TEMA 6 ENZIMAS

Antes de realizar la Gua deber revisar:

1. Funcin de las enzimas.
2. Caractersticas estructurales de las protenas.
3. Generalidades del mecanismo de accin enzimtica.

Evaluacin:

1. Porqu las enzimas son calificadas como biocatalizadores?

2. De una enzima "tipo" indique qu ordenamientos espaciales presenta su molcula?
3. Explique la reaccin representada abajo.

E + S E + P


GUIA DE CLASE

SITIO ACTIVO

1. En la figura se representa la estructura de una enzima y el detalle de su sitio activo.
Los R His 94, 96 y 119 de la enzima estn prximos en un lugar de la molcula: el sitio
activo.



a. Cmo explica que aminocidos distantes en la estructura primaria estn espacialmente tan
cercanos en el espacio?
b. Qu funciones cumplen en la reaccin los R del sitio activo?
c. Resuma las caractersticas estructurales del sitio activo.
2. Es frecuente que las enzimas requieran molculas orgnicas (vitaminas, por ejemplo) o
metales como Mg
++
, Fe
++
para catalizar reacciones.
a. Cmo se denominan genricamente esas molculas no proteicas?.
b. Identifique el metal en la enzima de la figura anterior.

3. La actividad de una enzima corresponde a la velocidad con que transcurre la reaccin. A
continuacin se esquematiza la reaccin catalizada por la enzima lactato deshidrogenasa que
tiene como cofactor al NAD/NADH. Analice las molculas que participan en la reaccin y
proponga cmo puede medir la velocidad.

CH
3
NADHH
+
NAD CH
3


C=O CHOH

COOH NADHH
+
NAD COOH

4. Las enzimas se agrupan segn el tipo de reaccin que catalizan. En los ejemplos que figuran
a continuacin, reconozca cundo acta una hidrolasa, una isomerasa y una ligasa.




maltosa
5. Las grfica A muestra la variacin de la actividad de dos enzimas medida a distintos pH. La
grfica B muestra la actividad de una misma enzima a distintas temperaturas luego de ser
sometida a distintos tratamientos


a. Qu conclusiones puede sacar respecto al efecto del pH sobre la actividad de las enzimas 1
y 2 del grfico A?

b. Por qu una misma enzima tiene distinta actividad a 30C en el grfico b?

c. Considerando los enlaces que estabilizan las enzimas, explique los grficos A y B.




CINETICA ENZIMATICA

6. La velocidad con la que un sustrato (S) se convierte en producto (P), en una reaccin
catalizada por una enzima, se mide en los primeros minutos de reaccin y se llama velocidad
inicial (v
o
).





Estudiando la reaccin catalizada por la sacarasa, Michaelis y Menten encontraron que, cuando
la concentracin de enzima era constante y no limitante, la variacin de v
o
con respecto a la [S]
se ajustaba a una curva hiperblica.
a. Represente grficamente el resultado obtenido.

b. Identifique en la representacin grfica realizada en a:

etapas sustrato-dependiente y sustrato-independiente,

la velocidad mxima de la enzima (V
mx
).

vo
pH 3 5 7 9 11
enzima 1
enzima 2
vo
Temp (C)
10 30 50 60
a
b
a. enzima en condiciones normales.
b. enzima luego de ser sometida a ebullicin.
A

B

la [S] necesaria para logra V
mx
/2, es decir la K
M



c. Relacione las distintas situaciones que se representan en el cuadro que aparece a
continuacin con las regiones de la grfica que realiz en a.






















d. Por qu cuando se alcanz la V
mx
, la velocidad no vara aunque aumente la [S]?



Ecuacin de Michaelis-Menten
La velocidad con la que se forma el complejo ES es proporcional a la constante de velocidad k
1

y la velocidad de disociacin del complejo es proporcional a las dos constantes de velocidad k
2

y k
3
correspondientes a las reacciones en las que se disocia ES.
La ecuacin de Michaelis-Menten es la expresin matemtica de la curva hiperblica que indica
la variacin de vo en funcin de [S] para una [E], a temperatura y presin constantes.




7. Utilizando la ecuacin de Michaelis Menten:
a. Calcule el valor de K
M
cuando la velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad
mxima alcanzada. Sustituya en la ecuacin vo por V
mx
/2 y despeje [S].

b. Defina K
M
a partir del resultado que obtuvo en el punto anterior.

+
+
+
+
+
+
+
+
E
+
S E+S E P
+
+
+
+
+
+
+
+
+
E
+
S E+S E P
+
c. Marque en la grfica el valor de K
M
y observe las unidades en las que se expresa.


8. En la grfica se representa la actividad de una enzima con dos sustratos distintos.
a. Indique en el grfico la K
M
de la enzima para cada sustrato.
b. Cmo relaciona la K
M
con la afinidad de la enzima por los sustratos?

9. Muchas veces es conveniente transformar la ecuacin de Michaelis-Menten, en otra que
representada grficamente resulta en una recta, ecuacin que viene dada por:

1 = K
M
. 1 + 1
v
o
V
mx
[S] V
mx



La representacin de 1/V
mx
. frente a 1/[S] es conocida como representacin Lineweaver-Burk.
a. A que corresponden los puntos de corte de la recta con los ejes?
b. Cmo calcula K
M
y V
mx
a partir de la grfica de este tipo?

INHIBICIN

Las constantes cinticas (V
mx
y K
M
) de una enzima para su sustrato pueden variar en presencia
de otros compuestos, los inhibidores.
10. La siguiente reaccin es catalizada por la succinato deshidrogenasa, una oxido-reductasa:

COOH FAD FADH
2
COOH

CH
2
CH

CH
2
FAD FADH
2
CH

COOH HOOC

a. En la figura siguiente, la curva 2 representa la velocidad de la enzima de la reaccin anterior
en presencia de su sustrato y la curva 1 cuando adems del sustrato, est el oxalacetato.
Indique el K
M
en cada caso y plantee cmo actu el oxalacetato.

S1
S2
vo
[S]


b. La presencia de cido malnico tiene, sobre la actividad de la enzima, una accin similar al
oxalactico (curva 1), sin embargo la presencia de palmtico o tirosina no tienen efecto sobre la
actividad de la enzima. Las frmulas de los compuestos se presentan abajo, en funcin de
estos datos explique los resultados.

OH COOH COOH COOH

(CH
2
)
14
C=O CH
2


CH
3
CH
2
COOH
CH
2

COOH
H
2
NCH

COOH

tirosina palmtico oxalactico malnico



c. A partir de las constantes cinticas de la succinato deshidrogenasa en presencia de
oxalactico, identifique el tipo de inhibicin que produce.

11. Se observ que una enzima que cataliza la transferencia de un grupo fosfato a otro
compuesto es inhibida por el ATP. En la tabla se presentan los valores de [S] y v
o
de la reaccin
en ausencia (A) y en presencia (B) de ATP.



a. Calcule el valor de K
M
en cada caso a partir de la representacin grfica adecuada.
b. Indique el tipo de inhibicin que produce el ATP en la enzima.
c. Defina inhibicin competitiva y no competitiva y, a partir de su definicin, identifique el tipo de
inhibicin planteado en el problema.


ALOSTERISMO


12. El siguiente es un ejemplo de regulacin de una va metablica donde:
E
1
, E
2
, E
3
, E
4
y E
5
son enzimas que catalizan las reacciones individuales de la va y A, B, C y D
son los compuestos intermediarios. E
1
es una enzima reguladora de la va.

Observe que A es el producto de la reaccin catalizada por E
1
y el sustrato de la reaccin
catalizada por E
2
, y as sucesivamente.



COO
-
COO
-

+ +
H
3
N C H E
1
A E
2
B E
3
C E
4
D E
5
H
3
N C H

H C OH treonina H C OH
deshidratasa
CH
3
CH
2

L-treonina
CH
3

L- isoleucina





a. La L-isoleucina regula negativamente la actividad de la treonina deshidratasa, primer enzima
de la va. Segn esta caracterstica, qu tipo de enzima es la treonina deshidratasa?

b Qu entiende por modulador positivo y negativo?

c. Haga una representacin grfica de la actividad de la treonina deshidratasa (v
o
con respecto
a [S]) en ausencia y presencia de isoleucina?

d. Cul es entonces el efecto de la L-isoleucina sobre la L-treonina deshidratasa?

Modificaciones covalentes

13. a. Qu entiende por zimgenos y qu importancia tienen?
b. Explique el proceso representado en la figura



13. a. En la figura que aparece a continuacin se representa la activacin e inactivacin de una
enzima por modificacin covalente. A partir de la figura explique este proceso.

b. Por qu a los procesos de activacin de estas molculas se les denomina modificacin
covalente?

14. Con respecto a las siguientes afirmaciones explique si son verdaderas o falsas:
a. En la inhibicin competitiva el inhibidor se une al sitio alostrico de la enzima.
b. La especificidad est determinada por el sitio activo.
c. Los inhibidores competitivos pueden ser desplazados cuando se aumenta la concentracin
de sustrato.