Recubrimientos para mejorar

biocompatibilidad
Gema Gonzlez
Laboratorio de Materiales Centro de . Ingeniera de
Materiales y Nanotecnologa,
Instituto Venezolano de Investigaciones
Cientficas
ENANO 2011
octubre 2011
Biomaterial Problemas Biofilms
Base
(sustrato)
Ti
TiAlV
TiAlVTa
CoCrMo
SS 316L
SS (sin Ni)

Biocompatibilidad
Limitada
Fijacion debil
hasta la aposicion
osea
Hasta ahora
limitado a
cementos con
antibioticos

Biorecubrimientos Hidroxiapatita,
Ti+ Hidroxiapatita

Baja adhesion al
sustrato
Resulta en
delaminacion
Se requiere
disear inhibidores
de biofilms para
evitar infecciones

Que necesitamos?
Desarrollo de nuevos sustratos y para mejorar biocompatibilidad

Desarrollo y mejora de recubrimientos con mejor
biocompatibilidad, fuerte adhesion y porosidad controlada de tal
manera de mejorar la osteointegracion

Entender con profundidad la interfaz recubrimiento-metal-hueso

Diseo y control de esta interfaz para fijacion optima

Estudio de formacion de biofilms, interacciones bacterias-
recubrimiento y diseo de inhibidores de formacion de biofilms

Diseo de recubrmientos con liberacion controlada de farmacos
POR QUE MODIFICAR LA
SUPERFICIE PARA MEJORAR
LA BIOCOMPATIBILIDAD?
Capa adsorbida de
agua, iones &
protenas
Bulk
Material
Surface Layer
of Material
Adsorbed layer of
water, ions &
proteins
Cells in
biological
fluid
Biocompatibilidad es principalmente un fenmeno de superficie
Capa superficial del
material
Clulas en el fluido
biolgico
Volumen
material
Celula
Protenas
Agua, iones
enlazados
La celula es capaz de leer superficies recubiertas o conformaciones
protenicas mitigadas por algo en la superficie y es muy sensible a
patrones rugosos.

Adhesin. Etapas iniciales
La superficie
Las celulas son capaces de leer o sentir
diferentes variaciones fisicas o quimicas en la
superficie

Existe una interfaz entre el sistema biologico
y el material sintetico
superficie- proteina-celulas
Campos medios vs. sitios especificos
Energia libre global vs. energia local
Efectos de topografia diferentes patrones


polimero
receptor
trauma
metabolitos
Micro-zona- desgaste
Enlace
ester
Matriz extracelular
polimeros
desgaste
Local
receptor
trauma
Matriz
Extracelular

Las superficies bioactivas mimetizan las del
hueso natural promoviendo mayor cantidad
de adsorcion de proteinas y estimulan
eficiencientemente la formacion de nuevo
hueso, mas que los materiales
convencionales


Superficies Bioactivas

ENANO 2011
octubre 2011
Reto
Desarrollar nuevos recubrimientos
biocompatibles multifuncionales con
inhibicion de biofilms y optima fijacion
Promover Osteointegracion
Evitar la formacion de biofilms mediante la
incorporacion de un aditivo
Nanorecubrimientos con liberacion
controlada de farmacos
Como modificar la superficies?

Metodos Quimicos
Sol-gel
(Deposicion Quimica) CVD
capa a capa(layer by layer)

Mtodos Fsicos
Deposicin catdica (sputtering)
Evaporacin trmica
Oxidacin
Anodizado
Grupos Funcionales
Carga
Metodo de fomacion de nanorecubrimientos Capa a Capa
(Layer by Layer)
Es un metodo de preparacion controlada de multicapas nanometricas

Consiste en la deposicion alternada de especies quimicas con carga
opuesta sobre un sustrato apropiadamente cargado

La fuerza motriz principal para la atraccion de las especies en
solucion es la atraccion electrostatica y la ganancia en entropia de la
liberacion de contraiones

La disponibilidad de grupos cargados sobre la superficie es crucial
para la deposicion controlada del material

Enlaces de hidrogeno, fuerzas de van der Waals e interacciones
hidrofobicas tambien controlan el ensamblaje de las peliculas
multicapa
Metodo de fomacion de nanorecubrimientos Capa a Capa
(Layer by Layer)
Polimeros en capas adyacentes interpenetran, en general se usan polipeptidos

Polipeptidos son polielctrolitos debiles, en general biocompatibles y biodegradables

La densidad de carga lineal de un polielectrolito debil cambia con el pH

Las unidades de aminoacidos que forman un grupo quiral en la columna del
polipeptido estan unidas por enlaces peptidos, menos flexibles que los enlaces
covalentes ordinarios
y con un hidrogeno aceptor y otro donador, que permiten formacion de
estructuras secundarias en medio acuoso, influenciando las propiedades y
estructura de la pelicula

Aplicaciones en medicina

Liberacion controlada de farmacos

La presencia de microporos o nanoporos tambien ayudara la liberacion de farmacos

Pueden actuar como una plataforma superficial para
acoplar moleculas target , como anticuerpos, grupos
funcionales, etc
Algunos polielectrolitos naturales biocompatibles

Alginato
Quitosano
Condoitrin sulfato
AND
Heparin
Dextran sulfato
carboximetilcelulosa

Metodo Layer by Layer (LbL) capa a capa
Metodo Layer by Layer (LbL) capa a capa
Advanced Drug Delivery Reviews, Volume 63, Issue 9, 14 August 2011, Pages 701-715
Melgardt M. de Villiers, Daniel P. Otto, Schalk J. Strydom, Yuri M. Lvov

Mecanismos de liberacion del farmaco
Disear recubrimientos porosos que liberen farmacos de manera
controlada para evitar la formacion de biopeliculas y asi prevenir
infecciones
Que es mas importante?
Topografia
Composicion Quimica superficial
Grupos Funcionales activos
Carga
Metodos de Modificacion de Superficies
Mtodos de Modificacin de la superficie:
1. Modificar la rugosidad superficial
2. Oxidacin de la superficie
3. Cambiando el tipo de Sustrato
Ti, TiAlV, TiAlV(Ta)
Recubrimientos :TiO2, TiN, TiN-TiO2
4.Mtodos Qumicos y Biomimticos: Inmersin en
soluciones de CaOH y Fosfato de Amonio y en
Solucin de Fluido Corporal Simulada (SBF)

nuestros resultados
316L SS
O Ti
Cr
2
O
3

TiO2

90C-
900C

HAP
Para lograr una buena interaccin metal-cermica es necesario crear una
capa intermedia de xido que establezca el enlace.
Rugosidad
Variable
120, 400,
600, 2000,
especular
Inmersin SBF
Mayo, 2008
Estudio de la rugosidad superficial de substratos de 316L SS
y su efecto sobre la oxidacin y la formacin de recubrimientos de HAP

Caracterizacin del Tratamiento de Rugosidad.
-Caracterizacin por Interferometra ptica.
Figura 5.5 Interferometra del Acero Inoxidable
316L, desbaste a 120 Grit.
Figura 5.5 Interferometra del Acero Inoxidable
316L, desbaste a 600 Grit.
Mayo, 2008
Estudio de la rugosidad superficial de substratos de 316L SS
y su efecto sobre la oxidacin y la formacin de recubrimientos de HAP

Caracterizacin del Tratamiento de Rugosidad.
-Caracterizacin por Interferometra ptica (MO).
Nivel de desbaste Rugosidad (Ra) (m)
120 Grit 0.165
600 Grit 0.024
2000 Grit 0.012
Pulido Especular 0.014
Promedios de Ra obtenidos de las tres medidas
tomadas en diferentes zonas de las muestras de
Acero Inoxidable 316L.
Nuevas Verdades
se hacen
evidentes
cuando nuevas
herramientas estn
disponibles

Roleslyn Yallow
1977 premio Nobel en
Medicina

Voltaje: 20.0 kV
Aumento: 3000x

Acero Pulido SBF
316L pulido +SBF

Acero Desbastado SBF
Voltaje: 20.0 kV
Aumento: 3000x

316L desbastado +SBF

Voltage: 20.0 kV
Aumento: 2000x


Acero Pulido T.O 400C SBF

316L pulido+oxidado +SBF

Voltaje: 20.0 kV
Aumento: 2000x

Acero Desbastado T.O 400C SBF

316L desbastado +oxidado +SBF

Titanio Pulido SBF
Voltaje: 20.0 kV
Aumento: 3000x

Ti pulido+SBF

Voltaje: 10.0 kV
Aumento: 5000x

Titanio Desbastado (1) T.O 600C SBF

Ti desbastado +oxidado 600 +SBF

Voltaje: 10.0 kV
Aumento: 5000x

Titanio Pulido (1) T.O 600C SBF

Ti pulido+oxidado 600C+SBF
Ti desbaste+SBF

Voltaje: 10.0 kV
Aumento: 5000x

Titanio Pulido T.O 600C y HAP


Voltaje: 10.0 kV
Aumento: 5000x

Titanio Desbastado T.O 600C y HAP

Titanio Desbastado T.O 600C y HAP
(Pto 4)

Titanio Pulido T.O 600C y HAP (Pto
2)

a) b)
c) d)
Adhesin y diferenciacin celular
Evaluacion de la adhesion celular:
Clulas adheridas = Nmero de clulas
sembradas Nmero de clulas no
adheridas.
la evaluacin de los procesos de
diferenciacin celular: morfologa
celular y actividad fosfatasa alcalina
Figura 8: Tincin de Rojo de
Alizarina, que muestra el mineral
depositado sobre los materiales
metlicos en cultivos
experimentales y cultivos
control
100m
Unidades de actividad enzimtica (mmol/L/seg)
Material 24 horas () d.e. 7 das () d.e.
Control 9,812 0,473 9,706 0,635
Dxm 9,861 0,385 9,727 0,384
Aq p 9,801 0,991 9,801 1,662
Aq sp 9,774 1,11 9,712 1,331
Ti p 9,894 1,539 9,747 0,712
Ti sp 10,073 1,228 9,761 1,32
actividad fosfatasa alcalina en
cultivos control y
experimentales en presencia de
metales. (Aq p): acero
quirrgico pulido, (Aq sp):
acero quirrgico no pulido, (Ti
p): titanio pulido, (Ti sp) titanio
no pulido
Total de calcio depositado ajustado por clula en
materiales metalicos
Control Ti p Ti sp Aq p Aq sp
0
0,5
1
1,5
2
u
m
o
l

C
a
l
c
i
o

/
c
e
l
u
l
a

(
x
1
0
E
-
5
)
Calcio depositado luego de 7
das, ajustada por nmero de
celulas encontradas, para los
cultivos control y
experimentales en metales.
(Aq p): acero quirrgico
pulido, (Aq sp): acero
quirrgico no pulido, (Ti p):
titanio pulido, (Ti sp) titanio
no pulido.

Imagen MEB del acero 316LVM Bioline
sumergido en SBF saturado en Ca y P por 4
semanas.

Imgenes de la muestra sumergida en SBF
saturado n Ca
+2
de acero bioline pulido
(perfil extrado) por MFA en modo
contacto.
TiO
2

SS316L
Thin film coatings/SS316L , TiO2, TiON and TiO2-TiON
Imagen topogrfica y de deflexin lateral (MFA), del
recubrimiento de TiO
2
sobre mica, obtenido a una distancia
sustrato- ctodo de 3 cm y diferentes presiones de operacin.
a.1), a.2) 0,10 mbar, b.1), b.2) 0,12 mbar, c.1), c.2) 0,15 mbar
Imagen topogrfica y de deflexin lateral (MFA), del recubrimiento de TiO
2
sobre mica,
obtenido a una distancia sustrato- ctodo de 4 cm y diferentes presiones de operacin. a.1),
a.2) 0,10 mbar, b.1), b.2) 0,12 mbar, c.1), c.2) 0,14 mbar
Imagen de campo claro y patrn de difraccin, de pelculas de TiO
2
obtenidas a una distancia sustrato
ctodo de 2 cm y diferentes condiciones de presin de operacin.
a) 0,10mbar b) 0,12mbar c) 0,14mbar.
Imagen de campo claro y patrn de difraccin.
a) recubrimiento de TiO
2
, b) recubrimiento de TiN.
Micrografa obtenida por MO de la superficie de recubrimientos de TiO2 a 500X.
Tiempos de deposicin catdica: a) 30min, b) 60min, c) y d) 90min, e) y f)
120min.
Imgenes obtenidas por MFA del recubrimiento de TiO
2
sobre acero inoxidable 316L (SS316L), para un tiempo de deposicin
catdica de 90min. a) Imagen topogrfica, b) imagen de deflexin lateral.

TiN SS316L
Imgenes obtenidas por MFA del recubrimiento de TiN sobre acero inoxidable
316L (SS316L), para un tiempo de deposicin catdica de 45min. a) Imagen
topogrfica, b) imagen de deflexin lateral.
Imagen MEB de la superficie del recubrimiento de TiO2 y de TiN sobre acero
inoxidable 316L, tiempo de deposicin catdica: 45min, espesor: 100nm, voltaje:
20keV, b) anlisis elemental EDX.
Imagen de huella de decapado de la muestra SS316L/TiN-TiO2 obtenida mediante
a) AES, b) MO.
Ti+N
Ti+N
O
O
Espectro Diferencial Auger de la muestra multicapas TiN-TiO
2
(T
d
= 3,5 y 9 min).

Imgenes obtenidas por MFA de la superficie del acero , luego de la inmersin en FCS
estndar por un perodo de 6 semanas. a) Imagen topogrfica, b) imagen de deflexin
lateral.
Imgenes obtenidas por MFA de la superficie del recubrimiento de TiO
2
, luego de la inmersin en FCS estndar
por un perodo de 6 semanas. a) Imagen topogrfica, b) imagen de deflexin lateral.
Imgenes obtenidas por MFA de la superficie del recubrimiento de TiN, luego de la inmersin en FCS estndar por
un perodo de 6 semanas. a) Imagen topogrfica, b) imagen de deflexin lateral.
Imgenes obtenidas por MFA de la superficie del recubrimiento de TiO2-TiN, luego de la inmersin en FCS
estndar por un perodo de 6 semanas. a) Imagen topogrfica, b) imagen de deflexin lateral.
Cual es la respuesta de la
adhesin celular a la
rugosidad?
Morfologa Celular
Actividad Fosfatasa Alcalina
Evaluacion de Adhesion Celular y
Diferenciacin
Figura 8: Tincin de Rojo de Alizarina,
que muestra el mineral depositado sobre
los materiales metlicos en cultivos
experimentales y cultivos control
316L pulido
316L rugoso
Ti pulido
Ti rugoso
Control
Mineralizacion
(rojo de alizarina)
100m
Unidades de actividad enzimtica (mmol/L/seg)
Material 24 horas () d.e. 7 das () d.e.
Control 9,812 0,473 9,706 0,635
Dxm 9,861 0,385 9,727 0,384
Aq p 9,801 0,991 9,801 1,662
Aq sp 9,774 1,11 9,712 1,331
Ti p 9,894 1,539 9,747 0,712
Ti sp 10,073 1,228 9,761 1,32
actividad fosfatasa alcalina en
cultivos control y experimentales en
presencia de metales:
(Aq p): acero quirrgico pulido,
(Aq sp): acero quirrgico no pulido,
(Ti p): titanio pulido,
(Ti sp) titanio no pulido
Total de calcio depositado ajustado por clula en
materiales metalicos
Control Ti p Ti sp Aq p Aq sp
0
0,5
1
1,5
2
u
m
o
l

C
a
l
c
i
o

/
c
e
l
u
l
a

(
x
1
0
E
-
5
)
Calcio depositado luego de 7 das,
ajustada por nmero de clulas
encontradas, para los cultivos control y
experimentales en metales:

(Aq p): acero quirrgico pulido,
(Aq sp): acero quirrgico no pulido,
(Ti p): titanio pulido,
(Ti sp) titanio no pulido.

Actividad de fosfatasa alcalina en
metales (Ti y 316L)
con diferente rugosidad

rugoso
rugoso
pulido
pulido
Peliculas delgadas con quitosano

Quitosano + hidroxiapatita
Quitosano + Ag
Quitosano +hidroxiapatita + Ag
Quitosano

+ Quitosano +Ag
Adhesion
fuerte
mejora en
sustratos
rugosos
pulido
rugoso
Ataque
quimico +
SBF(Ca)
SS 316L
TiON + SBF
SS 316L
TiON + quitosano+SBF (Ca)
SS 316L
TiON TiO2+quitosano+Ag+ SBF
SS 316L
TiON TiO2+quitosano/HA+SBF
Al P Ca Ti Cr Fe Mo
Ti N- TiO
2
FCS-
EC
0,31 0,59 0,46 85,6
0
3,94 7,59 0,88
TiN - TiO
2
FCS-
EC
0,30 0,69 0,65 85,1
0
4,13 7,56 0,92
SS 316L
TiON TiO2+ quitosano+HA
SBF
Conclusiones
La naturaleza quimica del recubrimiento
tiene un efecto sobre el comportamiento
del implante, la adhesion celular y la
biomineralizacion

Adhesion celular es favorecida en
superficies especulares (TiO2)

La composicion del metal base juega un
papel importante en la respuesta celular
La topografa y la qumica superficial pueden
ser alteradas por mtodos:
mecnicos, fsicos y qumicos o una
combinacin de ellos

La rugosidad del material base juega un
papel importante en la adhesin del polmero
FONACIT PROJECTS
G200100900
and G-200500103
Colaboradores:
Karem Noris
Sonia Camero





Personal del Lab.
Rafael Villalba
Antonio Monsalve
Lisbeth Losada
Maria Elena Gomes
Amaya Sagarzazu
Damarys Soto

Estudiantes:
Altair Contreras
Celso Reyes
Carlos Castillo
Kelly Alvarez
Jan Petternsen
Johanna Chacon
Eileen Flores
Jose Becerra
Ruben Briceo
Roseevelyn Serrano
Janeth Salas
Ursula spadavecchia
Cristina Parra
Mirla Rodriguez
Maria Eugenia Pirela
Maria Alejandra Romero
Daniel Figuera
Carlos Padrn
Iruhany Boyer
Vanessa Hernann
Carla Trocel
Claudio Naranjo
Daniel Macera
Yaquelin Sarmiento
Yacint Franco
Angelica Jara