196 LABORATORIO DE ANATOMI A P ATOLOGICA

1. I N T R O D U C C I O N G E N E R A L
En histotecnolog a se denomi na impregnacin a toda coloracin especial en
la que se utilizan sales metlicas (cloruro de oro, nitrato de plata, sales de
cromo, etc.) para originar precipitados metlicos en las estructuras que van a ser
teidas. El objetivo de la impregnacin argntica es precipitar plata metlica a
partir de sus sales para conseguir que se deposite sobre los tejidos.
La sal argntica ms utilizada es el nitrato de plata, que tiene la propiedad de
ser muy soluble en agua. C omo la i mpr egn ac i n ar gn ti ca s e f un damen t a
en la r educ c i n del ni trato de pl ata has ta obten er pl ata metl i ca y la
fotograf a en blanco y negro se basa en hechos similares, creemos que una breve
exposicin de los principios bsicos de sta puede servir como aproximacin
inicial a la impregnacin argntica.
En general, los rollos de pel cula fotogrfica van impregnados por una de sus
caras de una sal inestable de plata, el bromuro argntico, muy sensible a la luz y
que por accin de sta es precipitada de forma parcial a plata metlica constitu-
yendo la denomi nada imagen latente.
A l aadir luego un agente reductor potente, como el pirogalol o la hidroqui-
nona, la sal no precipitada libera gran cantidad de part culas de plata que se
asocian a las liberadas anteriormente, que actan como ncleos de precipita-
cin. Este proceso se denomi na revelado de la imagen latente.
Finalmente se emplean sales sdicas como el tiosulfato, que al retirar la plata
no reducida mediante la formacin de un ion argntico complejo, a travs del
proceso denomi nado fijacin, estabiliza la imagen revelada impidiendo la for-
macin ulterior de nuevas imgenes.
El proceso de impregnacin argntica que se explica a continuacin se basa
en mecani smos semejantes a los descritos, aunque en l la accin de la luz no
suele ser determinante en el proceso, salvo casos aislados.
2. F O R M A S DE I M P R E G N A C I O N A R G E N T I C A
Existen dos tipos de impregnacin argntica:
1. I mpr egn ac i n ar gn ti ca por me c a n i s mo s pr edomi n an t emen t e
f s i cos y f s i co- qu mi cos .
2. I mpr egn ac i n ar gn ti ca por me c a n i s mo s hi s toqu mi cos .
2. 1. I mpr egn ac i n ar gn ti ca por me c a n i s mo s pr edomi n an t emen t e
f s i cos y f s i c o- qu mi c os
En ella slo se producen f en men os de ti po f s i co y f s i c o- qu mi c o, y
no r eac c i on es qu mi cas c on c r etas entre l os tej i dos y la s al de pl ata
uti l i z ada. S e produce, por tanto, la coloracin de las estructuras'por un meca-
nismo puro de impregnacin en el que determinadas estructuras histolgicas
electronegativas atraen, por un mecani smo electrosttico, a los iones de plata
cargados positivamente (A g~) que existen en la solucin de impregnacin.
P osteriormente estos iones se hacen precipitar como plata metlica sobre las
196 LABORATORIO DE ANATOMI A PATOLO
1. I N T R O D U C C I O N G E N E R A L
En histotecnolog a se denomi na impregnacin a toda coloracin especial =r
la que se utilizan sales metlicas (cloruro de oro, nitrato de plata, sales m
cromo, etc.) para originar precipitados metlicos en las estructuras que van a so
teidas. El objetivo de la impregnacin argntica es precipitar plata metlico i
partir de sus sales para conseguir que se deposite sobre los tejidos.
La sal argntica ms utilizada es el nitrato de plata, que tiene la propiedad di
ser muy soluble en agua. C omo la i mpr egn ac i n ar gn ti ca se f undamenta
en la r educ c i n del ni trato de pl ata has ta obten er pl ata metl i ca
fotograf a en blanco y negro se basa en hechos similares, creemos que una brewi
exposicin de los principios bsicos de sta puede servir como aproximac DT
inicial a la impregnacin argntica.
En general, los rollos de pel cula fotogrfica van impregnados por una de S J E
caras de una sal inestable de plata, el bromuro argntico, muy sensible a la luz
que por accin de sta es precipitada de forma parcial a plata metlica constru-
yendo la denomi nada imagen latente.
A l aadir luego un agente reductor potente, como el pirogalol o la hidroc.
nona, la sal no precipitada libera gran cantidad de part culas de plata que m
asocian a las liberadas anteriormente, que actan como ncleos de precipit-
cin. Este proceso se denomi na revelado de la imagen latente.
Finalmente se emplean sales sdicas como el tiosulfato, que al retirar la plaa
no reducida mediante la formacin de un ion argntico complejo, a travs OB
proceso denomi nado fijacin, estabiliza la imagen revelada impidiendo la f or -
macin ulterior de nuevas imgenes.
El proceso de impregnacin argntica que se explica a continuacin se baa
en mecani smos semejantes a los descritos, aunque en l la accin de la luz m
suele ser determinante en el proceso, salvo casos aislados.
2. F O R M A S DE I M P R E G N A C I O N A R G E N T I C A
Existen dos tipos de impregnacin argntica:
1. I mpr egn ac i n ar gn ti ca por me c a n i s mo s pr edomi n an temer r a
f s i cos y f s i co- qu mi cos .
2. I mpr egn ac i n ar gn ti ca por me c a n i s mo s hi s toqu mi c os .
2. 1. I mpr egn ac i n ar gn ti ca por me c a n i s mo s pr edomi n an temen te
f s i cos y f s i c o- qu mi c os
En ella slo se producen f en men os de ti po f s i co y f s i co- qu mi cc
no r eac c i on es qu mi cas c on c r etas entre l os tej i dos y la s al de platz
uti l i z ada. S e produce, por tanto, la coloracin de las estructuras'por un meca-
nismo puro de impregnacin en el que determinadas estructuras histolgica!
electronegativas atraen, por un mecani smo electrosttico, a los iones de pi sa
cargados positivamente (A g
+
) que existen en la solucin de impregnacior.
P osteriormente estos iones se hacen precipitar como plata metlica sobre &
LA IMP REGNACION ARGENTICA 197
estructuras h sticas mediante reduccin externa. Esta propiedad de ios tejidos de
atrapar los iones argnticos existentes en una solucin de impregnacin recibe
el nombre de argi rof i l i a.
En general, la plata metlica en forma de finos precipitados tiene especial
apetencia por depositarse sobre estructuras fibrilares finas y por superficies
celulares dotadas de delgadas prolongaciones tales como clulas de la gl a,
neuronas, fibras reticulares del tejido conjuntivo, etc., que por este motivo
reciben la denomi naci n de argi rf i l as .
Las consecuenci as fundamentales que deben extraerse de lo expuesto son:
a) E l tej i do n o i nter vi ene ac ti vamen te en el me c a n i s mo de l i ber a-
ci n de la pl ata metl i ca a parti r de s u s al s ol ubl e.
b) N o t odos l os tej i dos ti en en i dnti ca apeten c i a por la pl ata; c o -
mo en toda i mpr egn ac i n , tan to la c ar ga el ctri ca c o mo l a tex-
tur a de l as cl ul as por tei r ( r ugos i dad s uper f i c i al , pr es en c i a de
pr ol on gac i on es o vel l os i dades , etc. ) . i n ter vi en en de man er a
dec i s i va.
2.2. I mpr egn ac i n ar gn ti ca por me c a n i s mo s hi s toqu mi c os
S e basa en la actuacin de algn componente del tejido sobre el nitrato de
plata o sus derivados a raz de la cual ocurre la precipitacin de plata metlica a
partir de sus correspondientes iones. P or tanto, el tej i do i ntervi ene ac ti va-
men te en el deps i to de pl ata metl i ca a travs de un a r eacci n qu mi -
c a de r educ c i n .
En general son col oraci ones discriminatorias que permiten separar compo-
nentes de las clulas en funci n de que descompongan o no el nitrato de plata o
sus derivados (vase ms adelante el concepto de argentafinidad).
2.3. I mpr egn ac i n ar gn ti ca no hi s toqu mi c a o por mt odos
pr edomi n an t emen t e f s i cos y f s i c o- qu mi c os
L os aspectos esenciales de este tipo de impregnacin son los siguientes:
1. L a fijacin ha de hacerse fundamentalmente en formol, aunque se puede
utilizar tambin el l quido de B oui n, que adems acta como mordiente.
2. L a impregnacin argntica puede dividirse en:
a) I mpregnacin argntica en dos tiempos.
b) I mpregnacin argntica en un tiempo.
A mbas tienen en comn la reduccin del nitrato de plata a plata metlica: los
mtodos en dos tiempos lo J iacen en varias fases sucesivas, mientras que los
mtodos en un tiempo realizan una reduccin ms severa.
I mpr egn ac i n ar gn ti ca en dos t i e mpo s
Utiliza procedimientos qu micos para obtener plata metlica a partir del nitra-
to de plata mediante varias reacciones sucesivas.
LABORATORIO DE ANATOMIA P ATOLOGICA
En una primera f ase es n eces ar i o tratar el nitrato de plata con bases fuertes
comp hidrxido sdi co . h**awiopotsico, hidrxido amnico, etc., con lo cual
se obtiene xi do de plata que pr eci pi ta en forma de granulaciones parduzcas.
2 A g N 0
3
- 2ttaO H > A g
2
0 + 2 N a N 0
3
+ H
2
0
Medi ante la adicin de amo n ac o a la solucin anterior se obtiene un com-
plejo inico de plata y amo ni o , el denomi nado xido diaminoargntico o plata
amoni acal , soluble en agua aunque muy inestable.
A g
2
0 - 4 N H , o [A g( N H
3
)
2
]
2
0
El xido diamino- argntico se reduce al aadirle formol al 10 por 100, el cual
tiene la capaci dad de captar ox geno hasta precipitar la plata dando como
productos de la reaccin plata metlica, cido frmico y amon aco.
[ A g( N H
3
) J
2
0 * C H O H o 2A g - 4 N H
3
+ H C O O H
Esta plata metlica es la que se deposita sobre el tejido en forma molecular
muy estable.
Las tcnicas de coloracin para fibras de reticulina son el ejemplo ms
caracter stico de esta forma de impregnacin.
I mp r eg n ac i n ar g n t i c a en un t i empo
En ella se suele partir del nitrato de plata ( A gN 0
3
) , aunque en ocasiones se
emplean otras sales argnticas.
Esta impregnacin se fundamenta en la reduccin severa y directa de la sal
de plata a plata metlica a travs de la accin de un agente reductor potente, que
suele ser el pirogalol o la hidroquinona.
A g N 0
3
+ agente reductor potente <s>A g - producto de oxidacin
Es una tcnica ms lenta que la de los dos tiempos, ya que el nitrato de plata
es ms estable que el xido diamino-argntico, a partir del cual se precipita la
plata metlica.
La t c n i c a d e B o d i an par a n eu r o f b r i l l as y l a d e Gr i mel i u s par a
ar g i r o f i l i a son las que emplean ms a menudo la impregnacin argntica en un
tiempo.
3. M A N I O B R A S C O M P L E M E N T A R I A S A R E A L I Z A R U S U A L M E N T E
E N L A I M P R E G N A C I O N A R G E N T I C A
1. La l i mpi eza del mat er i al de vi dri o ha de ser es c r u pu l o s a, ya que
cualquier impureza en l o en el agua destilada utilizada para lavarlo hace
precipitar la plata amoni acal .
P or idnticos motivos no se deben emplear objetos metlicos en la
manipulacin.
LA IMP REGNACION ARGENTICA 199
2. En la mayor parte de las tcnicas es conveniente realizar un mo r d en t aj e
pr evi o c o n al g n f i j ad o r , en particular l quido de B oui n, dicromato
potsico, etc., o con agentes oxidantes como el permanganato potsico.
Ello hace que aparezcan en las estructuras grupos qu micos particulares
que favorecen la coloracin (principalmente grupos aldeh dicos).
C uando se emplea permanganato deben blanquearse los cortes a
continuacin con una solucin de metabisulfito sdico o cido oxlico.
3. Tras la impregnacin argntica suele ser tambin conveniente realizar el
llamado vi r aj e, que se realiza con una disolucin acuosa de cloruro de
oro a partir de la cual se produce el depsito de molculas de oro
metlico sobre los precipitados de plata.
De esta manera, el color pardo negruzco que confiere la plata a los
tejidos se transforma en un color negro azulado intenso. A l mi smo tiem-
po, la disolucin de oro contribuye a retirar los posibles precipitados de
plata que hayan ocurrido anmalamente en el citoplasma y ncleos
celulares.
4. Tras el viraje puede ser conveniente realizar un b l an q u eami en t o con
metabisulfito sdico o cido oxlico.
5. P or ltimo, siempre hay que f i j ar la coloracin con tiosulfato sdico,
que retira la sal de plata no reducida y la metlica que no ha impregnado
las estructuras por colorear.
4. T E C N I C A S P A R A F I B R A S DE R E T I C U L I N A DE L T E J I DO
C O N J U N T I V O ( G O M O R I Y G O R D O N - S W E E T )
4. 1. G en er al i dades
U no de los principales problemas que plantean las tcnicas de impregnacin
argntica es la fijacin del corte al portaobjetos. A l realizarse mltiples lavados y
tratamientos sobre los cortes, es muy frecuente que se desprendan, sobre todo si
son de grosor elevado o si no se utilizan portaobjetos al bumi nados para su
montaje. P or ello, el c o r t e ha de ser l o m s d el g ad o po si b l e y ha de
mo n t ar s e n ec es ar i amen t e en po r t ao b j et o s al b u mi n ad o s o g el at i n ad o s
pr evi amen t e.
4. 2. M t o do de i mpr egn ac i n ar gnti ca de G o mo r i para f i bras
reti cul ares
S e trata de una tcnica de i mpr egn ac i n ar gn ti ca en dos t i empos que
utiliza como base fuerte el hidrxido potsico y como agente reductor el formol.
Antes de la impregnacin se realiza una oxidacin con permanganato potsico
al 1 por 100 seguida de blanqueamiento con metabisulfito potsico al 2 por 100
y un mordentaje con alumbre frrico al 2 por 100.
200
LABORATORIO DE ANATOMI A P ATOLOGICA
PROCE DIMIE NTO TE CNICO
r
Fi j aci n: formalina al 10 por 100.
Co r t es: en parafina, congelacin o en celoidina.
S o l uci o nes:
a) S o l uc i n acuo sa de per manganat o po t si c o al 1 por 100.
b) S o l uc i n acuo sa de met abi sul f i t o po t si c o al 2 por 100.
c) S o l uc i n acuo sa de al umbr e f r r i c o al 2 por 100 preparada antes de
usar.
d) Co mpl ej o de pl ata amoni acal di l ui do , durante tiempo limitado, en un
volumen igual de agua destilada. S e toman 10 mL de una solucin de nitrato
de plata al 10 por 100, se aaden 2 mL de hidrxido potsico al 10 por 100; el
precipitado que se forma se disuelve con amonaco concentrado, despus se
aade nitrato de plata hasta que empiece a formarse de nuevo el precipitado;
diluir con agua a partes iguales.
e) Fo r mo l al 10 por 100.
f) S o l uc i n acuo sa de hi po sul f i t o sdi co al 2 por 100.
Mo d o de oper ar :
1. Desparafinar, no co l o di o nar , hidratar.
2. Oxidar durante 1 a 2 minutos con el permanganato potsico.
3. Lavar con agua corriente.
4. Blanquear con metabisulfito.
5. Lavar con abundante agua corriente.
6. Tratar con una solucin de alumbre frrico durante 1 minuto.
7. Lavar con agua corriente durante 5 minutos.
8. Lavar dos veces con agua destilada.
9. Tratar durante 1 minuto con el complejo argntico.
10. Lavar con agua destilada, como mximo 10 segundos.
11. Reducir con formol.
12. Lavar con agua corriente.
13. P asar rpidamente por la solucin de hiposulfito.
14. Lavar con abundante agua corriente.
15. Deshidratar y montar.
Resul t ados:
Fibras reticulares Negro
Fibras colgenas Amarillento
Obser vaci o nes:
1. En caso de un viraje con el oro, como en el mtodo de Ramn y Cajal, las
fibras colgenas muestran una tonalidad ms purprea.
Hay que resaltar que el r esul t ado pt i mo de este mt o d o depende
del l avado que pr ecede a la r educ c i n por el f o r mo l , debiendo
determinarse empricamente la duracin de este lavado.
LA IMP REGNACION ARGENTICA
201
4. 3. Tc n i c a de i mp r eg n ac i n ar g n t i c a de Go r d o n - S weet
par a f i b r as r et i c u l ar es
S e trata de una impregnacin argntica en dos tiempos que emplea como
base fuerte el hidrxido sdico y como agente reductor el formol. Antes de la
impregnacin se realizan manipulaciones semejantes a la de la tcnica de G o-
mori, sustituyendo el metabisulfito por cido oxlico. Finalmente se realiza un
contrastado suplementario con cloruro de oro al 2 por 100.
PROCE DIMIE NTO TE CNICO
Fi j ador es: varios lquidos fijadores (carnoy, formol, etc.).
S o l uci o nes:
Solucin A: bao argntico de Wilder. S e prepara:
1. Nitrato de plata 1.0 g
Agua destilada 10 mL
2. Hidrxido sdico 0.3 g
Agua destilada 10 mL
S e toman 5 mL de solucin de nitrato de plata; aadir amonaco gota a gota
hasta que el precipitado casi se disuelva.
Se precipita de nuevo la solucin con 5 mL de hidrxido sdico y a continuacin
amonaco gota a gota hasta que la solucin quede clara.
Completar con agua destilada hasta 50 mL.
Solucin B:
Cloruro de oro 0.02 g
Agua destilada 10 mL
Solucin C:
Acido oxlico 0.5 g
Agua destilada 10mL
Solucin D:
Alumbre de hierro 0.2 g
Agua destilada 10mL
Solucin E:
Tiosulfato sdico 0.5 g
Agua destilada 10 mL
Solucin F:
1. P ermanganato potsico 0.5 g
Agua destilada 100 mL
2. A ci do sulfrico al 3 por 100
Mezclar 47.5 mi de la primera con 2.5 mL de
la segunda
Solucin G: formol al 10 por 100, 100 mL.
202
LABORATORIO DE ANATOMIA P ATOLOGICA
Mo d o de oper ar :
Cortes muy bien adhei
calientes.
1. Desparafinar e hidratar.
2. Oxidar con permanganato potsico (solucin F) durante 5 minutos.
3. Lavar con agua destilada.
4. Blanquear con cido oxlico durante 1 minuto.
5. Lavar en tres cambios de agua destilada.
6. Trata con mordiente de alumbre de hierro en solucin acuosa al 2 por 100
durante 30 minutos.
7. Lavar bien en dos cambios de agua destilada.
8. Tratar con el bao argntico de Wilder durante unos segundos.
9. Lavar brevemente y a fondo en agua destilada.
10. Tratar con formol al 10 por 100 durante 10 minutos.
11. Lavar en agua. S i los cortes aparecen poco impregnados, repetir desde el
paso sptimo.
12. Contrastar suplementariamente en cloruro de oro al 2 por 100 durante 5
minutos.
13. Lavar en agua destilada.
14. Fijar en tiosulfato sdico durante 10 minutos.
15. Lavar en agua destilada.
16. Deshidratar, aclarar y montar.
Resul t ados (fig. 11.1):
Fibras reticulares Negro azulado
Resto de estructuras Sin teir
Fi gur a 11.1. Tcnica de reticulina (Gordon-S weet) para visualizar la tra-
ma reticulnica en el ganglio linftico de un enfermo con el sndrome de
inmunodeficiencia adquirida (S I DA).
L~~tMPREGNACION ARGENTICA 203
5. C O N C E P T O S DE A R G E N T A F I N I D A D Y A R G I R O F I L I A
5. 1. A r gen taf ni dad
E s l a pr o pi ed ad q u e t i en en al g u n o s t ej i d o s d e r ed u c i r el n i t r at o de
pl at a amo n i ac al a pl at a met l i c a si n i n t er v en c i n d e ag en t es r ed u c t o -
r es ext er n o s. Esta propiedad es caracter stica de determinadas granulaciones
citoplasmticas presentes en clulas cutneas como los melanocitos, que secre-
tan melanina, y en ciertas clulas de secrecin endocrina presentes en el tubo
digestivo y que reciben el nombre de clulas argentafines, entero-cromafines o
clulas de Kultschitzky. Estas clulas se encuentran sobre todo en las glndulas
pilricas del estmago, criptas de L ieberkun y mucosa del apndice. L a reduc-
cin de la plata amoniacal a plata metlica depende esencialmente del contenido
de sus granulos de secrecin, por lo cual la imagen que aparece tras la impreg-
nacin es una imagen granular citoplasmtica.
El mecani smo preciso que desencadena esta reaccin no se conoce con
exactitud, aunque parece depender de la presencia de 5-hidroxitriptamina (5-
T H) , que es convertida en tetrah dro-4-carbolina por el formol. La tcnica ms
empleada para demostrar esta propiedad es la de Masson- F ontana.
5.2. A r gi r of i l i a
E s, como ya se ha menci onado, l a pr o pi ed ad q u e po seen d et er mi n ad as
est r u c t u r as t i su l ar es d e u n i r se a l o s i o n es d e pl at a d er i vad o s del n i t r a-
t o d e pl at a o pl at a amo n i ac al , de forma que, posteriormente, los iones de
plata atra dos por el tejido son precipitados a plata metlica por accin de un
agente reductor externo como el pirogalol o la hidroquinona. L as tcnicas utili-
zadas para la determinacin de fibras de reticulina pueden considerarse, en
sentido amplio, como tcnicas de argirofilia. S i n embargo, para demostrar argi-
rofilia en granulaciones intracitoplamticas se emplean otros mtodos como el
de Gr i mel i u s o el de S ev i er - Mu n g er .
6. P R E C A U C I O N E S G E N E R A L E S E N L A R E A L I Z A C I O N DE T E C N I C A S
DE A R G E N T A F I N I D A D
a) T odas las aconsejadas para cualquier impregnacin argntica (limpieza
escrupulosa del material, no utilizar instrumentos metlicos, etc.).
b) Fijacin. No deben emplearse l quidos fijadores que contengan al cohol ,
pues las granulaciones argnticas son solubles en l. El fijador de elec-
cin es la f o r mal i n a t ampo n ad a al 10 po r 100. S in embargo, hay que
tener en cuenta que tras esta fijacin los granulos muestran autofluores-
cenci a, lo que puede ser de utilidad para su demostracin tras observa-
cin con mi croscopi o de fluorescencia, filtro excitador S cott U G - 2 y
secci ones incluidas en parafina y montadas en medio de Apathy.
6. 1. T cni ca de M a s s o n - F o n t a n a para ar gen taf i n i dad
S e trata de una i mp r eg n ac i n ar g n t i c a en d o s t i empo s , en la cual el
amon aco realiza la primera reduccin del nitrato de plata a xido diaminoargn-
204 LABORATORIO DE ANATOMIA P ATOLOGICA
tico y el tejido la segunda, precipitndose plata metlica sobre las granulaciones
dotadas de capaci dad reductora.
Es de destacar que la i n c u b ac i n del tejido con la plata amoniacal es
pr o l o n g ad a (24 ho r as) y debe realizarse en la o s c u r i d ad para evitar precipita-
dos a causa de la accin de la luz solar.
L a principal dificultad de la tcnica se encuentra en la preparacin de los
reactivos, ya que hay que l l evar l a s o l u c i n d e pl at a hast a un mo men t o en
q u e es t a pu n t o de pr ec i pi t ar sin que llegue a hacerlo en realidad (solucin
de apariencia nubosa).
PROCE DIMIE NTO TE CNICO
Fi j aci n: formalina al 10 por 100.
S o l uci o nes:
a) S o l uc i n de ni tr ato de pl ata (Fontana):
Disolver:
Nitrato de plata 5 g
Agua destilada 100 mL
Aadir a 95 mL de esta solucin hidrxido amnico hasta obtener una solucin
clara sin precipitados. Luego aadir gota a gota lo necesario de ios restantes 5 mL
de la solucin de nitrato de plata hasta que la solucin se vuelva ligeramente turbia
(opalescente).
Dejar reposar 1 2 horas en la oscuridad antes de usar.
b) S o l uc i n de cl o r ur o de or o:
Cloruro de oro acuoso al 1 por 100 10 mL
Agua destilada 40 mL
c) S o l uc i n de t i o sul f at o sdi co al 5 por 100:
Tiosulfato sdico 5 mL
Agua destilada . . . 100 mL
d) S o l uc i n de r oj o nucl ear r pi do (Ker necht r ot )
Mo d o de oper ar :
Usar cortes de control. Emplear material de vidrio qumicamente limpio. Evitar
el contacto con metales.
1. Desparafinar y rehidratar los cortes hasta agua destilada.
2. Incubar en solucin de nitrato de plata a 56 C durante 1 hora o bien de
24 a 48 horas a temperatura ambiente (en oscuridad). Los cortes deben
ser de color marrn claro.
3. Lavar en agua destilada.
4. Colocar en solucin de cloruro de oro durante 5 minutos.
5. Lavar tres veces en agua destilada.
6. Colocar en solucin de tiosulfato sdico durante 5 minutos.
7. Lavar en agua destilada.
8. Contrastar con solucin de rojo nuclear rpido durante 5 minutos. Lavar
bien.
LA IMP REGNACION ARGENTICA
205
9.
10.
Lavar en agua destilada dos veces.
Deshidratar, aclarar y montar.
Resul t ados (fig. 11.2):
Sustancias reductor as de la plata, incluidos granulos argn-
tafines y melanina Negro
Ncleos Rosa
Fi gur a 11.2. Tcnica de Masson-Fontana para identificar clulas argenta-
fines en las glndulas del intestino delgado.
Obser vaci o nes:
Este procedimiento es i nespec f i c o , ya que muchos pigmentos, incluidos el
formol, hierro, pigmento lipofucsnico y granulos argentafines, pueden ser positi-
vos. Aunque se usa con frecuencia para demostrar melanina, es preciso realizar
otras tcnicas para confirmar los resultados positivos. Como otros pigmentos no
reaccionan con la plata a pH 3.3, se puede demostrar selectivamente la melanina
usando un mtodo de Warthin-S tarry modificado a este pH. La prueba histoqu-
mica crucial para las melaninas es la reduccin del nitrato de plata (0.1 M o 1.7 por
100) en tampn acetato (0.1 M pH 4), en 1 hora o menos, a temperatura ambiente
en la oscuridad.
I
6.2. M t o d o d e Gr i mel i u s par a ar g i r o f i l i a
S e trata de una i mp r eg n ac i n ar g n t i c a en un t i empo con reduccin del
nitrato de plata mediante la hidroquinona.
Las piezas fijadas en formol tamponado al 10 por 100 deben ser refijadas
toda la noche en l quido de Boui n antes de su tincin.
P rocesamiento normal. I nclusin en parafina.
206
LABORATORIO DE ANATOMIA P ATOLOGICA
PROCE DIMIE NTO TE CNICO
S o l uci o nes:
a) S o l uc i n de t amp n acet at o 0.1 M a pH 5.8:
S olucin 1:
Acetato de sodio puro 1.64 g
Acetato de sodio trihidrato 2.72 g
Agua destilada 100 mL
S olucin 2:
Acido actico glacial 1.2 mL
Agua destilada 98.2 mL
S olucin de trabajo:
S olucin 1 95.0 mL
S olucin 2 5.0 mL
Agua destilada 100 mL
b) S o l uc i n de i mpr egnac i n:
Tampn acetato 0.1 molar a pH 5.8 100 mL
Nitrato de plata 0.05 g
c) S o l uc i n r educt o r a de Bo di an:
S ulfito de sodio anhidro 5 g
Hidroquinona 1 g
Agua destilada 100 mL
d) S o l uc i n f i j ador a:
Tiosulfato sdico 2 g
Agua destilada 100 mL
Mo d o de oper ar :
1. Desparafinar e hidratar hasta agua destilada.
2. Lavar cuatro veces en agua destilada.
3. Colocar en la solucin de impregnacin durante 3 horas a 60 C (los
portaobjetos y la solucin han de ir alcanzando progresivamente la tempe-
ratura).
4. Transferir durante 5 minutos a la solucin reductora de Bodian recin
preparada y previamente calentada a 60 C. Examinar al microscopio. S i no
aparece color negro, lavar en cuatro cambios de agua destilada. Fijar en
tiosulfato sdico al 2 por 100 de 30 segundos a 1 minuto. Volver a colocar
en la solucin de impregnacin recin preparada a temperatura ambiente
durante 30 minutos. Transferir a la solucin reductora de Bodian recin
preparada durante otros 5 minutos.
5. Lavar en agua destilada.
6. Fijar en tiosulfato sdico al 2 por 100 durante 30 segundos.
7. Lavar en agua destilada.
8. Deshidratar, aclarar y montar.
Resul t ados (fig. 11.3):
Clulas argirfilas
Clulas alfa 2 de los islotes pancreticos
Negro
Negro
LA IMP REGNACION ARGENTICA 207
9
Fi gur a 11.3 Tcnica de Grimelius para identificar las clulas argirfilas
del intestino delgado.
Obser vaci o nes:
1. Es fundamental emplear so l uci o nes t ampo nadas, pues el resultado de la
tcnica depende del correcto equilibrio del pH.
2. Se utiliza nitrato de plata en muy pequea cantidad para evitar que los
iones de plata en exceso saturen la proliferacin.
3. S e obtiene un resultado excelente tratando los cortes, una vez desparafina-
dos con fijador de Bouin, durante 1 hora a 37 C, y pasndolos luego por
alcohol de 70 hasta que desaparezca el color amarillo. La incubacin se
realiza en una solucin de nitrato de plata al 0.1 por 100 aproximadamente
(casi el doble de la recomendada) durante 4 horas a 60 C. El resto de la
tcnica es igual a la descrita. (Modificacin realizada en el departamento de
anatoma patolgica del Hospital universitario de Granada).