Tema 5.

Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular

TEMA 5
ENZIMAS
1. Introduccin
2. Las enzimas como catalizadores
3. Nomenclatura y clasificacin de enzimas
4. Cofactores enzimticos
5. Modelos de actuacin de las enzimas
6. Cintica enzimtica
7. Inhibicin enzimtica
8. Reacciones multisustrato
9. Regulacin enzimtica
1. Introduccin
La vida deende de la e!istencia de unos catalizadores muy otentes y altamente
esec"ficos denominados enzim!. #e hecho$ todos los asos de todos los
rocesos metablicos estn catalizados or enzimas y la caacidad catal"tica se
considera$ %unto con la caacidad de autorrelicacin$ una de las caracter"sticas
fundamentales de la vida. Con la e!cecin de un e&ue'o gruo de molculas de
RN( catal"tico )los ribozimas*$ todas las enzimas conocidas son rote"nas.
+l nombre de enzima ),en la levadura,* no se emle hasta -.//$ ero mucho antes
ya se sosechaba &ue ciertos catalizadores biolgicos interven"an en muchos
rocesos. (s" en -.01$ Louis 2asteur concluy &ue la fermentacin de az3car en
alcohol or levaduras estaba catalizada or lo &ue llam 4fermentos5$ &ue l
consideraba insearable de las clulas de levadura vivas. +n -.6/$ 78chner$
consigui e!traer las enzimas &ue catalizaban la fermentacin alcohlica de las
clulas de levadura$ terminando as" con la teor"a vitalista. No obstante hubo &ue
eserar hasta -69:$ cuando ;umner consigui urificar y cristalizar or rimera vez
una enzima$ la ureasa$ ara demostrar su naturaleza roteica. +n la actualidad se
conocen ms de 9111 enzimas diferentes$ muchas de las cuales se han aislado en
forma ura. ;e utilizan otentes tcnicas de urificacin y secuenciacin$ tcnicas
de difraccin de rayos <$ RMN$ etc.$ ara conocer su estructura$ y tcnicas de
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Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
mutagnesis dirigida ara conocer ms sobre su funcionalidad y sus mecanismos
de actuacin.
2. "! enzim! como ct#izdore!
La funcin rincial de las enzimas es actuar como catalizadores de las reacciones
de los seres vivos= como tales catalizadores tienen ciertas caracter"sticas &ue
vamos a estudiar a continuacin. >odas las reacciones &u"micas tienen lugar
or&ue cierta fraccin de la oblacin de molculas reactantes oseen la suficiente
energ"a como ara alcanzar un estado activado$ llamado estado de transicin$ en
el &ue es muy elevada la robabilidad de &ue se roman o se establezcan enlaces
ara formar los roductos. +ste estado de transicin reside en la cima de la barrera
energtica &ue seara los reactantes de los roductos$ como muestra la ?igura -.
+n ella se observa el diagrama de energ"a ara una reaccin &u"mica$ no catalizada
y catalizada$ donde la energa libre de activacin es la cantidad de energ"a
necesaria ara llevar todas las molculas de un mol de sustancia$ a una
temeratura determinada$ al estado de transicin.
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?igura -.
E$o#ucin ener%&tic de un reccin 'u(mic. ;e observa
la diferencia energtica entre los estados de transicin de las
reacciones catalizada y no catalizada.
Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
+!isten dos mtodos generales mediante los cuales uede acelerarse la velocidad
de una reaccin &u"mica. @no de ellos es la elevacin de la temeratura )ya &ue
rovoca un incremento en la velocidad de las molculas*= el otro consiste en utilizar
un ct#izdor. +l catalizador se combina con los reactantes de modo transitorio
activndolos$ roduciendo un estado de transicin de menor energ"a &ue en la
reaccin no catalizada. @na vez formados los roductos el catalizador &ueda libre$ y
uede ser de nuevo utilizado.
La >abla - muestra una comaracin de las energ"as de activacin ara la
descomosicin del er!ido de hidrgeno$ en ausencia o resencia de un
catalizador. +n ella se uede areciar cmo el catalizador enzimtico ba%a a3n ms
la barrera energtica &ue ha de suerarse desde el nivel de reactivos ara alcanzar
el estado de transicin. +sta es una caracter"stica com3n de las enzimas. ;u alto
oder catal"tico se debe en arte a su alta e!)eci*icidd or los sustratos$ la cul
uede ser absoluta ara un 3nico sustrato o relativa$ cuando ermite la reaccin de
comuestos diferentes ero con una estructura similar.
La esecificidad de las enzimas es muy imortante ara los seres vivos. Cada
clula contiene varios cientos de miles de comuestos diferentes$ y e!isten muchas
combinaciones osibles entre las reacciones &u"micas &ue estos comuestos
ueden e!erimentar. Las enzimas cuidan de &ue tengan lugar$ de manera
74
+eccin Catalizador >emeratura
)AC*
+nerg"a
)BcalCmol*
,e!com)o!icin
de -
2
.
2
Ninguno
?e
9D
Catalasa
91
99
99
-.
-1
-$/
+eccin Catalizador >emeratura
)AC*
+nerg"a
)BcalCmol*
,e!com)o!icin
de -
2
.
2
Ninguno
?e
9D
Catalasa
91
99
99
-.
-1
-$/
+eccin +eccin +eccin Catalizador Catalizador Catalizador >emeratura
)AC*
>emeratura
)AC*
>emeratura
)AC*
+nerg"a
)BcalCmol*
+nerg"a
)BcalCmol*
+nerg"a
)BcalCmol*
,e!com)o!icin
de -
2
.
2
,e!com)o!icin
de -
2
.
2
,e!com)o!icin
de -
2
.
2
Ninguno
?e
9D
Catalasa
Ninguno
?e
9D
Catalasa
91
99
99
91
99
99
-.
-1
-$/
-.
-1
-$/
>abla -
,e!com)o!icin enzim/tic de# %u o0i%end. comaracin de
las energ"as de activacin ara la descomosicin del er!ido de
hidrgeno$ en ausencia o resencia de un catalizador
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esec"fica$ a&uellas reacciones &ue son esenciales e indisensables ara &ue la
clula viva.
(dems de la esecificidad y la alta eficiencia$ otras dos caracter"sticas &ue
diferencian a las enzimas de los catalizadores &u"micos$ son &ue las enzimas
ueden saturarse or sustrato y tienen caacidad ara regular su actividad.
3. Nomenc#tur 1 c#!i*iccin de #! enzim!
Muchas enzimas han sido designadas a'adiendo el sufi%o -asa al nombre del
sustrato$ es decir$ la molcula sobre la cul e%erce su actividad catal"tica. 2or
e%emlo la ureasa cataliza la hidrlisis de la urea$ y la arginasa cataliza la hidrlisis
de la arginina )a urea y ornitina*. Etras enzimas han recibido su nombre en funcin
del tio de reaccin &ue catalizan= as" la Fliceraldeh"doGH2Gdeshidrogenasa cataliza
la o!idacin del la Fliceraldeh"doGH2. Incluso algunas se conocen de hace mucho
tiemo y mantienen su nombre$ sin dar informacin alguna del sustrato o la reaccin
&ue catalizan )trisina*.
No obstante e!iste una c#!i*iccin !i!tem/tic de #! enzim! &ue las divide en
: grandes gruos$ cada uno de los cuales se divide a su vez en subclasesI
1 !"ido-reductasas )reacciones de o!idoGreduccin*
# Trans$erasas )transfieren gruos funcionales*
% &idrolasas )reacciones de hidrlisis*$
' (iasas )reacciones de adicin a los dobles enlaces*
5 )somerasas )reacciones de isomerizacin*
* (igasas )formacin de enlaces con consumo de (>2*.
( cada enzima se le asigna un n3mero con cuatro comonentes. Los tres rimeros
indican la clase$ subclase y subGsubclase$ resectivamente$ y el 3ltimo es un
n3mero de orden. (s"$ or e%emlo$ la enzima alcohol deshidrogenasa$ &ue cataliza
la o!idacin de etanol a acetaldeh"do$ y or lo tanto ertenece al gruo -$ se
designa como +C -.-.-.-. La >abla 9 muestra la clasificacin internacional de las
enzimas en los seis gruos antes citados.
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4. 2o*ctore! enzim/tico!
La actividad de algunas enzimas deende solamente de su estructura como
rote"na$ mientras &ue otras necesitan$ adems$ uno o ms comonentes no
roteicos$ llamados co*ctore!. +l cofactor uede ser un ion met+lico o bien una
molcula orgnica$ llamada coenzima$ aun&ue algunos enzimas necesitan de
ambos. +l cofactor uede estar fuertemente unido a la rote"na )suele ser el in
metlico$ aun&ue uede igualmente ser un coenzima* y recibe entonces el nombre
de gruo rosttico$ o dbilmente unido$ or lo &ue en realidad act3a como un
sustrato esec"fico de la enzima )co-sustrato= suele ser una molcula orgnica$
coenzima*. La >abla H muestra una relacin de iones metlicos &ue act3an como
cofactores de enzimas.
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>abla 9
2#!i*iccin interncion# de enzim!.
>abla H
Ione! met/#ico! como co*ctore!.
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La >abla J muestra algunos de los coenzimas ms habituales en la catlisis
enzimtica.
+l comle%o enzimaGcofactor catal"ticamente activo recibe el nombre de holoenzima.
Cuando se seara el cofactor$ la rote"na restante$ &ue or s" misma es inactiva
catal"ticamente$ se designa con el nombre de a,oenzima.
-.".ENZIMA 3 A4.ENZIMA 5 2.6A2T.+
77
>abla J
A#%uno! coenzim! m1oritrio! en ct/#i!i! enzim/tic.
2o*ctor
A)oenzim
-o#oenzim
2entro cti$o
2o*ctor
A)oenzim
-o#oenzim
2entro cti$o
A)oenzim
-o#oenzim
2entro cti$o
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+n las enzimas el cofactor uede actuar como centro catal"tico rimario$ gruo
uente ara reunir el sustrato y la enzima agente estabilizante de la actividad
enzimtica )conformacin*.
2or su arte cada uno de los coenzimas catalogados suele contener en su
estructura$ alguna vitamina )sustancias orgnicas &ue$ en cantidades m"nimas$ son
vitales ara el funcionamiento de todas las clulas$ y deben figurar en la dieta de
algunas esecies* o molcula derivada de ella. Los coenzimas act3an or lo general
como transortadores intermedios de tomos esec"ficos o de electrones.
5. Mode#o! de ctucin de #! enzim!
2ara e!licar la actividad catal"tica de las enzimas$ se ha rouesto un mecanismo
general$ en dos etaasI
+n la rimera etaa$ la enzima )+* se une a la molcula de sustrato );*$ ara formar
el comle%o enzimaGsustrato )+;*. +n una segunda etaa$ el comle%o se fragmenta
dando lugar al roducto )2* y a la enzima )+*$ &ue vuelve a estar disonible ara
reaccionar con otra molcula de sustrato. 2or lo general$ la molcula de enzima es
mucho mayor &ue la del sustrato or lo &ue slo una e&ue'a arte de la enzima
est imlicada en la formacin del comle%o= esta regin &ue interacciona con el
sustrato y en la &ue tiene lugar la reaccin$ se denomina !itio cti$o de la enzima.
+l sitio activo es una regin tridimensional de la enzima con una distribucin de los
gruos 3nica ara osibilitar la unin a su sustrato esec"fico. #ichos gruos del
enzima no tienen or &u ser necesariamente consecutivos en la secuencia de la
rote"na y reciben el nombre de centro! ct#(tico!.
+l mode#o ms conocido sobre el mecanismo de reaccin de las enzimas es el de
6i!c7er$ &uien rouso &ue la molcula de sustrato se adata al centro activo de la
enzima del mismo modo &ue lo har"a una llave al enca%ar en una cerradura$ es decir$
&ue tienen una relacin estructural comlementaria )?igura 9*. No obstante$ esta
hitesis tiene ciertas limitacionesI si el centro activo osee una estructura
redise'ada ara el sustrato$ en caso de &ue sea reversible el roceso dicho
78
S 5 E ES 4 5 E S 5 E ES 4 5 E
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deber"a estar erfectamente dise'ado ara &ue tambin enca%e el roducto de la
reaccin. #e la misma forma$ la teor"a de la llaveGcerradura tamoco e!lica bien el
fenmeno de la inhibicin enzimtica.
Etra hitesis ms acetada actualmente es la del enzima $le"ible o de a-uste
inducido )mode#o de 8o!7#nd*$ &ue sugiere &ue el sitio activo no necesita ser una
cavidad geomtricamente r"gida y ree!istente$ sino &ue dicho sitio activo debe
tener una disosicin esacial$ recisa y esec"fica$ de ciertos gruos de la enzima
&ue en resencia del sustrato se adatan a su estructura cuando interaccionan con
l )?igura H*.

79
?igura 9.
Mode#o! de ccin enzim/tic. Modelo llave-cerradura de
?ischer.
?igura H.
Mode#o! de ccin enzim/tic. Modelo de a-uste inducido de
Boshland.
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Indeendientemente del modelo$ una vez formado el comle%o enzima sustrato$
mediante un mecanismo de distorsin$ se activan los enlaces &ue hay &ue romer y
se aro!iman los gruos &ue hay &ue enlazar$ favoreciendo la formacin del
roducto resultante de la reaccin catalizada y &uedando la enzima libre ara
comenzar de nuevo el roceso catal"tico. La ?igura J muestra el caso de una
enzima )carbo!ietidasa* &ue nos sirve ara ilustrar el modelo de Boshland$ en
ella se uede ver como en el sitio activo$ en el &ue se encuentran los centros
catal"ticos )(rgG-J0$ FluG9/1$ tyrG9J.* y el cofactor )Kn*$ osee una conformacin
inicial &ue se modifica al interaccionar con el sustrato y formal el comle%o L+;].
6. 2in&tic enzim/tic.
Los rinciios generales de la cintica de las reacciones &u"micas son alicables a
las reacciones catalizadas or las enzimas$ en los seres vivos. No obstante$ estas
muestran )adems del fenmeno de la esecificidad$ antes comentado* un rasgo
caracter"stico &ue no se observa en los catalizadores no enzimticos$ se trata de la
saturacin or el sustrato$ entendida en trminos de ocuacin de los centros
activos de todas las molculas de enzima.
+studiar el efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad de una enzima
no es sencillo si ensamos &ue lgicamente la concentracin del sustrato disminuye
80
?igura J.
Mode#o de ajuste inducido de 8o!7#nd. Carbo!ietidasa.
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seg3n avanza la reaccin. @na simlificacin en los e!erimentos cinticos consiste
en medir la velocidad inicial )Mo*. ;i el tiemo es suficientemente corto la
disminucin de sustrato ser m"nima y sta odr considerarse$ or tanto$ casi
constante. La ?igura 0 muestra el efecto de distintas concentraciones de sustrato
sobre la velocidad inicial de la reaccin catalizada or un enzima.
+n la cintica enzimtica de la ?igura 0 se distinguen tres fasesI
2ara una concentracin ba%a de sustrato$ la velocidad de la reaccin es
directamente roorcional a la concentracin del sustrato )relacin lineal*$ la
cintica es de rimer orden.
2ara una concentracin alta de sustrato$ la velocidad de la reaccin se hace
rcticamente constante e indeendiente de la concentracin de sustrato$ la
cintica se considera de orden cero.
81

?igura 0.
2in&tic enzim/tic. Modelo de MichaelisGMenten.
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2ara concentraciones de sustrato intermedias la velocidad del roceso de%a
de ser lineal$ y a esta zona se la denomina de cintica mi!ta.
+ste comortamiento es caracter"stico de la mayor"a de las enzimas y fue estudiado
or Michaelis y Menten en -6-H. La velocidad de una reaccin catalizada nos
indica la cantidad de sustrato consumido$ o roducto formado$ or unidad de tiemo.
+n el ;istema Internacional se designa or 4@5 )unidad de actividad enzimtica* y
corresonde a los Nmoles de sustrato consumidos en - min$ o bien a los Nmoles de
roducto formado en - min.
- @ Nmol ;Cmin Nmol 2Cmin
La curva &ue e!resa la relacin entre la concentracin de sustrato y la velocidad
inicial tiene la misma forma ara la mayor"a de las enzimas= se trata de una
hirbola rectangular$ cuya e!resin algebraica viene dada or la +c. MichaelisG
Menten.
Los trminos .
ma"
)velocidad m+"ima/ y Bm 0constante de Michaelis/ son dos
armetros cinticos caracter"sticos de cada enzima$ &ue ueden determinarse
e!erimentalmente. La velocidad m!ima se obtiene cuando la velocidad de
reaccin se hace indeendiente de la concentracin de sustrato. +ste valor
deende de la cantidad de enzima &ue tengamos. La Bm nos indica la
concentracin de sustrato a la cul la velocidad de reaccin es la mitad de la
velocidad m!ima$ este armetro es indeendiente de la concentracin de enzima$
y es caracter"stico de cada enzima seg3n el sustrato utilizado )si tiene varios*. La
Bm tambin indica la afinidad &ue osee la enzima or el sustrato$ siendo sta
mayor$ cuanto menor es la B
m
. Cuanto menor sea la B
m
menor ser la cantidad de
sustrato necesaria ara alcanzar la mitad de la velocidad m!ima$ or lo &ue mayor
ser la afinidad del enzima hacia ese sustrato.
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Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
La ecuacin de MichaelisGMenten uede deducirse matemticamente haciendo la
aro!imacin del estado estacionario$ seg3n esta aro!imacin la concentracin del
comle%o +; es constante en el estado estacionario y or lo tanto las velocidades
de formacin y destruccin del comle%o +; son iguales. (dems$ asumimos &ue el
aso limitante de la reaccin es el segundo y or lo tanto la velocidad de la reaccin
esI M
o
OB
9
[+;].
Velocidad formacin del complejo ES = Velocidad destruccin del complejo
ES
B
-
[+][;]O B
G-
[+;] D B
9
[+;]
B
-
[+][;]O )B
G-
D B
9
*

[+;]
La concentracin de enzima libre ser igual a la concentracin total de enzima
menos lo &ue est unido al sustrato. [+]O[ +
t
]G[+;]$ as" &ueI
B
-
[ +
t
][;]G B
-
[ +;

][;] O )B
G-
D B
9
*

[+;]
B
-
[ +
t
][;]O )B
G-
D B
9
D

B
-
[;]*

[+;]
#ese%ando [+;] se obtiene un trmino constante formado or las tres constantes e
igual a la constante de Michaelis )Bm*. +l trmino B
-
[ +
t
] ser recisamente la M
)velocidad m!ima* cuando todo el enzima est unido al sustrato formado un
comle%o +;$ o sea$ cuando la enzima est saturada or el sustrato$ es decirI
B
-
[ +
t
]OMma!.
#e modo &ue la forma final de la ecuacin de MichaelisGMenten esI
( artir de esta ecuacin odemos e!licar matemticamente las tres fases de la
curva de Michaelis.
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Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
( ba%a L;] )es decir$ si Bm PPP L;]* el trmino BmDL;] odemos aro!imarlo a
la Bm$ &uedando un e!resin del tioI
M O QR L;]
+sta es una cintica de rimer orden$ &ue se caracteriza or una variacin lineal de
la M resecto al tiemo.
( altas L;] )es decir$ BmSSSSL;]* desreciar"amos Bm frente a L;]$ con lo &ue
M O Mma! )&ue ser"a constante*= la cintica es de orden cero y se habr"a
alcanzado la saturacin or sustrato.
+l tramo intermedio$ en el &ue la L;] Bm corresondiente a una cintica de
orden mi!to y se a%usta a la ecuacin de Michaelis.
+n muchos casos es de vital imortancia conocer estos armetros cinticos. +n
rinciio$ odr"an obtenerse de forma oco rigurosa a artir de la curva de Michaelis
Menten$ ero e!isten mtodos grficos ms fiables &ue facilitan el clculo reciso
de la Bm y la Mma!. Los clculos se hacen en base a transformaciones matemticas
de la ecuacin de Michaelis= una de las e!resiones ms utilizadas es la
reresentacin de LineTeaverG7urQ$ tambin conocida como de dobles inversos
)?igura :*. +n esta forma de clculo se reresenta -CM frente a -C;$ obtenindose
una recta cuya interseccin con el e%e < es U-CBm y con el e%e V es -CMma!$ siendo
la endiente BmCMma!.
84
?igura :.
2in&tic enzim/tic. Reresentacin de LineTeaverG7urQ.
Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
7. In7i9icin enzim/tic
+!isten sustancias &ue ueden imedir &ue la enzima desarrolle su actividad
catal"tica$ ralentizando o aralizando la reaccin enzimtica. ( estas sustancias se
las denomina inhibidores enzim+ticos. >eniendo en cuenta &ue las reacciones
&u"micas en la clula estn catalizadas or enzimas$ es fcil intuir el ael de
muchos inhibidores enzimticos &ue act3an como frmacos$ antibiticos o
conservantes= otros ueden ser t!icos$ otentes venenos. 2or e%emlo$ la asirina
)acetilsalicilato* inhibe la enzima &ue cataliza el rimer aso en la s"ntesis de
rostaglandinas$ imlicadas en la roduccin del dolor.
;e conocen dos tios rinciales de inhibicinI la reversible y a la irreversible. La
rimera imlica una unin 4no covalente5 del inhibidor y$ or lo tanto$ siemre
uede revertirse. +n la inhibicin irreversible$ el inhibidor se une al enzima de forma
4covalente5 y ermanente.
In7i9icin re$er!i9#e: los distintos modelos de inhibicin reversible imlican todos
la unin no covalente del inhibidor con la enzima$ ero difieren en los mecanismos
or medio de los cuales reducen la actividad enzimtica y en la forma en &ue
afectan a la cintica de la reaccin. +ntre ellos estn la inhibicin cometitiva$ la
acometitiva y la no cometitiva.
+l inhibidor cometitivo$ es una sustancia similar en estructura al sustrato$
con &uien comite or el sitio activo de la enzima.

Como consecuencia$ aun&ue la velocidad m!ima no se altera$ ara
alcanzarla ser"a necesario oner ms cantidad de sustrato en el medio de
reaccin$ lo &ue se refle%a en la corresondiente curva de Michaelis como un
aarente aumento de la Bm )la enzima en resencia del inhibidor erder"a
85
E+S ES E+P
K
1 K
2
K
-1
ES+I EIS
K
i
Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
afinidad or el sustrato*. La reresentacin de dobles inversos )?igura /*
ermite observar la variacin de la Bm.
La eficacia de un inhibidor cometitivo deende de su concentracin resecto
a la del sustrato. ;i hay un e!ceso de inhibidor ste blo&uear los centros
activos de las molculas de enzima$ resultando una inhibicin total. No
obstante$ el roceso es reversible si se rocura e!ceso de sustrato$ &ue
deslazar"a totalmente al inhibidor.
+l inhibidor acometitivo reacciona con la enzima en un unto distinto al
centro activo$ ero slo en el caso de &ue sta est unida al sustrato
formando el comle%o +;= de esta forma imide &ue la enzima desarrolle su
actividad catal"tica.
86

?igura /.
In7i9icin com)etiti$. Clculo de armetros
cinticos mediante la reresentacin de dobles inversos.
E+S ES E+P
K
1
K
2
K
-1
ES+I EIS
K
i
Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
>anto la Mma! como la Bm se alteran en la misma roorcin$ lo &ue se
manifiesta en la reresentacin de dobles inversos como rectas aralelas y
or lo tanto con la misma endiente )?igura .*.
;e observa cmo se roduce$ aarentemente$ una disminucin de la Mma! y
un incremento de la Bm.
+l inhibidor no cometitivo uede combinarse tanto con la enzima libre como
con el comle%o enzimaGsustrato$ sin afectar al sitio activo de la enzima.
87
E+S ES E+P
K
1 K
2
K
-1
E+I EI
K
i
K
i2
EIS ES+I
?igura ..
In7i9icin com)etiti$. Clculo de armetros
cinticos mediante la reresentacin de dobles inversos.
Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
(l no unirse el inhibidor al sitio activo$ no se afecta la afinidad de la enzima
or el sustrato y en este caso la Bm no se altera y la Mma! disminuye$ como
uede observarse en la reresentacin de dobles inversos )?igura 6*.
En # in7i9icin irre$er!i9#e; el inhibidor se une covalentemente a la enzima y la
inactiva de manera irreversible. Casi todos los inhibidores irreversibles son
sustancias t!icas naturales o sintticas. ;e trata de sustancias &ue reaccionan con
alg3n gruo funcional imortante ara la catlisis$ blo&uendolo e imidiendo &ue la
enzima desarrolle su actividad. +n muchos casos la interaccin se roduce a travs
del sitio activo$ imidiendo de manera irreversible &ue el sustrato ocue su lugar=
tal es el caso del gas ;ar"n$ &ue inhibe irreversiblemente enzimas imlicadas en la
transmisin del imulso nervioso y su inhalacin causa arlisis rida de las
funciones vitales.
+n la inhibicin irreversible$ cuando el inhibidor afecta al sitio activo se observar"a
una situacin similar a la inhibicin cometitiva$ una disminucin de la Mma! y un
aumento aarente de la Bm$ si bien el roceso ser"a comletamente irreversible or
sustrato$ incaaz ste de deslazar al inhibidor del sitio activo. La inhibicin
88
E+S ES E+P
K
1 K
2
K
-1
E+I EI
1/V
1/[S]
1
Sin I
Con I
- 1/Km
1/V
max
1/V
max
Inhibicin no competitiva
1/V
1/[S]
1
Sin I
Con I
- 1/Km
1/V
max
1/V
max
Inhibicin no competitiva
?igura 6.
In7i9icin no com)etiti$. Clculo de
armetros cinticos mediante la
reresentacin de dobles inversos.
Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
enzimtica or modificacin covalente constituye adems una imortante forma de
regulacin metablica$ como veremos en r!imos aartados.
8. +eccione! mu#ti!u!trto
+n este ca"tulo hemos estudiado reacciones del tio ;G2$ un mecanismo
relativamente simle con un solo sustrato &ue odr"a a%ustarse a reacciones
catalizadas or algunas enzimas )isomerasas$ hidrolasas$ algunas liasas* ero
es imortante tener en cuenta &ue la gran mayor"a de las reacciones son
multisustrato y suelen dar varios roductos. Cuando una enzima une dos o
ms sustratos y libera m3ltiles roductos$ el orden de los asos ara a ser
una caracter"stica imortante del mecanismo de reaccin. Way distintos
mecanismos &ue e!lican este tio de reacciones$ veamos varios casos en los
&ue se utilicen dos sustratos ;- y ;9 y se obtengan dos roductos 2- y 29.
a* @nin ordenada de los sustratos I en este caso un sustrato debe unirse antes
de &ue el segundo sustrato ueda unirse.
b* @nin aleatoria de los sustratos I en este caso cual&uiera de los dos sustratos
uede ser el rimero en unirse a la enzima.
c* Mecanismo 4ingGong 5I en este caso rimero se une un sustrato$ se libera el
rimer roducto$ y a continuacin se une el segundo sustrato ara as" liberar
el segundo roducto.
9. +e%u#cin enzim/tic
@na caracter"stica &ue diferencia las enzimas de los catalizadores &u"micos
convencionales es su caacidad ara regular su roia actividad. @na enzima
uede ser ms o menos activa gracias a la e!istencia de distintos niveles de
regulacinI
Nivel de s"ntesis I &ue haya ms o menos molculas de la enzima )ya lo
veremos*.
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Tema 5. Enzimas Bioqumica y Biologa Molecular
Nivel de actividad I &ue las molculas de enzima e!istentes estn ms o
menos activas. 2uede llevarse a cabo or factores e!tr"nsecos a la enzima$
W$ >X$ L;]$ LI]$ o or factores intr"nsecos a la roia enzima= en este caso
hablamos de enzim! re%u#dor!$ enzimas &ue or su roia naturaleza
tienen mecanismos eseciales de regulacin. +stn esecializadas en
regularse resondiendo de forma muy sensible a se'ales e!ternas.
+n la clula las enzimas oeran en gruo$ en rutas constituidas or varios asos
enzimticos. +n cada ruta hay al menos una enzima reguladora &ue determina la
velocidad de toda la ruta. La modulacin de las enzimas reguladoras ocurre
mediante diferentes mecanismosI
Enzimas alost1ricas. ?uncionan mediante la unin reversible no covalente
de comuestos regulatorios llamados moduladores. +l modulador uede
ser una activador )modulacin ositiva* o un inhibidor )modulador
negativo* y ser el roio sustrato de la reaccin )alosterismo homotrico*
o ser otra sustancia )alsoterismos heterotrico*. Normalmente se trata de
enzimas multimricas y normalmente el sito activo y el regulatorio se
encuentran en distintas subunidades.
Enzimas interconvertibles 2or modificacin covalente reversible$ como
or e%emlo or fosforilacinCdefosforilacin o modificacin redo!.
Mediante rote"nas reguladoras &ue se unen a la enzima.
Mediante la eliminacin roteol"tica de e&ue'os segmentos et"dicos
)esto es irreversible*.
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