A continuacin se presentan una serie de diferentes planes de las lecciones que

pueden ser de inters para los profesores de ciencias en la actualidad la enseanza de

la ciencia forense en la clase. Implican una serie de dificultades y diferentes aspectos
de la ciencia forense:
Seleccione uno de los siguientes planes de estudio:
-> Anlisis de sangre
-> Notas para el profesor
-> Notas de Estudiantes
-> Anlisis de cabello
-> Notas para el profesor
-> Notas de Estudiantes
-> Escenario Trabajo en equipo (para la aplicacin del Anlisis del pelo / de la
sangre)
-> Toma de huellas dactilares de ADN
-> Notas para el profesor
-> Notas de Estudiantes

Anlisis Bloodstain
[Impresin de
texto]
Tomado con permiso de la Iniciativa de Ciencias Biolgicas, patrocinado por la
Universidad de colourado.
INSTRUCCIONES DE MAESTROS
Objetivos
1. Introducir al alumno en algunas de las tcnicas utilizadas por los cientficos forenses
para el anlisis de sangre.
2. Introducir al alumno en el concepto de grupo sanguneo.
3. Proporcionar oportunidades para que los estudiantes practiquen las habilidades de
pensamiento crtico en el contexto de la investigacin cientfica.
Materiales
- Blood (pollo o de vaca, se pueden obtener de las instalaciones de envasado de
carne)
- Pintura roja
- colorante alimentario rojo
- tomates frescos
- Fresh, remolacha cruda
- Conservas de salsa de tomate o salsa de espaguetis
- pequeos recipientes de plstico en los que alcuota de cada uno de los anteriores
sustancias (6 por grupo de estudiantes)
- Conjunto de sobres con las plazas de algodn con manchas de la escena del crimen
(un juego por cada equipo de estudiantes)
- Pequeas botellas con cuentagotas o tubos de plstico pequeos y pipetas o goteros
- Perxido de hidrgeno
- Solucin de fenolftalena (instrucciones para la preparacin inmediatamente debajo )
Solucin Stock
Combine:
- 2 g de fenolftalena (polvo)
- 20 g de hidrxido de potasio (PRECAUCIN: custica base, fuerte)
-. 100 ml de agua
Homogeneizar.
Aadir:
-. 20 g de polvo de zinc
Permita 48 horas para la solucin a ser incoloro. Almacenar en una botella de color
marrn o botella envuelta con papel de aluminio.
Solucin de trabajo:
- 20 ml de solucin de stock
- etanol 80 ml "Caso de la High Tech Lab Hacked" - 1 sobre con plaza de algodn seco
teido con colorante rojo con la etiqueta "A" - 1 sobre con plaza de algodn seco
manchada con sangre de vaca o pollo etiqueta "B"


NOTA:. En lugar de proporcionar a los estudiantes con las manchas para poner a
prueba, es posible que tenga que probar las manchas reales que recogieron de la
escena del crimen
- Kit tipo de sangre simulada con muestras transferidas a nuevos tubos etiquetados
como "sospechoso 1", "sospechoso 2", " sospechar 3 ", y" pruebas ". Coloque el lquido
de la misma muestra en los dos tubos "sospechoso 1" y "evidencia" (por ejemplo, el
Sr. Smith del kit Wards). Coloque el lquido de las personas con diferentes tipos de
sangre en tubos de "sospechosos 2" y "3 sospechar".
Instrucciones
Esta actividad consta de dos partes.
Primera Parte tiene la intencin de ensear a los estudiantes acerca de la prueba de
catalasa para la presencia de sangre. Mientras que hay pruebas ms sensibles para
detectar la presencia de sangre que un investigador podra utilizar, esto es, con
mucho, el ms barato. Tras el folleto para estudiantes debera ser bastante
sencillo. Los estudiantes a predecir si o no las sustancias previstas sern catalasa
positivo o negativo, entonces ponen a prueba sus predicciones. Tambin prueban si
cada sustancia pruebas positivas de la sangre mediante la prueba de la
fenolftalena. Despus de este paso se abren los paquetes de las pruebas aportadas, y
probar si cada mancha que se encontr es probable que sea la sangre.
Parte Dos direcciones de grupo sanguneo. Una buena manera de evitar el uso de la
sangre humana real para este ejercicio es la compra de un kit de tipificacin de sangre
simulada a partir de una empresa suministradora. Su rango de precios es de
aproximadamente $ 35 - $ 50.
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INSTRUCCIONES PARA ESTUDIANTES
Los investigadores a menudo se encuentran manchas de sangre durante su examen de
la escena del crimen. Tambin encuentran manchas que pueden ser ya sea de sangre
o alguna otra sustancia similar, como la pintura de color marrn rojizo. Qu otras
cosas se te ocurren que podran parecerse a la sangre? Cmo se podra probar una
mancha para ver si se trata de sangre?
Alguna vez ha utilizado el perxido de hidrgeno para limpiar un corte o un
rasguo? Qu sucedi cuando el perxido de hidrgeno se puso en contacto con la
sangre de la herida?
La sangre contiene una enzima llamada catalasa, que descompone el perxido de
hidrgeno en agua y gas oxgeno.
2H2O2 --- catalasa -> 2H2O + O2
Cuando se produce esta reaccin, el gas oxgeno se libera en forma de burbujas. La
enzima catalasa realiza una funcin importante para los organismos vivos porque el
perxido de hidrgeno es muy txica para las clulas vivas. Otros organismos,
incluyendo plantas y algunas bacterias, tambin hacen catalasa.
Si coloca unas gotas de perxido de hidrgeno en una sustancia que contiene catalasa,
se formarn burbujas profusamente. Estas sustancias que la burbuja con la adicin de
perxido de hidrgeno se dice que un resultado positivo para la catalasa.
Los investigadores criminales no suelen utilizar la prueba de catalasa en escenas de
crmenes. Otras pruebas sencillas son mejores para detectar concentraciones muy
diluidas de sangre - a veces tan diluir el ojo humano ya puede ver la mancha. Estas
pruebas (listados abajo), mientras ms fiables, requieren productos qumicos ms
caros.
- Bencidina
- Leucomalaquita verde
- Phenolphthalein
- test Takayama
- bezidine Tetra-metil
- Luminol y pruebas espectrofotomtricas.
La mayora de estas pruebas se basan en la actividad de las enzimas peroxidasa en
sangre para reaccionar con una mancha qumica causando que cambie de color, o en el
caso de luminol, brillan en la oscuridad.
En esta actividad, se le comparando los resultados de la prueba de la catalasa
utilizando perxido de hidrgeno con la prueba de la fenolftalena, para ver cmo cada
uno reacciona con la sangre y otras sustancias.
Cul de las siguientes sustancias crees que sera un resultado positivo para la
catalasa?Haz una prediccin para cada uno, y explicar su razonamiento. Asegrate de
hacer una prediccin para cada sustancia antes de realizar la prueba.
Sustancia
Es usted predice que
ser catalasa positivo
o negativo?
Explique su prediccin.
Resultado:
La catalasa
positivo o
negativo?
Pintura roja
Tomate
Fresco
(aplastado)

Cocido
salsa de
tomate

Red
Colorantes

,
Remolacha
fresca
cruda

Sangre
(pollo,
vaca)

Pruebe cada uno de estas sustancias para ver si es catalasa positiva o negativa
mediante la colocacin de unas pocas gotas de perxido de hidrgeno en una pequea
cantidad de cada uno. Registrar los resultados de la tabla anterior.
NOTA DE SEGURIDAD: A pesar de que no va a utilizar toda la sangre humana real en
esta actividad, usted debe usar la proteccin adecuada, como guantes.
Anlisis de la evidencia de la escena del crimen
de prueba de las manchas de la escena del crimen que se sospecha puede ser
manchas de sangre. Slo debe probar parte de cada muestra y no toda la
muestra. Por qu?
Anota los resultados de abajo.
Mancha Catalasa + / - Phenolphthalein + / -
La
B
Cul de estas manchas es probablemente la sangre? Podra ser cualquier otra cosa
que no sea la sangre? Compruebe sus respuestas con la clave proporcionada. Una vez
que sepa que una mancha de sangre, lo que ms se puede hacer como un cientfico
forense?Hay una gran cantidad de informacin potencial en una mancha de sangre.
Patrn y forma: La forma y el patrn de las gotas de sangre pueden revelar
informacin importante acerca de la naturaleza de la herida de la que proceda la
sangre. Fue la persona sangrado de pie quieto o caminando? Qu distancia se cay la
gota de sangre?El salpicaduras de sangre en todas direcciones? Un buen investigador
sera fotografiar cuidadosamente todas las manchas de sangre de diferentes ngulos
tanto de modo que un cientfico forense podra examinar el patrn y para poder
presentar las pruebas ante un jurado.
ADN: La sangre contiene ADN, y dependiendo del tamao de la mancha y de su
condicin (edad, nueva, seco, etc), un cientfico forense puede ser capaz de obtener
suficiente informacin para obtener una coincidencia altamente probable de un
sospechoso con la evidencia .
Dos tcnicas son muy utilizados por los cientficos forenses en la evaluacin de las
pruebas de ADN a partir de sangre o de otros tejidos del cuerpo - reaccin en cadena
de la polimerasa (PCR) y el nmero de repeticiones en tndem de variable (VNTR 's).
Tipo: Determinacin del grupo sanguneo puede ser utilizado como una prueba inicial
para excluir a algunos sospechosos de fuentes de una mancha de sangre. Por ejemplo,
si una mancha de sangre en la escena del crimen contiene sangre del tipo A, pero el
principal sospechoso tiene sangre tipo O, el sospechoso podra
ser excluido como fuente de la mancha de sangre - lo que significa que l o ella
definitivamente no sali de la mancha de sangre. Sin embargo, el tipo de sangre por s
sola por lo general no puede identificar positivamente a un sospechoso, porque
muchas personas comparten el mismo tipo de sangre.
Los investigadores han recogido muestras de sangre de cada uno de los sospechosos
en el caso. Las muestras y las pruebas estn etiquetados AD. Ser su trabajo para
escribir cada muestra. Usted determinar tanto el tipo de sangre ABO de cada
muestra, as como el tipo de factor Rh.
Grupo sanguneo ABO:
Hay tres alelos en el locus que determina el grupo sanguneo ABO del individuo, y hay
cuatro posibles tipos -> A, B, AB y O. Tipo A tienen los individuos "A" antgenos en la
sangre. Los antgenos son protenas que inmune del cuerpo
sistema reconoce y, o bien monta una respuesta inmune a, si el antgeno es de una
fuente externa, o ignora, si el antgeno es parte del cuerpo en s. Tipo individuos A no
montan una respuesta inmune contra un antgeno. Si lo hicieran, el sistema inmune
producira Un anticuerpos que se unen a los antgenos A y hacer que la sangre se
espese y coagule. Las personas que son de tipo B no producen anticuerpos contra los
antgenos B, pero s producen anticuerpos
contra los antgenos A. Las personas que son de tipo O no tienen ni antgenos A o
antgenos B, por lo que tienen anticuerpos contra ambos tipos. Los individuos que son
tipo AB, tienen ambos antgenos y no tienen anticuerpos contra A o B. No hay
antgenos O.Individuos del grupo O simplemente no producen antgenos en este grupo
sanguneo.
Tipo A Tipo B Escriba AB Escriba O
Antgenos La B A y B ni A ni B
Anticuerpos B La Ni A ni B A y B
El factor Rh:
Otro grupo de antgenos en la sangre comnmente evaluados es el factor Rh. Los
individuos que producen antgenos Rh se denominan Rh positivo. Las personas que no
producen antgenos Rh se denominan Rh negativo.
Siga las instrucciones suministradas con el kit de determinacin del grupo sanguneo y
determinar los tipos de sangre de las muestras etiquetadas A, B, C, y D. Recuerde usar
guantes al manipular las muestras de sangre. Registre los tipos de sangre de cada
individuo a continuacin. Consulte la clave para las etiquetas y escribir en la identidad
de cada muestra.
Etiqueta Tipo de sangre Identidad
Evidencia
Sospechoso
1

Sospechoso
2

Sospechoso
3

Conteste las siguientes preguntas con respecto a sus resultados:
.? 1) Con base en los resultados del anlisis de grupo sanguneo, se puede excluir a
ninguno de los sospechosos como de haber dejado la mancha de sangre encontrada en
la escena del crimen
. 2) En base a los resultados de la sangre anlisis de tipo, que sospechoso (s) podra
haber dejado la mancha de sangre en la escena del crimen?
3.) Si se te permitiera realizar pruebas adicionales con esta mancha de sangre de la
escena del crimen, qu recomendara usted?
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Anlisis del cabello
[Impresin de
texto]
Tomado con permiso de la Iniciativa de Ciencias Biolgicas, patrocinado por la
Universidad de colourado.
INSTRUCCIONES DE MAESTROS
Objetivos
1. Introducir al alumno en el proceso de pensamiento implicados en el desarrollo de
una tcnica para el anlisis forense.
2. Introducir al alumno en la estructura fsica del cabello.
3. Proporcionar oportunidades para que los estudiantes a mejorar sus habilidades en la
observacin, el pensamiento crtico y la microscopa.
Esta actividad consiste en dos partes, que se pueden realizar por separado o como una
unidad cohesiva. La primera parte requiere que los estudiantes para examinar un
conjunto de pelos. Usando sus habilidades de pensamiento crtico y de observacin,
desarrollarn un procedimiento para identificar los pelos recogidos de la escena del
crimen.
La segunda parte tiene por objeto complementar cualquiera de los escenarios de la
escena del crimen desarrollados por la Iniciativa Hughes UCB. En esta parte, los
estudiantes examinan los pelos supuestamente recogidas de la escena del crimen, as
como pelos de los sospechosos y
sus mascotas. Van a utilizar la hoja de datos proporcionada para determinar que el
sospechoso es el partido ms probable. Si tiene la intencin de utilizar las dos partes,
se recomienda que las haces en el orden descrito anteriormente.
Anlisis de cabello Actividad - Parte Uno
Materiales
- Pelos de diferentes especies e individuos (humanos, gatos, perros, caballos, ciervos,
conejo, cobaya, chinchilla, etc)
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Agua y goteros
- Microscopios
Instrucciones
Preparar un conjunto de etiqueta, diapositivas hmedas de montaje para cada grupo
de 2-4 estudiantes. Los grupos ms pequeos son probablemente mejor, pero hacer lo
que funcione mejor para su saln de clases. Cada conjunto debe contener una
diapositiva con pelos o un solo cabello de cada individuo. De ocho a diez diapositivas
total por conjunto es un buen nmero. Un conjunto hipottico podra incluir las
siguientes diapositivas:
1.) Cabello humano (rojo, largo, rizado)
2.) el pelo de perro (negro, recto)
3.) pelo de gato (gris, largo)
4.) Ciervo pelo
5.) pelo de perro (blanco, nervudo)
6.) pelo de gato (beige, corto)
7.) cabello humano (marrn, recto, corto)
8.) pelo de conejo
9.) cabello (rubio, ondulado, largo)
10.) pelo de caballo
En lugar de preparar las diapositivas usted mismo, usted puede optar por dar a cada
equipo de estudiantes de un conjunto de sobres etiquetados que contienen los pelos y
pedirles que preparar las preparaciones hmedas.
Las instrucciones para la preparacin de preparaciones hmedas de pelo estn
incluidos en el folleto para estudiantes de la segunda parte.
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El caso del Laboratorio de Alta
Tecnologa Hacked
[Impresin de
texto]
Tomado con permiso de la Ciencia Biolgica Iniciativa del sitio.
Julie Chen es programador de computadoras en una de alta tecnologa centro de
investigacin militar, que est trabajando en una nueva tecnologa de satlites
espas.Lleg a su oficina esta maana y descubri su puerta entreabierta, con el cristal
roto. Un rpido anlisis de su computadora revel que alguien haba usado su terminal
para hackear y descargar la informacin clasificada sobre el diseo del satlite. Ella
report el incidente de inmediato. Mientras que la Sra. Chen tiene un rcord perfecto y
una altura libre de seguridad, investigador principal del laboratorio sospecha que ella
puede haber organizado el robo y descargar la informacin a s misma para que
pudiera vender a un organismo extranjero.
Usted y los othe r especialistas forenses de la Agencia de Seguridad Nacional (NSA) ha
sido asignado a examinar la escena del crimen. Usted debe buscar pruebas fsicas,
documentar todo lo que encuentres, y el paquete con cuidado y etiquetar cualquier
evidencia retirado de la escena. A continuacin, el transporte de la evidencia al
laboratorio y analizarla junto con las muestras tomadas de los posibles
sospechosos. Por favor refirase a la "Gua de Anlisis de la escena del crimen" (o su
libro de texto preferido) para procedimientos especficos.
Usted ser responsable de documentar y reunir los siguientes tipos de evidencia de la
escena del crimen:
Fibras y / o el cabello
Bloodstains
Varios rastros de evidencia (pedazos de papel, artculos de los ladrones pueden
havedropped, etc)
Al llegar a la escena del crimen, que se lo indique el agente a cargo de que los
investigadores han tratado de mantener el rea lo imperturbable posible. Le informan
que el equipo de huellas digitales ya ha sacado el polvo del rea y levant huellas, y el
patrn experto fractura de vidrio ya ha examinado la ventana rota.
La NSA quiere informacin de la evidencia fsica tan pronto como sea posible para
responder, a lo mejor de su conocimiento, las siguientes preguntas:
1.) Hay alguna evidencia que sugiere que una persona distinta de la Sra. Chen entr
en su oficina recientemente?
2.) Hay alguna evidencia que sugiera que alguien que no sea la Sra. Chen ha
trabajado en su terminal de computadora recientemente?
3.) Hay alguna evidencia fsica actual que podran vincular a un sospechoso potencial
para el crimen o utilizarse para exonerar a la Sra. Chen?
Proporcionar una respuesta detallada por escrito para cada una de estas
preguntas. Sus supervisores pueden tener preguntas adicionales para usted ms
tarde. Asegrese de que al entrar en la escena del crimen, que usted est usando la
proteccin adecuada para evitar la contaminacin de las pruebas (guantes, botines,
batas de laboratorio, cubiertas de pelo). Asegrese de que todos en su equipo de
investigacin sabe que su / su papel:
- Lder del equipo
- fotgrafo y grabador de registros fotogrficos
- bosquejo / mapa artistas
- recuperacin de pruebas y el equipo de grabacin de pruebas
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Los agentes de la NSA han estado identificando e investigando posibles sospechosos de
la descarga no autorizada de archivos de computadora de alta seguridad
restringidas. Sus resultados preliminares de las pruebas fsicas de la escena han sido
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Toma de huellas dactilares de
ADN
[Impresin de
texto]
Preparado por y basado en el uso de la Oficina de Biotecnologa de la Universidad
del Estado de Iowa .
PROFESOR DE PREPARACIN Y GUA DE INSTRUCCIONES PARA
CAROLINA BLU MANCHA
La preparacin y el desarrollo del laboratorio de huellas genticas de ADN se divide en
las siguientes secciones:
Preparacin de los materiales de los estudiantes
El plsmido de ADN Preparacin
Preparacin de restriccin de endonucleasa
Migracin preparacin de tinte
Preparacin, carga y ejecucin de un gel de agarosa Para uso con
Carolina Blu Stain
Montaje de la impronta gentica de ejercicio en perodos de 45 minutos
Instrucciones de Estudiantes
PREPARACIN DE LOS MATERIALES DE LOS ESTUDIANTES
Los suministros pueden ser mejor siempre a la clase en grupos de cinco alumnos. Las
muestras de ADN se deben mantener en el refrigerador hasta que la clase se
establezca.En la Oficina de Biotecnologa, por ejemplo, es demasiado caro proporcionar
ADN para todos los alumnos de una clase, de modo suficiente ADN, la endonucleasa de
restriccin, y tampn de reaccin para un mnimo de dos grupos de cinco estudiantes o
un grupo de cinco estudiantes de cada seccin de clase, se ofrece, lo que sea
mayor. Para los restantes grupos de estudiantes, el agua destilada se utiliza para
sustituir el ADN, endonucleasas de restriccin, y tampn de reaccin. Cada grupo de
estudiantes debe ser proporcionada con el colorante azul de migracin.
1 tubo de microcentrfuga (1,5 ml) que contiene 17 l de un 0,025 g / l
concentracin de ADN de pBR322 y la etiqueta "C". La etiqueta debe estar
escrito en la tapa y el cuerpo del tubo con un rotulador.
4 tubos de microcentrfuga (1,5 ml), conteniendo cada uno 17 l de una de las
cuatro muestras de ADN diferentes. El tubo con la etiqueta "1" debera contener
0,15 concentracin mg / l de l de ADN, el tubo etiquetado como "2" debe
contener 0.075 concentracin mg / l de Ad-2 del ADN, el tubo con la etiqueta
"3" debe contener 0.025 concentracin mg / l de pBR322 ADN, y el tubo con la
etiqueta "4" deben contener 0.025 concentracin mg / l de ADN de pUC19.
1 tubo de microcentrfuga (1,5 ml) que contiene 18 l de una mezcla de 3 l de
Bgl 1 y 15 l de tampn de reaccin
El tubo debe ser etiquetado como "N".
1 tubo de microcentrfuga (1,5 ml) que contiene 40 l de tinte migracin azul y
la etiqueta "D".
1-20 l pipeta
10 puntas de pipetas estriles de 200 l en un recipiente apropiado
1 recipiente para mantener las puntas de las pipetas usadas
5 copias de las instrucciones de laboratorio. Cada grupo debe tener una carta se
le asigna en la esquina superior derecha de la hoja de instrucciones.
El maestro debe tener disponibles para toda la clase:
Gel de electroforesis
Fuente de alimentacin de electroforesis
1-20 l pipeta y 1 caja de puntas de pipeta 200 l estriles para cada cuadro de
gel
Una incubadora a 37 C y la cremallera para sujetar los tubos de
microcentrfuga de los estudiantes
1 Sharpie pluma de marca
1 hoja de papel para cada cuadro de gel que ha numerado las lneas o casillas
correspondientes a los carriles en el gel.
(Opcional) lo suficientemente pequeo, mediano, grande, y grandes guantes
mdicos adicionales para los estudiantes.
Los maestros deben pedir los siguientes suministros por lo menos una semana de
antelacin.
6 cajas de puntas de pipeta (ya tratado en autoclave)
34 l de 0,025 mg / l por pBR322 seccin de clase (mnimo de 68 l por la
escuela)
17l de 0.075 mg l Ad-2 DNA / por seccin de clase (mnimo de 34 l por la
escuela)
17 l de 0,15 mg / l de ADN por seccin de clase (mnimo de 34 l por la escuela)
17 l de 0,025 g de ADN / l pUC19 por seccin de clase. (Mnimo de 34 l por la
escuela)
3 l Bgl 1 por seccin de clase (mnimo de 6 l por la escuela)
Tampn de reaccin de 15 l por seccin de clase (un mnimo de 30 l por la
escuela)
144 l Carolina Blu Gel Stain por gel (un mnimo de 2 geles)
732 l Carolina Blu Buffer Stain por gel (un mnimo de 2 geles)
1 botella de Carolina Blu ADN de la mancha
0,7 g de agarosa por gel (un mnimo de 2 geles)
70 ml de 10X TBE por gel (un mnimo de 2 geles)
40 ml de colorante azul de migracin para cada grupo de cinco estudiantes de
todas las secciones.
8 tubos de microcentrfuga para cada grupo de cinco estudiantes de todas las
secciones (ya en autoclave)
Identificacin gentica de instrucciones
Una nota para enviar los no utilizados puntas de pipeta / cajas, botellas 10X
TBE y Carolina Blu ADN de la mancha de nuevo a la Oficina de Biotecnologa
cuando haya terminado.
[ Volver al principio ]
Plsmido de ADN PREPARACIN
Lo mejor es que los guantes mdicos y la vajilla se usan en la preparacin de
materiales para el laboratorio para evitar que los dedos del maestro de la
contaminacin de las muestras de ADN. El ADN no daar el profesor, pero el profesor
puede daar el ADN. Las muestras de ADN se preparan a partir de ADN plsmido, que
en la Oficina de Biotecnologa, figure ya, a la concentracin apropiada. El ADN debe
mantenerse refrigerado, excepto cuando se est utilizando para preparar y realizar el
laboratorio.



Instrucciones de uso de la micropipeta

Los 17 l de la ADN plsmido se deben poner en tubos de microcentrfuga de 1,5 ml
estriles para los estudiantes. Los tubos se pueden preparar hasta 24 horas de
antelacin y se mantienen en el refrigerador hasta que el perodo de clase. El nmero
de tubos de cada tipo para cada grupo de cinco estudiantes se ha descrito
anteriormente en la preparacin de los materiales para los estudiantes. [ Volver al
principio ]


PREPARACIN endonucleasa de restriccin
La endonucleasa de restriccin utilizado para el laboratorio es Bgl 1, comnmente
conocida como Bagel 1. La endonucleasa y el tampn de reaccin se pueden preparar
para los estudiantes de hasta 24 horas de antelacin y se mantienen en el refrigerador
hasta que el perodo de clase. La mezcla debe ser preparada en tubos separados para
cada grupo de alumnos, es decir. una gran cantidad no debe ser preparado y
subdividida en diferentes tubos. Para obtener 18 l de la mezcla para un grupo de cinco
estudiantes, 3 l de Bgl 1 se aadi a un tubo estril de microcentrfuga de 1,5, a
continuacin, 15 l de tampn de reaccin se aadieron al tubo. Para enjuagar la punta
de la pipeta y mezclar el tampn Bgl 1 y la reaccin, llenar y descargar la pipeta con la
muestra tres veces. El tubo debe estar claramente etiquetado como "N".

[ Volver al principio ]
PREPARACIN DYE MIGRACIN
Un colorante azul migracin se utiliza para supervisar el movimiento de la ADN durante
la electroforesis. En la Oficina de Biotecnologa, se proporciona tal tinte migracin listo
para su uso. Cada grupo de alumnos debe recibir el medio de contraste, incluso si se
les da placebos de agua, en lugar de ADN, la endonucleasa de restriccin, y tampn de
reaccin.

[ Volver al principio ]
La preparacin, carga, y el funcionamiento de un gel de agarosa PARA
USO CON CAROLINA BLU MANCHA
El gel se puede preparar hasta dos das antes del perodo en el que el ADN se carga en
l.Si se prepara con antelacin, 1) colocar el cuadro de electroforesis en el refrigerador
con la tapa en su lugar o 2) la bandeja de fundicin y de gel pueden ser retirados de la
caja de la electroforesis, sellado en una bolsa de plstico, y se almacenaron en un
refrigerador.La siguiente descripcin se aplica a los 12 cm de ancho x 14 cm de la
unidad de electroforesis de largo proporcionado en la Oficina de Biotecnologa de la
Universidad del Estado de Iowa. Los procedimientos generales seran los mismos para
cualquier aparato de gel, a excepcin de los volmenes de gel de tampn y que se
utilizan.
1. Pngase un par de guantes mdicos y la vajilla y los usan durante todo el
procedimiento, incluso durante el laboratorio y la limpieza. Ninguno de los
productos qumicos utilizados son txicos, pero los guantes de proporcionar
proteccin a las personas que tengan la piel sensible.
2. El cuadro de electroforesis vendr completamente montado. Para preparar el
cuadro para la fundicin de un gel, followthe instrucciones a continuacin.
o una. Para quitar la tapa de la caja, frente a la caja con los enchufes de
electrodo apuntando a la parte posterior, y placefingers en cada extremo
de la unidad mientras pulsa los pulgares contra el borde frontal de la
tapa.Empuje thumbsagainst la tapa hacia la parte posterior de
desconectar los cables de alimentacin de los enchufes. Ascensor
toremove tapa del sistema.
o b. Retire la bandeja de gel agarrando cada lado y levantar en un ngulo
para facilitar la bandeja del sistema (Ver figura 1). Enjuague los peines,
bandeja de gel y la caja de gel en agua destilada para eliminar cualquier
residuo. No es necesario secar las piezas.
o c. Vuelva a colocar la bandeja de gel en el sistema bajando
cuidadosamente la bandeja en un ngulo tal que las juntas adapten al
tamao de la parte delantera y trasera de la pared de la caja del gel (Ver
figura 1). Esto debera proporcionar un sellado eficiente que evita la fuga
de la agarosa caliente cuando se vierte en la bandeja. Si la junta se ha
deslizado fuera de la ranura, empuje de nuevo en su lugar antes de
bajar la bandeja en la caja.
3. Preparar 700 ml de tampn de electroforesis TBE 1X mediante la dilucin de 70
ml de TBE 10X solucin madre con 630 ml de agua destilada.
4. Pesar 0,7 g de agarosa y se vierte en un matraz de 250 ml o vaso de
precipitados que contiene 45 ml de tampn de electroforesis 1X TBE preparados
en la etapa 3.Agitar la suspensin de agarosa para dispersar el polvo.
5. Pngase un guante resistente al calor. Microondas de la suspensin hasta que
hierva (aproximadamente 30 segundos a 1 minuto), agitar el frasco, y se
alternan de ebullicin y arremolinndose en intervalos de 15 segundos hasta
que la solucin haya hervido un total de 1 minuto o hasta que no hay slidos
visibles.
Figura 1

6. Se enfra la solucin de agarosa mediante la adicin de 45 ml del tampn 1X
TBE desde el paso 3, con lo que el volumen en el recipiente a 90 ml. Agitar la
solucin con cuidado para evitar que queden atrapadas burbujas de aire.
7. Aadir 144 l de Carolina Blu Gel Stain a la solucin de agarosa. En la Oficina de
Biotecnologa, el Gel Stain se proporciona en un tubo de microcentrfuga. Para
obtener toda la mancha fuera del tubo, enjuague el tubo con tampn TBE 1X o
agua destilada y se vierte en la solucin de agarosa. Agitar la solucin de
agarosa suavemente hasta que tenga un color azul claro uniforme.
8. Verter lentamente la solucin de agarosa en el gel bandeja con cuidado de no
permitir la formacin de las burbujas en el gel. Si se forman burbujas, golpee
con un dedo hasta que desaparezcan.
9. Lavar el matraz o vaso de precipitados de inmediato con abundante agua del
grifo para evitar que la agarosa se endurezca en ella o el fregadero.
10. Inmediatamente coloque un peine (s) de eleccin en la ranura de la bandeja,
tratando de evitar la formacin de burbujas de aire en los pozos. Deje que el
gel repose a temperatura ambiente durante unos 30 minutos hasta que est
slido (gel aparecer ligeramente lechoso).
11. Despus de que el gel se fija, retire el peine (s). Para eliminar un peine, sujete
ambos extremos del peine y levantar suavemente hacia arriba con una ligera
ida y vuelta movimiento de balanceo. Para orientar la bandeja de gel en la
posicin de funcionamiento, sujete los lados de la bandeja y levante
suavemente en un ngulo (Ver figura 1). Gire la bandeja de 90 grados a la
posicin de los extremos abiertos hacia los electrodos de platino. ADN tiene
carga negativa y migrar hacia el (rojo) positivo durante la electroforesis. Los
pocillos del gel deberan ser ms cercana el electrodo negativo final (negro) de
la caja de electroforesis. Baje con cuidado la bandeja en su posicin, y asegure
la bandeja entre las pestaas de la bandeja de gel. Para verificar si la bandeja
de gel est orientada correctamente, coloque la tapa sin apretar en la caja. Los
pozos deben estar ms cerca del electrodo negativo (negro).
12. Cargar las muestras de ADN mediante la colocacin de la punta de la pipeta en
la parte superior del pozo y liberar lentamente la solucin en el pozo (Ver figura
2). La pipeta se puede mantener constante manteniendo el can como un palo
de billar y apoyndose en el cuadro de gel. Coloque la punta en el pozo lo ms
verticalmente posible. No vaya demasiado profundo en el pozo para evitar
perforar el gel.
Figura 2

13. Despus de que los estudiantes han cargado sus muestras en los pocillos,
aadir 732 l de Carolina Blu Buffer Stain a los 610 ml de tampn 1X TBE que
quedaron despus del paso 6. En la Oficina de Biotecnologa de la Memoria de
las manchas se proporciona en un tubo de microcentrfuga. Para obtener toda la
mancha fuera del tubo, enjuague la sonda con agua destilada y se vierte en la
memoria intermedia.Agitar el bfer hasta que quede un color azul claro
uniforme.
14. Lentamente llenar la caja con gel de todo el tampn de electroforesis 1X TBE
para cubrir el gel a aproximadamente una profundidad de 2 mm. No vierta el
tampn directamente sobre el gel.
15. Asegrese de que el interruptor de la fuente de alimentacin est en la posicin
"Off" antes de conectar la cmara de electroforesis. Cuando est listo para la
electroforesis, coloque la tapa firmemente en la cmara y conecte los cables
elctricos en las tomas de salida rebajadas de la fuente de
alimentacin. Conecte el rojo (+) del en el conector rojo y el negro (-) del en el
enchufe negro.
16. Para el funcionamiento de la fuente de alimentacin, siga las instrucciones que
vienen con l.
17. Seleccione el voltaje deseado en la fuente de alimentacin. Un voltaje de 150
permitir la ejecucin de electroforesis que se completar en aproximadamente
una hora. Tensiones ms bajas tambin se pueden utilizar. Cuanto menor sea la
tensin, ms lento ser el ADN migrar. Por ejemplo, a una tensin de 10 se
completar la carrera electroforesis en aproximadamente 24 horas. La banda de
tinte migracin marca el borde de ataque de la DNA. La electroforesis se
completa cuando el borde de ataque del colorante ha migrado 5 a 6 cm de los
pozos.
18. Proceda con la electroforesis: Verifique que el colorante azul de migracin se
est moviendo hacia el electrodo positivo (rojo). Si est migrando hacia el
electrodo negativo (negro), apague la fuente de alimentacin, retire la tapa,
levante la bandeja de gel, convertirlo 180E, y repita los pasos 16 y
17. PRECAUCIN: Nunca retire la tapa de la cmara de electroforesis, mientras
que la fuente de alimentacin est encendido.
19. Cuando se completa la electroforesis, apague la fuente de alimentacin.
20. Para quitar la tapa de la caja, frente a la caja con los enchufes de electrodo
apuntando a la parte posterior, y coloque los dedos en cada extremo de la
unidad mientras pulsa los pulgares contra el borde frontal de la tapa. Empuje
los pulgares contra la tapa hacia la parte posterior de desconectar los cables de
alimentacin de los enchufes. Levante la tapa para retirarla de la caja.
21. Despus de la electroforesis es completa, algunas bandas de ADN ser
visible. Para oscurecer las bandas y hacer ms visible de ellos, retire la bandeja
de gel a partir de la unidad de electroforesis y coloque la bandeja en un
recipiente de plstico. Deslice el gel fuera de la bandeja empujndola en un
extremo de la misma. Agregue la Carolina Blu ADN Stain, asegurndose de que
el gel est completamente inmerso. No verter la mancha directamente en el
gel.
22. Teir el gel durante 15 minutos. Agitar suavemente, si es posible.
23. Vierta la mancha de nuevo en la botella. La mancha se puede reutilizar 6-8
veces.
24. Cubrir el gel con agua destilada para destain. (El agua del grifo contiene iones
de cloruro que pueden eliminar parcialmente la mancha de las bandas de ADN y
dar resultados inferiores.) Agitar suavemente, si es posible. Durante los 30 y 40
minutos de decoloracin, cambiar el agua cada 10 minutos, si es
posible. Durante el proceso de decoloracin, las bandas de ADN se harn ms
claras como la mancha se elimina del resto del gel. Es posible destain el gel
durante un mximo de 24 horas. Si las bandas de ADN se vuelven demasiado
claro, el gel puede ser teido y desteido de nuevo los pasos 21 a 24
repitiendo.
25. El gel se puede mostrar a la clase deslizndolo hacia un pedazo de plexigls y
de colocarla sobre una hoja blanca de papel o en un negatoscopio de luz
blanca. La Figura 3 ilustra los resultados esperados. Perro 3 es el culpable.
Figura 3

26. El gel se puede guardar durante al menos un mes en el refrigerador por
deslizamiento en una bolsa de plstico transparente y sellar la bolsa. El gel se
puede ver en una hoja blanca de papel o una caja de visualizacin de luz blanca
sin sacarlo de la bolsa.
27. Ninguno de los productos qumicos utilizados en el experimento son txicos. Las
soluciones pueden ser vertido en el desage convencional. El gel se puede
eliminar con el resto de basura.
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MONTAJE DEL EXPERIMENTO DE HUELLAS ADN en perodos de 45 minutos
PERIODO 1: ensea a utilizar la pipeta y hacer que el gel de agarosa. Despus de que
se hizo el gel, el profesor tiene dos opciones: a.) Coloque la caja de electroforesis en el
refrigerador con la tapa en su lugar hasta el perodo 2 b) La bandeja de fundicin y el
gel se puede quitar de la caja de la electroforesis, sellado en una bolsa de plstico, y
se almacena en un refrigerador hasta que el periodo 2. El gel se puede mantener en el
refrigerador por hasta dos das antes de su uso. PERIODO 2: Retire el recipiente con
el gel de la nevera. Conducta pasos 1 (opcional) a 6 de las instrucciones
estudiantiles. En el paso 3, la incubacin a 37 C se puede hacer hasta por 45
minutos, si se desea por el profesor. Si el ADN se incubaron no va a ser cargado por
los estudiantes en el gel de inmediato, se puede almacenar en un refrigerador hasta
que se aadi el colorante de la migracin y el gel se carga. Despus de que el ADN se
carga en el gel por los estudiantes, la profesor tiene tres opciones: (a) Realizar la
electroforesis. (b) Si los estudiantes en otra seccin se van a cargar el ADN en el
mismo gel en el mismo da, coloque la tapa de la caja de la electroforesis y gurdelo
en el refrigerador hasta la prxima perodo de clase. Despus de que el gel se carga
por la ltima seccin, aadir el tampn de electroforesis y llevar a cabo la
electroforesis. (c) Si hay otro gel se va a cargar en el mismo da por otra seccin de
clase, coloque la tapa de la caja de la electroforesis con gel cargado y gurdelo en el
refrigerador hasta que los dos geles se pueden ejecutar.Despus de que ambos geles
estn listos, aadir el tampn de electroforesis y llevar a cabo la electroforesis. Una
vez finalizada la electroforesis, hay dos opciones para la tincin: (a) Teir el gel
inmediatamente y coloque en el refrigerador, como se describe en el paso 26 de la
instrucciones. (b) Pour suficiente del tampn de electroforesis fuera de la caja
electroforesis de manera que el gel no se sumerge en ella. Coloque la cubierta en la
caja y gurdelo en el refrigerador hasta por un da hasta que sea conveniente para
mancharlo. PERIODO 3: Teir el gel si an no se ha hecho, ver el gel y discutir los
resultados.





















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INSTRUCCIONES PARA ESTUDIANTES
Huellas genticas de ADN
____________ (Carta Group)

Un agricultor posea cuatro perros. Uno de los perros mordi el nuevo par de botas, lo
que hizo que el granjero infeliz. Quera pluma hasta el culpable, pero no saba que el
perro lo haba hecho. Afortunadamente, el culpable haba dejado algunos mechones de
pelo en el arranque. El agricultor puso el pelo en una bolsa de plstico y lo etiquet
"Hair del culpable". Ella tom el pelo de cada uno de los cuatro perros y etiquetado de
las muestras "Dog 1", "Perro 2", "perro de 3", y "Dog 4". Ella tom las muestras a la
Universidad Estatal de Iowa y pidi un cientfico para determinar qu perro haba
masticado sus botas. El cientfico se extrae el ADN de la muestra de cabello llamado
"pelo del culpable" y la calific de "C". El cientfico extrajo ADN a partir de muestras de
pelo de cada perro y los etiquet con el nmero perro. El maestro que usted y sus
colegas est proporcionando las muestras y quiere que usted pueda determinar qu
perro era el culpable. Cada grupo de hasta cinco estudiantes tendrn muestras para
analizar juntos. Paso 1. (opcional) Pngase los guantes mdicos y llvelas durante
todo el experimento. Los guantes protegen las muestras de ADN de los contaminantes
que pueden estar en sus manos.



Paso 2. Su grupo tiene una muestra del ADN culpable en un ml tubo de
microcentrfuga de 1,5 C etiquetados y muestras de cada uno de los cuatro perros en
tubos etiquetados con el perro nmero. Mantener los tubos en posicin vertical a lo
largo de todos los pasos del experimento para mantener el ADN fuera de los lados del
tubo. En cada uno de los cinco tubos, pipetas 3 l de la endonucleasa de restriccin Bgl l
del tubo etiquetado N. Usar una punta de pipeta nueva al agregar Bgl 1 a cada
tubo. Para enjuagar la punta de la pipeta y mezclar el ADN y BGL 1, llenar y descargar
la pipeta con la muestra tres veces.Etiquetar los cinco tubos con la letra asignada a su
grupo y por escrito en la esquina superior derecha de esta hoja de instrucciones.

Paso 3. Colocar los tubos en un bastidor provisto por el instructor y los incuban a 37E
C durante 10 minutos. Bgl 1 es aislado de la bacteria Bacillus globigi. La endonucleasa
de restriccin protege a las bacterias de ADN extrao, tal como de un virus, por que
hasta el corte y hacindolo ineficaz. La endonucleasa corta el ADN ( ) en cada sitio
donde ocurren las siguientes secuencias.

5'-GCCN NNN NGGC-3 ' 3'-CGGN NNN NCCG-5 ' N puede ser cualquier nucletido,
pero la ubicacin y el orden de G (guanina) y C (citosina) es muy especfica.





Paso 4. Sacar los tubos de la incubadora y mantenerlos en posicin vertical. En cada
uno de los cinco tubos, pipetas 4 l de colorante azul del tubo etiquetado D. Use una
punta de pipeta nueva al agregar colorante a cada tubo. Para enjuagar la punta de la
pipeta y mezclar el ADN y el colorante, llenar y descargar la pipeta con la muestra tres
veces. El colorante azul se utiliza para controlar la migracin del ADN durante la
electroforesis.

Paso 5. Ir a la caja de electroforesis y registrar la identidad de las muestras antes de
cargarlas en el gel. El gel tiene carriles sobre los que se ejecutan las muestras
individuales, por lo tanto, no se numeran las lneas en la hoja de papel. Registro en la
hoja de la identidad de la muestra que se corresponde con el carril en el que se
cargar la muestra.

Paso 6. Usando una pipeta fijado para 20 l, transferir la muestra en el pocillo del
carril apropiado en el gel. Coloque la parte superior de la punta de la pipeta en la parte
superior del pozo y dispensar los 20 l de solucin en ella lentamente. No deje que la
punta de la pipeta toque el fondo del pozo, porque va a perforar el gel. Desechar la
punta de la pipeta en el recipiente designado despus de una muestra se ha puesto en
el pozo y utilice uno nuevo para la siguiente muestra. El gel se llevar a cabo por el
instructor.



Paso 7. Despus de que se ejecute el gel, las bandas en que se puede ver. A partir de
los patrones de ADN en el gel, determinar cul de los cuatro perros masticado las
botas.