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Universidad Tcnica de Manab

Facultad de Ciencias Matemticas Fsicas y Qumicas



Laboratorio de Microbiologa
Informe #2

ALUMNO:
Dumar Andrs Guerrero I.

Catedrtica
Ing. Virginia Snchez


Fecha: 27 de Enero del 2013
Ingeniera Qumica VII Nivel E

Laboratorio de Microbiologa
Informe #2
Tema:
Determinacin de microorganismos coliformes totales y coliformes fecales, mediante el
mtodo del nmero ms probable (NMP).
Objetivo General:
Investigar la presencia de bacterias del grupo Coliforme en agua de consumo humano
mediante la tcnica del Nmero Ms Probable (NMP), usando tubos de fermentacin
mltiple.
Objetivos Especficos:
Preparar los respectivos caldos como: Ec., Bilis verde brillante, Lactosa y Lauril como
medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los
microrganismos.
Familiarizarse con los mtodos de recuento, especialmente con el de NMP.
Detectar bacterias coliformes totales y fecales.

Marco Terico:
Introduccin
Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en
muestras lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el recuento
directo por microscopia de fluorescencia, as como los procedimientos basados en
diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos
slidos o lquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).
El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue
siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el
nmero de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha
demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos
aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este
mtodo es aplicable para estimar el nmero de microorganismos en muestras
de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la
lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados
por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se
encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se
considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se
denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta
es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los
Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es
favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad.
Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal.
Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden
estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de
organismos productores de enfermedades.
Coliformes fecales:
Los coliformes fecales son microorganismos con una estructura parecida a la de una
bacteria comn que se llama Escherichia coli y se transmiten por medio de los
excrementos. La Escherichia es una bacteria que se encuentra normalmente en el intestino
del hombre y en el de otros animales. Hay diversos tipos de Escherichia; algunos no causan
dao en condiciones normales y otros pueden incluso ocasionar la muerte.

Coliformes fecales

Formas patgenas de Escherichia y de otras bacterias (que por tener forma similar se
denominan genricamente coliformes fecales) se transmiten, entre otras vas, a travs de las
excretas y comnmente por la ingestin o el contacto con agua contaminada. La
Escherichia no sobrevive mucho tiempo en agua de mar, pero otros coliformes fecales s,
por lo que suelen reportarse en conjunto y ambos conforman un indicador de la
contaminacin bacteriolgica de las playas.

MATERIALES Y EQUIPOS SUSTANCIAS Y REACTIVOS
Autoclave Agua peptonada
Incubadora Agua destilada
Matraz Enlermeyer Muestra solida(balanceado)
Vasos de precipitacin Muestra liquida(agua)
Probeta Caldos: Ec.,
Vidrio de reloj Bilis verde brillante
Lpiz graso Lactosa , y;
Tubos de ensayo Lauril.
Gradilla
Balanza
Termmetro
Pipetas de 10ml ,5 ml y 1ml
Pera
Algodn
Alcohol
Cabina de flujo laminar


PROCEDIMIENTO:
Realizar las diferentes soluciones de los caldos :
CALDO DE LACTOSA: Preparar 3,25 gr en 250 ml.
CALDO DE LAURIL: Preparar 14,24 gr en 400 ml.
CALDO DE VERDE BRILLANTE: Preparar 10 gr en 250 ml.
CALDO DE EC: Preparar 14,8 gr en 400 ml.

Separar en dos gradillas los tubos de ensayos con los respectivos caldos en una
proporcin de 10 ml, para detectar los coliformes totales y fecales de las muestras
slidas y liquidas y ordenarlas en 3 series.

Preparar la muestra solida (balanceado), triturarlo y pesar en la balanza 10 gr de la
muestra y diluirlo en 90 ml de agua peptonada.

DETERMI NACI ON DE COLI FORMES FECALES EN LAS PRUEBAS:
LI QUI DO (AGUA) Y SOLI DO (BALANCEADO)

PRUEBA 1 CALDO VERDE BRILLANTE CON LA MUESTRA LIQUIDA
(AGUA). Y LA MUESTRA SOLIDA (BALANCEADO).

En las 3 series conformadas, cada una de la serie por 3 tubos y en tola son 9
tubos de ensayo los cuales en su interior contiene el caldo verde brillante y
verde brillante.

Agregamos 10 ml de la muestra liquida Y SOLIDA a los 3 primeros tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).

Agregamos 1 ml de la muestra liquida Y SOLIDA a los 3 segundos tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 segundos tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 terceros tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).


PRUEBA 2 CALDO EC. CON LA MUESTRA LIQUIDA (AGUA) Y LA
MUESTRA SOLIDA (BALANCEADO).

En las 3 series conformadas, cada una de la serie por 5 tubos y en total son 15
tubos de ensayo los cuales en su interior contiene el caldo EC.

Agregamos 10 ml de la muestra liquida Y solida a los 3 primeros tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).


Agregamos 1 ml de la muestra liquida Y solida a los 3 segundos tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 segundos tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 terceros tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 tercero tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 cuartos tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 cuartos tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 quintos tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).

DETERMI NACI ON DE COLI FORMES TOTALES EN LAS PRUEBAS:
LI QUI DO(AGUA) Y SOLI DO (BALANCEADO)

PRUEBA 3 CALDO LACTOSA CON LA MUESTRA LIQUIDA (AGUA) Y
LA MUESTRA SOLIDA (BALANCEADO).
.
En las 3 series conformadas, cada una de la serie por 3 tubos y en tola son 9
tubos de ensayo los cuales en su interior contiene el caldo lactosa.

Agregamos 10 ml de la muestra liquida Y solida a los 3 primeros tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).

Agregamos 1 ml de la muestra liquida Y solida a los 3 segundos tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 segundos tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 terceros tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).

PRUEBA 4 CALDO LAURIL CON LA MUESTRA LIQUIDA (AGUA) y
MUESTRA SOLIDA (BALANCEADO).

En las 3 series conformadas, cada una de la serie por 5 tubos y en total son 15
tubos de ensayo los cuales en su interior contiene el caldo Lauril .

Agregamos 10 ml de la muestra liquida y slida a los 3 primeros tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).

Agregamos 1 ml de la muestra liquida y slida a los 3 segundos tubos de
ensayo de las series 1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 segundos tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 terceros tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 tercero tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 cuartos tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).

Escogemos 1 ml de los 3 cuartos tubos de ensayo de las series 1, 2 3,
(dilucin

) y los agregamos a los 3 quintos tubos de ensayo de las series


1, 2 3, (dilucin

).



TABLA DE COLIFORMES TOTALES Y FEECALES (RESULTADOS)

VERDE BRILLANTE
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

- - - 0

- - - 0

- - - 0
NMP=1,8

EC
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

- - - - - 0

- - - - - 0

- - - - - 0
NMP=1,8

COLIFORMES FECALES EN MUESTRA SOLIDA

VERDE BRILLANTE
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

+ - + 2

- - - 0

- - - 0
NMP=4,5


EC
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

+ - - - - 1

- - - - - 0

- - - - - 0
NMP=2



DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES
COLIFORMES TOTALES EN MUESTRA LIQUIDA

LACTOSA
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

- - - 0

- - - 0

- - - 0
NMP=1,8

LAURIL
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

- + - + + 3

- - - - - 0

- - - - - 0
NMP=7,8



COLIFORMES TOTALES EN MUESTRA SOLIDA

LACTOSA
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

+ + + 3

+ + + 3

+ - + 2
NMP=24


LAURIL
DILUSIONES RESULTADOS TOTAL

+ + + + + 5

+ + + + + 5

- - + - - 1
NMP=350


ANLISIS DE LOS RESULTADOS
Si el total de tubos son negativos, el examen se da por terminado, reportando la
usencia de coliformes totales y fecales en la muestra analizada.

Todos aquellos tubos que den positivos para prueba presuntiva se anotarn
convenientemente y se proceder a realizar la prueba confirmatoria para
coliformes totales y fecales.

Si se observa turbidez y produccin de gas:
o La prueba se considera POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos
positivos para posteriormente hacer el clculo del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun cuando se
observe turbidez:
o Se consideran negativos, establecindose el Cdigo 0 para efecto del
clculo del NMP









CONCLUSIONES:

Se puede observar que las pruebas de coliformes fecales en la muestra liquida (agua),
son menores al 1,8 y en la en la muestra solida (balanceado) son de 2 y 4,5 por lo que si
son considerables.

Se puede observar que las pruebas de totales en la muestra liquida (agua), hay un ndice
de 7,8 el cual es un ndice considerable y la en la muestra solida (balanceado) existe un
ndice muy elevado de estos microorganismo de 24 y 350.




RECOMENDACIONES:

1. Esterilizar bien los materiales

2. Preparar con precaucin los caldos

3. Utilizar el debido equipo para no contaminar los caldos




BIBLIOGRAFIA:

o http://es.scribd.com/doc/11567692/coliformes-en-agua

o http://www.monografias.com/trabajos89/determinacion-coliformes-totales-
fecales/determinacion-coliformes-totales-fecales.shtml

o http://app1.semarnat.gob.mx/playas/nuevo/analisis_tecnico02.shtml

o http://espanol.answers.yahoo.com/question/index?qid=20080621052118AA7XMF












ANEXOS