs de complexos do poro.
Figura 4.8: Em a, o experimento
realizado para determinar por onde
passam as protenas que entram
no ncleo; em b, o resultado em microsco-
pia eletrnica de transmisso (Met),
onde podemos ver que os com-
plexos protena-ouro coloidal
passam apenas pelos complexos
do poro, delimitados por colchetes.
Note a mitocndria (M) indi-
cando de modo inconfundvel o
lado citoplasmtico. A foto b de
Feldherr et al. J Cell Biol, 99: 216, 1984.
Ouro coloidal
Microinjeo
Incubao a 37
met
Citoplasma
Caudas de
nucleoplasmina
(a)
(b)
CEDERJ 69
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
Entrou por uma porta, saiu pela outra?
Ser que existem complexos do poro s para a entrada de
protenas e outros s para sada de mRNA? Essa pergunta s pde
ser respondida quando protenas e mRNA foram acoplados a
partculas de ouro de tamanhos diferentes, s protenas com ouro de
10nm e aos mRNA com ouro de 20nm. Os complexos protena-ouro
foram injetados no citoplasma, enquanto os complexos
mRNA-ouro foram injetados no ncleo da mesma clula, que depois
de processada foi observada ao microscpio. Advinha o resultado?
Foram observadas partculas de 10nm entrando e partculas de
20nm saindo pelos mesmos poros! Assim foi demonstrado que os
complexos do poro so competentes tanto para transportar protena
do citoplasma para o ncleo quanto mRNA do ncleo para o citoplasma,
isto , na direo oposta.
Agora ns tocamos num ponto chave quando se trata do
transporte entre ncleo e citoplasma: direo. A direo exclusiva
uma das principais caractersticas desse transporte: as molculas de
mRNA s saem do ncleo, enquanto as protenas que tm a seqncia
de localizao nuclear s entram (por isso voc vai encontrar em alguns
textos que o transporte entre ncleo e citoplasma vetorial, isto , tem
direo e sentido). Se voc pensou na biognese dos ribossomos, em que
protenas so sintetizadas no citoplasma, entram no ncleo e depois
saem para o citoplasma, lembre que antes de retornar ao ncleo elas
se associaram a molculas de RNA, formando ribonucleoprotenas,
que tm caractersticas de transporte especiais.
O transporte entre ncleo e citoplasma consome energia?
Para responder a essa pergunta, foi feito um experimento
muito semelhante ao descrito na Figura 4.7, mas em vez de incubar
a preparao a 37
o
C, a incubao foi feita a 4
o
C. Nessa situao, a
nucleoplasmina no entrava no ncleo, ou entrava to devagar que
tornava o experimento difcil de observar. O passo seguinte foi fazer a
microinjeo de nucleoplasmina em clulas que tinham sido depletadas
de ATP (Figura 4.9). O resultado foi a reteno da protena no envoltrio
nuclear. Esse experimento levou idia de que o transporte entre
ncleo e citoplasma tem duas etapas: reconhecimento, independente
DEPLETAR
Diminuir,
extinguir, no caso,
o estoque celular
de ATP.
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 70
Incubao na ausncia de ATP
(Observao por uorescncia)
Nucleoplasmina
Microinjeo
Acumulao ao
redor do ncleo
A etapa de reconhecimento das protenas que sero transportadas
para o ncleo certamente envolve receptores que reconhecem as
seqncias de localizao nuclear. A identidade exata dos receptores
ainda no foi determinada, mas h indcios de que eles estejam localizados
nas brilas que se projetam do anel citoplasmtico do complexo do poro
(Figura 4.6). Depois do reconhecimento, a acomodao da protena na
abertura do canal inicia a etapa de translocao.
No era bem assim
Recentemente, novos experimentos mostraram que o
nucleotdeo envolvido no transporte do ncleo para o citoplasma no
o ATP diretamente, e sim o GTP. A entrada de protenas no ncleo,
e tambm a sada de RNA, dependem da associao dessas molculas
com co-fatores que ligam e hidrolisam GTP. Como a recomposio
do estoque citoplasmtico de GTP depende da produo de ATP
(e transferncia do fosfato do ATP para GDP na mitocndria,
relembre na Aula 27 de Biologia Celular I), o bloqueio do transporte
na ausncia de ATP ca explicado.
de ATP, e translocao, dependente de ATP. Curiosamente,
a depleo de ATP no bloqueou a sada RNA do ncleo
para o citoplasma, o que s foi compreendido anos depois
(se os pesquisadores esperaram anos, voc pode esperar
um pouquinho, n?).
Figura 4.9: O transporte de protena do ncleo para o citoplasma no ocorre na
ausncia de ATP. A protena se associa ao envoltrio, mas no translocada.
CEDERJ 71
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
Figura 4.10: O ciclo de Ran
entre o citoplasma e o ncleo.
Mais personagens: vou entrar, voc se importina?
Outra descoberta recente que as seqncias de localizao
nuclear, no citoplasma, e de excluso nuclear, no ncleo, no so
reconhecidas diretamente pelos componentes do complexo do poro e
sim por receptores de transporte. O complexo formado pelas protenas
a serem transportadas (carga) mais os receptores de transporte
que reconhecido no poro e transportado. Os receptores de
transporte so protenas chamadas, coletivamente, carioferinas ou
importinas (reconhecem as NLS no citoplasma e so importadas)
e exportinas (reconhecem as NES no ncleo e so exportadas).
Veja na Figura 4.11 como Ran e importina funcionam em conjunto.
O bichinho do Ran-ran
Ran, a GTPase envolvida no transporte entre ncleo e citoplasma,
pertence mesma famlia de GTPases monomricas cujo representante
mais famoso Ras, que atua na sinalizao celular (Aula 14 de Biologia
Celular I), e que tambm abriga as Rab, que trabalham no controle
do trfego intracelular de vesculas (Aula 25 de Biologia Celular I).
Como todas as GTPases, Ran pode estar ligada a GTP ou a GDP.
A forma Ran-GDP mais abundante no citoplasma e a forma Ran-GTP
mais abundante no ncleo. Essa distribuio conseqncia da ao
de outras protenas sobre as Ran (Figura 4.10). No citoplasma existem
protenas que estimulam a atividade enzimtica de Ran, fazendo com
que ela hidrolise o GTP, enquanto no ncleo protenas associadas
cromatina roubam o GDP de Ran, que logo substitudo por GTP.
Supe-se que Ran-GTP tenha tendncia a sair do ncleo, enquanto
Ran-GDP tenha tendncia a entrar.
Ran-GDP
Citoplasma
Ncleo
GTP
GTP
GDP
Ran-GEF
Ran-GAP
Ran-GTP
GDP
p
Cromatina
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 72
Diviso celular: apertem os cintos, o envoltrio sumiu!
Voc viu como o envoltrio nuclear bem estruturado e
o trabalho que d para transportar protenas entre os ambientes
citoplasmtico e nuclear. Mas no esquea que toda essa organizao
s vale durante a intrfase! Quando as clulas iniciam a fase M, na
maioria delas o envoltrio se desarranja e s volta a se organizar ao
nal do processo, j nas clulas-lhas. Se o envoltrio se desarranja, no
h mais separao entre os ambientes nuclear e citoplasmtico e seus
componentes se misturam.
Figura 4.11: Uma protena no cito-
plasma (carga) que tenha a seqncia de
localizao nuclear (NLS) acopla-se a uma
importina e o conjunto reconhecido pelo
complexo do poro e translocado. J no ncleo,
a protena liberada porque a importina tem
mais anidade pela Ran-GTP, liga-se a ela e
saem juntas para o citoplasma. L chegando,
Ran hidrolisa o GTP e se solta da importina,
que est pronta a reconhecer outra carga.
Figura 4.12: Uma carga com seqncia de
excluso nuclear (NES) que esteja dentro do
ncleo acopla-se exportina e Ran-GTP
da Ran roubado e o complexo se desfaz.
Exportina
Carga j no
citoplasma
Citoplasma
Ncleo
Carga com NES
Exportina+carga+Ran-GTP
Ran-GDP
P
Citoplasma
Importina
Carga com NLS
Ncleo
Ran-GTP
Carga j
importada
Importina+Ran
Ran-GTP
Supe-se que a excluso de uma carga do ncleo funcione
do mesmo modo (Figura 4.12).
P
Ran-GDP
CEDERJ 73
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
VESICULAO
A vesiculao de
um compartimento
diferente do
brotamento.
A vesiculao
um processo mais
dramtico, no
qual TODO o
compartimento se
fragmenta, formando
inmeras vesculas.
Figura 4.13: O envoltrio nuclear se
desorganiza no incio da mitose e
se reorganiza ao nal do processo.
REORGANIZANDO O ENVOLTRIO NUCLEAR
Ao nal da mitose, so ativadas fosfatases que desfosforilam
os substratos que foram alvo do MPF no incio do processo.
Com a desfosforilao, a cromatina volta a descompactar,
tornando a expor os stios de anidade por laminas do tipo A e por
protenas da membrana nuclear interna. Nesse mesmo perodo, as
laminas desfosforiladas voltam a polimerizar a lmina, no em qualquer
lugar, mas exatamente em volta do genoma das clulas-lhas porque tm
anidade pela cromatina que est descompactando. Ao se incorporar
ao polmero, as laminas do tipo B ajudam a aproximar as vesculas de
membrana interna onde esto presas.
O desmonte do envoltrio nuclear disparado pelo complexo
MPF (reveja na Aula 1), que nessa ocasio fosforila muitos substratos,
entre eles as protenas que vo compactar a cromatina, outras que vo
despolimerizar microtbulos, fragmentar o retculo endoplasmtico
e tambm as membranas que formam o envoltrio nuclear, que
vesiculam. As laminas tambm so substrato para as quinases da fase
M e, como todos os lamentos intermedirios quando so fosforilados,
despolimerizam. As laminas do tipo A cam solveis no citoplasma, mas
as laminas do tipo B continuam presas ao seu receptor nas vesculas de
membrana nuclear interna. Alguns componentes do complexo do poro
tambm so fosforilados e o conjunto se desassocia (Figura 4.13).
Poro
Lmina nuclear
Cromatina
Membrana nuclear interna
Membrana nuclear externa
Fosforilao
Prfase
Ncleo interfsico
Fim da telfase
Cromatina
Desfosforilao
Incio da telfase
Vesculas de membrana interna
Cromossomo
Lamina B fosforilada
P
P
P
P P
P
P
P
P
P
P
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 74
A incorporao dos componentes do complexo do poro ao
envoltrio um fenmeno ainda menos conhecido. Durante muito
tempo se sups at que os complexos do poro permaneciam ntegros
durante a mitose. Hoje, j se sabe que os complexos do poro se
desorganizam e que alguns de seus componentes tm anidade pela
prpria cromatina. Alguns pesquisadores formularam a hiptese de
que os componentes do complexo do poro podem mesmo ajudar na
reorganizao do prprio envoltrio.
E agora? Salve-se quem puder!
Depois que o envoltrio nuclear se reestruturou nas clulas-lhas,
os ambientes nuclear e citoplasmtico voltam a se separar. E as protenas
que estavam no ncleo antes da mitose? Ser que conseguiram correr para
dentro do ncleo das clulas-lhas antes que o envoltrio se fechasse?
E se no conseguirem, sero degradadas? Que desperdcio!
Mas espere a! Elas no tinham mantido a seqncia de localizao
nuclear (NLS) porque esta cava no meio da cadeia? Puxa, que alvio!
Ento s usar a NLS e passar por um complexo do poro de novo!
CONCLUSO
Vimos que o envoltrio nuclear uma estrutura altamente complexa e dinmica.
Os complexos do poro regulam a passagem de protenas do citoplasma para o
ncleo e dos mRNA na direo oposta.
Como em muitas clulas, o envoltrio se desorganiza durante a mitose, protenas
de localizao nuclear cam dispersas no citoplasma durante essa fase, mas so
capazes de reentrar no ncleo (de uma das clulas-lhas) passando atravs de
um complexo de poro graas presena de uma seqncia de localizao nuclear
(NLS) no meio de sua cadeia peptdica.
CEDERJ 75
A
U
L
A

4
M

D
U
L
O

1
R E S UMO
O envoltrio nuclear formado por duas membranas concntricas separadas
pelo espao perinuclear e sustentadas no lado nuclear pela lmina nuclear.
Os lamentos da lmina so formados por protenas chamadas laminas.
As laminas tm um papel importante na manuteno da forma
e do tamanho do ncleo.
O envoltrio nuclear possui complexos do poro estruturados que atravessam
as duas membranas nucleares, estabelecendo uma comunicao direta entre
os ambientes citosslico e nuclear.
A estrutura de cada poro formada por trs anis (citoplasmtico, mediano
e nuclear), longas brilas envolvidas com o reconhecimento das molculas que
podero atravessar o poro e outros lamentos que se prendem ao anel distal,
formando a cesta nuclear.
Os complexos do poro mantm abertas passagens diretas entre os ambientes
citoplasmtico e nuclear. Existem mecanismos de transporte especializados,
tanto para promover a passagem de molculas maiores do que o poro quanto
para barrar a passagem de molculas menores.
A seqncia de localizao nuclear (NLS) corresponde menor seqncia de
aminocidos necessria e suciente para a entrada no ncleo. Entretanto, em cada
protena nuclear, h variaes na seqncia e esta no est na ponta da cadeia.
Protenas de localizao citoplasmtica, como a actina, possuem uma
seqncia de excluso nuclear (NES).
As protenas atravessam o complexo do poro em sua conformao nativa.
Os mesmos poros so utilizados para a entrada de protenas e a sada de RNA.
A entrada de protenas no ncleo e tambm a sada de RNA dependem
de GTP e de sua associao com co-fatores as carioferinas e as Ran que
respectivamente ligam e hidrolisam o GTP.
Durante a mitose, a fosforilao de laminas e protenas do complexo do poro
leva ao desmonte do envoltrio nuclear: as laminas do tipo A cam solveis no
citoplasma, mas as do tipo B continuam presas ao seu receptor nas vesculas de
membrana nuclear interna. O complexo do poro tambm se desassocia.
A recomposio do envoltrio nuclear depende da desfosforilao das
protenas envolvidas. As protenas de localizao nuclear so reconduzidas ao
novo compartimento nuclear graas s seqncias NLS.
BIOLOGIA CELULAR II | Transporte ncleo-citoplasma
CEDERJ 76
EXERCCIOS
1. Quais so os componentes do envoltrio nuclear?
2. Quais so as caractersticas da membrana nuclear externa?
3. Quais so as caractersticas da membrana nuclear interna?
4. O que lmina nuclear? Qual a sua funo?
5. O que so complexos do poro?
6. O que seqncia de localizao nuclear?
7. Por onde as protenas que tm seqncia de localizao nuclear entram
no ncleo?
8. Por onde as molculas de mRNA saem do ncleo?
9. Por que se pode dizer que o transporte entre ncleo e citoplasma vetorial?
10. O transporte entre ncleo e citoplasma consome energia?