I.

FUNDAMENTO TEORICO
USO Y MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO
A) ESECTROFOTOMETRO: Se usa para medir la intensidad de luz procedente
de una fuente de potasio. Esta comparacin permite determinar la
concentracin de la sustancia que ha producido este espectro. Los
espectrofotmetros. Tambin son tiles para estudiar espectros en las zonas
mas visibles.
) APLICACIONES: Las aplicaciones cualitativas de espectrofotometr!a
ultravioleta "visible son limitadas porque el espectro de la ma#or!a de las
compuertas en solucin consisten de uno o$ cuando mucho unos picos ampl!an.
Sin estructura fina que podr!an ser requeridos para su identificacin precisa. En
contraste$ el mtodo es una de las mas poderosas # m%s utilizadas para el
an%lisis cuantitativo.
Entre las caracter!sticas importantes de espectrometr!a cuantitativa
ultravioleta"visble est%n la amplia aplicabilidad en sustancias or&%nicas$
inor&%nicas # bioqu!micas' buena sensibilidad$ l!mites de deteccin de ()
*+
a ()
*
,
-' selectividad de moderada o elevado' e.actitud # presin razonables
/errores relativas en el intervalo de (0 a 10 # con tcnicas especiales$ tan ba2as
como unas cuantas dcimas de una por cien)' # rapidez.
3) DETALLES DE PROCEDIMIENTO: 4na primera etapa en cualquier
mtodo espectrofotometr!a es el desarrollo de condiciones que permitan una
reaccin reproducible entre absorbancia # concentracin del %mbito.
- Solucin de la lon&itud de onda.
- 5ariables que influ#en en la absorbancia.
- Limpieza # mane2o de las celdas.
- 6eterminacin de las relaciones entre la absorbancia # la concentracin.
- -todo de adicin de est%ndar.
3.( 6eterminacin de las relaciones entre la absorbancia # la concentracin.
Los est%ndares de calibracin para un an%lisis espectrofotometr!a deben
apro.imarse tanto como sea posible a la composicin &eneral de las
muestras actuales # deben comprender un intervalo razonable de
concentraciones del %mbito.
3.7 -todo de adicin est%ndar. Las dificultades para atender la produccin de
est%ndar con una composicin &eneral que se aseme2a estrictamente a la
muestra pueden ser dif!ciles de superar. En estas circunstancias$ el mtodo
de admisin de un est%ndar puede ser til.
II. DESARROLLO EXPERIEMTAL
7.( OBJETIVOS:
Aprender a operar correctamente el espectrofotmetro de
absorcin ultravioleta
6eterminar los espectros visibles de las muestras problemas
8-n9
+
)$)(-"())ml # 8
7
3r
7
9
,
)$)(-"())ml.
7.7 REACTIVOS
8-n9
+
)$)(-"())ml
8
7
3r
7
9
,
)$)(-"())ml.
7.1 MATERIALES Y EQUIPO
- Espectrofotmetro 45 : 5;S;LE' Spectronic &nes#s <.
- 3elda de vidrio
- 3elda de cuarzo
- -anual de instrucciones
- 5asos precipitados de <)ml
- =iolas de ())ml
- >ipetas de <ml
- A&ua destilada
- >apel filtro.
7.+ METODO
Espectrofotometr!a
7.< PROCEDIMIENTO DE LA PRACTICA
>asos para el funcionamiento # uso del espectrofotmetro 45"5.
(. Se procedi a encender el equipo $ el cual hace su propia
calibracin.
7. >osteriormente se coloc la celda en blanco # la celda en el lu&ar de
la muestra.
1. Si presiono la funcin men principal$ lue&o selecciono ( AS9?"
0T"39@T.
+. Lue&o la funcin A9 T9 BL # se soluciona la /) lon&itud de
onda en la que se quiere traba2ar.
<. Se presion para ir al lanco # a la funcin auto cero para calibrar la
absorbancia c ).)))
C. >or ltimo se fue a la celda de la muestra para leer a$ b de acuerdo
a la cantidad de muestras que le colocaron en la m%quina.
V. CUESTIONARIO
1. Expliq! l"# $i%!&!'(i"# !')&! l*# i'#)&+!')*# $! ' #*l* ,"- . $!
$*/l! ,"- p"&" l"# +!$i(i*'!# $! "/#*&/"'(i".
3omo su nombre lo indica$ un instrumento de un solo haz tiene solo un
ra#o o haz de luz que se diri&e a travs del portacelda. En este caso$
primero se coloca # se a2usta el instrumento al ())0 de transmitancia.
6espus se retira el patrn # se mide la absorbancia de la muestra. 3on
un instrumento de doble haz$ el ra#o de luz &eneralmente se divide en dos'
una porcin se diri&e a travs del patrn # la otra a travs de la muestra $ en
forma simult%nea. As! un instrumento de doble haz compensa los
cambios a corto plazo en la intensidad de la l%mpara # en la respuesta del
detector.
1. 0C1l !# !l p&*p2#i)* $!l "3#)! $!l 4.444 $! "/#*&/"'(i" 51446 T7
"')!# $! !%!()"& +!$i$"# (*' ' !#p!()&*%*)2+!)&*8
En la pr%ctica normal de la espectrofotometr!a $ los errores lle&an a ser
relativamente &randes en ambos e.tremos de la escala de absorbancia.
3omo un medio para aliviar esta situacin$ frecuentemente se a2usta el
espectrofotmetro al ).))) de Absorbancia /())0 de Transmitancia).
IV. BIBLIO9RAF:A
- An%lisis ;nstrumental
SDoo& : Lear#
Editorial -cAraE*Fill
3uarta Edicin
-.ico : (GG<
- 3%lculos de Hu!mica Anal!tica
Familton : Simpson * Ellis
Ediciones -cAraE*Fill
Se.ta Edicin
3olombia : (GGI
- Hu!mica Anal!tica
SDoo& : Best * Foller
Editorial -cAraE*Fill
Se.ta Edicin
3olombia : (GGG
USOS Y CUIDADOS DEL ESPECTROFOT;METRO DE
ABSORCI;N UV < VISIBLE= PARTE II
1. FUNDAMENTO TEORICO: Las aplicaciones cualitativas de
espectofotometr!a ultravioleta"visible son limitadas porque el espectro de la
ma#or!a de los compuestos en solucin consisten de uno a unos pocos picos
amplios sin estructura fina que podr!an ser requeridos para su identificacin.
Entre las caracter!sticas importantes de espectrofotometr!a cuantitativa
ultravioleta"visible est%n la amplia aplicabilidad en sistemas or&%nicos$
inor&%nicos # bioqu!micos J$ buena sensibilidad$ selectividad de moderna a
elevada e.actitud # precisin razonable$ rapidez # conveniencia. Adem%s$ los
mtodos espectrofotomtricos son f%cilmente automatizados.
Los espectrofotmetros son aparatos de opresin delicados # deben mane2arse
con cuidado. Si una de las teclas o botones del espectrofotmetro no se mueven
con facilidad no ha# que forzarlo @4@3A$ ha# que detenerse # considerar si
lo que se est% haciendo es lo correcto. @o &olpear nunca con violencia$ sino al
contrario moverlos con suavidad. El tiempo de vida del instrumento depender%
del tipo de uso que se le d al instrumento.
Las cubetas de s!lice /3uarzo) son indispensables para efectuar
determinaciones por deba2o de 1+)nm$ que es el l!mite de transparencia del
vidrio. La s!lice transmite hasta 7))nm an menos. Las cubetas de s!lice son
caras # rompen f%cilmente. Sus caras pticas pulidas se ra#an con facilidad.
>el!culas invisibles de suciedad o de &rasa$ inclu#endo las huellas dactilares$
pueden absorber luz ultravioleta. Las cubetas se han de tocar slo por sus caras
ru&osas$ nunca por las pulidas$ # se debe n mantener escrupulosamente limpia.
6espus de llenar una cubeta # antes de colocarlas en el espectrofotmetro se
en2ua&an las caras lisas e.teriores con unas &otas de a&ua destilada # se secan
suavemente con papel blanco.
>. DETALLES EXPERIMENTALES
R!"()i?*#
- 8-n9
+
- 8
7
3r
7
9
,
MATERIALES
- 3eldas de vidrio
- 3eldas de cuarzo
- -anual de instrucciones
- 5asos de precipitacin
- =iolas de 7<ml # ())ml
EQUIPO
- Espectrofotmetro
PROCEDIMIENTO
P&*(!#* I
9btencin de la curva de calibracin a partir de la solucin 8
7
3r
7
9
,
.
Se preparan otras concentraciones a una /) lon&itud de onda m%.ima hallado.
@. CONCLUSIONES
1. >odemos decir que mediante la pr%ctica hemos demostrado que se
obtienen los valores tericos de la muestra problema.
>. La concentracin de la muestra # preparacin de la misma puede influir
notablemente en los espectros$ as! como el uso correcto del
espectrofotmetro.
A. -uchos instrumentos automatizados para an%lisis se basan en
mediciones fotomtricas # espectrofotomtricas.
B. RECOMENDACIONES
- Se debe verificar la concentracin del analito antes de llevar al
espectrofotmetro para evitar posibles errores.
- Evitar tocas las ventanas pticas de las celdas #a que se pueden
alertar las caracter!sticas de transmisin debido a la huella di&itales.
- Se debe tener en cuenta que el espectrofotmetro &uarda datos de
an%lisis anteriores.
C. DISCUSIONES Y RERSULTADOS
Los resultados obtenidos en la pr%ctica est%n dentro de los ran&os
establecidos para las soluciones que son analizadas.
D. CUESTIONARIO
1. I'$iq! B !3!+pl*# $! (*+p!#)*# qE+i(*# $! i')!&F# %"&+"(F)i(*
q! (*')!'G" ' G&p*# (&*+2%*&*#.
Los &rupos funcionales or&%nicos insaturados que absorben en las re&iones
ultravioletas o visibles se denomina cromforos. Los &rupos cromforos mas
comunes sonK
3?9-9=9?9 ELE->L9 6;S9L5E@TE
Alqueno 3
C
F
(1
3F M 3F
7
n* heptano
Alqueno 3F
7
M 3F3F M 3F
7
n* heptano
Alquino 3
<
F
((
3 M 3M 3F
1
n* heptano
Alquino 3
<
F
((
3 M 3 M 3F
1
n* heptano
>. Expliq! p*& qF #*' i+p*&)"')!# l*# +1xi+*# $! "/#*&(i2' q! #!
*/#!&?" !' l*# !#p!()&*# $! +*lF(l"# q! (*')i!'!' (&*+2%*&*#8
Los datos de e.posicin e intensidad de los picos pueden servir como una
&u!a de orientacin con fines de identificacin #a que ambos est%n influidos
por los efectos del disolvente as! como por cortos detalles estructurales de la
molcula
H. BIBLIO9RAF:A
- 3%lculos de Hu!mica Anal!tica
Familton : Simpson * Ellis
Ediciones -cAraE*Fill
Se.ta Edicin
3olombia : (GGI
- Hu!mica Anal!tica
SDoo& : Best * Foller
Editorial -cAraE*Fill
Se.ta Edicin
3olombia : (GGG
- An%lisis ;nstrumental
SDoo& : Lear#
Editorial -cAraE*Fill
3uarta Edicin
-.ico : (GG<
INTRODUCCI;N
4n espectro de absorcin en la re&in visible e infrarro2o se realiza con un instrumento
llamado espectrofotmetro.
Es importante conocer las tcnicas del uso # mane2o del espectrofotmetro pues es tan
&rande # tan importante que no se debe de2ar de estudiar en una asi&natura de qu!mica
anal!tica instrumental.
>or tanto para el estudiante # futuro profesional es importante que ha#a operado al&n
instrumento anal!tico especialmente a los estudiante de la especialidad de farmacia #
bioqu!mica' que sepa leer e interpretar correctamente un espectro de absorcin en la
re&in visible # infrarro2a.