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Mtodos e Tcnicas em
Parasitologia Clnica
Populaes que no
dispem de gua
potvel correm alto
risco de infeces
(Foto OMS).
Habitao rstica infestada de
insetos triatomneos e habitada por
pacientes com a Doena de Chagas.
reas endmicas de malria
no Brasil
Causas desconhecidas e outras
6.250 (12%)
Doenas do
sistema respiratrio
2.890 (6%)
Doenas Infecciosas
e parasitrias
17.310 (33%)
Doenas do sistema
circulatrio
15.300 (29%)
Cnceres
6.235 (12%)
Causas maternas
585 (1%)
Causas peri e neonatais
3.630 (7%)
A OMS mostrou que
as principais causas de
morte no mundo (1997)
eram as doenas
infecciosas e
parasitrias,
responsveis por 33% de
todos os bitos.
Vinham, em 2 lugar,
as doenas do sistema
circulatrio (29%) e, em
3, os cnceres (12%).
Importncia do diagnstico
Prevalncia significativa no mundo (OMS) NTD
Doenas Tropicais Negligenciadas
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Expectativas do diagnstico
Mdico diagnstico acurado.
Paciente conforto na coleta, poucas coletas.
Laboratrio custo x benefcio (baixo custo, fcil
interpretao, rapidez, simplicidade).
Mtodos laboratoriais
Recurso indispensvel para o diagnstico
das infeces
Estudo dos parasitos
Epidemiologia
Relao parasito-hospedeiro
Critrios de cura
Exame parasitolgico do sangue
Hemoscopia
Doenas parasitrias com estgios no
sangue.
Malria, filariose, doena de Chagas.
Parasito vivo ou fixado e corado.
Mais indicado o uso de material fresco
mtodo executado imediatamente aps colheita de
sangue.
Exame parasitolgico do sangue
Coleta do sangue
Puno da polpa digital ou lbulo da orelha.
Puno venosa.
Exame parasitolgico do sangue
Exame direto
Gota no centro da lmina coberta comlamnula.
Adicionar salina ou citrato.
Avaliao imediata.
Visualizao de parasitos vivos movimentao dos
flagelos agitamhemcias. Tripanossomos
Escassez de parasitos ou pouca mobilidade
preparao de lminas fixadas e coradas.
Exame parasitolgico do sangue
Preparao de lminas
Gota espessa
Parasitos escassos.
3 ou 4 gotas de sangue prximas espalhadas de forma
circular.
Gota estendida
Distenso de uma gota sobre a lmina.
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Exame parasitolgico do sangue
Preparao de lminas
Corantes
Giemsa necessrio fixao prvia comlcool metlico.
Leishman no necessrio fixao com lcool
(presente na frmula).
Xenodiagnstico
Diagnstico de Doena de Chagas.
Mtodo introduzido por Brumpt em 1914 largamente
empregado ainda nos dias atuais no diagnstico da
doena de Chagas.
Xenodiagnstico
Multiplicao do T. cruzi no trato digestivo do
triatomneo permite sua deteco nas fezes ou na
urina dos insetos alimentados com sangue do paciente
ou de animais suspeitos.
Utilizao de ninfas de 3
o
a 5
o
estgio de
desenvolvimento, as quais so criadas em condies
controladas em laboratrio, sendo portanto livres do
parasita.
Xenodiagnstico
1. Ninfas de 3
o
a 5
o
estgio
2. Ninfas em jejum alimentar de 20 a 30 dias.
3. Pequenas caixas cobertas com tela, aplicadas diretamente sobre
o hospedeiro por 30 a 60 minutos (humamos, a caixa aplicada
no antebrao).
4. Exame dos insetos para pesquisa do T. cruzi realizada aos 30 e
60 dias aps o repasto sangneo.
Exame parasitolgico de fezes
1. Exame macroscpico verificar a consistncia das
fezes, presena de muco, sangue ou vermes adultos.
2. Exame microscpico
- ovos ou larvas de helmintos
- Cistos ou trofozotos
Exame parasitolgico de fezes
1. Mtodos quantitativos avaliar intensidade da
parasitemia.
Kato-Katz
Coprotest

2. Mtodos qualitativos presena de parasitas.

Mtodo direto
Mtodos de enriquecimento nmero pequeno de formas
parasitrias eliminadas.
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Exame parasitolgico de fezes
Escolha do mtodo:
No existe mtodo nico capaz de identificar todos os
parasitos.
Mtodos gerais:
1. Sedimentao espontnea (Hoffman, Pons e Janner
HPJ).
2. Centrifugao (MIFC e Coprotest).
Exame parasitolgico de fezes
Maioria dos pedidos no relatada a suspeita clnica:
> Realizao de um dos mtodos gerais
Relato de suspeita clnica:
> Mtodo geral e mtodo especfico devem ser realizados
Exame parasitolgico de fezes
Melhor exame:
1. Fcil execuo
2. Menor tempo
3. Identificao de maior nmero de parasitos
Qualidade dos exames:
1. Tcnica correta
2. Um exame isolado negativo no deve ser conclusivo
3. Produo de cistos, ovos ou larvas no constante e uniforme
CADASTRO DO PACIENTE:
- Nmero de registro de identificao do paciente gerado pelo LAB
- Nome completo do paciente;
- Tipo de convnio;
- Idade, sexo;
- Telefone e/ ou endereo do paciente;
- Nome e contato do responsvel em caso de menor de idade ou incapacitado;
- Nome do solicitante;
- Data e hora do atendimento;
- Horrio da coleta, quando aplicvel;
- Exames solicitados e tipo de amostra;
- Informaes adicionais: medicamento em uso
(laxantes, anticidos, ingesto de meios de contrastes)
- Data prevista para entrega do laudo;
DADOS CLNICOS
- Origem geogrfica do paciente;
- Deslocamento em reas endmicas (com datas);
- Antecedentes parasitrios;
- Tratamento j recebidos;
- Resultados anteriores ( fezes hemograma );
- Suspeita clnica.
Exame parasitolgico de fezes
Coleta e conservao
1. Evacuao deve ser feita em recipiente limpo e seco e as fezes
transferidas para recipiente prprio.
2. Fezes sem conservador devem ser enviadas ao laboratrio
imediatamente.
3. Coleta de amostras mltiplas dias alternados e utilizao de
conservador.
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Exame parasitolgico de fezes
Conservadores:
Formol 10%
MIF (mercurocromo, iodo e formol)
SAF- fixador usado para conservar cistos e trofozoitos.
Colorao Lugol
Iodo, iodeto de potssio e gua destilada.
Utilizada para corar ovos, cistos e larvas.
LAUDO
O laudo deve conter no mnimo:
a) identificao do laboratrio;
b) endereo e telefone do laboratrio;
C) identificao do RT;
D) nmero de registro do RT no respectivo conselho;
E) identificao do profissional que liberou o exame;
F) nmero de registro do laboratrio no respectivo conselho;
G) nome e registro de identificao do cliente no laboratrio;
H) data da coleta da amostra;
i) data de emisso do laudo;
J) nome do exame, tipo de amostra e mtodo analtico;
K) resultado do exame;
L) limitaes tcnicas da metodologia e dados para interpretao;
M) observaes pertinentes.
Resultado - Negativo
No material examinado, no foram encontrados ovos ou larvas de
helmintos, nem cistos ou trofozoitos de protozarios.
Resultado - Positivo
Presena de Ovos de Ascaris lumbricoides
Cistos de Giardia duodenalis
Mtodo Empregado: Direto, Lutz ou HPJ, Kato-Katz.
Observaes: coleta amostra nica
trs amostras em dias alternados.
LAUDO
CONTROLE DE QUALIDADE
Controle Interno da Qualidade:
duplo cego;
amostra aleatria.
Controle Externo da Qualidade;
Devem ser documentados !!!
Exame parasitolgico de fezes
Exame direto a fresco:
1. 2 a 3 gotas de salina em lmina.
2. Tocar comum palito vrios pontos das fezes,
transferindo para a lmina.
3. Espalhar as fezes na lmina.
4. Para identificao de cistos de protozorios e larvas de
helmintos corar com lugol.
5. Examinar a lmina com objetiva de 10X e/ou 40X.
Tcnica com baixa sensibilidade
Exame parasitolgico de fezes
Sedimentao espontnea (Hoffman, Pons e Janer ou Lutz):
1. 2g de fezes em um frasco Borrel e 5 mL de gua, triturar bem.
2. Acrescentar mais 20 mL de gua.
3. Filtrar a suspenso em clice utilizando gaze dobrada em quatro e
lavar os detritos com mais 20 mL de gua.
4. Completar o volume do clice (200 mL) com gua.
5. Deixar a suspenso em repouso de 2 a 24h.
6. Sobrenadante lmpido, colher uma amostra do sedimento
utilizando pipeta.
7. Corar a lmina com lugol e examinar em objetivas de 10X e/ou
40X.
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Exame parasitolgico de fezes
Sedimentao por centrifugao (MIFC)
1. Colher as fezes em MIF.
2. Homogeneizar bem,
3. Filtrar a suspenso em gaze dobrada em quatro.
4. Transferir 1 a 2 mL do filtrado em tubo cnico de centrifugao.
5. Adicionar 4 a 5 mL de ter sulfrico e agitar vigorosamente
(desengordurar o material).
6. Centrifugar a 1500 rpm por 1 minuto.
7. Descartar o sobrenadante.
8. Adicionar uma gota de lugol ao sedimento e recolher uma parte
para anlise em lmina e cobrir com lamnula.
Exame parasitolgico de fezes
Coprotest sedimentao por centrifugao
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Exame parasitolgico de fezes
Faust Centrfugo-Flutuao
1. 10 g de fezes em 20 mL de gua (homogeneizar bem).
2. Filtrar em gaze e transferir para um tubo de hemlise.
3. Centrifugar a 2.500 rpm por 1 minuto.
4. Desprezar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em gua.
(Repetir esta operao at o sobrenadante fique claro)
5. Ressuspender o sedimento em soluo de sulfato de zinco a
33%. (densidade = 1,18 g/mL)
6. Centrifugar novamente.
Exame parasitolgico de fezes
Faust Centrfugo-Flutuao
Os cistos e alguns oocistos de protozorios e ovos leves de helmintos
ficaro na pelcula superfcial.
Retirar com ala de platina, adicionar uma gota de lugol e analisar em
lmina.
Exame parasitolgico de fezes
Baermann-Moraes
1. Colocar 8 a 10 g de fezes em uma gaze dobrada.
2. Colocar sobre um funil fechado com um tubo de borracha.
Adicionar gua (45C) ao funil em quantidade suficiente para
entrar em contato com as fezes.
3. Deixar uma hora em repouso.
4. Recolher 5 a 7 mL de gua em tubo e centrifugara 1.000 rpm por
1 minuto.
5. Colher o sedimento sem desprezar o sobrenadante, adicionar o
lugol e examinar ao microscpio. (avaliar a presena de larvas)
Exame parasitolgico de fezes
Rugai
1. Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e envolv-
lo em gaze (fazendo uma pequena trouxa).
2. Colocar o material com a abertura para baixo num clice de
sedimentao com gua aquecida (45C).
3. Deixar uma hora em repouso.
4. Colher o sedimento no fundo do clice, corar com lugol e observar
ao microscpio.
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Exame parasitolgico de fezes
Kato Katz
1. Preparar uma soluo de verde malaquita (conservar as fezes e
clarificar as formas parasitrias).
2. Cortar papel celofane semipermevel em pedaos de 24X30mm e
deix-los mergulhados na soluo de verde malaquita por pelo
menos 24 horas.
3. Comprimir as fezes com um pedao de tela meilica. Nesta malha
passam ovos de helmintos e detritos menores do que eles.
4. Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela e
transferi-las, com o auxlio de um palito, para o orificio (6mm de
dimetro) de um carto retangular de plstico, colocado sobre uma
lmina de microscopia.
Exame parasitolgico de fezes
Kato Katz
5. Aps encher completamente o orificio, retirar o carto,
cuidadosamente, deixando as fezes (aproximadamente 42mg) sobre a
lmina de vidro.
6. Cobrir as fezes com a lamnula de papel celofane embebida na
soluo de verde malaquita, inverter a lmina, sobre uma folha de papel
absorvente e comprimi-la.
7. Aguardar uma a duas horas e examinar ao microscpio.
Exame quantitativo nmero de ovos encontrados X 23 = opg
Exame parasitolgico de fezes
Mtodo de Graham (fita gomada)
1. 5 a 6 cm de fita adesiva transparente com tiras de papel nas
extremidades para identificao.
2. Colocar a fita sobre o fundo de um tubo de ensaio com o lado
adesivo voltado para fora.
3. A poro aderente deve ser encostada vrias vezes mucosa da
regio perianal, e em seguida colar na lmina.
4. Examinar a lmina em microscpio.
Material deve ser colhido de manh, antes que o paciente se levante ou
realize qualquer tipo de higiene.
Indicado: Adulto e ovos de E. vermiculares e proglotes de T. saginata.
Diagnstico imunolgico
Resistncia natural
Mecanismos protetores passivos
Revestimento cutneo
Mucosas
Conjuntiva ocular e secreo lacrimal
Temperatura do corpo
Tenso do O
2
, pH e potencial de oxi-reduo
Substratos para crescimento e desenvolvimento indisponveis
Ausncia de mecanismos que estimulam desencistamento, ecloso do ovo
ou desenvolvimento larvrio
Ausncia de receptores (aderncia e endocitose)
Imunidade
Anticorpos protetores ou funcionais
reao com Ag parasitrio levando morte ou bloqueio do
desenvolvimento
Anticorpos no-funcionais
indicam presena, mas sem capacidade de eliminao ou
controle
utilidade diagnstica !!!
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Evaso dos parasitos ao sistema
imunolgico
Schistosoma
Mimetismo imunolgico
Superfcie externa que reveste todo o corpo do verme adulto
presena de antgenos semelhantes aos do hospedeiro
(sistema ABO)
Mecanismo de escape
Descamao e renovao da membrana externa - eliminao do
complexo Ag-Ac.
Toxoplasma gondii
Aps fagocitose, impede a fuso dos lisossomos com o vacolo
de fagocitose.
Trypanosoma cruzi
Experincia em ratos macrfagos com inumeros flagelados em
multiplicao for a dos fagossomos.
Taquizotas
Diagnstico imunolgico
A demonstrao da presena do parasito ou de seus
produtos no organismo do hospedeiro nem sempre
possvel
Soluo emalguns casos - mtodos imunolgicos
Diagnstico imunolgico
Detectar antgenos, anticorpos ou imunocomplexos
relacionados com a existncia da infeco parasitria.
Diagnstico imunolgico
Simplicidade e rapidez de execuo
Possibilidade de automao
Baixo custo operacional
Diagnstico diferencial
Inquritos epidemiolgicos
Diagnstico imunolgico
Padronizao dos testes imunolgicos - amostras
de referncia, positivas e negativas.
Adequada escolha dessas amostras importante
para a definio da referncia (padro ouro)
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Diagnstico imunolgico
Dificuldade de padronizao:
Memria imunolgica
Pacientes com a doena
Pacientes curados
Pacientes que tiveram contato com o parasito
mas no foram infectados
Pacientes vacinados
Frequente semelhana entre os antgenos
constituintes dos parasitos
ELISA enzimaimunoensaio
Visualizar a formao do complexo imune atravs da atividade
enzimtica (peroxidade, fosfatase)
Anlise visual ou sistemas de deteco fotomtrica
Dot-Elisa Realizado em tira de nitrocelulose
Western Blot
Aplicado a protenas - estas so separadas usando eletroforese em
gel de poliacrilamida, na presena do detergente SDS.
Imunofluorescncia
Formao de imunocomplexos visveis atravs da ligao com
anticorpos ligados com substncias fluorescentes (isotiocianato de
fluorescena e rodamina B)
Imunofluorescncia direta pesquisa de antgenos
Imunofluorescncia indireta pesquisa de antgenos e anticorpos, amplifica
sinal.
Leitura: microscpio de fluorescncia