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1. INTRODUCCION

El hgado es la glndula ms grande del cuerpo humano, que recibe aproximadamente
1,5 litros de sangre por minuto y uno de los ms importantes en cuanto a la actividad
metablica que desarrolla en el organismo. Entre sus innumerables funciones se
destacan:1) Almacenamiento de glucgeno; 2) Sntesis de cidos grasos y conversin
a cetonas, formacin de lipoprotenas, colesterol y fosfolpidos; 3) Sntesis de
protenas plasmticas, conservacin y desaminacin de aminocidos y formacin de
urea; 4) Metabolismo y almacn de vitaminas; 5) Sntesis, liberacin y degradacin de
factores de coagulacin; 6) Catabolismo y excrecin de hormonas, 7) Detoxificacin de
sustancias, endgenas, bacteria, sustancias exgenas; 8)Formacin de bilis: secretora
y excretora; 9)Mantenimiento del balance hidroelectroltico y 10) Barrera defensiva por
medio de las clulas del SER.
En la prctica clnica diaria, las mltiples funciones hepticas solo son superadas por
os mtodos bioqumicos diseados para eliminarlos. De forma esquemtica las
pruebas funcionales hepticas se pueden dividir en: a) Pruebas que informan sobre
posible lesin hepatocelular o citolisis; b) Pruebas relacionadas con el metabolismo de
la bilirrubina as como del estasis biliar y c) Pruebas que analizan la sntesis heptica
de sustancias necesarias para el funcionalismo corporal. Generalmente suelen
alterarse varias de estas funciones al mismo tiempo, aunque hay formas aisladas con
afeccin nica.
Entre las pruebas que informan de lesin heptica o citolisis destacan las
transaminasas o aminotransferasas. Estas representan enzimas del metabolismo
intermedio, que catalizan la transferencia de grupos amino del cido asprtico o
alanina al cido acetoglutarico, formando cido oxalactico y cido pirvico. En el
hgado se producen mltiples reacciones de transaminasas con valor clnico son dos:
1) aspartato-aminotransferasa o glutamato oxalacetato transferinasa (ALT o GOT)
cuya vida media es de 48 horas y 2) alanino aminotransferasa o glutamato piruvato
transferasa (ALT o GPT) con una vida media de 18 horas. La ALT es ms especfica
de dao heptico que la AST, debido a que la primera se localiza casi exclusivamente
en el citosol del hepatocito, mientras que la AST adems del citosol y mitocondria, se
encuentra en el corazn, musculo esqueltico, riones, cerebro, pncreas, pulmn,
eritrocitos y leucocitos.
La elevacin srica de transaminasas se correlaciona con el vertido a la sangre del
contenido enzimtico de los hepatocitos afectados, aunque la gradacin de la
elevacin enzimtica puede no relacionarse con la gravedad lesional.
As pues, se puede considerar la enfermedad heptica como la causa ms importante
del aumento de la actividad de la ALT y frecuentemente del aumento de la actividad de
la AST.




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2. MARCO TEORICO

Las transaminasas son enzimas son protenas que catalizan las reacciones qumicas
que se realizan en todas las clulas vivas y son responsables de los procesos
qumicos esenciales a la vida. Una enzima se combina temporalmente con la
sustancia (sustrato) sobre la cual acta para formar un complejo sustrato-enzima que
se rompe para formar los productos de la reaccin y libera a la enzima para continuar
su funcin cataltica.

2.1.1. CONCEPTO
Las Transaminasas son un conjunto de enzimas que catalizan la transferencia de un
grupo amino desde un alfa aminocido a un alfa-cetocido; entre ellas destacan varias
enzimas sricas, especialmente la aminotransferasa asprtica (AST o GOT) y la
aminotransferasa de alanina (ALT o GPT). Constituyen un excelente marcador de
lesin hepatocelular, y participan en la gluconeognesis al catalizar la transferencia de
grupos amino del cido asprtico o alanina del cido alfa cetoglutarato para producir
cido oxalactico y pirvico, respectivamente.
La GOT est presente en las isoenzimas citoslicas y mitocondriales del hgado,
msculos esqueltico y cardaco, rin, cerebro, pncreas, pulmones, leucocitos y
glbulos rojos, es menos especfica y sensible para el hgado. La GTP es una enzima
citoslica que se encuentra en altas concentraciones en el hgado, por lo cual es ms
especfica de este rgano y su misin es la fabricacin de glucosa.

2.2. ASPARTATO AMINO TRANSFERASA (GOT)
Es un enzima de localizacin intracelular que existe en dos formas una mitocondrial
que es la ms abundante y la otra citoplasmtica, su actividad srica en condiciones
normales es baja o nula. Los glbulos rojos contienen diez veces ms TGO. Se
distribuye ampliamente en los tejidos corporales y su concentracin es bastante
elevada en tejidos con actividad metablica alta.

La concentracin de la enzima se encuentra en orden descendente en los siguientes
tejidos: cardiaco, heptico, renal musculo esqueltico y eritrocitos. La enzima existe en
las clulas de pulmn cerebro y pncreas pero en concentraciones menores que en el
suero sanguneo.

La holoenzima del hgado de la AST es un dmero formado por dos subunidades
idnticas con un peso molecular total de 93 Kda y a cada monmero se le une al
menos una molcula de piridoxal-5-fosfato (P-5-P). En todos los rganos, se
encuentra una isoenzima mitocondrial (ASTm) que es una protena claramente
diferente a la citoplasmtica, aunque es tambin un dmero formado por dos
subunidades idnticas con un peso molecular de aproximadamente 90 Kda.

El P-5-P acta como cofactor necesario para las dos transaminasas, se puede
detectar una deficiencia de vitamina B6 si se produce un aumento de los niveles de
estas enzimas cuando se lleva a cabo un tratamiento con vitamina B6.

Debido a su amplia distribucin la TGO se considera una enzima inespecfica de tejido
o de rgano, y por tanto es ms til cuando su concentracin srica se compara con
los valores de varias enzimas sricas diferentes. Una cantidad muy escasa de TGO se
excreta en la bilis debido a la barrera hematobiliar y no se sabe si la pequea cantidad
encontrada en la bilis procede de la sangre o directamente de los hepatocitos.
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Su funcin a nivel celular es catalizar la transferencia reversible de un grupo alfa
amino del amino cido (aspartato) a un alfacetocido (alfa cetoglutrico) como una de
las ms importantes reacciones del metabolismo proteico.


GOT
l- aspartato + -cetoglutarato glutamato +oxalacetato


2.3. ALANINA AMINO TRANSFERASA (GPT)
Es una enzima de origen heptico, la forma mitocondrial constituye el 81% de la
enzima total presente en el hgado humano.

Se eleva en la hepatitis acompaada de necrosis, cirrosis, ictericia obstructiva, cncer
de hgado y congestin heptica secundaria a fallo cardaco. La GPT se encuentra con
mayor frecuencia, pero no de manera exclusiva en el hgado, por ello pocas veces se
ven incrementos sricos sin efectos hepticos. Se requieren lesiones del hgado ms
graves o extensas para causar valores anormales, en el caso de la GOT. Puede
decirse que la prueba de GPT es menos sensible pero mucho ms especfica que la
GOT.

Los tejidos del rin, corazn y musculo esqueltico tienen cantidades significativas de
GPT en orden descendente al indicado. Las concentraciones de GPT suelen retornar a
lo normal antes que las de GOT, probablemente debido a que la mayora de los tejidos
que contienen ambas enzimas tienen, en proporcin, ms GOT que GPT.

Su funcin es catalizar la transferencia reversible de un grupo amino de la alanina al
cido alfa cetoglutrico dando como resultado cido pirvico y cido glutmico en
presencia del activador que es la vitamina B6.

GPT
I-alanina + -cetoglutarato glutamato + piruvato


2.4. HGADO
El hgado es una glndula impar asimtrica, la ms grande del cuerpo, situada en la
parte superior derecha del abdomen, debajo del diafragma, pesa aproximadamente
1500 g. Es un rgano muy vascularizado, efectundose su riego a travs de la vena
porta y la arteria heptica.

La sangre que lleva la vena porta procede del bazo e intestino, mientras que la sangre
arterial procede del tronco celiaco (originado en la arteria aorta abdominal). Dentro del
hgado, estos vasos se subdividen originando una red vascular comn: la sinusoide
heptica.

La sangre sale del hgado por las venas supraheptica derecha e izquierda que
desembocan a su vez, en la vena cava inferior. Los hepatocitos en su citoplasma
contienen glucgeno, su membrana celular reconoce clula a clula y tiene un sistema
de transporte activo de sodio, potasio, glucosa y aminocidos, entre otros compuestos;
en las mitocondrias se produce la oxidacin de metabolitos a C02 y agua, con
produccin de energa (ATP) y el aparato de Golgi se encarga de secretar los
productos de desecho celulares. El parnquima heptico est formado por hepatocitos
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expuestos a la sangre circulante; los mismos que tienen organizacin vascular
formando cordones,
desde una entrada de sangre arteriovenosa hasta la salida venosa.

Esta estructura da dos interpretaciones respecto a la organizacin funcional:
Lobulillo heptico: unidad estructural.
Acino heptico: unidad funcional.
El hgado es el cerebro del metabolismo, con la transformacin bioqumica y la
distribucin molecular de los alimentos que proceden del tracto intestinal
Convierte sustancias nitrogenadas no proteicas en urea.
Es el centro de la sntesis de protenas y lpidos.
Es el rgano productor de la bilis.
Junto con la mdula sea y el bazo, acta en la formacin y regeneracin de la
sangre.
Elimina compuestos potencialmente txicos.
Interviene en el metabolismo de los hidratos de carbono: almacena glucosa en forma
de glucgeno.
Sintetiza cidos grasos a partir de hidratos de carbono y glucosa a partir de
glucgeno.

2.5. PATOLOGA CLNICA DE LA GOT Y GPT
La GOT y la GPT son importantes en la clnica y su aumento se debe a un proceso
necrtico en rganos con alta funcionalidad como lo es el hgado y el miocardio, las
dos enzimas pueden mostrar aumentos considerables (ms de 50 veces las cifras
normales) en las lesiones hepatocelulares agudas y extensas (hepatitis por virus).

2.5.1. Trastornos que lesionan las clulas musculares cardiacas:
Infarto del miocardio: los valores sricos pueden elevarse a 500 U/I (de un rango
normal de 10-40 U/I) en las 24 horas siguientes y retornan a lo normal en un lapso de
4 a 7 das si ya no hay ms dao celular.
Insuficiencia cardiaca congestiva: con frecuencia hay elevacin de los niveles
sricos, pero el grado del aumento vara, de acuerdo a la alteracin heptica
concomitante.
En lesiones hepticas aumentan ambas transaminasas en el suero cuando sobreviene
la mejora clnica ambas descienden en forma paralela y si aparece una recada, las
dos suben nuevamente. Sus modificaciones son muy precoces y se puede hacer el
diagnstico de la hepatitis hasta 3 semanas antes de la aparicin de los sntomas y
signos clnicos.

2.5.2. Trastornos que lesionan los hepatocitos:
Hepatitis viral: las concentraciones sricas son a menudo altas (mayor de 100 U/l), la
elevacin mayor tiene lugar en la etapa pre ictrica.
Hepatitis por ingestin de sustancias txicas: valores sricos de 30.000 U/l se
observan en envenenamiento con tetracloruro de carbono.
Ictericia obstructiva: las elevaciones son relativamente moderadas, por lo general
menos de 300 U/l.
Cirrosis, neoplasia metastsica del hgado y hematomas primarios, que son menos
comunes; todos ellos producen necrosis heptica y un cuadro clnico semejante a la
hepatitis.

2.5.3. Trastornos que lesionan las clulas musculares esquelticas:
Dermatomiositis: se caracteriza por una inflamacin constante de los msculos, que
conduce a descomposicin y atrofia.
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Distrofia muscular progresiva: debido a la lesin celular causada por la sustitucin de
las clulas musculares con tejido adiposo y conjuntivo y a un proceso inflamatorio.

2.5.4. Cualquier trastorno que cause lisis del eritrocito:
Anemias hemolticas: las cuales liberan GOT al suero



2.5.5. Hepatotoxicidad secundaria a la administracin de numerosos frmacos:
Narcticos analgsicos, antibiticos y esteroides.
La disminucin de los valores de transaminasas corresponden a baja nutricin con
piridoxina (vitamina B6) deficiente, a la ingestin de anticonceptivos y en pacientes en
quienes se les practica hemodilisis.
La proporcin TGO/TGP es a menudo menor a 1, en pacientes con lesin
hepatocelular y en las hepatitis alcohlicas este ndice es mayor a 1.

2.6. ENFERMEDADES CON NIVELES SRICOS ANORMALES DE
TRANSAMINASAS

2.6.1. Hemocromatosis
La hemocromatosis hereditaria es una enfermedad gentica muy frecuente
caracterizada por depsito de hierro en distintos rganos como consecuencia de un
trastorno en la absorcin intestinal de hierro. La deteccin de un valor de saturacin de
transferrina mayor a 45% hace sospechar su presencia.

Actualmente es posible una prueba gentica para identificar la mutacin del gen hfe
(C282Y), responsable en muchas ocasiones de la enfermedad. En los casos de
enfermedad heptica crnica, es necesaria la biopsia heptica y la cuantificacin de
hierro.

2.6.2.- Hepatitis Virales
Afecta principalmente a pacientes jvenes, sobre todo mujeres. Analticamente se
caracteriza por la presencia de transaminasas elevadas e hipergammaglobulinemia,
aumenta la IgG e IgM en un 33% en los pacientes, siendo caracterstico de la hepatitis
A un incremento de la Ig M.
La mayor parte de la hepatitis viral aguda en nios y adultos se debe a uno de los
siguientes agentes: virus de la hepatitis A (VHA) agente etiolgico de la hepatitis B
(VHB) y de la hepatitis C (VHC).

2.6.3. Beri Beri
Es la carencia crnica o avanzada de tiamina que afecta el aparato cardiovascular
(beriberi hmedo) o el sistema nervioso (beriberi seco). La tiamina es el precursor del
pirofosfato de tiamina, una coenzima necesaria para varias reacciones bioqumicas
importantes, indispensables para la oxidacin de carbohidratos. Tambin tiene un
papel independiente en la conduccin en nervios perifricos.
La principal carencia de tiamina se debe a alcoholismo. Los alcohlicos crnicos
tienen una ingestin diettica deficiente de esta vitamina y deterioro de su absorcin,
metabolismo y depsito. La carencia de tiamina tambin se relaciona con
malabsorcin, dilisis, nutricin parenteral y otras causas de desnutricin crnica de
protenas y caloras.

2.6.4. Cirrosis alcohlica
Las transaminasas tienen en general un incremento leve de 1 a 2 veces, la
concentracin de GOT aumenta de 3 a 4 veces. En el hgado graso secundario a
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alcoholismo sin cirrosis, el aumento es muy leve, o puede estar en los lmites
normales. La concentracin de GOT es ligeramente superior a lo normal.






3. FUNDAMENTO

La GOT cataliza la siguiente reaccin:
GOT
l- aspartato + -cetoglutarato glutamato + oxalacetato

La GPT cataliza la siguiente reaccin:
GPT
I-alanina + -cetoglutarato glutamato + piruvato

El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma en piruvato),
reacciona con la 2.4-dinitrofenilhidracina producindose en medio alcalino, un
compuesto coloreado que se mide a 505 nm.


4. TECNICA
Llevaremos la reaccin qumica al tubo de ensayo. Para ello haremos uso de
cuatro tubos de ensayo de los cuales 2 sern para el blanco y 2 para la muestra.

Reactivo


Blanco


Muestra

Sustrato
(GOT o GPT)


0.5ml

0.5ml

Colocar en bao mara a 37C por 3 minutos

Suero


-

100ul

H2O dest.

100ul

-

Mesclar por agitacin suave e incubar por 33 minutos exactos
y agregar


2.4 DNFH

0.5ml

0.5ml

Mezclar y dejar por 10 minutos a 37c y agregar
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NaOH
4mol/L



5ml


5ml

Mezclar por inversin y retirar del bao mara.
Luego de 2 minutos leer la absorbancia a 505nm.

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5. RESULTADO
5. RESULTADO

Utilizando la curva de calibracin construir dos curvas de calibracin con los siguientes
datos. Para poder hallar la concentracin de GOT y GPT de la muestra, con ayuda de
esta curva.

GOT GPT
Abs 1 [ ]U/L Abs 2 [ ]U/L

0 ----- 0 0 ----- 0
0.168 ----- 7 0.046 ----- 9
0.173 ----- 12 0.111 ----- 18
0.195 ----- 20 0.145 ----- 25
0.250 ----- 28 0.172 ----- 37
0.266 ----- 37 0.217 ----- 46
0.359 ----- 98 0.252 ----- 56
0.353 ----- 81 0.330 ----- 79


Tras leer la absorbancia del blanco y la muestra los valores que se obtuvieron fueron:

Abs GOT Abs GPT

Blanco: 0.290 Blanco: 0.273
Muestra: 0.332 Muestra: 0.349

Ahora para obtener la absorbancia de la enzima efectuamos la resta del blanco y la
muestra del GOT y del GPT respectivamente.

0.332- 0.290= 0.042 0.349- 0.273= 0.076

En seguida estos valores los llevamos a la grfica de curva de calibracin para hallar
su concentracin. El valor referencial que nos dan es el de 18u/L, sin embargo
los valores normales de transaminasas pueden variar segn el laboratorio donde se
realicen los anlisis de sangre.
Los valores de transaminasas varan segn el sexo, la edad, la temperatura corporal y
el ndice de masa corporal. Para algunos laboratorios los valores normales de
transaminasas en el hombre varan entre 10 y 40 U/L, aunque en otros laboratorios
varan entre 6 y 60 U/L. En el caso de la mujer, el valor normal de transaminasas es
menor que en el hombre.

GPT: 7-40 u/L
GOT: 10-40 u/L

Los valores obtenidos presentan un margen dentro de lo normal ya que la
concentracin obtenida en GOT es 1.5u/L y en el caso de GPT es 16.5u/L. Por esta
razn podemos afirmar que la paciente no presenta un metabolismo con trastorno
heptico.


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6. CONCLUSION

Las transaminasas se encuentran en todos los tejidos, sin embargo se
relacionan preferentemente, en los procesos de escape de enzimas del
miocardio o el hgado; adems estn presentes en el suero pero en
concentraciones muy bajas, por lo tanto su elevacin nos indicara que hay un
proceso anormal en estos rganos, lo cual las hace muy tiles en los
diagnsticos.

La GPT y GOT son indicadores sensibles de dao heptico en diferentes tipos
de enfermedades, mas debe ser enfatizado que tener niveles ms altos que lo
normal de estas enzimas no indica necesariamente una enfermedad heptica
establecida. Ellas pueden indicar algn problema o no. La interpretacin de los
niveles altos de TGO e TGP depende del cuadro clnico en general y as lo
mejor es que esto sea determinado por mdicos experimentados en
hepatologa.

Muchos factores pueden causar que los niveles de las transaminasas varen,
normalmente hombres y mujeres tienen diferentes niveles, los hombres en
mayor cantidad, adems tomar ciertos medicamentos y hierbas pueden causar
un aumento en los niveles de transaminasas.

La causa ms comn de moderadas elevaciones de estas enzimas es el
hgado graso; y la causa ms frecuente de hgado graso es el abuso de
alcohol, sin embargo puede originarse por la diabetes y la obesidad.



















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7. BIBLIOGRAFIA


Lehinnger Principios de Bioqumica - David L. Nelson y Michael M. Cox -
Quinta Edicin.

Harper - Bioquimica Ilustrada. Vigsima novena edicin. Editorial: Mc Graw Hill
Lange. Autores: Robert K. Murray- David A. Lender- Peter L. Kennelly

Carrasco Carrasco, M. y otros (2004). Fundamentos y tcnicas de anlisis
hematolgicos y citolgicos. Madrid: Paraninfo.