Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso

Climtico
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
FACUTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL
Y DE RECURSOS NATURALES


TINCIONES Y COLORACIONES

INTEGRANTE

ALVAREZ CCATAMAYO KEVIN


PROFESORA: SUYO LOAYZA BEATRIZ
ASIGNATURA: MICROBIOLOGA GENERAL
GRUPO HORARIO: 91G
CICLO: V
SEMESTRE: 2014-A
FECHA DE ENTREGA: 16/04/2014







INDICE


OBJETIVOS
INTRODUCCION
MARCO TEORICO
METODOLOGIA
RESULTADO
CONCLUSIONES
CUESTIONARIO




















COLORACIONES

I. OBJETIVOS
Aprender a hacer frotis y fijar la muestra
Tincin y visualizacin de la muestra
Identificar bacterias Gram + y Gram mediante la tincin de
Gram.
Conocer la reaccin de las paredes celulares de las bacterias al
agregar el colorante.
Aprender a teir con el mtodo la tincin de Ziehl Neelsen


II. INTRODUCCION
Son tcnicas que permiten observar microorganismos en funcin de la
capacidad de los mismos para retener o no determinadas sustancias
colorantes, lo que depende de la carga de la clula y del colorante.
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Catinicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de
las clulas y las tien. Ejemplos: azul de metileno, cristal violeta, safranina.
Aninicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que
no tien las clulas, sino el entorno. En este caso se habla de tincin negativa.
Ejemplos: eosina,nigrosina.
Liposolubles. Se mezclan con los lpidos celulares y los tien. Ejemplo: negro
sudn.
Las tinciones pueden ser:
Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las clulas
tienen una composicin qumica diferente a la de su entorno, de modo que
ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El colorante tie
las clulas (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de clulas tienen
distinta composicin qumica, y por lo tanto reaccionan de forma diferente
frente a una tincin, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes
grupos, segn su capacidad de tincin. En este apartado estn dos tinciones
de importancia taxonmica y mdica: la tincin de Gram y la de cido-alcohol
resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan ms de un colorante.
Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen
distinta composicin qumica, de modo que se tien selectivamente con ciertos
colorantes. Ej; tincin de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de
corpsculos metacromticos. Pueden utilizarse uno o ms colorantes.
a) Azul de metileno (Tincin positiva). Permite teir el interior celular.
Tie microorganismos procariticos (vivos o muertos). Los eucariticos slo se
tien si estn muertos. Algunas estructuras, como los corpsculos
metacromticos, se tien ms intensamente con este colorante que el resto de
la clula.
b) Nigrosina (Tincin negativa). Se trata de un colorante aninico, que no
penetra en el
interior celular. Proporciona una visin de la forma y el tamao celulares al
observarse los
microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro.
De gran importancia en Microbiologa porque permite diferenciar dos grandes
grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), segn se comporten ante esta tincin. El
fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos
grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su
pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano
ms fina y una capa lipopolisacardica externa. Tras la tincin con el primer
colorante (Cristal violeta) se efecta un lavado con etanol que arrastrar al
colorante slo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda
retenido y las clulas permanecern azules. Las clulas Gram (-) se teirn
despus con un colorante de contraste (safranina) para que puedan
observarse.


III. MARCO TEORICO

Existen tres tipos de tcnicas de tincin: simples, diferenciales y especficas:

Tinciones simples: En las tinciones simples se usa un nico colorante, que
siempre es de tipo bsico. Se utilizan solamente para incrementar el contraste;
todas las clulas absorbern el colorante y quedarn teidas del mismo color.
Por tanto, la tincin simple mejora la observacin de la clula completa. Se fija
el espcimen, se aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se
absorba, se retira el exceso de colorante y la preparacin ya est lista para ser
observada. Si se utiliza un mordiente, hay que aadirlo justo antes del
colorante.

Tinciones diferenciales: Las tinciones diferenciales se utilizan para distinguir
entre tipos de microorganismos. La tcnica de tincin diferencial consta de dos
etapas: una tincin primaria (siguiendo el mismo mtodo que en una tincin
simple) seguida de una tincin de contraste. En la tincin de contraste se utiliza
otro colorante que tie (y por tanto, revela) las clulas no teidas por el primer
colorante. Estas tinciones son muy utilizadas en microbiologa. Por ejemplo, la
tincin de Gram y la tincin de cido-alcohol resistencia, ambas aplicadas a
bacterias.

La tincin de Gram La tcnica de la tincin de Gram fue desarrollada por el
bacterilogo dans Christian Gram en 1884. Esta tincin clasifica las bacterias
en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas La tcnica incluye tincin
primaria, decoloracin y tincin de contraste.
La tincin de Ziehl Neelsen (BAAR) es una tcnica en que la paredes celulares
de ciertos, es una tcnica de tincin diferencial rpido y econmico, que se
basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen
cidos grasos.

Por eso se denomina bacilos acido-alcohol resistentes o BAAR.
Las micobacterias.la coloracin clsica de Ziehl Neelsen requiere
calentamiento para el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene
ceras.
La tincin fue descrita por primera vez por dos mdicos Alemanes Franz Ziehl
un bacterilogo y Friedrich Neelsen un patlogo.

Al observar lapreparacin al microscopio, los organismos acido-alcohol
resistentes aparecen teidas de rojo mientras que el resto de las bacterias
aparecen de color azul.

Las especies del genero Mycobacterium, Nocadias y algunos Acitnomicetos,
retienen las coloraciones aun despus de los procesos de decoloracin con
cidos, o con soluciones de acido-alcohol, acido-acetona, por lo que son M.O
denominados acido-resistentes. Dicho caracteres es atribuido a un componente
lpido (acido micolitico) en las especies bacterianas de las especies del genero
Mycobacterium,en los casos de los Criptosporidium y de las endosporas se
atribuye a factores de impermeabilidad.
Los componentes y factores mencionados hacen ms difcil la penetracin del
colorante en la clula microbiana, por lo que los procederes para estos
colorantes necesitan de la ayuda del calor, de solventes orgnicos o de
detergentes.

Entre los mtodos de coloracin para demostrar la acido-resistencia se
encuentra este mtodo.


IV. METODOLGIA

Tincin simple

Frotis:
1. Tomar con el hisopo una colonia, tratando de no coger el agar.
2. Realizar un frotis de un centmetro cbico en el portaobjetos.
3. Pasar el portaobjetos por el mechero 5 veces, tratando de no
calentarlo mucho.

Tincin:

1. Ponerle violeta y safranina por un minuto. Lavar.
2. Observarlo a 100x con aceite de inmersin

Tincin Gram

Frotis:
1. Tomar con el hisopo una colonia, tratando de no coger el agar.
Realizar un frotis de un centmetro cbico en el portaobjetos.
Pasar el portaobjetos por el mechero 5 veces, tratando de no
calentarlo mucho.

Tincin:

1. Poner Violeta por 1 minuto. Lavar
2. Poner Licor de Gram por 1 minuto. Lavar
3. Poner Alcohol Cetona por 10 segundos. Lavar
4. Poner Safranina por 15 segundos. Lavar y dejar secar
5. Observarlo a 100x con aceite de inmersin

Tincin ziehl neelsen

1. Se toma la muestra y se hace el frotis en el porta objetos
extendindolo de forma giratoria
2. Se fija la muestra pasndolo el porta objetos 3 veces por el fuego
del mechero, a una temperatura adecuada.
3. Con unas pinzas se toma el porta objeto y se coloca sobre el
puente o gradilla de tincin.
4. Se aplica unas gotas de fucsina-fenicada y se deja actuar durante
5 min.
5. Calentar con agua (ayuda) del mechero hasta la emisin de
vapores de 3-5 min.
6. Lavar el porta objetos con agua corriente hasta que el colorante
se caiga por completo
7. Colocar unas gotas de alcohol acido como solucin de colorante
y dejarlo sobre el porta objetos por 3 min.
8. Montar la preparacin con un cubre objetos usando un mtodo de
montaje
9. Examinar 200-300 campos utilizando el objetivo seco fuerte 40X.
10. Confirmar la morfologa interna usando el objetivo de 100X junto
con el aceite de inmersin.

V. RESULTADOS

Tincin Gram

Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color
morado, y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color
rosa o rojo o grosella

Tincin ziehl neelsen

Las Bacterias BAAR (+) se tien de un color Rojizo

Las Bacterias BAAR (-) se tien de un color Morado

VI. CONCLUSION
Tincin Gram
Aunque las bacterias no aparecen en diferentes medio que las rodea, difieren
mucho qumicamente esta diferencia qumica es los que permite distinguir las
bacterias por Tincin, pues generalmente, el colorante reacciona con
la clula bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.

Debido a eso la Tincin es importante para la microbiologa debido a que:
Proporciona contraste entre el microorganismo y el medio que lo rodea,
permitiendo diferenciar varios tipos morfolgicos.
Permite el estudio de las estructuras internas de la clula bacteriana, tales
como paredes celulares, vacuolas o cuerpos celulares.
Permite el empleo de mayores amplificaciones.

VII. CUESTIONARIO

Qu funcin cumple el Lugol en la tincin de Gram?
En microbiologa se emplea en la tincin de Gram para retener el
colorante cristal violeta. El I
2
entra en las clulas y forma con el colorante
cristal violeta un complejo insoluble en agua.
Cul es la funcin de la fucsina fenicada en la coloracin ziehl
neelsen?
Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y
tia la pared celular de la bacteria. Para posteriormente decolorar con
alcohol-cido.
A que denominamos colorante primario y colorante e contraste?
Primer colorante.- Un colorante bsico (+) que en contacto con las
clulas cargadas negativamente, reacciona con ellas colorendolas. El
ms utilizado es el cristal violeta.
Colorante contraste.- Es un colorante bsico de distinto color que el
primer colorante, por ejemplo,la safrina.