Contenido

Trichomonas vaginalis ________ 1

Comparacin de los resultados
despus de la vitrificacin
utilizando DMSO o PrOH_____ 1
Efectos de diferentes casas
comerciales de tampones ______ 2
La seleccin de los
espermatozoides ____________ 3
PS100-1000 ml ______________4
SpermCryoProtec
TM
__________ 4
Prximos eventos ____________ 4
A quien contactar ____________ 4
Preguntas frecuentes _________ 4
Comparacin de los resultados despus de la vitricacin utilizando DMSO o PrOH.
toriamente en tres grupos; congelacin
lenta, vitrificacin con DMSO y vitrificacin
con PrOH . Los blastocistos fueron congela-
dos o vitrificados de acuerdo con el proto-
colo de la clnica usando un sistema cerrado.
Se realiz transferencia de un solo embrin.
Resultados: Los resultados no mostraron di-
ferencias significativas entre los grupos en
cuanto a la implantacin y las tasas de naci-
dos vivos. Los blastocistos vitrificados con
DMSO mostraron tasas de supervivencia
significativamente ms altas que los blasto-
cistos vitrificados con PrOH.
Cada vez son ms las clnicas que
estn descubriendo nuestros pro-
ductos, VitriBlast
TM
y ThermoBlast
TM
para la vitricacin de blastocistos.
Uno de ellas es la clnica FIV Falun , una
clnica privada en Suecia. Ellos presentaron
un estudio en la reunin de los pases
nrdicos a principios de este ao , donde
compararon la congelacin lenta y vitrifica-
cin utilizando DMSO y vitrificacin
utilizando PrOH.
Antecedentes: La clnica ha utilizado con
xito la congelacin lenta para la criopreser-
vacin de blastocistos y antes de la imple-
mentar un nuevo m-
todo, los mtodos fue-
ron evaluados.
Preguntas: Tiene la
congelacin lenta de
blastocistos humanos
resultados comparables
a los de la vitrificacin ?
Tiene la vitrificacin
con DMSO mejores re-
sultados que con PrOH?
Principales medidas de resultados: Crio su-
pervivencia , implantacin y tasas de naci-
dos vivos.
Diseo y confgura-
cin: estudio piloto
prospectivo aleato-
rizado en una
clnica de FIV pri-
vada.
Mtodos: 300 cic-
los de FIV fueron
distribuidos alea-
Congelacion DMSO PrOH
Lenta
Numero de ciclos 100 100 100
Tasa supervivencia 93% 93% 87%
hCG Positiva 41% 46% 40%
Bebes nacidos/
Embarazo en curso. 28% 28% 26%
Tricomonas vaginalis un intruso latente
en la infertilidad inexplicada?
RESUMEN
La incidencia de la infeccin por T. vaginalis
ha venido creciendo cada vez ms en todo el
mundo durante la ltima dcada. Esto ha
llevado a que este microorganismo tenga
una importancia relevante como un
problema grave en la salud reproductiva ,
incluyendo la enfermedad inflamatoria
plvica, complicaciones durante el embarazo
y un mayor riesgo de
adquirir el VIH. En la
fertilizacin natural, se
necesita no slo de
muestra de semen p-
tima, que contenga un
nmero de clulas de
esperma normal y m-
viles, sino tambin libre
de cualquier microorga-
nismo que incluye T.
vaginalis. A continua-
cin, presentamos un caso clnico de un
paciente varn con infertilidad inexplicada
que se sometio a un ciclo de FIV. La
muestra de eyaculado de este paciente
fue recogida con fines de fertilizacin in
vitro y de inmediato se analiz al microsco-
pio. La contaminacin con T. vaginalis
y varias clulas polimorfonucleares se pone
de manifiesto en la muestra de semen.
Adems, se ob-
serva astenozoos-
permia que tiene
un impacto nega-
tivo en el logro de
la fertilizacion de
los ovocitos. Se
utiliz el proto-
colo de laborato-
rio para separacin
por medio de gra-
dientes de densi-
dad (PureSperm-Nidacon) en conjunto con
el dispositivo ProInsert (Nidacon). Se realiz
la preparacin de la muestra de semen para
capacitacin y recuperacin de espermato-
zoides mviles necesarios para el proce-
dimiento de FIV. Encontramos que los
gradientes de densidad elimina de manera
eficaz el microorganizmo T. vaginalis y las
clulas polimorfonucleares , dejando slo los
espermatozoides mviles para dar lugar a un
desarrollo exitoso de la fertilizacin de
ovocitos y embriones in vitro para ser trans-
ferido. Desafortunadamente, el embarazo
no se consigue debido a un fallo de la im-
plantacin del embrin como posible causa,
la infeccin endometrial por T. vaginalis de
la pareja femenina asintomtica.
IVF clinic Falun.
Dr. Laura Coral B.Sc,
BMR
Clara Esteban B.Sc.,
M.Sc., Ph.D., BMR
Cecolfes, Bogot, Colombia.
Nidacon
Noticias
Las noticias de su especialista en suplementos para ART No 1 2014
Nidacon Noticias No 1 2014
Nidacon Noticias 2
Efectos de diferentes casas comerciales de tam-
pones en la viabilidad espermtica y capacitacin.
Referencias Andrisani A, Don G, Ambrosini G, Bonanni G, Bragadin M, Cosmi E, Clari G, Armanini D, Bordin L. Effect of various commercial buffers on sperm viability
and capacitation. Syst Biol Reprod Med. 2014 Mar 27. [Epub ahead of print] Don G, Fiore C, Andrisani A, Ambrosini G, Brunati A, Ragazzi E, Armanini D, Bordin L,
Clari G. Evaluation of correct endogenous reactive oxygen species content for human sperm capacitation and involvement of the NADPH oxidase system. Hum Reprod.
2011;26(12):3264-73. Don G, Fiore C, Tibaldi E, Frezzato F, Andrisani A, Ambrosini G, Fiorentin D, Armanini D, Bordin L, Clari G. Endogenous reactive oxygen species
content and modulation of tyrosine phosphorylation during sperm capacitation. Int J Androl. 2011;34(5):411-9.
La preparacin de espermatozoides
en tampones de lavado es un paso
muy importante en el mantenimi-
ento de la correcta actividad siolg-
ica de las clulas. El procedimiento
adoptado ampliamente para evaluar
la viabilidad celular est normalmente
restringida a la evaluacin de la
motilidad agelo/hiperactivacin, un
parmetro que es insuciente para
la caracterizacin de esperma.
Recientes estudios pusieron de relieve la
importancia de la evaluacin de nuevos
parmetros, tales como el anlisis bioqu-
mico del contenido endgeno de las espe-
cies reactivas de oxgeno (ROS) y el nivel
de Tyr- fosforilacin de las clulas, como
caractersticas eficaces en cuanto a lo que
representa el estado correcto de los esper-
matozoides. (Doa et al., 2011) . De hecho,
slo cuando los mecanismos anteriores se
cumplen correctamente, el esperma se
puede considerar capacitado y puede
someterse a reaccin del acrosoma. La
capacitacin es un conjunto de alteracio-
nes que conducen a la reaccin acrosmica
(AR), un proceso de exocito-
sis mediada por enzimas
hidrolticas (por ejemplo, ac-
rosina) que son liberados
para permitir que el esperma
pueda fertilizar el oocito.
Lo que es necesario subrayar
es que una de la ms delicada
etapa del procedimiento de
ART est dado en la prepara-
cin de los espermatozoides
correctamente, incluyendo el
lavado inicial e incubacin
final que conduce a lograr el
estado capacitado.
Un estudio reciente (Andri-
sani et al, 2014.) Compar el
efecto de diferentes tampones
comerciales de acuerdo con su
capacidad para inducir la pro-
duccin de ROS, la Tyr-P de
la cabeza y, en consecuencia,
AR, prestando especial aten-
cin a la supervivencia de las
(Andrisani et al., 2014) Sperm, incubated for 180 min in capacitating conditions in different buffers, were ana-
lysed for Tyr-P pattern, AR and viability (NVC) by immunofluorescence cytochemistry as described in Methods.
Number of cells expressed as % of the total amount of cells showing Tyr-P in any part of the cell-body, or in
the head, were detected and reported as Tyr-P cells and Tyr-P head, respectively. Percentage of cells under-
going acrosome reaction or not viable cells (AR and NVC, respectively) were also reported. Spontaneous AR
percentages were also evaluated in each sample in the absence of A23187 and values reported (SAR).
**p<0.0001 and *p<0.02, comparing each sample against T0 (ANOVA followed by Dunnetts post hoc test).
Values are expressed as the mean SD.
Informe de la Universidad de of Padova, Italia.
clulas al final de 2h de incubacin. Lo in-
teresante es que, PSW-Nidacon fue
de lejos el mejor medio para la preparacin
de los espermatozoides: de hecho, las
clulas que alcanzaron AR (67,2 7,9 %)
fue casi tres-cinco veces en comparacin
con los resultados obtenidos con otros
tampones comerciales. PSW-Nidacon tam-
bin conserva las clulas de la apoptosis
(slo 3,5 1,4 % del total de clulas no
eran viables) en comparacin con el gran
nmero observado con los otros (Fig. 1).
El estudio tambin abord el problema
bien conocido de cmo se deben almace-
nar los tampones , puesto que la albmina
de suero humano, glucosa, lactato, etc
promueven la contaminacin bacteriana/
fngica , lo que resulta en un aumento de
la produccin de ROS con la consiguiente
rpida desnaturalizacin del esperma y
la incapacidad para alcanzar el estado
capacitado.
Capacitacin implica la reorganizacin de
la arquitectura de la membrana, debido a
la actividad extracelulares de las protenas
que tienen la tarea de extraer el colesterol
y reorganizar la membrana en microdomi-
nios especializados, tambin llamados
balsas, capaces de remodelarse y reorgani-
zarse para generar la reaccin acrosomal.
Una vez se ha producido la capacitacin,
estas balsas migran desde el flagelo, donde
se encuentran ampliamente, a la regin
peri-acrosmica donde presumiblemente
permiten la interaccin con el ovocito.
Los tampones utilizados en ART para la
preparacin de esperma, deben inducir
condiciones ptimas para lograr AR y
una vez ms, PSW demostr claramente
la mejor reorganizacin de la membrana
para alcanzar el potencial de AR. PSW-
Nidacon es un medio ptimo para preparar
esperma para someterse a sucesivas AR
y evitar la desnaturalizacin ligada al
tiempo.
Con el fin de evitar cualquier complicacin,
es recomendable utilizar tampn fresco
evitando un almacenamiento prolongado.
Nidacon Noticias No 1 2014
3 Nidacon Noticias
Introduccin
Los espermatozoides que se utilizan para la
reproduccin asistida, tiene el desafo, que
se ve aumentada la osmolaridad en el
lquido seminal. El aumento se debe a la
degradacin enzimtica que comienzan
cuando se recolecta la muestra de semen en
un recipiente y se mezclan y no durante el
coito normal. Los incrementos en la osmo-
laridad varan mucho de un hombre a otro.
A las 3 horas despus de la eyaculacin la
osmolalidad fue 384mOsm (284-544 , N =
35 ) (Holmes et al no publicado).
Los espermatozoides entonces enfrentan un
nuevo desafi por un chock hipotnico
abrupto cuando se transfiere en un medio
isotnico para seleccin de espermatozoi-
des. Aunque el medio de seleccin de esper-
matozoides ha sido estandarizado en una
composicin especfica.
La respuesta al medio, se convi-
erte en un evento nico no estan-
darizado para cada muestra de
semen si no se toman en cuenta
los cambios en la osmolaridad. El
objetivo de esta investigacin fue
estudiar cmo y por qu estos pro-
blemas iatrognicos afectan la
motilidad de los espermatozoides.
Objetivo
El objetivo del estudio era imitar
lo que ocurre con los espermato-
zoides durante la preparacin y
manipulacin en el laboratorio de
la FIV (Fertilizacin In Vitro), e
investigar como las funciones
La seleccin de los espermatozoides en ART
involucra un chock hipoosmtico incontrolado
a menudo ignorado, que afecta bsicamente
el volumen y la movilidad del esperma.
Holmes E., Bjorndahl L., Kvist U. Centro de Androloga y Medicina Sexual (CASM),
Departamento de Medicina, Hospital Karolinska, Huddinge .
bsicas de la cola de los espermatozoides y
movilidad fueron afectadas.
Material y Mtodos
Los medios utilizados para el lavado y exten-
diendo el semen se prepararon con anticipa-
cin. Son medios comerciales, PureSperm
40, PureSperm80 y PureSpermWash de
Nidacon AB. La variacin de la osmolaridad
se logr ajustando la glucosa, los niveles
de NaCl y KCl en los medios, para conseguir
los nivels deseados de osmolalidades
290- 450mOsm.
Las muestras se obtuvieron por mastur-
bacin antes de venir al laboratorio. Las
muestras se mantuvieron a temperatura
ambiente (20-22C) hasta que la licuefac-
cin se haba producido . Las muestras
fueron entonces divididas en alcuotas para
los diferentes tratamientos de osmolalidad.
Cada alcuota se limpi por centrifugacin
en gradiente de densidad , se lav en medio
de lavado y despus se resuspendi. La
osmolalidad se mantuvo la misma durante
todo el proceso de limpieza.
Justo antes del anlisis las alcuotas se
extendieron con medio de diferente osmo-
lalidad (50-450mOsm) con el fin de lograr
una osmolalidad final del 112, 150, 290,
450mOsm.
La motilidad se evalu con un sistema de
Hamilton Thorn IVOS y valores para las
velocidades de curva lineal (VCL) y el por-
centaje de espermatozoides con motilidad
progresiva se dan . Las observaciones se rea-
lizaron cada 5 minutos durante 60 minutos .
Porcentaje de cola enrrollada se evalu por
anlisis de imagen (sistema de imagen
Picsara) de suspensiones de espermatozoides
vivos en el que la osmolalidad se redujo de
0, 20, 40, 60 y 110 mOsm a una osmolalidad
final de 290 mOsm.
Resultados
Cambio hipertnico de 300-450 mOsm no
tuvo ningn efecto sobre la motilidad. Cam-
bio hipoosmtico de 300-150 mOsm dismi-
nuy la velocidad del esperma de 100 a
45m/s, y en el 112 mOsm espermato-
zoides no mviles fueron encontrados.
Cambio hipoosmtico de 400 mOsm a
290 mOsm disminucin fisiolgica de la
velocidad de esperma de forma permanente
de 97 a 77m/s (p<0,01) y disminuy el
porcentaje de espermatozoides progresiva
del 80% al 68 % (p <0,001). El 89% de
los espermatozoides haban enrollado la cola.
Conclusin
La seleccin de esperma eyaculado en el
laboratorio de FIV a menudo implica una
descarga hipoosmtica hasta entonces igno-
rada. La gravedad vara entre hombres y
permanentemente afecta a la velocidad y
la proporcin de espermatozoides mviles.
Esto puede afectar el resultado del tratami-
ento de FIV. Sin embargo , el problema puede
ser evitado si los espermatozoides son selec-
cionados en la eyaculacin como en la selec-
cin natural.
Coiled tails after treatment with low osmolality.
Photo by: Emma Holmes
Especialista de producto
Ms. Emma Holmes
Direct +46 31 703 06 43
emma@nidacon.com
Actualmente se encuentra ms en los efectos de
los cambios de osmolalidad en espermatozoides.
Mediante el uso de SCSA y citometra de flujo se
puede estudiar los daos en el ADN.
Karolinska University Hospital / Karolinska
Institute Emma Holmes, PhD student
Center for Andrology and Sexual Medicine
Normal
Coiled
Coiled
El objetivo de esta
investigacin fue estudiar
cmo y por qu estos
problemas iatrognicos
afectan la motilidad
de los espermatozoides.
Sperm with coiled tails after hypoosmotic challenge
at selection for IVF/ART
P
e
r
c
e
n
t
a
g
e

(
%
)

c
o
i
l
e
d

t
a
i
l
s
Change in osmolality (mOsm)
0 20 40 60 80 100 120
Max.
Min.
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
?
Fljelbergsgatan 16 B

S-431 37 Mlndal

Sweden

Phone +46-31-703 06 30

Fax +46-31-40 54 15
contact@nidacon.com www.nidacon.com
A
n
f
a
n
g

r
e
k
l
a
m
Especialista de producto
Ms. Ann-Soe Forsberg
ann-sofe@nidacon.com Tel: +46-31-703 06 42
Logstica
Mr. Dennis Johansson
dennis@nidacon.com Tel: +46-31-703 06 37
A quien contactar
Proximos eventos
ASRM Annual meeting , October 18th-22nd,
2014 , Honolulu, Hawaii.
ESHRE, Annual meeting,
June 29th July 2nd 2014. Munich, Germany
Nidacon Noticias No 1 2014
SSRM (Swedish Society for
Reproductive Medicine)
May 16-17th, 2014. Ume ,Sweden
Todos los productos Nidacon excepto MorfoStain
TM
y SpermVital-
Stain
TM
deben guardarse en el refrigerador una vez abiertos. La misma
vida til del producto, se aplica incluso despus de abrir si se maneja
de una manera asptica. MorfoStain
TM
y SpermVitalStain
TM
se deben
almacenar a temperatura ambiente despus de abrir.
Algunas preguntas y respuestas recientes que
pueden ser tiles para usted.
Si pasar pero, para mejorar el resultado mediante el tratamiento de la
muestra viscosa con PureSperm

Buffer antes de su se debe: Diluir

la muestra con PureSperm

Buffer 1 3 (1 ml PSB + 3 ml de muestra)

se incuba a 37C durante 15-30 minutos, mezcle y ya est listo para
la preparacin de gradiente de densidad. Puede encontrar ms infor-
macin en nuestro sitio web.
Preguntas frecuentes
Tengo una muestra muy viscosa; podr pasar a travs
del ProInsert
TM
?
Durante cunto tiempo puedo usar productos Nidacon
despus de abrir?
No, CryoProtec
TM
es un producto listo para usar como medio de cong-
elacin, que no requiere ningn tipo de aditivo. Slo tienes que seguir
las instrucciones y el esperma
se congela y se descongela de
manera segura.
Tengo que aadir yema de huevo al CryoProtec
TM
antes de su uso?
SpermCryoProtec
TM
una nueva botella
Vamos a cambiar el envase de SpermCryoProtec
TM
.
En lugar de la botella de vidrio con un tapn tendremos una
botella de plstico con tapa de rosca. Esto har ms fcil el uso
para el cliente, ms barato el transporte y con el mismo buen
resultado.
La nueva botella contiene 25 ml en lugar de 20 ml como hasta hoy.
Sin embargo, el precio seguir siendo el mismo.
Con el cambio de botella, tambin habr un pequeo cambio de
nombre. Estamos removiendo el "II" despus SpermCryoProtec
TM
,
para volver a usar solamente SpermCryoProtec
TM
.
Las nuevas botellas estarn disponibles a fnales de mayo.
PS100-1000 ml
4 x PS100-250 ml
Nidacon ha decidido eliminar
la produccin de PS100-1000
por motivos a la baja demanda
de PureSperm

100 en botellas de
1 litro.Durante el periodo de transi-
cin (Junio- a Diciembre, 2014) da-
remos a nuestros clientes un paquete
de 4 botellas de 250 ml de PS100
al mismo precio de la botella de
1000 ml.
Para pedidos, el artculo numero
ser el mismo PS100-1000.
Especialista de producto
Ms. Ann-Sofe Forsberg
Direct +46 31 703 06 42
ann-sofe@nidacon.com