Medios de Cultivo para el

Diagnstico de Tuberculosis :
Una perspectiva desde los pases
en vas de desarrollo
Dr. Alonso Soto Tarazona, MD, Mg, MSc, PhD (c)
Medico Internista
MSc Applied Statistics
Doctor en Medicina
Editor Cientfico Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pblica .
sotosolari@yahoo.com
A.Soto
Medios Alternativos en TB
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Importancia del Cultivo
Diagnstico
20-30% de casos de TB Pulmonar son frotis
negativo.
Determinacin de Sensibilidad
En el Pertodo paciente con baciloscopa
positiva debera tener cultivo .
A.Soto
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Medios de Cultivo
Slidos
Basados en agar
Middlebrook 7H11, 7H10
Basados en Huevo
Lwenstein J ensen
Ogawa (u Ogawa-Kudoh)
Lquidos
Middlebrook 7H9
OPS. Manual para el Diagnstico Bacteriolgico de la Tuberculosis. Normas y Gua Tcnica. Parte II.2008
Medio Middlebrook 7H9
Puede utilizarse solo o en distintas
combinaciones
MGIT
MODS
MB-Redox
Septi-Chek
Asociado a Bromuro de Tetrazolium
Recomendaciones de la OMS sugieren la
implementacin de medios lquidos dada su
mayor sensibilidad y menor tiempo para
diagnstico*.
La diferencia entre cultivos slidos y lquidos
sera ms notoria en pacientes con baciloscopa
negativa.
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*World Health Organization (2007). Improving the diagnosis and treatment of smear-negative pulmonary and
extrapulmonary tuberculosis among adults and adolescents: recommendations for HIV-prevalent and resource-constrained
settings
Comparacin de MGIT, Middlebrook 7H9 y
Ogawa en pacientes con sospecha de TBFN
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Medios de cultivo alternativos para el diagnstico
de tuberculosis pulmonar aplicables en pases en
vas de desarrollo:
Revisin sistemtica y metanlisis
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Antecedentes
Los medios de cultivo clsicos slidos son
considerados el estndar de referencia actual para
el diagnstico de tuberculosis.
Existen medios de cultivo alternativos accesibles
a pases en vas de desarrollo, algunos de los
cuales parecen haber de reducido el tiempo
requerido para el desarrollo del M.tuberculosis y
aumentar la positividad del cultivo.
La mayora de recomendaciones se basan en
recomendacioones de expertos.
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Objetivos
Objetivo Principal
Realizar una revisin sistemtica y metanlisis para
evaluar el rendimiento diagnstico de medios de cultivo
alternativos para tuberculosis pulmonar aplicables en
pases en vas de desarrollo.
Objetivos especficos
Determinar la sensibilidad para el diagnstico de
tuberculosis pulmonar de los medios de cultivo alternativos
evaluados.
Determinar la diferencia de sensibilidades con respecto a
los medios de cultivo slidos convencionales.
Determinar la reduccin porcentual del tiempo de
crecimiento para M.tuberculosis
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RESULTADOS
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Se encontraron estudios para los siguientes
medios/sistemas de cultivo:
MGIT
Septi-Chek
Middlebrook 7H11
MODS
Otros : Agar sangre, Middlebrook
7H9/7H10,Stonebrink, ATS
RESULTADOS
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MGIT: Mycobacterium Growth
Indicator Tube
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MGIT (Mycobacteria growth
indicator tube)
Caldo de crecimiento
lquido (basado en
Middlebrook 7H9
enriquecido y con ATB ) +
Sensor oxigeno sensible
embebido en silicona
Aparicin de fluorescencia
naranja indica crecimiento
micobacteriano
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Sensibilidad MGIT
0.911 (IC 95% 0.88-0.943)
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Diferencia de Sensibilidad: MGIT vs
Slidos
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Disminucin proporcional de los tiempos de crecimiento
del medio MGIT comparado con medios slidos (Ogawa o
Lwenstein Jensen)
Disminucin proporcional de tiempo de cultivo
-.1 0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8
Combined
Tortoli1997
Abe1999
Casal1997
Piersimoni1999
Macondo2000
Rivera1997
Somoskovi1999
Oh2001
Chew1998
Caviedes2000
Kocazabec2002
Dirra2003
Abe1996
Badak1996
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Sistema Septi-Chek
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El medio Septi-Chek
consiste en la combinacin
de un tubo conteniendo
medio Middlebrook 7H9
enriquecido asociado a
antibacterianos y una placa
conteniendo 3 tipos
diferentes de agar: Medio
Middlebrook 7H9, medio
Middlebrook 7H11
suplementado con huevo y
agar sangre.
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Sensibilidad del Medio Septi-Chek
0.96 (IC 95% 0.93-1)
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Disminucin proporcional del tiempo de crecimiento en
medio Septi-Chek comparado con medios slidos
Disminucin proporcional de tiempo de cultivo
-.1 0 .1 .2 .3 .4 .5 .6 .7 .8
Combined
Griethuysen1996
Isemberg1991
Damato1991
Abe1996
Sewell1993
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Middlebrook 7H11
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Sensibilidad Medio Middlebrook 7H11
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En 3 estudios se comparla sensibilidad del
medio Middlebrook 7H11con medios slidos de
referencia: En 2 de ellos se encontruna menor
sensibilidad y en uno una mayor sensibilidad.
El uso de Middlebrook 7H11 en capa delgada en
placas fue similar al medio slido de referencia en
2 estudios adicionales.
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Medio MB-Redox
sistema de cultivo no radiactivo que utiliza
medio de Kirchner y, como indicador, una
sal incolora de tetrazolio que es reducida al
crecer las micobacterias, dando grnulos de
color rosa o violeta.
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Medio MB Redoxpresento una mayor
sensibilidad que el medio slido de
comparacin en los 3 estudios en los que se
pudo realizar la comparacin (5,8,21%).
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MODS(microscopic-observation
drug-susceptibility) assay
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Consiste en placas
conteniendo agar
Middlebrook 7H9 las
cuales son ledas en forma
peridica con un
microscopio luz invertida a
fin de detectar la presencia
de formacin de cordones
tpicos del crecimiento de
M.tuberculosis.
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Estudios Evaluacin MODS
Zimic et al. Development of low-cost inverted microscope to detect
early growth of Mycobacterium tuberculosis in MODS culture.
PLoS One. 2010 Mar 23;5(3):e9577
Se diseun sistema
de lectura basado en la
lectura con una cmara
web convencional
conectada a una laptop
y un software
desarrollado en el
Per.
Middlebrook 7H9 asociado a
bromuro de Tetrazolium*
Sensibilidad comparable a medios slidos
Menor tiempo de crecimiento
Bromuro de Tatrzolium tiene efecto
inhibidor del crecimiento para
M.tuberculosis (dificulta prueba de
sensibilidad).
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*Soto A et al. Evaluation of the performance of two liquid-phase culture media for the diagnosis of pulmonary tuberculosis in a national
hospital in Lima, Peru
Agar sangre
El M.tuberculosis no necesita medios
especiales para su crecimiento.
El cultivo en agar sangre tiene el mismo
rendimiento diagnstico y menor tiempo de
crecimiento que los medios slidos
convencionales.
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A.Soto
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El rendimiento de los distintos medios de cultivo
depende de varios factores:
Baciloscopa positiva vs negativa
Tamao del inoculo (tipo de muestra, volumen).
Tiempo de espera entre toma y procesamiento de
la muestra.
Proceso de decontaminacin.
Exposicin a antibiticos bacteriostticos frente a
M.tuberculosis
Experiencia en lectura.
Limitaciones para interpretacin
de estudios sobre cultivos
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CONCLUSIONES Y
RECOMENDACIONES
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Conclusiones
El sistema MGIT y el MODS presentan mayor
sensibilidad y un tiempo de crecimiento
significativamente menor a los medios de cultivo slido
convencionales.
El sistema Septi-chek parece presenta mayor
sensibilidad y un tiempo de crecimiento
significativamente menor a los medios de cultivo slido
convencionales.
El medio Middlebrook 7H11 parece ser comparable en
cuanto a sensibilidad y tiempo de crecimiento a los
medios slidos convencionales.
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Recomendaciones
Fomentar la realizacin de estudios de evaluacin
de pruebas diagnosticas para tuberculosis a nivel
nacional enfocados en evaluar tanto la sensibilidad
como la especificidad de los mismos.
Considerar la implementacin de las prueba
diagnostica MGIT/MODS en los laboratorios de
referencia para el diagnostico de Tuberculosis.
Considerar la modificacin del estndar de
referencia actual -particularmente para trabajos de
investigacin - para el diagnstico de tuberculosis
(especialmente FN), incluyendo el uso del medio
MGIT y/o MODS
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