Comunicacin intercelular

durante el ciclo de desarrollo de

Myxococcus xanthus



































Benoit DRIENCOURT
Master Microbiologa UGR Granada 2011-2012
Asignatura : Transduccin de seales a travs de la membrana clular de las bacterias
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NDICE


Resumen 3


1. Seales en las bacterias 4


2. Mixobacterias y myxococcus 6
- Las mixobacterias
- Historia
- Filogenia
- Morfologa celular y estructuras
- Apndices extracelulares


3. Myxococcus xanthus 9


4. Movilidad por deslizamiento 10


5. Nutricin y metabolismo 13


6. Ciclo de desarrollo 14
- Cuerpos fructificantes
- Regulacin


Conclusiones 16



Bibliografa 17

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RESUMEN


Myxococcus xanthus es un bacilo Gram-negativo, tiene apndices que sirven para su
movilidad y sus interacciones sociales. Estas interacciones sociales sirven durante tiempos
de ayuno a construir estructuras de reproduccin. En las estructuras llamadas cuerpos
fructificantes se encuentran esporas. Para formar los cuerpos fructificantes, las clulas de
M. xanthus interactan con seales qumicos. Tambin, las clulas de M. xanthus se mueven
con diferentes mecanismos segn la fase en el ciclo de desarrollo. Los mecanismos de
movilidad y de comunicacin son relacionados pero las clulas puedan moverse solas.
Este trabajo presenta de manera sucinta los elementos claves de la vida social de
Myxococcus xanthus.

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1. SEALES EN LAS BACTERIAS

Las bacterias utilizan mecanismos de seal precisamente coordinados para asegurar
una transmisin eficaz y precisa de los mensajes qumicos dentro de la poblacin. Durante la
diferenciacin bacteriana, esta sealizacin fue descrita como autocrina todas las clulas
emiten y reciben la misma seal. Sin embargo, en un reciente artculo en Genes and
Development, Lopez et al. explican que la formacin de biofilm por Bacillus subtilis implica
una sealizacin paracrina. Precisamente, cuando la mayor parte de las clulas de la
poblacin produce un pptido prenilado, se encuentra que esta molcula activa la produccin
de una otra molcula seal la surfactina solamente en un pequeo subconjunto de
clulas. Por lo tanto, un subconjunto de clulas incapaces de producir la surfactina contesta
a la surfactina para producir el componente de la matriz extracelular del biofilm.

En la sealizacin autocrina, las mismas clulas producen y responden a una seal aunque
la sealizacin paracrina controla procesos eucariotas dependientes de la sealizacin
clula-clula como la transmisin neuronal o la coagulacin del sangre. La comunicacin
clula-clula en las bacterias fue pensada autocrina. Por ejemplo, el quorum sensing implica
la deteccin de un umbral de concentracin de una molcula seal por las bacterias que
producen esta seal (Fig 1a). En el caso del quorum sensing en Vibrio, los auto-inductores
AHL estn detectados por protenas citoplasmicas como LuxR, que activa la transcripcin de
los genes de quorum sensing por ligacin de los inductores de las parejas.

Aunque estas respuestas pueden producirse sobre largas distancias dentro de las
poblaciones bacterianas, una sealizacin que necesita que las clulas estn adyacentes
puede aparecer. Por ejemplo, durante la formacin del cuerpo fructificante de Myxococcus
xanthus, una protena seal esta presentada en superficie y interacta con el receptor de una
clula adyacente para transmitir la seal. Las dos clulas exprimen la molcula seal y el
receptor (Fig1b).


Fig 1

Al contrario de las clulas eucariotas, las poblaciones bacterianas se consideran en un tipo
de clulas. Sin embargo, hay un numero creciente de pruebas que la bacterias tienen
propiedades de organismos pluricelulares, por ejemplo, la estructuras miceliales de los
Estreptomicetes o los cuerpos fructificantes de las mixobacterias.

Micelio de Estreptomices
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La comunicacin clula-clula es central en varios procesos de desarrollo bacterianos. Esta
sealizacin puede ser entre especies, dentro una especie o entre organismos prximos o
viviendo en comunidades en las cuales la clula emisora de la seal estara lejos de la clula
receptora. Investigaciones suplementarias ensearan sin duda como estos eventos de
sealizacin llevan a alteraciones de la expresin del genoma y dan bacterias idnticas con
propiedades fenotpicas y comunales individuales.


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2. MIXOBACTERIAS Y MIXOCOCCUS

LAS MIXOBACTERIAS

Las mixobacterias son bacilos Gram-negativos, unicelulares, que se encuentran en
suelos y medios ricos en materia orgnica en descomposicin. Su distribucin es
prcticamente universal, en suelos de todo el mundo y bajo condiciones climticas extremas.
Las mixobacterias tienen tres caractersticas que las diferencian del resto de las bacterias
Gram-negativas :
- Son capaces de hidrolizar una amplia variedad de macromolculas insolubles como
protenas, almidones, quitina, celulosa, paredes celulares ; no solamente aisladas,
sino tambin cuando forman parte de organismos vivos y muertos.
- Las clulas vegetativas se mueven por deslizamiento sobre la superficie de sustratos
slidos.
- El ciclo de vida es exclusivo, hay un ciclo de crecimiento vegetativo y otro de
desarrollo. Depende de la cantidad de nutrientes, de la concentracin en productos
txicos o de la densidad celular. Esta caracterstica es nica entre los procariotas.


HISTORIA

Heinrich Freidrich Link, botnico alemn, fue el primero describiendo los cuerpos
fructificantes de algunas mixobacterias, confundindolas con hongos en 1809.
En 1892, el botnico estadounidense Roland Thaxter reconoci S. aurantiaca como una
mixobacteria, y describi el ciclo de vida de las mixobacterias en unas publicaciones.
En los 50, Myxococcus xanthus era la especie preferida y se conseguan cultivos puros de
estas bacterias.
Dworkin fue el primero en conseguir cultivos dispersos con M. xanthus en 1962 ; y con
Gibson en 1964, encontraron que las clulas vegetativas podan convertirse en mixsporas.
En los 70, Kaiser desarroll mtodos de anlisis genticos.
Muos-Dorado et al. (1991) describi por primera vez una protena quinasa con capacidad
de autofosforilarse en serina y tronina, tpica de las quinasas eucariotas.



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FILOGENIA

Clasificacin cientfica :

Dominio : Bacteria
Filo : Proteobacteria
Clase : Proteobacteria delta
Orden : Myxococcales
Familia : Myxoccaceae
Gnero : Myxococcus
Especie : M. xanthus


MORFOLOGA CLULAR Y ESTRUCTURAS

Bacilos unicelulares (3-12 m de longitud y 0,7-1,2 m de dimetro) que se
multiplican por fisin binaria transversal. Las clulas se encuentran en un muclago
constituyendo una colonia plana caracterstica que recibe el nombre de enjambre . La
matriz extracelular de M. xanthus est compuesta por un polisacrido neutro, carente de
cidos urnicos, que aparecen normalmente en los exopolisacridos de otras bacterias, y
representa del 5 al 10% del peso seco total de la colonia (Sutherland & Thomson, 1975). A
este muclago se le han atribuido varias funciones : adhesin clula-clula, adhesin a
sustratos slidos, proteccin frente a toxinas y bacterifagos, movimiento por deslizamiento.

La estructura de las clulas vegetativas de las mixobacterias es similar a las de otras
bacterias Gram-negativas : membrana externa, peptidoglucano y membrana plasmtica, que
envuelven al protoplasto.

Las mixobacterias presentan un tamao de cromosoma de los ms grandes de los existentes
en bacterias. En M. xanthus se ha demostrado que el genoma posee un tamao de 9,5 Mpb,
pero slo una pequea porcin est destinado al proceso de desarrollo un 0,3-0,6% resulta
esencial para estos eventos. El ADN de M. xanthus se metila en sitios especficos durante
los procesos de desarrollo y en fases tardas del crecimiento vegetativo.


APNDICES EXTRACLULARES

Las mixobacterias presentan dos tipos de apndices extracelulares, pili y fibrillas,
unidos a su superficie externa. Ambas estructuras estn implicadas en interacciones clula-
clula.
- Pili de tipo IV (T4P = type four pili) : de 3 a 10 m de longitud y unos 10 nm de
dimetro. Forman un penacho de dos a ocho filamentos en uno de los polos. Papel
importante en la adhesin de las clulas en la comunidad, as como en el
movimiento social.



- Fibrillas : de ms de 50 m de longitud por 15-30 nm de dimetro. Distribuidas
alrededor de la clula disposicin peritrica. Estas fibrillas conectan unas clulas
con otras y representan las fuerzas cohesivas que mantienen a las clulas unidas en
el enjambre. Papel critico en la agregacin y la formacin de cuerpos fructificantes.

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Fibrillas de M. xanthus

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3. MYXOCOCCUS XANTHUS

La vida social de M. xanthus depende del movimiento activo de las clulas. Las
clulas de M. xanthus se mueven por deslizamiento, es el movimiento de los bacilos en el
sentido de la longitud sobre una superficie y sin flagelo. Sobre una superficie solida y en alta
densidad celular, las clulas de M. xanthus se auto-organizan en tres estructuras distintas :
colonias en expansin, cretas y cuerpos fructificantes. La estructura dominante depende del
estatus nutricional de las clulas. En presencia de nutrimentos, la clulas forman colonias en
expansin. En ausencia de nutrimentos, las clulas inician un desarrollo que se acaba con la
produccin de cuerpos fructificantes llenos de esporas.


El ciclo de desarrollo de M. xanthus

La formacin del cuerpo fructificante se desarrolla en fases morfolgicas distintas,
separadas en el tiempo y en el espacio. Despus de 4 a 6 horas de ayuno aparecen los
primeros signos de la formacin de un cuerpo fructificante. Las clulas agregan, los centros
crecen y forman cpulas. A 24 horas, el proceso de agregacin est acabado y cada cuerpo
fructificante naciente contiene aproximadamente 105 clulas. En cada cuerpo fructificante las
clulas pasan por una diferenciacin morfolgica y fisiolgica en mixosporas esfricas, los
cuerpos fructificantes son maduros. Slo 10% de las clulas de la poblacin se diferencian
en esporas, las que estn en los cuerpos fructificantes. Hasta 30% de las clulas se quedan
fuera y se diferencian en bacilos esfricos. Las otras clulas mueren por lisis.

Bajo condiciones de ayuno menos drsticas o con presencia de presas, las clulas
de M. xanthus se arreglan en una tercera estructura llamada ondas. Durante la ondulacin,
las clulas agregan en crestas espaciadas por valles menos densas en clulas. Las
estructuras en crestas se mueven por deslizamiento de manera coordinada y sncrona en
ondas sobre la superficie. La ondulacin se inicia tpicamente antes la agregacin, las
crestas desaparecen con la gnesis de los cuerpos fructificantes.


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4. MOVILIDAD POR DESLIZAMIENTO


Placa de Mycococcus xanthus

La movilidad de las clulas es esencial para la mayora sino todas las actividades
sociales de M. xanthus. Las clulas se mueven por deslizamiento utilizando dos sistemas
llamados sistema de movilidad A (aventurero) y sistema de movilidad S (social). Los dos
sistemas son independientes para generar una fuerza motriz en la misma direccin y
demostrar una ventaja selectivo sobre diferentes superficies ; por lo tanto, las actividades son
coordinadas. La movilidad S es generalmente operativa slo cuando las clulas estn juntas,
mientras que la movilidad A es operativa en las clulas solas o en grupos. De vez en cuando,
las clulas cambian de trayectoria, el antiguo polo lder se vuelve el nuevo polo posterior.


Movimiento de M. xanthus en 3 horas

SISTEMA S

La mquina molecular del T4P da la fuerza para la movilidad S. Los T4P son
estructuras localizadas en los polos y solo presentes en el polo anterior de las clulas. La
generacin de fuerza por los T4P implica 3 etapas : extensin del T4P desde el polo anterior
de la clula, fijacin sobre la superficie, retraccin. La fuerza permite a la clula avanzar.

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Mquina del T4P

Adems del T4P, la movilidad S depeende del lipopolisacarido O-antigenio y matriz
extracelular (ECM). Ignoramos como el lipopolisacarido afecta la movilidad del T4P. La
relacin entre la ECM y la movilidad dependiente de los T4P fue establecida con la
observacin que los polisacaridos de la ECM activa la retraccin de los T4P. Este explica le
dependencia con el contacto clula-clula.


Movilidad de tipo S en M. xanthus

SISTEMA A

Se ignora actualmente como el sistema de movilidad A genera una fuerza mecnica.
Sin embargo, dos modelos existen. Las clulas de M. xanthus se mueven con el sistema de
movilidad A y dejan una huella de mucus. La movilidad A dependera de las secreciones y la
hidratacin de un gel polielectrlito de las estructuras en tobera de la membrana externa. En
M. xanthus, estas estructuras se encuentran a los dos polos ; pero pensamos que la
secrecin aparece slo al polo posterior de la clula. Un descubrimiento soporta este modelo
enseando los varios genes necesarios a la movilidad A codeando protenas de la sntesis y
la exportacin de polmeros. Adems, la protena reguladora de respuesta RomR, necesaria
para la movilidad A se encuentra en una estructura bipolar y asimtrica en el polo posterior.
Su funcin en la movilidad A es ignorada ahora ; sin embargo, la localizacin de RomR
sugiere que la mquina de la movilidad A es en el polo posterior de la clula.

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Huellas de mucus de M. xanthus

En el segundo modelo para la movilidad A, la produccin de fuerza depende de los
complejos de adherencia multifocal distribuidos en la longitud de la clula. Estos complejos
son definidos por la protena AglZ necesaria para la movilidad A. Asociando una AglZ con
una protena amarilla fluorescente (YFP), se observa que AglZ-YFP forma puntos en la
longitud de la clula. Esos puntos se quedan fijos sobre el sustrato durante el movimiento de
la clula. Se necesitara una estructura citoesqueleto para sostener el complejo. Una otra
investigacin sugiere AglZ fuera la mquina y mas como un regulador negativo del sistema
quemo-sensor Frz que regula la frecuencia de inversin celular.


La mquina de la movilidad A en M. xanthus

A lo largo de los aos, un gran nombre de mutantes para la movilidad A fue aislado.
Slo un pequeo nombre fue analizado a la escala molecular y celular. Futuras anlisis en
combinacin con la identificacin de los genes codeando las protenas en las estructuras en
tobera y en los complejos de adhesin focal ayudaron para resolver los mecanismos de la
movilidad A.



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5. NUTRICION Y METABOLISMO

Las mixobacterias son saprofitos y depredadores de otros microrganismos. Cmo
cazan las mixobacterias? Varias prcticas en laboratorio ensean colonias de M. xanthus
pueden atraer clulas de E. coli con un mecanismo desconocido y despus, lisar esta
clulas. Al contrario, el carbono de las clulas viviente de E. coli en el suelo seria recuperado
por bacterias rastreras ; sugiriendo que las mixobacterias utilizan tambin la movilidad celular
para cazar sus presas. Una vez atrapada, la presa esta matada y los polmeros degradados.
No sabemos mucho a propsito de estos procesos ; sin embargo, pensamos que la clula
esta matada con enzimas hidroliticas secretadas y de metabolitos segundarios con actividad
antimicrobiana, mientras que la degradacin de los polmeros dependera slo de enzimas
hidroliticas secretadas.

Adems, la funcin y la importancia de la variedad de enzimas secretadas por la depredacin
son desconocidas. Pensamos que la degradacin de polmeros es un proceso cooperativo.
As, si la casena es la sola fuente de carbono, las clulas de M. xanthus no ensean un
crecimiento significativo que desde una cierta densidad celular y el ndice de crecimiento
aumenta con la densidad celular. Adems, el crecimiento cooperativo est relacionado con
los aumentos de la actividad de la proteasa extracelular y con la concentracin en casena
hidrolisada en el medio, sugiriendo una hidrolisis cooperativa de la casena. Tambin, si la
casena esta sustituida por casena hidrolisada, el crecimiento de M. xanthus es
independiente de la densidad celular.

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6. CICLO DE DESAROLLO

Cuerpos fructificantes de M. xanthus

La formacin de cuerpos fructificantes depende mucho de la comunicacin celular
entre las clulas de M. xanthus. 5 seales intercelulares fueron definidos genticamente. Sin
embargo slo dos de estas seales, las seales A y C fueron caracterizadas
bioqumicamente y funcionalmente. Estas dos seales tienen funciones diferentes. El
sistema de sealizacin A asegura que la formacin del cuerpo fructificante no se inicia antes
que un nmero suficiente de clulas estn en ayuno. El sistema de sealizacin C asegura
un orden temporal correcto por el deslizamiento, la aglomeracin y la esporulacin. La seal
C informa las clulas a propsito de la posicin y permite un buen acoplamiento espacial de
las clulas en la agregacin en cuerpos fructificantes y en la esporulacin de las clulas
acumuladas en los cuerpos fructificantes.


Maduracin de mixsporas

La seal A vuelve importante en el desarrollo despus de dos horas de ayuno. La
seal A consiste en 2 partes : una parte estable con el calor y una parte inestable con el
calor. La parte estable es una mezcla de aminocidos y de pptidos. La parte inestable
consiste al menos en dos proteasas. Segn el modelo actual para el mecanismo de la seal
A, las clulas secretan una mezcla de proteasas durante las primeras fases del ayuno, las
proteasas digieren las protenas de superficie, causando la liberacin de pptidos y
aminocidos con una actividad seal A. Si un umbral de concentracin en seal A est
alcanzado, la seal A se nota y la expresin de los genes dependientes del sistema A
empieza, resultando una progresin en el programa de desarrollo. El sistema de sealizacin
A no es un anlogo funcional de los sistemas de quorum sensing con homoserina lactone de
las bacterias Gramo negativo, porque a bajas concentraciones, la seal A apoya el desarrollo
y a altas concentraciones el crecimiento celular.

Seis mutantes (asgA a asgE y sigD) que no producen la seal A fueron aislados.
Pensamos que las protenas correspondientes son los compuestos de vas de sealizacin
importantes en sntesis de la seal A. Notablemente, ningn de los seis genes codean
A B C A B C
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proteasas, las proteasas de la seal A quedan desconocidas. Varias mutaciones fueron
identificadas, causando un desvo del encargo en seal A por los genes cuyos la expresin
depende de la seal A. Sin embargo, queda a identificar un receptor para esta seal.
Recientes datos sugieren tambin una conexin entre los genes asg pero no la seal A y
la depredacin, es decir que varios mutantes asg tienen una eficacia de depredacin
reducidos, y en presencia de presas, la seal A esta facultativa en la formacin del cuerpo
fructificante, pero no en la esporulacin.

La seal C vuelve importante en la formacin del cuerpo fructificante despus de
seis horas de ayuno y es totalmente requerida para la ondulacin, la agregacin y la
esporulacin. La seal C acta de una manera umbral-dependiente para inducir estos
mecanismos, es decir que la ondulacin es inducida a bajo umbral, la agregacin a medio
umbral y la esporulacin a alto umbral. La seal C es una protena de 17 kDa y su sntesis
depende del gen csgA. csgA codea una protena de 25 kDa que se cliva de manera
proteolitica para dar p17. Durante el clivaje proteoltico de p25, 8 kDa son quitados de la
extremidad N-ter y p17 corresponde al C-ter de p25. LA localizacin sub-celular de p25 y p17
es controvertida. Clulas salvajes marcadas con anticuerpos contra un pptido
correspondiente a p17, seguido por un anticuerpo con una cola dorada son analizados por
microscopia electrnica ensea partculas de oro asociadas con la ECM y el citoplasma,
mientras que los p17 y p25 fueron detectados en la membrana externa de un mutante
deficiente en biosntesis de ECM. Al final, estas observaciones sugieren que p17 y p25 son
ancladas en la membrana externa.

p25 se acumula en las clulas vegetativas ; sin embargo, es solamente clivado para
generar p17 durante el ayuno. En los 2000, el mecanismo de regulacin del clivaje de p25
durante el ayuno fue descubierto. Como p25 y p17 estn ancladas en la membrana externa y
como la protelisis esta bloqueada por los inhibidores de proteasa a serina, emitimos la
hiptesis que la proteasa responsable del clivaje es una proteasa a serina secretada. Una
anlisis ensea la protease subtilisin-like PopC como la proteasa que cliva directamente p25.
El mecanismo subyacente la protelisis regulada de p25 es basada sobre la secrecin
regulada de PopC. PopC acumula en el citoplasma de las clulas vegetativas y es solamente
secretada durante el ayuno de las clulas. Adems, a pesar de que PopC y p25 acumulan en
las clulas vegetativas, slo estn presentes en el mismo compartimento en las clulas
jvenes, as restringiendo el clivaje de p25 en las clulas jvenes. Una vez secretada, PopC
es rpidamente degradada y acta slo en cis. La degradacin rpida, combinada con la lenta
secrecin de PopC, asegura la lenta acumulacin de p17 en la superficie de las clulas,
necesaria para un bien funcionamiento de la seal C como minutero de desarrollo y de
morfognesis. Ninguna de PopC o p25 no tiene pptido seal y no se sabe como son
secretadas.

p17 es anclada en la membrana externa y por consiguiente no es difusible. Adems,
la transmisin de la seal C necesita una movilidad activa y un buen alineamiento de las
clulas. Desde estas observaciones, se sugiere que la transmisin de la seal C depende de
las interacciones entre p17 y el receptor a p17 de una clula adyacente. Este receptor queda
desconocido. La transmisin de la seal C se aade a la lista de las actividades de
M. xanthus que son dependientes del contacto clula-clula.

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CONCLUSIONES

Mixococcus xanthus encarna el modelo de la bacteria social. Con un ciclo de
desarrollo nico, M. xanthus es a la vanguardia de la tecnologa bacteriana. Ensear una
vida multicelular bacteriana antes de las eucariotas pruebe que hoy, estos organismos estn
lejos en la evolucin delante de nosotros.

Comportamientos multicelulares de M. xanthus

Adems, su vida social ensea como se construyen las grandes estructuras
orgnicas, estas estructuras multicelulares que hoy permiten al ser humano conquistar el
espacio. Sabemos que las estructuras multicelulares son una ventaja frente a la vida. Y este
se ve cuando vemos M. xanthus dar mixosporas en gran cantidad, que pueden sobrevivir a
catstrofes mayores. Adems, M. xanthus ensea una evolucin cuando caza otros micro-
organismos, sus apndices son sus armas.


A : M. xanthus salvaje ;B : M. xanthus mutante frz



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BIBLIOGRAFA


From individual cell motility to collective behaviors: insights from
a prokaryote, Myxococcusxanthus.
Zhang Y, Ducret A, Shaevitz J, Mignot T
FEMS Microbiol Rev. 2012 Jan;36(1):149-64. doi: 10.1111/j.1574-6976.2011.00307.x. Epub
2011 Oct 3.

CorE from Myxococcus xanthus is a copper-dependent RNA polymerase sigma factor.
Gmez-Santos N, Prez J, Snchez-Sutil MC, Moraleda-Muoz A, Muoz-Dorado J.
PLoS Genet. 2011 Jun;7(6):e1002106. Epub 2011 Jun 2.

Microbial interactions: bacteria talk to (some of) their neighbors.
Shah IM, Dworkin J.
Curr Biol. 2009 Aug 25;19(16):R689-91.

Sociobiology of the myxobacteria.
Velicer GJ, Vos M.
Annu Rev Microbiol. 2009;63:599-623.

Extracellular biology of Myxococcus xanthus.
Konovalova A, Petters T, Sgaard-Andersen L.
FEMS Microbiol Rev. 2010 Mar;34(2):89-106. Epub 2009 Oct 20.

Eukaryotic-like protein kinases in the prokaryotes and the myxobacterial kinome.
Prez J, Castaeda-Garca A, Jenke-Kodama H, Mller R, Muoz-Dorado J.
Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 Oct 14;105(41):15950-5. Epub 2008 Oct 3.

Myxococcus-from single-cell polarity to complex multicellular patterns.
Kaiser D.
Annu Rev Genet. 2008;42:109-30.

Social interactions in myxobacterial swarming.
Wu Y, Jiang Y, Kaiser D, Alber M.
PLoS Comput Biol. 2007 Dec;3(12):e253. Epub 2007 Nov 13.