Qu es la Ingeniera Gentica?

De los genes a la ingeniera gentica

Cuando los cientficos comprendieron la estructura de los genes y cmo la informacin que
portaban se traduca en funciones o caractersticas, comenzaron a buscar la forma de
aislarlos, analizarlos, modificarlos y hasta de transferirlos de un organismo a otro para
conferirle una nueva caracterstica. Justamente, de eso se trata la ingeniera gentica, que se
podra definir como un conjunto de metodologas que permite transferir genes de un
organismo a otro y expresarlos (producir las protenas para las cuales estos genes codifican)
en organismos diferentes al de origen. El ADN que combina fragmentos de organismos
diferentes se denomina ADN recombinante. En consecuencia, las tcnicas que emplea la
ingeniera gentica se denominan tcnicas de ADN recombinante. As, es posible no slo
obtener protenas recombinantes de inters sino tambin mejorar cultivos y animales. Los
organismos que reciben un gen que les aporta una nueva caracterstica se denominan
organismos genticamente modificados (OGM) o transgnicos. A su vez, la ingeniera gentica
es lo que caracteriza a la biotecnologa moderna que implementa estas tcnicas en la
produccin de bienes y servicios tiles para el ser humano, el ambiente y la industria.

Etapas para la obtencin de un organismo transgnico
La siguiente tabla resume los pasos bsicos de la ingeniera gentica empleados para
transformar un organismo, y se ejemplifica con un caso concreto:

Metodologa Caso: obtencin de maz Bt que produce una protena
recombinante que le confiere resistencia a determinados
insectos.
1. Identificar un carcter deseable en el organismo
de origen.
1. Identificar el carcter resistencia a insectos en el
organismo de origen, la bacteria del suelo Bacillus
thuringiensis (Bt)
2. Encontrar el gen responsable del carcter deseado
(gen de inters), aislarlo y caracterizarlo.
2. Encontrar al gen que lleva las instrucciones para esta
caracterstica, aislarlo y caracterizarlo.
3. Combinar dicho gen con otros elementos necesarios
(vector) para que ste sea funcional en el
organismo receptor.
3. Combinar este gen con otros elementos genticos para
que sea funcional en una planta: especialmente una
secuencia promotora (y ligarlo a un vector adecuado para
transformar plantas).
4. Transferir el gen de inters, previamente
introducido en el vector adecuado, al organismo
receptor.
4. Transferir este gen a clulas de maz (organismo
receptor).
5. Crecer y reproducir el organismo receptor, ahora
modificado genticamente.
5. Identificar las clulas de maz que recibieron el gen
(clulas transformadas) y regenerar, a partir de estas
clulas, una planta adulta resistente a insectos.






Tcnicas de Ingeniera Gentica o del ADN Recombinante
La obtencin de un organismo transgnico mediante tcnicas de ingeniera gentica implica la
participacin de un organismo que dona el gen de inters y un organismo receptor del gen que
expresar la nueva caracterstica deseada. Por ejemplo, para el caso particular de la
produccin de una variedad de maz que resista el ataque de insectos, el organismo dador es la
bacteria del suelo denominada Bacillus thuringiensis (Bt) de la cual se extrae el gen que
determina la sntesis de la protena insecticida, y el organismo receptor del gen es la planta
de maz. Las etapas y tcnicas involucradas en este proceso seran:

1. Corroborar que existe un gen que codifica para la caracterstica de inters. Cuando se
encuentra una caracterstica en un organismo que resulta interesante para transferir a
otro organismo debe verificarse que es producto de un gen. Se identifica el gen de inters
por medio de cruzamientos a partir de una caracterstica que se expresa, y se verifican las
proporciones mendelianas. Si la caracterstica se atribuye a una protena, que es producto
directo de un gen, ser ms sencillo transferir esa caracterstica a un organismo que no la
tiene.

2. Clonar el gen de inters. Clonar un gen significa tenerlo puro en el tubo de ensayos, o
mejor an, dentro de un vector (una molcula mayor de ADN que permite guardar
fragmentos de ADN en forma estable y prctica por ms tiempo). La tarea de clonar un
gen involucra varias tcnicas: i) Extraccin de ADN; ii) Bsqueda de un gen entre la
mezcla de genes del ADN; iii) Secuenciacin; iv) Construccin del vector recombinante. El
ADN de inters se inserta en plsmidos-vectores que son molculas de ADN lineales o
circulares en las cuales se puede guardar (clonar) un fragmento de ADN. Los ms usados
son los plsmidos de origen bacteriano.























Los plsmidos pueden extraerse de las bacterias e incorporarse a otras, a travs del proceso de
transformacin. Los plsmidos fueron modificados por los investigadores para ser empleados como
vectores (vehculos). As, el gen de inters puede insertarse en el plsmido-vector e incorporarse
a una nueva clula.

El desarrollo de estas tcnicas fue posible en gran medida por el descubrimiento de las
enzimas de restriccin. Las enzimas de restriccin reconocen secuencias determinadas en
el ADN. De esta manera, conociendo la secuencia de un fragmento de ADN, es posible
aislarlo del genoma original para insertarlo en otra molcula de ADN. Hay muchas enzimas
de restriccin obtenidas a partir de bacterias y que sirven como herramientas para la
ingeniera gentica.














Las enzimas de restriccin reconocen secuencias de 4, 6 o ms bases y cortan generando
extremos romos o extremos cohesivos. Estos extremos, generados en diferentes molculas de
ADN, pueden sellarse con la enzima ADN ligasa y generar as una molcula de ADN nueva,
denominada recombinante.

Para tener gran cantidad y fcil disponibilidad del ADN de inters, el vector se inserta
dentro de bacterias (E. coli), las cuales crecen fcil y rpidamente. O sea, la bacteria se
utiliza como multiplicadora del vector, y por ende del inserto de inters. Esta es una etapa
de amplificacin del ADN para poder tener gran cantidad para secuenciarlo, caracterizarlo,
y luego poder hacer con l ADN recombinante.









En placas de Petri se cultivan las bacterias. Se originan colonias de bacterias iguales (clones).
Las bacterias transformadas, que incorporaron el plsmido y el gen de inters, se seleccionan por
medio de antibiticos y por reacciones con indicadores de color.


3. Caracterizar el gen de inters. A partir de conocer la secuencia del gen se puede,
mediante bioinformtica, comparar esta secuencia con las de genes ya conocidos para
determinar a qu gen se parece, y se le asigna una posible funcin. Una vez predicha la
funcin del gen clonado por medio de anlisis informtico, se debe proceder a confirmar la
funcin real in vivo, o sea corroborar que en un sistema biolgico funciona acorde a lo que
se prev. Para ello se suele transferir el gen a un organismo modelo, en el cual se pueda
expresar el gen y medir su funcin. En el ejemplo del maz, el gen Bt se puede transferir
primero a las especies modelo Arabidopsis thaliana y Nicotiana tabacum.

4. Modificar el gen de inters. Si as se desea se puede agregar, deletar o mutar secuencias
dentro de la regin codificante, y agregar secuencias (promotor, terminador, intrones)
para que se pueda expresar en el sistema de inters. Por ejemplo: si se clona un gen Bt de
una bacteria para luego ponerlo en maz, se debe agregar un promotor que funcione bien en
plantas, es decir, que permita que las clulas vegetales expresen la protena Bt. El
promotor es una regin fundamental del gen ya que determina cundo y dnde se expresar
el gen.
















EPGRAFE: Inserto preparado para ser transferido.


5. Transformacin de un organismo con el gen de inters. Una vez hecha la construccin
gentica con el gen y promotor deseado, se elige el mtodo de transformacin ms indicado
para el organismo que se desea hacer transgnico.

6. Caracterizacin del OGM. Una vez obtenido el OGM, se lo analiza desde el punto de vista
molecular y biolgico. Para el anlisis molecular se debe demostrar, entre otras cosas, si tiene
una (o ms) copias del transgn, y cmo y en qu tejidos se expresa el gen. Para analizar en
qu tejido, momento y cantidad se expresa el gen se analiza la presencia del ARN mensajero y
de la protena recombinante codificados por el transgn. Para la caracterizacin biolgica, el
OGM se analiza desde el punto de vista del objetivo (en este ejemplo, si el maz resulta
efectivamente resistente a los insectos) y desde el punto de vista que sea necesario acorde al
OGM en cuestin. Si ser utilizado como alimento y se lo cultivar a campo, entonces se
deber hacer el anlisis de riesgo alimentario y ambiental.

Hasta el momento se ha utilizado la ingeniera gentica para producir, entre otras
aplicaciones:
Vacunas, por ejemplo contra la hepatitis B
Frmacos, como la insulina y la hormona del crecimiento humano, tanto en clulas
transformadas y crecidas in vitro como en bacterias recombinantes y animales
transgnicos
Enzimas para disolver manchas, como las que se usan en los detergentes en polvo,
mayormente por medio de microorganismos recombinantes (transgnicos) que crecen
en biorreactores.
Enzimas para la industria alimenticia, como las empleadas en la elaboracin del queso y
en la obtencin de jugos de fruta, entre otras.
Plantas resistentes a enfermedades, entre otras caractersticas.
Gen principal
Promotor
para el gen
principal
Terminador para el
gen principal

Promotor para el
marcador selectivo

Marcador selectivo
Terminador para el
marcador selectivo
Plsmido
vector
con puntos de
insercin,
marcador de
resistencia a
antibiticos






ACTIVIDAD 1. Repaso de conceptos
A continuacin se presentan pares de trminos. Redactar para cada par de conceptos un
breve texto (entre 5 y 8 lneas) en el cual ambos conceptos estn relacionados.
a. ingeniera gentica / genes
b. ADN recombinante / transgnico
c. Clonar / plsmido
d. ADN / enzimas de restriccin
e. Maz Bt / protena recombinante

ACTIVIDAD 2. Interpretacin de esquemas
Se presentan tres esquemas, de lo ms general a lo ms especfico, para interpretar la informacin que
aportan, y comprender la relacin que existe entre los tres esquemas.
Analizar cada esquema y responder a las consignas:

Esquema 1


a. Qu representa el esquema?
b. Cul es la caracterstica que se transfiere de un organismo a otro?
c. Qu componente celular se transfiere de un organismo a otro?
d. Qu caractersticas presenta el organismo que aporta el rasgo deseado?
e. Qu ventaja podra representar obtener un cultivo de maz con esta nueva caracterstica?
f. Quin se vera beneficiado con este nuevo cultivo transgnico? Por qu?

Esquema 2



a. Qu representa el esquema?

1
2
3
4




b. Ubicar en los nmeros del esquema los siguientes conceptos: extraer el ADN; transformacin de
clulas; clonar el gen; modificar el gen de inters; cultivo de OGM.

Esquema 3
a. Explicar qu representa el esquema.
b. Indicar qu etapa representa cada nmero.





1
2
3
4
5