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AO ANTIMICROBIANA DO LEO DE MELALEUCA

(Melaleuca alternifolia)

GARVIL, Mariana Pacifico (UNITRI) Correspondncia:
mariana_unitri@hotmail.com
ROSA, Gisele Arajo Alvarenga (Unitri) giselealvarenga.udi@hotmail.com
SILVA, Rayane Borges da (UNITRI) rayanne.ura@hotmail.com
SILVEIRA, Aline Pacheco (UNITRI) alinepacheco.s@hotmail.com)


Resumo: A fitoterapia utilizada pela humanidade h muitos anos,
infelizmente ficou esquecida por um tempo devido ao surgimento de novos
frmacos quimicamente sintetizados, mas nos ltimos anos vem novamente
ganhando fora, e sendo preferida por mdicos e pacientes. O fenmeno da
resistncia bacteriana se tornou um problema de sade pblica, como
consequncia aumentou as pesquisas em torno de melhores frmacos para o
combate das infeces, principalmente os antimicrobianos oriundos de plantas
medicinais. O leo essencial das folhas da Melaleuca alternifolia j usado h
vrias dcadas, e ultimamente tem sido muito estudado devido ao seu efeito
antimicrobiano e antifngico. O objetivo desse trabalho foi comprovar a
atividade antimicrobiana do leo atravs da formao de halos de inibio
satisfatrios. Foi testada a eficcia do leo de Melaleuca contra cepas de
Staphylococcus aureus e Escherichia coli, usando o mtodo de antibiograma
proposto na Farmacopia Brasileira, 5 edio, parte 1.. Os resultados obtidos
foram favorveis a ao antimicrobiana, pois no houve crescimento bacteriano
de nenhuma das duas espcies nos locais onde havia presena do leo. Dessa
forma o leo de Melaleuca confirma as expectativas como um timo agente
antimicrobiano de amplo espectro.

Palavras-chave: fitoterapia, leo de Melaleuca, antimicrobianos, antibiograma,
resistncia bacteriana.














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INTRODUO:
Desde os primrdios das civilizaes, os vegetais so usados como
alimentos e fonte dos nutrientes necessrios vida, e tambm como fonte
medicamentosa. Vrias enfermidades podem ser tratadas a partir de chs,
sucos, tinturas, cataplasmas, unguentos, e outros, todos preparados com
plantas medicinais. A indicao do uso de fitoterpicos no tem por finalidade
substituir medicamentos registrados e j comercializados, ao contrrio disso,
vem para aumentar as opes teraputicas dos profissionais da sade,
oferecendo medicamentos equivalentes, tambm registrados, muitas vezes
mais baratos, com espectro de ao mais adequado, e podendo ser nica
escolha para o tratamento ou para complementar as medicaes j existentes.
Alm disso, o emprego crescente das plantas como medicamentos valoriza as
tradies e crenas populares e ainda fornece matrias-primas para as
indstrias farmacuticas de cada regio ou pas (VOLPATO, 2005).
Nas civilizaes, as plantas so pesquisadas com a finalidade
alimentcia, medicamentosa ou cosmtica. O conhecimento da fitoterapia vem
persistindo por muitas dcadas. Utilizadas no tratamento de diversas doenas,
as plantas que no somente contribuem para a produo industrial de
derivados qumicos puros, mas tambm parte de extratos ou compostos
fitoterpicos fazem parte da ao benfica das plantas contra as enfermidades
(TESKE, 2001)
As doenas infecciosas continuam a ser grande causa de morbidade e
mortalidade no mundo todo, mesmo com todos os avanos tecnolgicos e
cientficos. Um dos principais motivos do destaque dessas doenas a
capacidade dos micro-organismos de adquirir mecanismos de resistncias aos
antimicrobianos. A maior busca por substncias com atividade antimicrobiana
tem dado ateno para os produtos naturais e, entre eles, os derivados das
plantas superiores vm despertando a investigao para o potencial da flora
brasileira (AYRES; BRANDO et al., 2008).
Os leos essenciais extrados de plantas apresentam atividade
antimicrobiana contra um grande nmero de bactrias, incluindo algumas
espcies resistentes a antibiticos e antifngicos. A composio qumica
desses leos varia dependendo do clima, da estao do ano, das condies
geogrficas, perodo de colheita e a tcnica de destilao empregada. Os leos
essenciais podem apresentar ao contra bactrias Gram-positivas e Gram-
negativas, e ainda contra leveduras e fungos filamentosos (BERTINI et al.,
2005)
O leo essencial das folhas da Melaleuca alternifolia, tambm conhecido
como leo de Tea Tree, tem uma longa histria como anti-sptico de uso
tpico. Recentemente ganhou uma reputao como anti-sptico seguro, eficaz
e natural. Isso gerou um ressurgimento de sua popularidade e atualmente
incorporado como antimicrobiano principal ou como conservante natural em
produtos farmacuticos e cosmticos de uso externo (COX, et al., 2000). Alm
disso, o leo reduz a taxa de reproduo de patgenos (bactrias, fungos,
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vrus), e intensifica a resistncia contra esses agentes agressores, por esse
motivo til nas afeces do couro cabeludo, como a caspa, e de pele, como a
acne (TESKE; TRENTINI, 2001)
A Fitoterapia originada da unio de dois radicais gregos: phyton, que
significa planta, e therapia, tratamento. a teraputica caracterizada pelo
uso de plantas medicinais em suas diferentes formas farmacuticas, sem a
utilizao de substncias ativas isoladas, ainda que de origem vegetal
(BRASIL, 2006). Segundo Dippolito et. al (2005) as plantas medicinais
respondem, hoje, por 20 a 24% do total das prescries mdicas em pases
desenvolvidos; nos pases em desenvolvimento, a participao de plantas
medicinais no arsenal teraputico alcana 80%. Elas representam uma rea
em intensa expanso, sendo utilizadas como matria-prima para extratos ou
mesmo para isolamento de substncias naturais puras. Os extratos purificados
ou padronizados possuem grande importncia, pois estes possibilitam melhor
caracterizao analtica e atendem melhor aos requisitos de qualidade, eficcia
e segurana, que so exigidos de medicamentos tanto naturais quanto
sintticos.
A primeira obra escrita sobre o uso de plantas como medicamentos a
Pen Tsao (A Grande Fitoterapia), de origem chinesa, escrita por Shen Nung,
datada do ano de 2800 a.C. Antigos papiros egpcios demonstram que aps o
ano 2000 a.C. muitos mdicos j utilizavam as plantas com finalidade
medicamentosa e tambm j consideravam as doenas como consequncias
de fenmenos naturais e no mais como aes de foras ocultas malficas. No
Papiro Ebers, de cerca de 1500 a.C. foram listadas aproximadamente 700
diferentes drogas, dentre elas, extratos vegetais, metais e venenos de animais.
Ainda neste papiro foram mencionadas frmulas para tratar doenas j
conhecidas, e algumas espcies que constam nesse escrito so utilizadas por
fitoterapeutas at hoje (TOMAZZONI et. al, 2006)
Entretanto foram os gregos, e depois deles os romanos, que herdaram e
aprimoraram os conhecimentos deixados pelo povo egpcio. Hipcrates
elaborou um conjunto de tratados que levou o nome de Corpus Hipocraticum,
nessa obra ele descreve um remdio de origem vegetal e um tratamento
especfico para cada enfermidade. O grego Galeno criou o que at hoje
chamada de farmcia galnica, nessa modalidade farmacutica as matrias-
primas vegetais so usadas em preparaes, onde so usados lcool, vinagre
ou gua como solventes e tambm como conservantes ou ainda para melhorar
a concentrao dos ativos de cada planta, e dessa forma passaram a utiliz-las
na preparao de emplastros, unguentos e etc (TESKE; TRENTINI, 2001)
No incio da Era Crist, o tambm grego Dioscrides criou a De Matria
Mdica, nessa obra ele catalogou cerca de 600 diferentes espcies vegetais
utilizadas como medicamentos e ainda descreveu a finalidade teraputica de
muitas delas. Esta obra foi de extrema importncia, pois foi a principal
referncia ocidental em relao s plantas medicinais at o Renascimento
(TOMAZZONI et. al, 2006)
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Aps a primeira Grande Guerra, os avanos na sntese de
medicamentos geraram uma queda do uso das plantas medicinais para o
tratamento das enfermidades. A partir das ltimas dcadas do sculo XX,
observa-se uma mudana nesse quadro, e um retorno do uso de produtos
naturais. Esse fato deve-se a vrios fatores, como os graves efeitos
secundrios associados ao uso de medicamentos sintticos; o aumento da
prtica da automedicao, assim como suas graves consequncias; o
desenvolvimento de novas formas de preparao e administrao das frmulas
naturais; um maior conhecimento qumico, farmacolgico e clnico das plantas
medicinais; o desenvolvimento de novos mtodos analticos para melhor
garantia da qualidade; a preferncia dos consumidores por produtos naturais
em vrias reas do mercado (p. ex. sade, alimentao, vesturio)
(DIPPOLITO et.al., 2005)
Para que a planta alcance a sua ao medicinal com xito necessrio
que ela passe por tratamentos para que se obtenham os ativos derivados com
ao especfica. Vrias preparaes podem ser feitas com uma mesma planta,
ou at mesmo com a mesma parte de uma planta, mas alguns pontos devem
ser levados em considerao como o modo de preparo, propriedades fsicas,
concentrao dos princpios ativos e propriedades farmacolgicas, finalidade,
etc (TESKE; TRENTINI, 2001).
Os cocos Gram-positivos so divididos em duas classes, os aerbios ou
facultativos, e os anaerbios. Na classe dos aerbios fazem parte os gneros
Staphylococcus e Streptococcus. Dentre os Staphylococcus temos o S. aureus
que uma bactria encontrada em pessoas saudveis, mas quando presente
em determinados rgos pode causar infeco, a mais comum delas o
furnculo. Quanto aos anaerbios que possuem importncia clnica podemos
citar os gneros Peptococcus e Peptostreptococcus, todas as suas espcies
fazem parte da flora normal humana, mas podem desencadear infeces em
algumas condies especiais. Nesse trabalho iremos dar nfase ao estudo da
espcie Staphylococcus aureus, que foi uma das espcies utilizadas para
realizao dos testes (TRABULSI, 2004)
Os Staphylococcus so cocos Gram e catalase positivos, tem
aproximadamente 0,5 a 1,5m de dimetro, so imveis, no-esporulados e,
em sua maioria, no-encapsulados. Os Staphylococcus podem apresentar-se
isolados, aos pares, em cadeias curtas, ou agrupados de forma irregular, com
aspecto semelhante a um cacho de uva. A sua forma de apresentao
depende da sua diviso celular, que ocorre em trs planos perpendiculares
(SANTOS et. al., 2007)
O S. aureus o agente mais comumente encontrado em infeces
pirognicas, seja na pele ou em regies mais profundas. As doenas
provocadas por esse micro-organismo variam de infeces simples, como
furnculos, acne e celulite; at infeces severas, como osteomielite,
pneumonia, endocardite, meningite, entre outras. Alm de infeces
pirognicas, o S. aureus pode causar vrios tipos de intoxicaes, durante um
processo infeccioso ou no, so exemplos de intoxicaes causadas pelo
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mesmo: doena de Ritter, intoxicao alimentar e choque txico da mulher
menstruada (SANTOS et al., 2007; TRABULSI, 2004)
O diagnstico de infeces estafiloccicas feito a partir do isolamento
do micro-organismo em meios de cultura comuns, e depois feita sua
identificao a partir da prova de coagulase e pelo teste de sensibilidade
novobiocina. A espcie S. aureus naturalmente sensvel s penicilinas,
cefalosporinas, eritromicinas, aminoglicosdeos, tanto por contato direto com
um indivduo infectado, ou mesmo por contato indireto, atravs de objetos,
roupas, etc.
O S. aureus encontrado nas fossas nasais, pele, garganta e intestinos
de indivduos desde recm- nascidos at adultos. Sua colonizao destes
locais geralmente no possui nenhuma sintomatologia, mas em alguns casos
pode desenvolver infeces, principalmente se essas reas estiverem
comprometidas por trauma ou cirurgia. Normalmente as infeces
estafiloccicas so leves, mas podem se agravar em pacientes que estejam no
ps-operatrio, recm-nascidos e portadores de doenas como cncer e
diabetes. Esse um dos motivos que explicam o fato de que as formas mais
severas desse tipo de infeco so adquiridas em hospitais (SANTOS et al.,
2007; TRABULSI, 2004)
A grande capacidade infecciosa desse micro-organismo deve-se sua
facilidade de multiplicao e disseminao, e tambm produo de molculas
com alto poder patognico, dentre elas, as enzimas e toxinas. So exemplos
de enzimas produzidas para aumentar a patogenicidade dessas bactrias, as
betalactamases, coagulases, catalases, lpases, estearases, entre outras.
Dentre as toxinas de importncia produzidas por esse patogeno temos a
leucocidina; alfa, beta e gama toxinas; a esfoliatina; as enterotoxinas e a toxina
do choque txico (SANTOS et. al., 2007)
Entre os bacilos Gram-negativos aerbios ou facultativos destaca-se a
famlia Enterobacteriaceae, dentre elas podemos citar os gneros Escherichia,
Shigella, Salmonella, Proteus e outros. As principais causadoras de infeces
hospitalares e de infeces que atingem a populao levando hospitalizao
so as enterobactrias. Em estudos realizados nos laboratrios clnicos de
hospitais, foi comprovado que mais de 60% das bactrias isoladas eram da
famlia Enterobacteriaceae. Os bacilos Gram-negativos anaerbios so
geralmente habitantes da flora normal, mas em certas condies podem causar
severas infeces, so exemplos desse grupo os gneros Bacteroides e
Fusobacterium (TRABULSI, 2004). Dentro do presente trabalho os bacilos
Gram-negativos que possuem destaque e que sero estudados mais
profundamente so os do gnero Escherichia.
A Escherichia coli comprovadamente um patgeno causador de
infeces entricas e extra-intestinais, sendo um agente de amplo espectro em
infeces invasivas no homem. Levando em considerao as caractersticas de
patogenicidade, o efeito em determinadas clulas e nos grupos sorolgicos,
foram classificados nove grupos de E. coli virulentos: E. coli enteroagregativa
(EaggEC), E. coli enterohemorrgica (EHEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E.
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coli enteropatognica (EPEC), E. coli enterotoxignica (ETEC), E. coli que
adere difusamente (DAEC), E. coli uropatognica (UPEC), E. coli de meningite
neonatal (NMEC) e E. coli patognica para aves (APEC) (SILVA, et. al., 2011)
A espcie E. coli abrange um grande nmero de grupos e tipos sorolgicos, os
quais so identificados por meio de anti-soros devidamente preparados contra
os trs antgenos presentes nessa espcie, os antgenos O, K e H (TRABULSI,
2004)
A E. coli um dos habitantes mais encontrados no trato intestinal, e
provavelmente o organismo mais familiar da microbiologia. Sua presena na
gua e nos alimentos um importante indicador de contaminao fecal. A E.
coli no naturalmente patognica, mas, pode ser uma causa comum de
infeces do trato urinrio, e certas linhagens produzem enterotoxinas que
comumente causam diarreia e ocasionalmente causam graves doenas
alimentares (TORTORA et al., 2003)
Segundo Trabulsi (2004), a E. coli a causa mais comum de infeco
urinaria, sendo responsvel por 90%, ou mais, das infeces adquiridas na
comunidade. A infeco urinria causada pela E. coli, normalmente se d pela
via ascendente, ou seja, as bactrias presentes nas fezes colonizam a uretra e,
aps, as vias urinrias superiores.
A partir das ltimas dcadas, o desenvolvimento de frmacos para o
controle de diversas doenas cresceu em grande nmero, dentre esses
frmacos esto os antimicrobianos, que evoluram e contriburam para reduo
dos quadros de morbidade e mortalidade causados por doenas infecciosas.
Juntamente com o crescimento da tecnologia acerca desses frmacos, surgiu o
fenmeno de resistncia dos micro-organismos aos antimicrobianos. A
resistncia aos antimicrobianos reduz as opes teraputicas para tratamento
das infeces, tornando-se um grave problema de sade pblica e fazendo
com que o tratamento e subsequente cura dessas enfermidades sejam mais
difceis de alcanar (SILVEIRA et al., 2006)
J no ano de 1905, durante a observao de culturas de tripanossomas
africanos que estavam sendo tratados com arsnico, ou corantes especficos,
notou-se que alguns indivduos de uma mesma populao resistiam ao
tratamento, sobrevivendo mesmo na presena das substncias que deveriam
combat-los (TAVARES, 2000). Aps a Segunda Guerra Mundial surgiram as
primeiras cepas de bactrias Gram-positivas no-sensveis a penicilina, devido
ao uso extensivo do frmaco nessa poca. Nos anos seguintes a esse episdio
foram lanados diversos frmacos como a meticilina, as cefalosporinas,
tetraciclinas e eritromicinas, na tentativa de cobrir a falha causada pela
resistncia aos antibiticos penicilnicos que, at ento, eram os principais
medicamentos usados no combate das infeces. Porm, esses novos
frmacos acabaram tornando-se tambm limitados devido ao desenvolvimento
de resistncia de diversas cepas bacterianas a essas substncias (SILVEIRA
et al., 2006). Na atualidade, o fenmeno da resistncia est presente em
praticamente todas as espcies de bactrias, sendo possvel conhecer os
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mecanismos de aquisio dessa resistncia e os mecanismos de manifestao
da mesma.
A resistncia aos antimicrobianos um fenmeno gentico, onde o
micro-organismo possui genes que codificam diversos mecanismos
bioqumicos com a finalidade de inibir a ao do frmaco. Esses mecanismos
genticos de resistncia podem ocorrer atravs de resistncia inerente ou
intrnseca, quando h presena de genes que proporcionam resistncia do
micro-organismo a um determinado antibitico, esses genes podem ser
inativos, ativos e tambm podem ser ativados pelo frmaco especfico. Pode
ainda ser resistente devido a alguma caracterstica intrnseca, como a falta do
stio de ao de um dado antibitico. Ou ainda o micro-organismo pode passar
por mutao gentica, onde essas mutaes e recombinaes genticas
podem gerar a evoluo e multiplicao de um micro-organismo mutante
resistente (OLIVEIRA; SILVA, 2008)
A transferncia de material gentico uma forma de adquirir resistncia
j que as bactrias tm a capacidade de importar e transferir os genes
causadores da resistncia. Esse fenmeno ocorre por trs vias- conjugao: a
bactria ao se reproduzir adquire os elementos de resistncia, tais como
podem ser os plasmdeos ou os transpossons; transformao: no genoma da
bactria, uma parte livre do DNA incorporado e este possui gene de
resistncia; transduo: atravs de um bacterifago, a bactria adquire genes
de resistncia (OLIVEIRA; SILVA, 2008)
Os principais mecanismos bioqumicos de resistncia das bactrias em
relao aos antibiticos so: a sntese de enzimas que inativam o frmaco, a
alterao dos receptores do frmaco, reduo da concentrao do frmaco na
bactria e alterao das vias enzimticas (RANG; DALE, 2007)
Para a preveno de resistncia bacteriana, devido ao grave risco que o
fenmeno traz, foi criada estratgias as quais so: a educao dos
profissionais de sade, a deteco de pacientes sob risco (por meio da cultura
de vigilncia), implementao de isolamento por contato para pacientes
colonizados/infectados, uso de Equipamento de Proteo Individual (EPI), a
higienizao das mos, desinfeco de superfcies, restrio/controle do uso
de antimicrobianos, manuteno de um banco de dados com a identificao de
todos os pacientes colonizados/infectados, alm da educao do paciente e da
reformulao das polticas pblicas (OLIVEIRA; SILVA, 2008)
Agentes Antimicrobianos so aqueles reduzem ou inibem o
desenvolvimento de micro-organismos, em baixas concentraes, so
conhecidos como agentes antimicrobianos. Estes classificam-se em
bactericidas, que matam os micro-organismos; e os bacteriostticos, que
responsvel pela inibio do crescimento das bactrias. Neste grupo esto
inclusos os quimioterpicos que so substncias antimicrobianas produzidas
quimicamente e os antibiticos que so sintetizados naturalmente por alguns
micro-organismo, prejudicando assim outros (VOLPATO, 2005)
Cada agente antimicrobiano manifesta sua atividade de uma maneira
especfica, no geral, esses mecanismos podem ser: leso da parede celular,
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alterao da permeabilidade celular, alterao das molculas de protena e
cidos nuclicos, inibio da sntese de cidos nuclicos.
Os antibiticos esto entre os medicamentos mais prescritos em
hospitais, responsveis por 20% a 50% dos gastos com
medicamentos. Estima-se que o uso inapropriado dos antibiticos gire em torno
de 50% dos casos e vrios estudos apontam os antibiticos como um dos
grupos medicamentosos que mais causam efeitos adversos (LOURO et al.,
2007)
As substncias isoladas de plantas que possuem atividade
antimicrobiana so bem diferentes daqueles obtidos a partir de bactrias,
leveduras e fungos. Ao contrrio dos antibiticos e quimioterpicos, no h
muitos registros na literatura que trata dos possveis mecanismos de ao dos
ativos originrios de plantas. Esses ativos podem atuar ativando enzimas no
metabolismo intermedirio, alterando a ao de inibidores que influenciam os
nutrientes do meio, inferindo nos processos enzimticos em nvel nuclear ou
ribossomal, provocando alteraes nas membranas ou ainda interferindo no
metabolismo secundrio (VOLPATO, 2005)
As espcies da famlia Myrtaceae podem ser encontradas em regies
tropicais e subtropicais, e so divididas em duas subfamlias: Myrtoidea, de
maior ocorrncia na Amrica tropical e Leptospermoideae, encontrada,
principalmente, na Austrlia, Malsia e Polinsia. O gnero Melaleuca,
pertencente subfamlia Leptospermoideae, engloba aproximadamente 100
espcies nativas da Austrlia e Ilhas do Oceano ndico. Melaleuca alternifolia
tambm conhecida na Austrlia como "rvore de ch" (Tea Tree),
florescendo principalmente em solos arenosos s margens de rios (VIEIRA, et
al., 2004)
Antigamente a Melaleuca era considerada uma praga na Austrlia,
sendo arrancada pelas razes pelos fazendeiros. Das suas folhas extrado o
leo de Melaleuca, que possui timas propriedades antimicrobianas. Durante a
2 Guerra Mundial foi de grande importncia, pois era utilizado como parte dos
primeiros socorros que eram dados aos soldados australianos e ingleses
(TESKE; TRENTINI, 2001)
A constituio qumica do leo essencial de M. alternifolia bastante
conhecida, sendo este rico em terpinen-4-ol (29,4-44,9%), este constituinte o
principal responsvel por suas propriedades medicinais, especialmente
antifngicas e antibacterianas (VIEIRA, et al., 2004)
O leo de Melaleuca , em grande parte bactericida, mas, pode ser
bacteriosttico quando usado em baixas concentraes. Suposies sobre seu
mecanismo de ao contra bactrias foram feitas com base na sua estrutura de
hidrocarbonetos e lipofilicidade. Presume-se que o mecanismo de ao envolva
a perda da integridade da membrana e sua funo, podendo levar a perda de
material intracelular, incapacidade de manter a homeostase, e inibio da
respirao. No tem sido relatada resistncia das bactrias ao leo de
Melaleuca, apesar de ser usado como medicamento na Austrlia desde 1920
(CARSON, et al., 2006)
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O objetivo do presente trabalho foi analisar a capacidade bactericida
e/ou bacteriosttica do leo de Melaleuca.


METODOLOGIA:
Este trabalho foi desenvolvido no Laboratrio de Anlises Clnicas do
Centro Universitrio do Tringulo (UNITRI), onde foi realizada toda a parte
prtica do presente estudo, no perodo de 19 21 de outubro de 2011.
Agradecimentos tambm devem ser feitos farmcia Farmativa Manipulaes
que concedeu a amostra de leo de Melaleuca para a realizao deste teste.
A metodologia usada para realizao desse trabalho foi baseada nos
mtodos propostos pela Farmacopia Brasileira, 5 ed. 2011.
Primeiramente foram usados dois tubos de ensaio com soluo salina.
Em um tubo foram colocadas, com o auxlio de ala, colnias de Escherichia
coli e, no outro, colnias de Staphylococcus aureus. As colnias utilizadas
haviam sido previamente cultivadas em laboratrio. Foram adicionadas
colnias soluo salina at obter turvao do lquido mediante comparao
com soluo controle de sulfato de brio. Para a realizao do teste foram
utilizadas quatro placas de petri contendo meio gar Mueller-Hinton.
Na primeira placa, com a ajuda de um swab estril, foram distribudas as
colnias de Escherichia coli anteriormente dispersas na soluo salina. Aps
cobrir todo o gar com as bactrias por mtodo de estrias, foi implantado
usando uma pina flambada e j resfriada, um disco de Ceftriaxona, um disco
de papel-filtro com leo de Melaleuca e uma gota do mesmo leo, mantendo-os
a distncia suficiente para que no houvesse sobreposio dos halos de
inibio.
Na segunda placa foi feito o mesmo processo, s que dessa vez
implantou-se Staphylococcus aureus usando o procedimento usado para a
primeira placa, e foram colocados os discos de Ceftriaxona, de leo de
Melaleuca e a gota do mesmo leo, procurando manter as posies
semelhantes s da primeira placa.
A terceira e a quarta placa foram utilizadas como controles, na terceira
foram colocados apenas o disco de Ceftriaxona, o disco de leo de Melaleuca
e a gota de leo, sem a presena de bactrias, para garantir que nem o disco
de antibitico, nem o leo de Melaleuca estivessem com algum tipo de
contaminao por micro-organismos. J a quarta placa permaneceu apenas
com o meio de cultura, sem bactrias e nem os medicamentos, para tambm
garantir que o prprio meio no estivesse contaminado.
Todas as placas foram levadas para incubao em estufa a 37 C (+ ou
2C) por 24 horas para ento serem observados se houve ou no formao
de zona inibitria pelos medicamentos.

RESULTADOS E DISCUSSO
Aps aproximadamente 24 horas as placas foram retiradas da estufa
para anlise dos resultados. Na primeira placa, onde foram plantadas as
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colnias de Escherichia coli, foi observado que no houve crescimento
bacteriano ao redor dos discos de antibitico, de leo e nem da gota do leo de
Melaleuca, resultados que podem ser observados na Figura 1. Foi feita a
medio dos halos de inibio usando uma rgua comum, em volta do disco de
Ceftriaxona foi formado um halo de 3.000 mm (3 cm), comprovando a eficcia
do antibitico contra os bacilos Gram-negativos. Quanto ao disco de leo de
Melaleuca, no foi obtido um halo perfeito devido baixa viscosidade do
mesmo, que se espalhou facilmente pela placa, mas pde-se observar que no
houve crescimento bacteriano no local onde havia a presena do leo. Mesmo
no formando um halo perfeito foi feita a medio a partir do local onde no se
encontrava mais colnias de bactrias, e a medida obtida foi de 4.000 mm (4
cm) aproximadamente, provando assim que o leo de Melaleuca um
antimicrobiano eficaz contra as bactrias Escherichia coli.

Figura 1: Placas com Escherichia coli.

Na segunda placa, onde foram distribudas as colnias de
Staphylococcus aureus, mostrada na Figura 2, no houve muito crescimento
das bactrias, mas pde-se observar a no aparncia de nenhuma colnia ao
redor dos discos de Ceftriaxona e de leo de Melaleuca, e tambm onde
estava a gota do mesmo leo. O halo de inibio formado pelo disco de
antibitico foi de 5.000 mm (5 cm). Assim como na primeira placa, o disco de
leo de Melaleuca no formou um halo perfeito, acredita-se que tambm
devido ao fato do leo ser fluido, mas foi feita a medio baseada no ponto
onde j no se encontravam colnias bacterianas e a medida encontrada foi de
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aproximadamente 4.000 mm (4 cm), a mesma da placa com Escherichia coli,
confirmando a eficcia da Melaleuca tambm contra os cocos Gram-positivos.

Figura 2: Placa com Staphylococcus aureus.

As placas controle tambm foram analisadas, na placa onde foram
colocados o antibitico e o leo no houve crescimento bacteriano,
comprovando que nem o disco de Ceftriaxona nem o leo de Melaleuca
estavam com algum tipo de contaminao (Figura 3). Na placa controle vazia
tambm no teve aparncia de nenhuma forma bacteriana, comprovando a
esterilidade do meio de cultura (Figura 4).


Figura 3: Placa controle com leo.
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Figura 4: Placa controle sem leo.

O meio de gar Mueller-Hinton o mais recomendado para os testes de
antibiograma, ele contm em sua composio por litro: infuso de carne 300 g;
hidrolisado de casena 17,5 g; amido solvel 1,5 g e gar 10 g; seu pH gira em
torno de 7,2-7,4 aps a esterilizao (FARMACOPIA BRASILEIRA, 2011).
Por esses motivos o meio de Mueller-Hinton foi escolhido para a realizao
dessa pesquisa, e provou realmente ser o meio ideal, promovendo o
crescimento das bactrias e resultados satisfatrios.
A Ceftriaxona uma cefalosporina de terceira gerao, com espectro
voltado principalmente para Gram-negativos (FERRAZ et al., 2003). As
cefalosporinas so usadas para tratar infeces causadas pelos micro-
organismos sensveis. Assim como com outros antibiticos, os padres de
sensibilidade variam geograficamente, e o tratamento com frequncia iniciado
empiricamente. Muitos tipos de infeco podem ser tratados com as
cefalosporinas, incluindo septicemia, pneumonia, meningite, sinusite. Os
compostos de terceira gerao so menos ativos contra as bactrias Gram-
positivas que os de segunda gerao, porm mais ativos contra as bactrias
Gram-negativas, e apresentam alguma atividade contra Pseudomonas (RANG
& DALE, 2007) Na presente pesquisa a Ceftriaxona se mostrou plenamente
eficaz contra as bactrias Gram-negativas, nesse caso Escherichia coli, como
tambm contra as Gram-positivas, nesse trabalho Staphylococcus aureus,
sendo uma boa escolha para base de comparao com o leo de Melaleuca, a
substncia a ser pesquisada.
Os resultados obtidos com o leo de Melaleuca foram satisfatrios,
comprovando a sua eficcia como agente antimicrobiano, tanto contra os
bacilos Gram-negativos, como contra os cocos Gram-positivos. Esse resultado
foi confirmado pela medida do halo de inibio, que provou a sensibilidade das
bactrias frente ao leo de Melaleuca.
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Foram encontradas algumas dificuldades devido fluidez do leo, que,
assim que foi colocado sobre o gar, se espalhou para outras partes da placa,
no permitindo a formao de halo completamente visvel. Esse fato tambm
pode ter sido agravado por no ter se estabelecido um padro da gota de leo,
sendo assim, no se sabia o volume de cada gota e nem a sua concentrao
exata. Mesmo assim foi possvel observar uma grande zona de inibio onde
havia sido colocado o leo de Melaleuca, e tambm medir um suposto halo
tomando-se como ponto de medida o local onde no havia crescido nenhuma
colnia de bactria.

CONCLUSO:
Uma mudana de paradigma no tratamento de doenas infecciosas
necessria, para evitar que antibiticos se tornem obsoletos, e a procura de
alternativas aos antibiticos deve ser considerada. Terapias alternativas so
vistas favoravelmente por muitos pacientes, porque eles no esto muitas
vezes sendo ajudado por terapias convencionais e acreditam que h menos
efeitos colaterais prejudiciais com os medicamentos naturais. Alm disso,
muitos relatam melhoria significativa enquanto estiveram
tomando medicamentos complementares e alternativos. As pesquisas em torno
dessa classe de medicamentos aumentaram o que muito importante devido
ao tambm crescimento da popularidade desses frmacos, a garantia da
qualidade atravs dos estudos cientficos traz mais confiana aos mdicos e
pacientes e ainda valoriza a cultura e as tradies de cada povo.
O fenmeno da resistncia ganhou uma enorme proporo, sendo
considerado um problema de sade pblica e fazendo com que se
intensificassem os estudos para encontrar melhores agentes antimicrobianos,
isso tem feito com que os interesses sejam voltados para os fitoterpicos que
tm provado serem timos frmacos antibiticos e gerado pouca resistncia. A
busca por alternativas que combatam ou minimizem o surgimento de
resistncia a mais e mais frmacos de extrema importncia e deve comear a
partir da conscientizao da populao para o uso correto de antibiticos de
qualquer origem, at as pesquisas sobre novos frmacos e melhorias daqueles
j comercializados.
O leo de Melaleuca j tinha sido por muitas vezes estudado para provar
a sua atividade antimicrobiana e antifngica. O mtodo escolhido demonstrou
ser de boa escolha para esse tipo de pesquisa, no havendo maiores
problemas durante todo o desenvolvimento do trabalho. O mtodo aponta
vantagens como baixo custo para a realizao, demonstrao de bons
resultados, baixas chances de erros operacionais, rapidez de desenvolvimento,
facilidade de interpretao dos resultados, entre outras. Sendo assim, os
objetivos desejados com essa pesquisa foram plenamente alcanados, mesmo
no sendo uma pesquisa avanada, conseguiu-se atravs desta creditar mais
pontos na histria bem sucedida do leo de Melaleuca, que mais uma vez pode
ser considerado um agente seguro e confivel no combate s infeces
bacterianas.
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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:

AYRES, Mariane CC; BRANDO. Marcela S.; VIEIRA JUNIOR, Gerardo M.;
MENOR, Jlio Csar A. S.; SILVA, Hildessandra B.; SOARES, Maria Jos S.;
CHAVES, Mariana H. Atividade antibacteriana de plantas teis e constituintes
qumicos da raiz de Copernicia prunifera. Rev Bras Farmacognosia, v. 18, p.
90-97, 2008.

BERTINI, Luciana Medeiros; PEREIRA, Alexsandra Fernandes; OLIVEIRA,
Carla Loane de Lima; MENEZES, Everardo Albuquerque; MORAIS, Selene
Maia de; CUNHA. Francisco Afrnio; CAVALCANTI, Eveline Solon Barreira.
Perfil de sensibilidade de bactrias frente a leos essenciais de algumas
plantas do nordeste do Brasil. Infarma, v. 17, n. 34, 2005.

BRASIL. Ministrio da Sade. Poltica Nacional de Plantas Medicinais e
Fitoterpicos. Braslia, DF, 2006.

CARSON, C. F.; HAMMER, K. A.; RILEY, T. V. Melaleuca alternifolia (tea tree)
oil: a review of antimicrobial and other medicinal properties. Clinical
microbiology reviews, v. 19, n. 1, p. 50-62, 2006.Disponvel em:
<http://cmr.asm.org/cgi/content/full/19/1/50?eaf>. Acesso em: 28 out. 2011.

COX, S. D.; MANN, C. M.; MARKHAM, J. L.; et. al. O modo de ao
antimicrobiana do leo essencial de Melaleuca alternifolia (tea tree). Journal of
Applied Microbiology, v. 88, p. 170-175, jan. 2000. Disponvel em:
<http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1046/j.1365-2672.2000.00943.x/full>.
Acesso em: 25 out. 2011.

DIPPOLITO, J. A. C.; ROCHA, L. M.; SILVA, R. F. Fitoterapia Magistral: um
guia prtico para a manipulao de fitoterpicos. So Paulo: Editora
Elbergrfica, 2005.

FARMACOPIA BRASILEIRA. Quinta edio, parte I. So Paulo: Atheneu,
2011.

FERRAZ, A. A. B.; ARRUDA, P. C. L. de; et al. Estudo comparativo entre
ampicilina/sulbactam e ceftriaxona na antibioticoprofilaxia de cirurgia
baritrica. Rev Bras Med, v. 60, n. 8, p. 617-21, 2003. Disponvel em:
<http://www.saudeemmovimento.com.br/revista/artigos/rbm/v60n8a5.pdf>.
Acesso em: 23 out. 2011.

LOURO, Estela; ROMANO-LIEBER, Nicolina Silvana; RIBEIRO, Eliana.
Eventos adversos a antibiticos em pacientes internados em um hospital
universitrio. Rev. Sade Pblica, So Paulo, v. 41, n. 6, dez. 2007.
Disponvel em:
15

<http://www.scielosp.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-
89102007000600020http://www.scielosp.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=
S0034-89102007000600020&lng=pt&nrm=iso&tlng=en>. Acesso em: 28 out.
2011.

MUELLER-HINTON Agar (7101). Disponvel em:
<http://www.neogen.com/acumedia/pdf/ProdInfo/7101_PI.pdf>. Acesso em: 23
out. 2011.

OLIVEIRA, Adriana Cristina de; SILVA, Rafael Souza da. Desafios do cuidar
em sade frente resistncia bacteriana: uma reviso. Revista Eletrnica de
Enfermagem, v. 10, n. 1, 2009

RANG, H. P.; DALE, M. M. et al. Rang & Dale Farmacologia. 6. ed. Rio de
Janeiro: Elsevier, 2007.

SANTOS, A. L.; SANTOS, D. O.; FREITAS, C. C. et al. Staphylococcus aureus:
visitando uma cepa de importncia hospitalar. Bras. Patol. Med. Lab, v. 43, p.
413-423, 2007.

SILVA, I. M. M.; EVNCIO NETO, J.; SILVA, R. M. et al. Caracterizao
genotpica dos isolados de Escherichia coli provenientes de frangos de corte.
Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., Belo Horizonte, v. 63, n. 2, abr. 2011. Disponvel
em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0102-
09352011000200010&lang=pt>. Acesso em: 27 out. 2011.

SILVEIRA, G. P.; NOME, F.; GESSER, J. C.; S, M. M. Estratgias utilizadas
no combate resistncia bacteriana. Quim. Nova, Florianpolis, v. 29, n. 4, p.
844-855, 2006.

TAVARES, W. Bactrias Gram-positivas problemas: resistncia do estafilococo,
do enterococo e do pneumococo aos antimicrobianos. Revista da Sociedade
Brasileira de Medicina Tropical, v. 33, n. 3, p. 281-301, mai-jun 2000.

TESKE, M.; TRENTINI, A. M. M. Herbrio compndio de fitoterapia. 4. ed.
Curitiba: Herbarium Lab. Bot. Ltda., 2001.

TOMAZZONI, M. I.; NEGRELLE, R. R. B.; CENTA, M. L. Fitoterapia popular: a
busca instrumental enquanto prtica Teraputica. Texto Contexto Enferm.,
Florianpolis, v. 15, n. 1, p. 115-121, fev 2006.

TORTORA, J. G.; FUNKE, R. B.; CASE, L. C. Microbiologia. 6. ed. Porto
Alegre: Editorial Artemed, 2000.

16

TRABULSI, Luiz Rachid; ALTERTHUM, Flvio. Microbiologia; Microbiology.
2. ed. So Paulo: Editorial Atheneu, 2004.


VIEIRA, T. R.; BARBOSA, L. C. A.; MALTHA, C. R. A.; et al. Constituintes
qumicos de Melaleuca alternifolia (Myrtaceae). Qum. Nova, So Paulo, v. 27,
n. 4, p. 536-539, jul./ago. 2004. Disponvel em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-
40422004000400004&lng=pt&nrm=iso>. Acesso em: 28 out. 2011.

VOLPATO, Ana Marcia de Matos. Avaliao do potencial antibacteriano de
Calendula officinalis (Asteraceae) para seu emprego como
fitoterpico.Curitiba: Universidade Federal do Paran, 2005.