BIOTECNOLOGIA

APLICADA AO
MARACUJ AZEIRO
Fbio Gelape Faleiro
BIOTECNOLOGIA

Biologia e Tecnologia

Tcnicas que usam os seres vivos

Desenvolvimento de processos e produtos

Envolve vrias reas do conhecimento

Envolve vrios profissionais

Interesse social econmico
Cerrados
BIOTECNOLOGIA
Bioqumica
Engenharia qumica
Gentica e melhoramento
Biomedicina
Microbiologia agrcola
Fitopatologia
Gentica Molecular
Biologia Celular
Engenharia gentica
Biologia Molecular
Cerrados
BIOTECNOLOGIA EM SENTIDO AMPLO
Uso de seres vivos ou parte deles para produo
de bens e servios
BIOTECNOLOGIA CLSSICA
Conjunto de atividades que o homem vem
desenvolvendo h milhares de anos como a produo
de alimentos fermentados, como o po e o vinho
BIOTECNOLOGIA MODERNA
Tecnologias relacionadas engenharia gentica,
DNA recombinante, cultura de clulas e embries
TERMINOLOGIA NOVA, MAS PRINCPIO MUITO ANTIGO
Incio da biotecnologia 10.000 a.C.
Forma primitiva de biotecnologia 7.000 a.C.
Cerrados
Uso de flores como inseticidas 100 d.C.
Cerrados
BIOTECNOLOGIA
Fermentaes industriais
Produo de frmacos
Melhoramento gentico
Produo das vacinas
Uso de microrganismos na agricultura
Controle biolgico
Anlises do DNA
Cultura de tecidos
e clulas
Engenharia gentica
Clonagem
Cerrados
Aplicaes da biotecnologia em diferentes reas
industrial
ambiental
sade
agropecuria
cientfica
BIOTECNOLOGIA
Vinhos, cerveja, pes, queijos, vinagres
Antibiticos e vitaminas
Plantas e animais
melhorados geneticamente
Vacinas para o homem
e animais domticos
Bactrias fixadoras de nitrognio e
fungos micorrzicos
Biofungicidas
Testes de paternidade
Biodegradao
Transformao
gentica
Multiplicao de
recursos genticos
Cerrados
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AO MARACUJ AZEIRO
microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
BIOTECNOLOGIA APLICADA
AO MARACUJ AZEIRO
microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
Uso dos recursos genticos

Fornecer genes importantes para o
melhoramento gentico

Diversificar os sistemas de
produo de maracujazeiro doce

Utilizao como porta-enxertos

Desenvolvimento de hbridos
interespecficos com potencial
ornamental

Utilizao como plantas funcionais
e medicinais
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microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
Melhoramento gentico do maracujazeiro azedo,
doce e silvestre
Alta Produtividade
Resistncia tolerncia
a pragas e doenas
Qualidade fsica e
qumica dos frutos
Vigor e longevidade
das plantas
Menor dependncia
da polinizao
manual
Produo na
entressafra
Adaptabilidade
azedo
doce
silvestre
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microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
Aplicaes da cultura de tecidos

Propagao clonal

Conservao de germoplasma
in vitro

Introgresso de genes de interesse
(hibridao somtica, cibridao)

Germinao de sementes in vitro e
resgate de embries

Produo de calos para
transformao gentica

Produo de mudas por
micropropagao

Limpeza clonal
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microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
Uso de marcadores do DNA
como ferramenta auxiliar
http://www.cpac.embrapa.br/download/1368/t
http://www.cpac.embrapa.br/download/1936/t
Marcadores moleculares aplicados a programas de
caracterizao e uso de recursos genticos
G1
F1
G1 F1 G2
24 24 24
F ? 1
A
Confirmada
F ? 1
A
Confirmada
Estudos taxonmicos, filogenticos e evolutivos
Marcadores moleculares aplicados a programas de
melhoramento gentico
G1
F1
G1 F1 G2
Cruzamento interespecfico
Compatibilidade
gentica
Localizao das espcies
nos diferentes grupos
filogenticos
P. edulis x P. setacea Sim 1 x 1
P. galbana x P. alata Sim 1 x 2
P. mucronata x P. alata Sim 2 x 1
P. quadrangulares x P. alata Sim 1 x 1
P. coccinea x P. setacea Sim 1 x 1
P. galbana x P. alata Sim 1 x 1
P. galbana x P. actinia Sim 2 x 1
P. sanguinolenta x P. citrina Sim 7 x 7
P. sanguinolenta x P. capsulares Sim 7 x 7
P. galbana x P. alata Sim 2 x 1
P. setacea x P. edulis Sim 1 x 1
P. edulis x P. caerulea Sim 1 x 2
P. setacea x P. alata Sim 1 x 1
P. setacea x P. amethysthina Sim 1 x 2
P. laurifolia x P. nitida; Sim 1 x 1
P. caerulea x P. amethystina; Sim 2 x 2
P. coccinea x P. actinia Sim 1 x 1
P. sidifolia x P. actinia Sim 1 x 1
P. galbana x P. actinea Sim 2 x 1
F1 (P. coccinea x P. setacea) x P. coccinea Sim 1 x 1
F1 (P. coccinea x P. setacea) x P. mucronata Sim 1 x 2
P. galbana x P. edulis Sim 2 x 1
P. coccinea x P. setacea Sim 1 x 1
P. mucronata x P. coccinea Sim 2 x 1
P. caerulea x P. edulis No 2 x 1
P. edulis x P. tenuifila No 1 x 2
P. hematoestigma x P. edulis No 8 x 1
P. hematoestigma x P. coccinia No 8 x 1
P. edulis x P. actinia No 1 x 1
P. amethystina x P. edulis No 2 x 1
P. serratodigitada x P. alata No 1 x 1
P. mansoi x P. caerulea No 8 x 2
P. serratodigitata x P. edulis No 1 x 1
P. serratodigitata x P. coccinea No 1 x 1
P. mansoi x P. edulis No 8 x 1


Confirmao da fecundao cruzada
utilizando marcadores moleculares do DNA
Acompanhamento e
quantificao da recuperao
do genoma recorrente
utilizando marcadores
moleculares do DNA
Caracterizao molecular
e estudos de diversidade
gentica
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microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
Extrao do DNA

Enzimas de Restrio

DNA Ligase

Clonagem e Transformao
Engenharia gentica
MANIPULAO DO DNA
AATTCCGTTTA
TTAGCTTAA
AATCG
GGGAAAT
+
AATCGAATTCCGTTTA
TTAGCTTAAGGGAAAT
....
....
DNA de planta DNA de animal
a introduo controlada de cidos nuclicos
em um genoma receptor,
EXCLUINDO-SE A INTRODUO POR
fecundao,
hibridao somtica e
cibridao
O que transformao gentica?
Diferentes etapas da transformao
Isolamento e caracterizao do gene de interesse

Construo de um cassete de expresso

Transformao propriamente dita

Regenerao e seleo das clulas transformadas

Testes das plantas transformadas
Cerrados
Isolamento e caracterizao do gene de interesse
Identificao
do gene
de interesse
Isolamento
Clonagem
Enzimas de
restrio
Insero do
gene
Multiplicao
do gene
Transformao
Testes finais
Bactria incubada
com clulas vegetais
Transferncia do
gene para o
genoma da planta
insero do gene
no plasmdio Ti
DNA adsorvido em
Micropartculas
Clulas bombardeadas
e insero do gene
no genoma da planta
Clulas selecionadas
para o transgene
Clulas transformadas
selecionadas por
um marcador
Anlises
moleculares
Anlise
da prognie
Planta transgnica
regenerada de uma
clula transformada
Replicao do
gene
Agrobacterium
A
Bombardeamento
B
Seleo das clulas
contendo o
transgene
C
Gene de interresse
Testes em casa de
vegetao e no campo
1 2 3 5 6 7 8
Construo de um cassete de expresso
Gene de interesse P1 Gene de seleo P2 T1
T1
P1 = regio promotora P2 T1 = regio terminadora
Gene reprter P3 T1
P3
Gene de interesse X gene de seleo X gene reprter
Cerrados
Fonte de explante
Fonte de explante
Planta transgnica
em casa de vegetao
Planta transgnica
em casa de vegetao
Explantes
Explantes
Co-cultivo com a
bactria desarmada
em meio lquido
Bombardeamento
com micropartculas
com DNA adsorvido
Co-cultivo em
meio slido
Co-cultivo em
meio slido
Meio de induo de brotos
com agentes de seleo
Meio de induo de brotos
com agentes de seleo
Meio de enraizamento
Meio de enraizamento
Transformao indireta
Transformao direta
Regenerao e seleo das clulas transformadas
Clulas alvo
Calo Organogenese
Seleo
alongamento
Enraizamento
Aclimatao
Transgnico
Testes das plantas transformadas
casa-de-vegetao
laboratrio
campo
Cerrados
http://www.cpac.embrapa.br/download/1655/t
Transformao gentica do maracujazeiro visando
resistncia ao vrus do endurecimento dos frutos

BE BD
Npt II
BamH I BamH I
2/3 Nib 1/3 cp
Nos
pro
Nos
ter
35S
pro
CABMV-MG1
Construo utilizada para a transformao gentica
de maracuj-amarelo. Fonte: Zerbini et al. (2005).
Sintomas de infeco em plantas de maracujazeiro por trs isolados de CABMV (MG-1, PE-1 e SE-1). NT:
planta no-transformada; 15: planta F2 proveniente de autofecundao de planta transgnica resistente.
Fonte e Fotos: Zerbini et al. (2005).
Transformao gentica do maracujazeiro visando
resistncia bacteriose
Vetores utilizados para insero do gene que
codifica a atacina A (attA), isolado de
Trichoplusia ni. Fonte: Monteiro (2005)
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microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
Exemplos de controle biolgico no maracujazeiro

Baculovirus (Baculovirus AEE

,
Baculovirus Nitral

, Coopervirus
PM

e Protege

)
Bacillus thuringiensis (Agree

,
Bac-Control

, Bactur WP

, Dipel SC

,
Dipel WG

, Dipel WP

, Ecotech Pro

,
Thuricide

e Xentari

)

Trichoderma (Ecotrich, Itafort,
Agrotrich e Tricho Plantio)
Trichogramma
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microrganismos no
sistema de produo
Recursos genticos
Cultura de tecidos
Engenharia gentica
Melhoramento gentico
Controle biolgico
Anlises
do DNA
Microrganismos

Microrganismos no solo
ciclagem de nutrientes
biorremediadores de poluentes
promotores de crescimento de plantas
desenvolvimento de produtos tecnolgicos
Fungos micorrzicos na produo de mudas de
maracuj
melhora absoro de nutrientes pelas plantas
possibilita maior crescimento das mudas
antecipa o transplantio para o campo
melhora controle biolgico de patgenos
presentes no solo
aumenta a sobrevivncia das plantas no viveiro e
no campo
Fonte: Vitorazi Filho (2011)
sem fungo
com fungo