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54
Suero 1
Diagnstico: Colitis ulcerosa
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: P-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: A-ANCA / P-ANCA (no consenso)
MPO: negativo
PR3: negativo
Negativo
55
Garbie Roy. H Ramn y Cajal. P formalina INOVA 1/20
D.Pascual. H. La Paz. P metanol Biosystems 1/20
A. Marn. H Vall dHebrn. HEp-2 / neutrfilos etanol. Euroimmun
A. Marn. H Vall dHebrn. P etanol INOVA 1/20.
S Su ue er ro o 1 1: : A A- -A AN NC CA A / / P P- -A AN NC CA A
56
S Su ue er ro o 1 1: : A A- -A AN NC CA A / / P P- -A AN NC CA A
IFI objetivo x100: No se detectan puntos intranucleares
M.R. Juli. H U Son Espases. P etanol casero I 1/20
57
Suero 2
Diagnstico: Lupus eritematoso sistmico
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: P-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: P-ANCA
MPO: positivo
PR3: negativo
Positivo: anti-Sm, SSA, SSB, U1RNP
58
SUERO 2: P-ANCA, MPO+, ANA+
M ML L V Va ar rg ga as s, , I I. .A Al lc ca al l . . H H I In nf fa an nt ta a C Cr ri is st ti in na a P P f fo or rm ma al li in na a M MO OV VA AC CO O 1 1/ /2 20 0
H Cruces. MA Pacho. Hep2 Kallestad 1/80
D. Pascual H. La Paz. P Metanol Biosystems 1/20
M ML L V Va ar rg ga as s, , I I A Al lc ca al l . . H H I In nf fa an nt ta a C Cr ri is st ti in na a. . P P e et ta an no ol l M MO OV VA AC CO O 1 1/ /2 20 0
59
Suero 3
Diagnstico: Granulomatosis con poliangiitis (G. Wegener)
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: C-ANCA / NEGATIVO
Segn terminologa participantes del Taller: C-ANCA / NEGATIVO (no consenso)
MPO: negativo
PR3: positivo (no consenso)
Lactoferrina: positivo
Negativo
60
D. Pascual. H La Paz. P metanol Biosystems 1/20
Suero 3: C-ANCA / NEGATIVO, PR3+, LACTOFERRINA+
M.A. Montes. H Virgen del Roco. P etanol INOVA 1/20
D. Pascual. H La Paz. P formalina INOVA 1/20
A. Marn. H Vall dHebrn. Hep-2/neutrfilos etanol 1/10 Euroimmun
61
Suero 4
Diagnstico: Colitis ulcerosa
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: P-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: A-ANCA / P-ANCA (no consenso)
MPO: negativo
PR3: negativo
Negativo
62
MJ martnez. Fundacin Jimnez Daz. P formalina INOVA 1/10
Suero 4: A-ANCA / P-ANCA
Y Barrios, A Franco. H U de Canarias. P etanol
Zenit 1/20
A. Marn. H Vall dHebrn. Hep-2/neutrfilos etanol Euroimmun
1/10
G.Roy. H Ramn y Cajal. P metanol Biosystem 1/20.
63
Suero 4: A-ANCA / P-ANCA
Objetivo x100: Se observan puntos intranucleares
M.R. Juli. H U Son Espases. P etanol INOVA 1/20
64
Suero 5
Diagnstico: Colitis ulcerosa
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: P-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: P-ANCA / A-ANCA (no consenso)
MPO: negativo
PR3: negativo (no consenso)
Positivo, patrn homogneo
65
P. Martnez. H V Arrixaca. Hep2 Immunoconcepts 1/80
Suero 5: P-ANCA / A-ANCA, ANA+ patrn homogneo
MA Pacho. H Cruces. P etanol INOVA 1/20
A.Marn. H Vall dHebrn. P formalina 1/10 Euroimmun
G. Roy. H Ramn y Cajal. P metanol Biosystems 1/20
66
Suero 5: P-ANCA / A-ANCA. IFI sobre portas de neutrfilos fijados con formalina
MJ Martnez. Fundacin Jimnez Daz INOVA 1/10: resultado - A Marn. H Vall dHebrn. INOVA 1/20: resultado +
G Roy. H.Ramn y Cajal. INOVA 1/20: resultado +/- P Martnez. H Virgen de la Arrixaca. MBL 1/20: resultado -
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IFI Objetivo x100: No se observan puntos intranucleares
Suero 5: P-ANCA / A-ANCA, ANA+ patrn homogneo
M.R. Juli. H U Son Espases. P etanol Biosystems 1/20 M.R. Juli. H U Son Espases. P etanol casero 1/20
68
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: P-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: A-ANCA (no consenso)
MPO: negativo
PR3: negativo
Negativo
Suero 6
Diagnstico: Granulomatosis necrotizante pulmonar
69
P. Eiras. H. Universitario Santiago. Hep2 Kallestad
1/40
Suero 6: P-ANCA / A-ANCA
F. Pujalte, M. Alsina. Parc logstic de salut . P etanol Zenit
1/20
M.Rodrguez. H Gregorio Maran. P formalina INOVA 1/10 M.Rodrguez. H Gregorio Maran. P metanol
Biosystems 1/20
70
Suero 6
Objetivo X100: No se detectan puntos intranucleares
MR Juli. H.U.Son Espases. . P etanol casero 1/20
71
C Gelp. H Sant Pau. P etanol casero absorbido con pellet Hep2
Suero 6: P-ANCA / A-ANCA
72
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: NEGATIVO / C-ANCA ATPICO
Segn terminologa participantes del Taller: NEGATIVO / C-ANCA ATPICO
(no consenso)
MPO: negativo
PR3: negativo
Negativo
Suero 7
Diagnstico: Granulomatosis con poliangiitis (G. Wegener)
73
Suero 7: ANCA negativo / C-ANCA atpico
A.Snchez. Clnica U. Navarra. P etanol INOVA 1/10
G.Roy. H Ramn y Cajal. P metanol Biosystems 1/10 G.Roy. H Ramn y Cajal P formalina INOVA 1/10
P.Martnez. Hep2 Immunoconcepts 1/80
74
Suero 7: negativo / C-ANCA atpico
C.Gonzlez. H Virgen de la Macarena. P etanol INOVA
1/20: res -
M.Rodrguez. H Gregorio Maran. P formalina INOVA 1/10: res+ A Prada, R Sez. H Donostia. P etanol INOVA 1/20: res. +
C.Gonzlez. H Virgen de la Macarena. P formalina INOVA
1/20: res -
75
Suero 8
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: C-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: C-ANCA
MPO: negativo
PR3: negativo
Anti-ribosomal P positivo
Suero 8
Diagnstico: Lupus eritematosos sistmico
76
Suero 8: C-ANCA, anti-ribosomal P +
E.Martnez. H.Tras i Pujol. P etanol Euroimmun 1/10
D.Pascual. H La Paz. P metanol INOVA 1/20
P.Eiras . H U. Santiago . P formalina MBL 1/20
A. Marn. H Vall dHebrn. Hep2 / neutrfilos etanol.
Euroimmun 1/10
77
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: C-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: C-ANCA
MPO: negativo
PR3: positivo (no consenso)
Negativo
Suero 9
Diagnstico: Colitis ulcerosa
78
Suero 9: C-ANCA, PR3+
C.Gelp. H.Sant Pau. P etanol casero 1/20
D.Pascual. H La Paz. P metanol INOVA 1/20
P.Eiras . H U. Santiago . P formalina MBL 1/20
P. Martnez. H Virgen de la Arrixaca. Hep2 Immunoconcepts 1/80
79
Patrn ANCA por I.F.I
Especificidad ANCA
ANA
Segn terminologa consenso internacional: P-ANCA
Segn terminologa participantes del Taller: P-ANCA
MPO: positivo
PR3: negativo
Anti-Scl70 positivo
Suero 10
Diagnstico: Vasculitis necrotizante y esclerosis sistmica difusa
80
Suero 10: ANCA p, MPO+, SCl70+
P. Eiras. H.C.U.Santiago Compostela. P etanol MBL 1/20
D.Pascual. H La Paz. P metanol INOVA 1/20
S.Toribio, J.J.Cid . H.U. A Corua Teresa Herrera.
P formalina Euroimmun 1/20
M. Esprrago. H. Mrida. Hep2 Euroimmun 1/20
81
Suero 10: ANCA p, MPO+, SCl70+
Objetivo X100: Se observan puntos intranucleares
MR Juli. H.U.Son Espases. P etanol Biosystems 1/20
10-CONCLUSIONES
10.1.-Patrones IFI
1-La nomenclatura de los participantes para sueros P-ANCA positivos en etanol y
negativos en formalina vara, prcticament al 50%, entre A-ANCA y P-ANCA. Sera
conveniente unificar criterios en cuanto a este tema.
2-La positividad, tanto en portas fijados en etanol como en portas fijados en formalina y el
tipo de patrn informado, segn la IFI en portas etanol, no dependen del origen de los
portas (tipo de fabricante) sino de los laboratorios participantes.
3-El hecho de utilizar una dilucin de cribaje de 1/10, 1/20 1/40 tampoco condiciona la
positividad o negatividad en etanol y formalina.
4- Los participantes no han descrito la presencia o ausencia de puntos intranucleares en
sueros P-ANCA positivos. En nuestra experiencia, la deteccin de puntos intranucleares
en sueros P-ANCA positivos de pacientes con colitis ulcerosa no es siempre positiva por
microscopa de fluorescencia, por lo que su observacin no es til, en general. Adems
en sueros con P-ANCA debidos a anticuerpos a-MPO pueden hallarse tambin
anticuerpos dirigidos a estructuras de la membrana nuclear que den dichos puntos en IFI,
como ocurre con el suero 10 del taller.
5-En la mayora de casos, la IFI sobre portas fijados con formalina es ms sensible que la
IFI sobre portas fijados con etanol.
6-La presencia de anticuerpos dirigidos contra antgenos del citoplasma (antiprotenas
ribosomales, por ejemplo) puede dar lugar a patrones C-ANCA, difciles de distinguir de
los dirigidos a protenas especficas de los neutrfilos, como ha ocurrido con el suero 8 del
taller en el que se ha obtenido consenso cono C-ANCA positivo.
7-La absorcin con pellet de clulas HEp2 puede ayudar a distinguir los ANA de los
ANCA atpicos, como ocurre en el suero 6, sin embargo, slo un laboratorio ha informado
la utilizacin de esta tcnica.
8-La mayora de laboratorios no han utilizado portas fijados con metanol, por lo que no es
posible deducir conclusiones vlidas sobre los resultados obtenidos con los sueros del
taller. Los dos sueros a-MPO positivos presentan adems antinucleares por lo que
tambin han sido informados como positivos en metanol.
Los sueros A-ANCA positivos correspondientes a pacientes con colitis ulcerosa han sido
informados positivos en portas fijados con metanol, por los laboratorios que han utilizado
este substrato.
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10.2-Tcnicas de determinacin de anti-MPO y anti-PR3
1-Un 12% de laboratorios utiliza tcnicas cualitativas para deteccin de a-PR3 y a-MPO.
En algunos laboratorios no se constata tcnica cuantitativa de confirmacin, necesaria
adems para un correcto seguimiento de los pacientes, segn recomendaciones
nacionales e internacionales (1,2,10).
2-Tal como refleja la literatura sobre el tema, existen diferencias en la sensibilidad de las
distintas tcnicas de deteccin de a-PR3:
Respecto a los sueros n 3 y 9, las distintas tcnicas se comportan de forma similar en
ambos: la mayora de ELISA directos dan negativos, mientras que las tcnicas anchor y
de captura son positivas. Las dos tcnicas de quimioluminiscencia utilizadas se
comportan de forma opuesta , aunque hay pocos laboratorios que las usan. Estos sueros
corresponden a un paciente no activo con granulomatosis con poliangiitis (anteriormente
denominada Granulomatosis de Wegener) (suero 3) y a un paciente con colitis ulcerosa
(suero 9). Este ltimo caso apoya recientes publicaciones sobre la asociacin entre a-PR3
y colitis ulcerosa y la utilidad en su diagnstico diferencial (8,9). En ambos casos hay
concordancia entre los patrones IFI y los ELISA, ya que la mayora de los laboratorios que
dan IFI positiva les atribuye un patrn C-ANCA, caracterstico de PR3.
El problema en el paciente 3 (positivo para PR3 en el 49% de determinaciones), es que
no est activo, aunque la persistencia de un valor positivo de a-PR3 podra indicar la
necesidad de un seguimiento estrecho, para evitar recada, segn postulan algunos
autores (15). Otros trabajos describen que el exceso de sensibilidad de algunas tcnicas
ELISA de ltima generacin puede crear confusin en este tipo de pacientes (16).
El suero 5, que corresponde a un paciente con colitis ulcerosa, slo en el 30% de las
determinaciones ha dado a-PR3 positivo y no corresponde a patrn C-ANCA por IFI, por
lo que la positividad a-PR3 es discutible. En este caso las tcnicas que dan resultado
positivo se encuentran dentro de los ELISA directos, dot-blot, quimioluminiscencia y
tcnica multiplex. Para la determinacin de a-MPO hay algunos laboratorios que utilizan
tcnica directa (mientras que usan una de ltima generacin para a-PR3), de acuerdo con
algunos autores que describen mejor capacidad diagnstica de esta tcnica para a-MPO
(13).
3- En cuanto a los dos pacientes a-MPO positivos, hay muy buena concordancia entre
laboratorios (100% los dan a-MPO positivos) y entre el patrn P-ANCA por IFI y la
positividad para a-MPO. Se trata de dos pacientes que presentan una conectivopata, en
el primer caso se trata de un lupus eritematoso sistmico y en el otro de una esclerosis
sistmica. El primero no presenta clnica de vasculitis y la biopsia renal tampoco es
compatible con vasculitis necrotizante, mientras que el segundo s que es una vasculitis
sistmica. Estos resultados apoyan el hecho de que la presencia de estos anticuerpos en
enfermedades autoinmunes sistmicas no va siempre asociada a vasculitis sistmica.
4-La introduccin del recientemente aparecido estndar internacional para a-PR3 y a-
MPO de los Centers for Disease Control and Prevention (CDC), de Atlanta, puede
contribuir a una mayor concordancia de las distintas tcnicas, a pesar de que se ha
descrito muy variable binding de distintos estndares a los diferentes kits (14,17). La
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utilizacin del estndar internacional podra ser de gran utilidad en la optimizacin de las
tcnicas con menor sensibilidad.
5-La deteccin de antgenos distintos de MPO y PR3 se ha realizado por una minora de
laboratorios. En los sueros de pacientes con colitis ulcerosa (1, 4, 5) , no se ha detectado,
mayoritariamente, positividad para estos antgenos minor, de acuerdo con la literatura
(18).
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