AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE

I. INTRODUCCION

En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como poblaciones
mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos, necesitamos tenerlos como
cultivos puros.
Un cultivo puro es aquel en el que todos los microorganismos provienen de una sola clula.
La obtencin de un cultivo puro, a partir de una poblacin mixta, se lleva a cabo en dos etapas:
1. La muestra debe diseminarse de manera tal que los diferentes microorganismos queden lo
suficientemente separados sobre la superficie de un medio de cultivo slido, de manera
que luego de la incubacin ellos formen colonias visibles aisladas. Este proceso se cmo
como aislamiento. En esta placa tendremos diferentes tipos de colonias correspondientes
a los diferentes microorganismos presentes en la poblacin original.
2. Luego de tener las colonias aisladas, estn deben transferirse con el filamento a un que
contenga agar nutritivo estril para cultivar esa colonia aislada; este proceso se conoce
como trasplante.
Para garantizar la pureza del cultivo, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia aislada.
Se considera que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este proceso, todas las
colonias presenten las mismas caractersticas
El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento depender, entro otros factores, de los
requerimientos nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la presencia de
microorganismos que, por sus caractersticas y/o por la cantidad en que se encuentren en la
muestra, dificulten la obtencin de los microorganismos objeto del aislamiento. Este ltimo caso,
se deben utilizar medio de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de
grmenes contaminantes.
Basndose en el origen y naturaleza de la muestra se pueden inferir los posibles microorganismos
que se encuentren presentes en la misma y ese conocimiento ayudara en la seleccin del medio y
las condiciones del cultivo adecuado.









II. OBJETIVO

2.1 OBJETIVOS GENERAL

Evaluacin de microorganismos

2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Evaluar cualitativamente los microorganismos que se encuentran en el medio
ambiente
Preparar los medios de cultivo para el desarrollo de los microorganismos




III. MARCO TEORICO

3.1 Medio de cultivo:

El medio de cultivo se emplea para tres fines principales:

Desarrollar y conservar cultivos
Estudiar la accin de los microorganismos sobre alguna sustancia del medio
Facilitar la produccin por los microorganismos en algn producto determinado o
combinacin de productos.

Los medios de cultivo varan en complejidad, la cual va desde los tejidos hasta las simples
mezclas de sales orgnicas. Muchos microorganismos requieren solo los medios de
cultivo orgnicos, otros necesitan medios especiales para su desarrollo o para ayudar a la
identificacin cuando las caractersticas del cultivo y las reaccin es especificas son los
factores determinantes

El medio de cultivo debe estar exento de sustancias que puedan inhibir el desarrollo de
los microorganismos que han de cultivarse.



3.2 Esterilizacin:

El autoclave es un instrumento para hervir el agua bajo presin y poder esterilizar desde
materiales de vidrio y los medios de cultivo, es decir liminar todo los microorganismos
presentes.

Para el manejo de la autoclave se debe de tener en cuenta lo siguiente:

Comprobar el nivel de agua y la carga
Cerrar hermticamente la tapa.
Abrir la vlvula de vapor y encender
Una vez que salga el vapor por la vlvula, esperar al menos cinco minutos para
expulsar todo el aire y cerrar la vlvula
Esperar que el manmetro descienda a cero y abrir entonces la llave de vapor.
Esperar unos 5 minutos y abrir la tapa, y despus de unos minutos quitar la carga.

3.3 Materiales:

Placas Petri

La placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una cubierta de la
misma forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se pueda colocar
encima y cerrar el recipiente, aunque no de forma hermtica. Es parte de la coleccin
conocida como material de vidrio. Tiene usos en microbiologa.

Matraz Erlenmeyer

Se utiliza para el armado de aparatos de destilacin o para hacer reaccionar sustancias
que necesitan un largo calentamiento. Tambin sirve para contener lquidos que deben
ser conservados durante mucho tiempo.

Bagueta

Varilla de Vidrio utilizada para agitar soluciones o lquidos, con el fin de homogenizar



Probeta

La probeta es un instrumento volumtrico que consiste en un cilindro graduado de vidrio
que permite contener lquidos y sirve para medir volmenes de forma aproximada.

Cocina elctrica

Una cocina elctrica es una variacin de la cocina que convierte
la electricidad en calor

Papel aluminio

El papel aluminio es una hoja fina de aluminio que, a consecuencia de ello, es
extremadamente maleable y permite numerosos usos en la vida cotidiana, entre las que
est la de poder hacer de envoltorio de diversos objetos conductores de electricidad y se
utiliza tambin como papel de embalaje para envolver alimento.

Agua destilada

El agua destilada es aquella sustancia cuya composicin se basa en la unidad
de molculas de H2O. Es aquella a la que se le han eliminado los iones e impurezas
mediante destilacin. La destilacin es un mtodo en desuso para la produccin de agua
pura a nivel industrial. Esta consiste en separar los componentes lquidos de una mezcla.

Agar plate count

Plate Count Agar (PCA), tambin llamado mtodos estndar de agar (SMA), es un medio
de crecimiento microbiolgico comnmente utilizado para evaluar o para monitorizar
"total" o el crecimiento de bacterias viables de una muestra. PCA no es un medio
selectivo.
La composicin del agar para recuento en placa puede variar, pero por lo general
contiene (w / v): [1]

0,5% de peptona
Extracto de levadura 0,25%
0,1% de glucosa
1,5% de agar
pH ajustado a neutro a 25 C

IV. MATERIALES Y METODOS

4.1 Materiales:

Placas Petri
Matraz Erlenmeyer
Bagueta
Probeta
Cocina elctrica
Papel aluminio
Agua destilada
Agar plate count
Papel Kraf

4.2 Mtodos

Desarrollar la prctica teniendo en cuenta el siguiente procedimiento:

a) Preparacin del medio de cultivo

En un matraz disolver el agar en polvo con agua destilada, luego llevar al fuego
para su completa disolucin. Tapar la boca del Erlenmeyer con cierta cantidad de
algodn.

b) Esterilizar el medio de cultivo y las placas Petri

c) Plaquear y fijar un lugar determinado del ambiente que se quiera analizar, dejando
al descubierto las placas Petri por un espacio de 5 a 10 minutos. cumplido el
tiempo necesario, anotar el lugar, fecha y nombre del estudiante, luego incubar a
una temperatura de 25 a 30"C, por un espacio de 4 a 5 das.

d) Observar el desarrollo de colonias y determinar:

Numero de colonias
Frecuencias de tipos de colonias
Caractersticas particulares: color, aspecto general, etc.



V. PROCEDIMIENTO

Preparacin de Cultivo Agar

a) Preparar la muestra de 15 ml por placa Petri.


b) Tenemos una relacin que por cada 60 g de agar se diluye en 940 ml de agua
destilada.

60 g. 940 ml
X 150 ml

X= 9.47 g agar
c) En un matraz con 150 ml de agua destilada se vierte 9.47 g de agar para as obtener
nuestro cultivo.
d) El cultivo disuelto se lleva a la cocinilla durante 10 min para terminar de disolverse.
e) Se esterilizolas placas Petri y la solucion de agar a una presin de 2.5 Kpa con una
Temperatura de 10 C
f) Esperar que enfrie la solucin.
g) Vertir 15 ml del cultivo agar en las placas Petri
h) Recoger la muestra: abrir la placa Petri y dejar 5 min al medio ambiente, luego ponerla
a 30 C en la estufa para su incubacin.
i) Luego de 24 h. se observ la formacin de la colonia microbiana.
j) Luego de 48 h. se aprecia en su totalidad la formacin de colonia microbiana.

Nombre del local Kiosco Nuevo
Fecha 13 05 14
Hora 8: 25 am
responsable Mamani Nina, Elvis
Quispe Gomez, Fiorella

VI. RESULTADOS

En el conteo de la poblacin microbiana se identific a 14 = 0.14x10^2
Radio = 4.5 cm

VII. CONCLUSIONES

La formacin de colonias microbiana son distintas de acuerdo al lugar de la toma
de muestra.


VIII. CUESTIONARIO

1. Definir y dar ejemplos de:

a) Bacterias mesfilas.

Microorganismos cuya temperatura ptima de crecimiento se encuentra dentro de
un rango de 25 40 C, dentro de este grupo se encuentran la mayora de los
microorganismos contaminantes de los productores farmacuticos, alimentos y
cosmticos y los microorganismos patgenos para el hombre
EJEMPLO: Neisseria gonorrhoeae

b) Bacterias termfilas.

Microorganismos cuya temperatura optima es de 50 60 C, hay algunos con
temperaturas optimas an ms altas 80 121 C a estos se los denomina
hipertermofilos o termfilos extremos.

EJEMPLO: Thermus aquaticus (temperatura optima 72 C, crece entre 50 80 C)

c) Bacterias Psicrofilas.

Microorganismos capaces de crecer a bajas temperatura. Existen varias
definiciones de psicrofilas, en un inicio se defina como psicrofilo a cualquier
microorganismo que poda crecer a 0 C. Sin embargo, parecen haber dos grupos
diferentes que pueden crecer a esta temperatura. El primer grupo est constituido
por los psicrofilos estrictos o aquellos microorganismos que pueden crecer a 0 C
pero cuya temperatura optima es de 15 C. el otro grupo los constituyen aquellos
microorganismos que pueden proliferar a 0 C pero que tienen temperaturas
optimas mas elevadas 20 30 C llamados psicrofilos facultitativos.
EJEMPLO: Pseudomonas





RANGOS DE TEMPERATURA PARA EL CRECIEMINTO DE LOS MICROORGANISMOS

GRUPOS MINIMO (C) OPTIMO (C) MAXIMO (C)
Bacterias Mesofilas 5 - 15 30 - 40 40 - 47
Bacterias Termofilas 40 - 45 55 - 75 60 - 90
Bacterias Psicrofilos -5 - 5 12 - 15 15 - 20



2. lndicar las diferencias entre mohos y hongos. Ponga ejemplos

2.1 Los Mohos

Los mohos son parte del grupo de los hongos, representan un gran campo de estudio
para la microbiologa, sobre todo por su aplicacin en los procesos productivos, as como
en la vida cotidiana. Los hongos, son hetertrofos, a diferencia de las plantas, estos, se
alimentan de materia orgnica muerta o de huspedes vivos, cuando interactan como
parsitos.

Los mohos tienen la capacidad de adaptarse a condiciones del entorno que no todos los
microorganismos son capaces de tolerar, como un nivel de acidez o basicidad en un
rango mayor que las bacterias. Debido a que viven desde 2 hasta un valor de 9 de pH. Su
pH ptimo es aproximadamente 5.6, valor que no todas las especies bacterianas
soportan. Esta propiedad se utiliza para aislar cultivos de bacterias de cultivos de mohos,
debido a que si se realiza un cultivo de mohos y bacterias, usualmente las bacterias
crecen y se reproducen a un ritmo mucho mayor que los mohos, por lo tanto, suelen
cultivarse a pH bajos, para inhibir el crecimiento bacteriano y debido a que los mohos
soportan un pH menor, se pueden analizar con mayor facilidad. Adems se suele aadir
cierta concentracin de azcares, puesto que la mayora de bacterias son intolerantes a
ellas.



2.2 LOS HONGOS


Los hongos se reproducen sobre todo por medio de esporas, las cuales se dispersan en
un estado latente, que se interrumpe slo cuando se hallan condiciones favorables para
su germinacin. Cuando estas condiciones se dan, la espora germina, surgiendo de ella
una primera hifa, por cuya extensin y ramificacin se va constituyendo un micelio. La
velocidad de crecimiento de las hifas de un hongo es verdaderamente espectacular: en un
hongo tropical llega hasta los 5 mm por minuto. Se puede decir, sin exagerar, que algunos
hongos se pueden ver crecer bajo los propios ojos.
Las esporas de los hongos se producen en esporangios, ya sea asexualmente o como
resultado de un proceso de reproduccin sexual. En este ltimo caso la produccin de
esporas es precedida por la meiosis de las clulas, de la cual se originan las esporas
mismas. Las esporas producidas a continuacin de la meiosis se denominan meiosporas.
Como la misma especie del hongo es capaz de reproducirse tanto asexual como
sexualmente, las meiosporas tienen una capacidad de resistencia que les permite
sobrevivir en las condiciones ms adversas, mientras que las esporas producidas
asexualmente cumplen sobre todo con el objetivo de propagar el hongo con la mxima
rapidez y con la mayor extensin posible.
El micelio vegetativo de los hongos, o sea el que no cumple con las funciones
reproductivas, tiene un aspecto muy simple, porque no es ms que un conjunto de hifas
dispuestas sin orden. La fantasa creativa de los hongos se manifiesta slo en la
construccin de cuerpos fructferos, los cuales, como indica el nombre, sirven para portar
los esporangios que producen las esporas.




Dibujar las diferentes estructuras bacterianas



BACTERIA MESOFILA



BACTERIA TERMOFILA

















IX. BIBLIOGRAFIA

Maria A. R. Control Microbiologico Lima Peru.

Collins C. H.- Metodos Microbiologicos

Seeley, H.W.I, Jr and P.J. Van Demark. 1972. Microbes in action. W.H. Freeman
and Company

Benson H. J. 1979. Microbiological Application. A Laboratory Manual in General
Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company Publishers. Dubuque, Iowa

Madigan M.T, Martingo J. M. y Jack Parker. 2004. Dcima Edicin. Brock Biologa
de los Microorganismos Prentice Hall

Tortora, Funke and Case. Introduccin a la Microbiologa. 9na Edicin 2007.
Editorial Mdica Panamericana


BACTERIA PSICROFILA

X. ANEXOS N 1


FIGURA 1 : Rangos de Temperatura para el crecimiento microbiano