UNIVERSIDAD DE NARIO INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

LABORATORIO DE BIOQUIMICA No. 7

FERMENTACION DE GLUCOSA
OBJETIVO: Determinar algunos de los
productos formados en la fermentacin de la
glucosa por accin de la levadura y de
lactobacillus.
FUNDAMENTO TEORICO: La glucosa por
accin de la levadura de panificacin
(habitualmente saccharomyces cerevisiae) es
capaz, en el proceso conocido como
fermentacin alcohlica, de degradarse, en
condiciones anaerobias, hasta etanol. La
misma glucosa por accin de lactobacillus del
yoghourt, se transforma en acido lctico en un
proceso conocido como fermentacin lctica.
En ambos casos hay una serie de reacciones
comunes a ambos procesos, que van desde
la glucosa hasta el acido pirvico. Por tal
razn el acido pirvico se va a encontrar en
muy baja concentracin como metabolto
intermediario. Igual cosa sucede con el
acetaldehdo, un metabolto intermediario en
la fermentacin alcohlica. Identificando la
presencia de piruvato, acetaldehdo y etanol
se comprueba entonces, que se est
realizando una fermentacin alcohlica. De
igual manera, al identificar la presencia de
cido pirvico y acido lctico se puede
comprobar que se ha presentado la
fermentacin lctica.

MATERIALES Y REACTIVOS

Dos esferas de cristal
Bao maria
Termometro
Embudo de vidrio
Papel filtro
Pipeta graduado de 1 o 2 ml
Levadura de panificacin
Suspensin de Lactobacillus
10 ml de suspensin de levadura al 10 % en
agua destilada
15 ml de glucosa al 10%
15 ml de galactosa al 10%
15 ml de fructosa al 10%
15 ml de sacarosa al 10%
15 ml de maltosa al 10%
15 ml de manosa al 10%
25 ml de cido tricloroacetico al 10%
10 g de sulfato de amonio solido
20 ml de nitroprusiato de sodio al 5 % (recin
preparado)
20 ml de amoniaco concentrado
10 ml de solucin saturada de 2,4
dinitrofenilhidrazina
20 ml de hidrxido de sodio al 10 %
20 ml de piperidina al 3 %
10 ml de ter etilico
5 g de carbonato de sodio finamente
pulverizado
25 ml de solucin de yodo-yoduro: 4 g de
yoduro de potasio y 2 g de yodo en 50 ml de
agua destilada
5 ml de acido piruvico al 2%
5 ml de acido lctico al 2 %
5 ml de acetaldehdo al 5%
5 ml de etanol al 10%
20 ml de solucin sulfocromica diluida
25 ml de solucin de cloruro ferrico al 0,3%

PROCEDIMIENTO
En dos tubos de ensayo pipetee 10 ml del
carbohidrato que le asigne el profesor. A un
tubo aada 5 ml de la suspensin de levadura
y en el otro 5 ml de la suspensin de
lactobacillus. Tape los tubos con una esfera
de cristal y colquelos en un bao mara entre
35-40 C durante una hora. Luego aada a
cada tubo 2 ml de la solucin de cido
tricloroacetico, mezcle bien y filtre. Con el
filtrado haga las siguientes pruebas.

Determinacin de piruvato con
nitroprusiato de sodio:
En un tubo de ensayo caliente hasta
ebullicin 2 ml del filtrado y agrguele 1 g de
sulfato de amonio solido. Adicione dos gotas
de solucin de nitroprusiato de sodio mezcle
vigorosamente y deje deslizar por la paredes
del tubo, amoniaco concentrado hasta que se
formen dos capas. Si hay piruvato se forma
un anillo verde o azul en la interfaz de los dos
lquidos. La formacin de un anillo rosado
transitorio en la interfaz indica la presencia de
grupos tioles y con frecuencia se observa
antes de la coloracin azul o verdosa
caracterstica de la reaccin con piruvato.



.

Determinacin de acetaldehdo
A 2 ml de filtrado agregue 0,5 ml de solucin
fresca de nitroprusiato de sodio y 2 ml de
piperidina acuosa y agite. Si hay acetaldehdo
presente se observa una coloracin azul.
Determinacin de etanol mediante su
oxidacin con cido sulfocromico a
acetaldehdo.
A 1 ml del filtrado se le aaden 0,5 ml de
solucin sulfocromica diluida. Tras mezclar
bien el conjunto se calienta en un bao de
agua hirviente; aparece un intenso color
verde, percibindose el olor caracterstico del
acetaldehdo.
Determinacin de Acido Lctico
A 1 ml de filtrado agregue 1 ml de ter etlico
y agite intensamente el conjunto; al separarse
las fases se recoge la fase etrea (parte
superior) y se le aade un volumen igual de
solucin de cloruro frrico. El lactato frrico
que se forma confiere al conjunto un intenso
color verde amarillento.

Resultados

Registre los resultados obtenidos en la
siguiente tabla:

Carbohidrato con que trabajo: ___________

PRUEBAS Tubo con
levadura
Tubo con
lactobacillus
Prueba de piruvato con nitroprusiato
Determinacin de etanol
Determinacin de acetaldehdo
Determinacin de acido lctico


Analice coherentemente a la luz de la teora del metabolismo de carbohidratos los resultados
obtenidos, si su resultado no coincide con lo esperado explique lo sucedido.

Realice toda la secuencia de reacciones para la fermentacin alcohlica y lctica del carbohidrato
con el que trabajo.