Este documento describe la superóxido dismutasa (SOD), una enzima antioxidante que cataliza la conversión del radical superóxido en oxígeno y peróxido de hidrógeno. Explica que existen tres isoformas de SOD en humanos que difieren en su localización celular y metal cofactor. Además, detalla la estructura, sustratos, productos, mecanismo de acción y función biológica de proteger a las células de los efectos tóxicos del superóxido.
Este documento describe la superóxido dismutasa (SOD), una enzima antioxidante que cataliza la conversión del radical superóxido en oxígeno y peróxido de hidrógeno. Explica que existen tres isoformas de SOD en humanos que difieren en su localización celular y metal cofactor. Además, detalla la estructura, sustratos, productos, mecanismo de acción y función biológica de proteger a las células de los efectos tóxicos del superóxido.
Este documento describe la superóxido dismutasa (SOD), una enzima antioxidante que cataliza la conversión del radical superóxido en oxígeno y peróxido de hidrógeno. Explica que existen tres isoformas de SOD en humanos que difieren en su localización celular y metal cofactor. Además, detalla la estructura, sustratos, productos, mecanismo de acción y función biológica de proteger a las células de los efectos tóxicos del superóxido.
Enzimologa e interacciones moleculares Segundo de Bioqumica UNIVERSIDAD DE LAS ISLAS BALEARES SUPERXIDO DISMUTASA NDICE
1. Introduccin 2. Caractersticas Reaccin que cataliza Estructura Sustratos, productos, cofactores e inhibidores Localizacin celular Mecanismo de accin 3. Funcin Biolgica
1. INTRODUCCIN
La Superxido dismutasas (SODs), es un antioxidante endgeno que fue descubierta por McCords y Fridovich en 1969, consiguieron aislarla mediante el aislamiento de los eritrocitos. Su nmero EC es 1.15.1.1, lo cual nos indica que pertenece a la familia de las oxidoreductasas, es decir, que realiza una reaccin general de oxido- reduccin. A grandes rasgos podemos decir que cataliza la reaccin de disimulacin del radical superxido en oxgeno molecular y perxido de hidrgeno, Esto convierte la convierte en un sistema de defensa antioxidante muy importante en la mayora de clulas expuestas a oxgeno. Son un grupo de metaloenzimas presentes frecuentemente en organismos aerbicos, aerotolerantes y algunos anaerobios obligados. Esta enzima es esencial para su defensa contra la toxicidad que producen los metabolitos parcialmente reducidos, que se generan durante la reduccin biolgica normal del oxgeno molecular. Su funcin consiste en eliminar el radical superxido antes de que ste reaccione con molculas biolgicas susceptibles u origine otros agentes txicos, ya que es muy reactivo.
2. CARACTERSTICAS
Reaccin que cataliza
La reaccin que cataliza es la misma para todas los 0rganismos: Es una de las enzimas ms rpida que se conocen (K= 2 x x109 M-1S-1 para la CuZn-SOD). Por ello la SOD se encuentra en las vas de sntesis de etileno y en las de degradacin de radicales libres.
Estructura La estrucutura de la enzima depende bastante del organismo al cual pertenezca, nos centraremos en los tres tipos de SODs que se pueden encontrar en los seres humanos: SOD1, SOD2 y SOD3. La primera es un dmero y las otras dos son dmeros. Adems se sabe que SOD1 y SOD3 contienen cobre y zinc en su centro activo mientras que SOD2 contiene manganeso. Las 3 formas de SODs se diferencian segn s el metal que tienen en su centro activo. Estas a su vez pueden dividirse en 2 familias filogenticas diferentes: CuZn-SODs y Fe/Mn-SODs.
Entre ellas no existe homologa de secuencias ni de estructuras de orden superior, lo que indica que evolucionaron independientemente en respuesta a una presin evolutiva comn: la presencia del oxgeno y la amenaza de su toxicidad.
Sustratos, productos, cofactores e inhibidores El sustrato de la reaccin es siempre el mismo, superxido y protones, y el producto tambin es el mismo para todas las reacciones, oxigeno y perxido de hidrgeno. Por otro lado los cofactores que utiliza este enzima son iones metlicos (Cu 2+ , Mn 2+ , Zn 2+ y Fe 3+ ). Esta enzima en humanos tiene diversos inhibidores como pueden ser el 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoate), CN - , perxido de hidrgeno, N3-, peroxinitrito, etc.
Localizacin celular En eucariotas existen 3 tipos de SODs como ya hemos dicho, se trata de tres isoenzimas diferentes que dependen del metal que contengan en su centro activo y cuya localizacin es diferente dependiendo de la isoenzima de la que se trate. En su conjunto contribuyen a la regulacin de las concentraciones del radical superxido. Las tres isoenzimas son: Mn-SOD mitocondrial, CuZn-SOD citoslica y CuZn-SOD extracelular y Fe-SOD. En estudios realizados en hepatocitos de rata se encontr que el 20 % de los radicales superxido formados en la mitocondria pueden pasar al citosol, mientras el 80 % restante puede ser neutralizado por la enzima mitocondrial.
Mecanismo de accin El anin superxido como ya hemos dicho es una especie muy txica y reactiva, que se genera como intermediario o como producto de la incompleta descomposicin del oxgeno en la transformacin del oxgeno a agua. El mecanismo de toxicidad aceptado actualmente se conoce como la Reaccin de Haber-Weiss.
- En la primera etapa el superxido interacta con un metal, por el Cu(II) o Fe(III), que se encuentra disponible en la clula, dando como resultado la respectiva especie reducida. - En la segunda etapa una molcula de agua oxigenada es reducida por ese catin, produciendo un ion y un radical oxhidrilo. Este radical, deficiente en electrones, es un potente e indiscriminante oxidante y un iniciador de reacciones por radicales libres. En algunas bacterias esta actividad SOD est asociada a un centro que contiene hierro y en algunos otros organismos contiene manganeso.
La SOD de Cu/Zn se conoce desde 1938, pero fue en 1970 cuando por fin qued claramente establecida la presencia de zinc en la misma y la reaccin global catalizada, que es la siguiente:
El agua oxigenada que se genera como resultado de la reaccin es descompuesta por la catalasa y de esta manera ambas enzimas (SOD y catalasa), trabajando en equipo, protegen a las clulas de los subproductos txicos, generados en la produccin de oxgeno. La SOD mejor estudiada es la extrada de eritrocitos de bovinos, es una enzima de peso molecular no muy elevado (32 kDa) y est constituidas por dos subunidades cada una de las cuales contiene un tomo de cobre y uno de zinc. Ambos centros metlicos estn unidos por un puente de imidazol deprotonado. Las esferas de coordinacin, tetracoordinadas, se completan con otros tres nitrgenos imidazolnicos en el caso del cobre, mientras que el zinc las completa con dos nitrgenos del mismo tipo, y un oxgeno, proveniente de un residuo de cido asprtico.
Sitio activo de la Cu, Zn-SOD. En H63 se puede apreciar el puente imidazol. (Miller, 2004)
La esfera de coordinacin del zinc es un tetraedro bastante regular mientras que, como se ve en la figura de arriba, la del cobre es ms irregular, lo que seguramente aumenta la reactividad de este sitio.
Hay numerosas evidencias que sugieren, con toda claridad, que el cobre es realmente el sitio activo donde ocurre la dismutacin. Con lo que llegamos a la conclucion de que el zinc debe desempear un papel meramente estructural, ayudando a generar condiciones geomtricas optimas que faciliten la reaccin. La reaccin puede describirse, formalmente, as:
Desde el punto de vista qumico, es muy interesante el hecho de que los dos iones metlicos estn unidos por un puente imidazolato, por otra parte esta no es una configuracin usual para complejos de imidazol, los que habitualmente se presentan en forma de complejos polimricos, unidos por un puente de imidazolato: -M-N-im-N-M-N-im-N-M-N-im-N-M-
Durante la reaccin, que es muy rpida, se supone que el anin superxido llega al centro activo a travs de un mecanismo de gua electrosttica. Es decir, existen una serie de residuos de aminocidos cargados positivamente, cercanos al centro activo activo y que van guiando al anin, hacia este sitio (figura 1). - La Arg143 se asocia con el ion superxido desplazando a una molcula de agua. El superxido se une directamente a Cu (II) y transfiere su electrn hacia la esfera interior. El puente Cu-His63 se rompe. - El dioxgeno se difunde fuera del canal del centro activo y se sustituye por una molcula de agua proveniente de los puentes de hidrgeno. - En la segunda mitad del ciclo de la reaccin, otro ion superxido entra en el canal del centro activo, desplaza una molcula de agua y al enlace de hidrgeno con Arg143. Como el electrn se acepta del Cu(I), a travs de una transferencia de electrones de esfera externa, el superxido acepta simultneamente un protn de una molcula de agua. - Posteriormente, el Cu(II) , restablece el puente con His63 desprotonada. El perxido de hidrgeno elctricamente neutro se difunde fuera del canal del centro activo, para ser reemplazado por una molcula de agua. No hay cambios significativos en la protena en el ciclo cataltico (Miller, 2004).
Figura 1. Mecanismo de accin de la Cu, Zn-SOD. (Miller, 2004)
Eso explica tambin porque ciertos aniones de cargas elevadas, como el ortofosfato o los vanadatos, inhiben fuertemente a la enzima, bloqueando de alguna maenra el transporte de sustrato. Algunos otros, ligandos pequeos tales como el fluoruro o el cianuro, son tambin capaces de inhibir el sistema, aunque en este caso probablemente actan bloqueando directamente el sitio activo.
Algunos estudios espectroscpicos realizados con esta enzima, han revelado informacin sobre las caractersticas del sitio bimetlico. En particular, una gran cantidad de trabajos se han realizado utilizando la espectroscopaelectrnica, estudiando a la enzima sustituida en uno, o en los dos, de sus sitios metlicos, por otros cationes. Algunos resultados se resumen a continuacin, agrupados por sistemas:
a) Sistemas I. Cu 2 M 2 -SOD, donde M puede ser Zn, Co, Cd o Hg. b) Sistemas II. Cu 2 E 2 -SOD, donde E significa sitio vaco. c) Sistema III. Ag 2 Cu 2 -SOD. d) Sistema IV. Cu 2 Cu 2 -SOD.
3. FUNCIN BIOLGICA
Como ya hemos dicho se conocen 3 formas de SODs segn el metal que tienen en su centro activo, que a su vez pueden dividirse en 2 familias filogenticas diferentes: CuZn-SODs y Fe/Mn-SODs. Entre ellas no existe homologa de secuencias ni de estructuras de orden superior, lo que indica que evolucionaron independientemente en respuesta a una presin evolutiva comn: la presencia del oxgeno y la amenaza de su toxicidad. Como las concentraciones fisiolgicas de radical superxido son normalmente bajas, la reaccin depende de su difusin. Sin embargo, la asociacin de la enzima con su sustrato no es una simple cuestin de difusin y colisin. La estructura submolecular de la enzima, la distribucin de carga electrosttica, interacciones de apantallamiento por solventes inter e intramoleculares, y las interacciones hidrodinmicas, pueden afectar tanto a la difusin del radical superxido como a su asociacin con la enzima. Se ha encontrado que el campo elctrico de la SOD favorece 30 veces la velocidad de asociacin del anin. Los estudios con mutantes deficientes de la SOD evidencian que la enzima, dentro de este sistema de defensa, tiene una funcin fundamental. El perxido de hidrgeno generado por la accin de la enzima, es eliminado por la catalasa y/o la glutatin peroxidasa. El gen que codifica a esta enzima, se encuentra ubicado en el cromosoma 21 y ms especficamente en el segmento extra (21q22) que aparece en el sndrome de Down, de ah que los niveles de SOD se encuentren elevados en la generalidad de estos casos. El interes bioqumico y biolgico en eliminar los radicales libre como el ion superxido parte del hecho de que los mismos pueden ocasionar daos celulares a diferentes niveles como por ejemplo: Atacan a los lpidos y protenas de la membrana celular por lo que la clula no puede realizar sus funciones vitales (transporte de nutrientes, eliminacin de deshechos, divisin celular...). Atacan al DNA impidiendo que tenga lugar la replicacin celular y contribuyendo al envejecimiento celular. Estrs oxidativo: se da cuando los radicales libres oxidan muchas estructuras biolgicas dandolas, se produce cuando hay un desequilibrio en el cual la produccin de radicales libres es mayor que su eliminacio. Las principales consecuencias del estrs oxidativo son:
Envejecimiento: cuando toman el electrn que les hace falta de las clulas del tejido colgeno de la piel, dando como consecuencia, que la piel pierda su elasticidad al daarse las fibras elsticas y la aparicin precoz de arrugas y sequedad. Cncer: Pueden contribuir al crecimiento anormal de las clulas, al perder stas la capacidad de reconocer las clulas vecinas. Esa proliferacin sin control se produce en los tumores benignos o malignos. Ateroesclerosis: Peroxidacin de lpidos en las partculas de LDL con dao de otros componentes. Cataratas: Modificaciones irreversibles en las protenas. Cuadros Inflamatorios Crnicos: Activacin de genes relacionados con la respuesta inflamatoria.