1

Linhagens celulares
Quimeras
1
Linhagens celulares e Diferenciao celular
A organizao dos meristemas apicais mostra, de uma maneira geral, que uma ou
vrias clulas iniciais esto na origem dos diferentes sistemas de tecidos.
E l d id tifi i i i i i t d i i t
2
Em algumas razes podem identificar-se iniciais para o sistema drmico, para o sistema
fundamental e para o sistema vascular;
no pice caulinar a epiderme forma-se de um pequeno conjunto de clulas na camada
superficial - L1.
Noutros casos mais difcil identificar as clulas iniciais, mas o padro histolgico
produzido pelos meristemas sugere que os tecidos tm origem num pequeno grupo de
clulas, algumas das quais sero iniciais.
2
Linhagens celulares
No meristema apical
caulinar das
Angiosprmicas podem
distinguir-se 3 estratos
f i i (L1 L2 L3) funcionais (L1, L2, L3) que
diferem no tipo de diviso
celular e/ou no destino de
desenvolvimento.
A maioria das clulas de
uma planta adulta forma-
se por divises nas
camadas L3 do pice
3
caulinar
A epiderme deriva
exclusivamente da L1.
As camadas L2 formam
camadas subepidrmicas
pluricelulares
sabido que o plano segundo o qual uma clula se divide
determina a posio das clulas filhas no corpo da planta e esta p p p
posio que primordial na definio do destino das clulas filhas.
Deste modo, a melhor prova para a importncia da posio das
clulas advm da observao do destino de clulas que so
deslocadas da sua posio normal e passam a ocupar uma posio
noutra camada.
Vimos que as divises celulares nas camadas da tnica so de uma
maneira geral anticlinais; contudo, podem ocorrer divises
periclinais de modo que uma derivada passa a estar includa na
4
pe c as de odo que u a de ada passa a esta c u da a
camada adjacente na tnica. A derivada assume funes
adequadas s clulas dessa camada.
EX: Quimeras periclinais.
3
Quimeras
Wikipdia
Os tecidos quimricos so
constitudos por sectores ou camadas
de clulas com composio gentica
diferente (de modo que possvel
identificar estas clulas e as suas
derivadas)
Podem criar-se meristemas apicais
quimricos comradiaes (Raios X)
5
quimricos com radiaes (Raios X)
ou tratamentos com colquicina;
algumas regies ou camadas ficam
poliploides como resultado do
aumento no n de cromossomas nas
clulas que se dividiam aquando da
aplicao do tratamento.
Tipos de
Quimeras
Periclinais a
composio gentica de
uma ou mais camadas
difere da das outras
camadas.
Sectoriais um conjunto,
sector, de clulas em
vrias camadas difere
geneticamente do resto.
Mericlinais s um
sector numa camada
6
afectado.
4
1. Quimeras periclinais
Estas quimeras surgem ou podem ser induzidas nas
Angiosprmicas porque o meristema apical caulinar constituido Angiosprmicas porque o meristema apical caulinar constituido
por camadas concntricas nas quais as divises celulares ocorrem
segundo um plano.
7
1. Quimeras periclinais (cont)
A camada L2 origina parte dos
tecidos internos.
A camada L1 origina a epiderme;
contudo, as derivadas da
camada L1 ficam determinadas
para originar clulas epidrmicas
porque ocupam uma posio
externa, por fora das camadas
corticais.
8
5
2. Quimeras sectoriais
Quando afectam a cor
9
Qua do a ecta a co
originam Plantas variegadas
3. Quimeras mericlinais
Plantas variegadas
Os sectores brancos ou amarelos
resultam de clulas que no
formam cloroplastos (genes
mutantes para o desenvolvimento
cloroplastidial). Os tecidos brancos
surgem de uma regio do
meristema distinta da dos tecidos
verdes. (Deste modo pode-se
avaliar a linhagem celular de
d t i d t t )
10
determinadas estruturas).
As mutaes que afectam o
desenvolvimento dos cloroplastos
so teis porque permitem
identificar visualmente as clulas
brancas ou verdes.
6
Plantas variegadas
Quimera periclinal
Mutao nas clulas iniciais apicais
da camada L2 da tnica de modo que
as derivadas no formam
l l t C t d l l t
Pg. Sup.
Pg. Inf.
Transparncia
cloroplastos. Contudo, os cloroplastos
podem desenvolver-se em clulas
provenientes das camadas L1 e L3.
Admitindo que maioria das clulas de
clornquima tem origem na camada
L2, as folhas desta quimera deveriam
apresentar muito tecido branco; no
entanto, no so totalmente brancas,
mas variegadas, com pores
verdes que s podero ser
provenientes das camadas L1 ou L3
Distribuio
clornquima
nas camadas
do mesfilo
11
provenientes das camadas L1 ou L3.
Nas fases iniciais do desenvolvimento
das folhas, divises periclinais
ocasionais nas camadas L1 ou L3
estabeleceram clones de clulas
normais que se diferenciaram como
clulas verdes do mesfilo.
Plantas variegadas
Pelargonium
(Branco sobre verde)
Quimera periclinal:
L1 normal
(origina a
epiderme)
L2 albina
L3 normal
(verde)
12
( )
7
Plantas variegadas
Hedera helix
13
Importncia da posio celular na histognese
A anlise das quimeras mostra que a diferenciao de uma clula no
depende da sua linhagem; o seu destino determinado pela posio que
ocupa no corpo da planta.
Funcionamento do
pice caulinar
Equilbrio entre proliferao e
diferenciao celular
8
Leaf primordia
Primeiro, as clulas tmde
adquirir uma nova
identidade - foliar emvez
de meristemtica
Depois a folha tem de
adquirir polaridade:
pag. superior vs pag.
inferior
Processos de Desenvolvimento
Shoot apical
meristem
p
crescimento - padres
regulados de diviso celular e
... e de diferenciao de
clulas especializadas
g
expanso celular ...
Poethig, R.S. andSussex,I.M. (1985) Thedevelopmental morphologyandgrowthdynamicsof thetobaccoleaf. Planta165: 158-169; ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd: Runions, J . (2003)
Cell of theMonth. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 4: 603; NadeauJ A, Sack FD (2002) Stomatal Development inArabidopsis: September 30, 2002. TheArabidopsisBook. Rockville, MD: ASPB.
O desenvolvimento envolve
Informao posicional
. Deslocao directa de um sinal
por distribuio assimtrica de
protenas de transporte (e g
A informao posicional pode surgir de
protenas de transporte (e.g.
deslocao de auxina e deste modo
os gradientes de auxina so
regulados pelos transportadores de
auxina)
disperso de um sinal
a partir da fonte (i.e.
sinais produzidos pelo
meristema ou por certas
clulas diferenciadas)
destruio selectiva
de um sinal ( por ex.
por degradao de
mRNAs por miRNA)
9
O Desenvolvimento envolve Territrios
Um limite difuso formado
por um gradiente, pode ser
reforado num limite
Se um efeito do
vermelho eliminar
o amarelo e vice-
versa, ento forma-se

abrupto por mtuo

antagonismo
e mantida uma
fronteira bem definida
Formam-se fronteiras entre o
meristema apical caulinar e o
primrdio foliar e entre a superfcie
superior e inferior da folha
Shoot apical
meristem
O formao de um padro
celular na epiderme
envolve tambmproduo
de sinais inibidores
O Desenvolvimento envolve Reguladores
- frequentemente factores de transcrio
Uma vez estabelecidos os
Domnios de desenvolvimento, os
factores de transcrio regulam o factores de transcrio regulam o
crescimento e a diferenciao
Padres de expresso
de factores de
transcrio que regulam
a diferenciao de
clulas oclusivas (em
cima) e de tricomas (em
baixo)
J ackson, D., Veit, B., andHake, S. (1994) Expressionof maizeKNOTTED1relatedhomeoboxgenesintheshoot apical meristempredictspatternsof morphogenesisinthevegetativeshoot. Development 120: 405413;
Tsiantis, M., Schneeberger, R., Golz, J .F., Freeling, M. andLangdale, J .A. (1999). Themaizerough sheath2 geneandleaf development programsinmonocot anddicotplants. Science. 284: 154-156. Reproducedwith
permission; Szymanski, D.B., J ilk, R.A., Pollock, S.M. andMarks, M.D. (1998). Control of GL2expressioninArabidopsisleavesandtrichomes. Development. 125: 1161-1171; Ohashi-Ito, K. andBergmann, D.C.
(2006). ArabidopsisFAMA controlsthefinal proliferation/differentiationswitchduringstomatal development. Plant Cell. 18: 2493-2505.
Padres complementares de
expresso de um gene especfico
do meristema (esquerda) e de um
gene especficode primrdio
foliar (direita)
baixo)
10
Expresso de genes reguladores da
actividade meristemtica
Num meristema em actividade expressam-se preferencialmente
determinadas classes de genes, genes especficos de meristemas:
1. Genes envolvidos na proliferao celular (mitticos)
genes reguladores do ciclo celular (~genes de ciclinas, CDKs ...)
genes necessrios duplicao do DNA
genes necessrios formao do fuso mittico.
2. Genes envolvidos na determinao do destino celular
genes equivalentes a homeobox genes e outros reguladores de
transcrio
homeobox sequncia de DNA conservada com cerca de 180bp que codifica para um
motivo, sequncia de a.a., que se liga ao DNA.
3. Genes cuja expresso est limitada a tecidos e rgos especficos
e cujos produtos intervm na actividade dessas estruturas.
Controlo gentico da
actividade do pice caulinar
Primrdio foliar
Como que um
primrdio foliar se
t f f lh
Primrdio foliar
Meristema
Primrdio foliar transforma numa folha
emvez de fazer parte
do meristema?
Poethig, R.S. andSussex,I.M. (1985) Thedevelopmental morphologyandgrowthdynamicsof thetobaccoleaf. Planta165: 158-169.
Figure3Copyright (1985) Planta. Reprintedwithkindpermissionof Springer Science+BusinessMedia.
11
No meristema as clulas so
indeterminadas
As clulas no meristema so
funcionalmente distintas das clulas no funcionalmente distintas das clulas no
primrdio foliar
So indeterminadas e funcionam como
populao de clulas-mes (stem-cell)
Poethig, R.S. andSussex,I.M. (1985) Thedevelopmental morphologyandgrowthdynamicsof thetobaccoleaf. Planta165: 158-169.
Figure3Copyright (1985) Planta. Reprintedwithkindpermissionof Springer Science+BusinessMedia.
Determinao (destino) celular num
meristema activo
Comoqueummeristemaapicalcaulinar
indeterminado originaestruturas,como
asfolhas,comdesenvolvimento
Comoqueumprimrdiosetransforma
numafolhaemvezdefazerpartedo
meristema?
determinado?
Duranteaformaodosprimrdiosas
clulasdomeristematmdeperdera
suaidentidadecomoclulas
meristemticas eassumiridentidade de
apndiceslaterais.
Adeterminaocelular envolve,
aparentemente,aperdadacapacidade
desedividirem eaaquisiodenovas
funes quepermitemsclulas
especializarse.
Inactivadosgenesenvolvidosnadiviso
celular
Activadosgenesintervenientesna
diferenciao.
Contudo,nodesenvolvimentodeumtecidoourgoa
proliferaocelularnointerrompidaimediatamente;
poroutrolado,enquantootecidoouorgo
ocuparemasuaposio normalacapacidade
proliferativalimitada.
12
KNOTTED
desenvolvimento indeterminado
Certas protenas (tipo KNOTTED 1) que actuam como
factores de transcrio regulando a expresso de
outros genes, esto envolvidas na manuteno do
estado indeterminado do SAM- meristema apical
caulinar.
Milho mutante knotted (kn1) mutao dominante que
afecta drasticamente a morfologia foliar. Divises
celulares anormais ao longo das nervuras
nodosidades. Divises que ocorrem depois de ter
cessado a proliferao celular normal e,
adicionalmente, segundo planos anormais.
Estas divises celulares tardias distorcem os tecidos
vasculares e formam nodosidades proeminentes na
superfcie foliar.
No mutante a diferenciao celular relativamente No mutante a diferenciao celular relativamente
normal excepto nas nodosidades que se assemelham a
meristemas contm clulas indiferenciadas que
continuam a dividir-se depois de as circundantes
maturarem e cessarem de se dividir.
A mutao kn1 traduz-se numa aquisio de funo o
fentipo mutante resulta de uma expresso incorrecta
do gene e no na perda da sua expresso (o gene
expressa-se na altura e no local errados durante o
desenvolvimento).
Genes KNOX1 mantm o meristema num
estado indeterminado
Classe I de genes KNOX (KNOX1) g ( )
(KNOX significa Knotted-like homeobox)
Codificamfactores de transcrio
Expressam-se no meristema
No se expressamnos primrdios incipientes
Ajudama manter o crescimento indeterminado
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Expresso de KNOTTED
EmZea mays o mRNA de EmZea mays o mRNA de
KNOTTED (um gene KNOX1)
acumula-se no meristema
mas no nos primrdios
foliares (setas)
J ackson, D., Veit, B., andHake, S. (1994) Expressionof maizeKNOTTED1relatedhomeoboxgenesintheshoot apical meristem
predictspatternsof morphogenesisinthevegetativeshoot. Development 120: 405413. Reproducedwithpermission.
Mutantes SAM (Mutantes na formao do pice caulinar)
I. Mutantes que no mantm a actividade proliferativa no pice caulinar
O estudo dos mutantes que afectam a formao dos meristemas do pice caulinar importante
para compreender a actividade do pice caulinar e o desenvolvimento do caule.
shoot meristemless (stm1) durante a
embriognese no edifica um pice
caulinar reconhecvel e no estado de
plntula no forma folhas verdadeiras.
Contudo, estes mutantes formam
embries aparentemente normais com
cotildones e hipoctilo, demonstrando
que a edificao do pice caulinar
embrionrio no necessria para a
formao daqueles rgos.
De facto, a anlise de linhagens celulares
de embries de algodoeiro (Christianson,
1996) permitiu concluir que o SAM tem
origem em clulas com uma linhagem
diferente da das clulas que originam
os cotildones.
14
Estudos com stm 2 (mutante no qual o pice s surge no estado de plntula,
forma algumas folhas mas no inflorescncia) permitiraminferir que STM forma algumas folhas, mas no inflorescncia) permitiram inferir que STM
necessrio para manuteno da actividade proliferativa do SAM.
A anlise da srie de alelos (mutaes com diversos graus de severidade;
stm1, stm2,...) mostra que o pice em stm apresenta uma depleo das
clulas proliferativas porque incapaz de impedir a diferenciao das clulas
no centro do pice caulinar (SAM).
Nas mutaes severas a diferenciao celular esgota as clulas proliferativas nos
estados iniciais do desenvolvimento do meristema apical caulinar (SAM);
Nas mutaes suaves a populao de clulas proliferativas no centro do pice
caulinar dura mais tempo, mas por fim extingue-se diferenciando-se.
A mutao stm consiste numa deficincia na manuteno do meristema e no
na sua formao (embora nas mutaes severas parea no formar SAM).
Genes como KN1 e SHOOTMERISTEMLESS (STM) so necessrios para
manter a identidade das clulas meristemticas, mantendo-as num estado
indeterminado.
Locais de expresso de STM
O gene STM foi clonado e usado
em estudos de hibridao para
detectar os locais da sua expresso
durante o desenvolvimento
embrionrio de plantas silvestres.
No estado inicial de embrio
globular STM expressa-se em1-2
clulas
No estado de final de embrio
globular a expresso de STM surge
numa faixa de clulas na metade
superior do embrio.
Nos embries cordiforme-torpedo o
RNA STM surge na regio entre os
cotildones onde se forma o SAM.
15
Marcadores moleculares iniciais do destino de clulas
(a) Diversos genes como MERISTEM
LAYER 1 (AtML1), WUSCHEL (WUS) e
membros da famlia WOX (WUSCHEL-
related homeodomain) mostramuma
di i d i d expresso dinmica emdeterminados
domnios, revelando no estado de
embrio pr-globular, a emergncia de
novos destinos celulares emcada round
de divises.
(b) No estado de embrio cordiforme
reconhecem-se os primrdios da
maioria dos tecidos e rgos. O
meristema radicular organiza-se volta da
clula lentiforme, progenitora do centro
29
clula lentiforme , progenitora do centro
quiescente, e atravs das delimitaes
resultantes da diviso assimtrica do zigoto.
O limite entre as camadas superiores e
as camadas inferiores (linha azul
superior) no coincide exactamente
com a delimitao entre hipoctilo e
cotildones porque algumas clulas das
camadas inferiores contribuempara os
primrdios dos cotildones.
Simetria radial - Simetria bilateral
Thebreakingofradialsymmetry.(b)TheCUPSHAPEDCOTYLEDON3 (CUC3)geneisinitiallyexpressed g y y ( ) ( ) g y p
throughouttheuppertierbutbecomesconstrictedtoastripecoveringthemedialdomainofthelateglobular
embryo,presumablyasaresultofincreasedauxin fluxtothefuturesiteofthecotyledonprimordia.
CUC genespromoteexpressionoftheKNOTTEDrelatedhomeodomain (KNOX)gene SHOOTMERISTEMLESS (STM)
intheincipientshootmeristem.STM,inturn,negativelyregulatesCUC transcription,suchthatbythelateheart
stagetheexpressionofCUC geneshasbecomeconfinedtoanarrowcircleseparatingtheincipientshootapical
meristem (SAM)fromthecotyledonprimordia (notshown).STM alsorepressesASYMMETRICLEAVES1 (AS1),
oneofthefactorspromotingdifferentiationinlateralorganprimordia inthestemcellsofthemeristem.
16
Origem dos domnios central e perifrico
Theoriginofcentralversusperipheraldomains. (a)ClassIIIhomeodomain leucinezipper(HDZIPIII)genes, g p p ( ) pp ( ) g ,
suchasPHABULOSA (PHB), andKANADI (KAN)genes,suchasKAN1, areinitiallyexpressedthroughouttheearly
embryo,buttheirexpressionsoonbecomeslimitedtothecentral(PHB)orperipheral(KAN1)domain.Inadult
plants,theHDZIPIII andKAN genesshowmutuallyantagonisticinteractions.Inaddition,themiR166 familyof
microRNAs playsaroleindelimitingHDZIPIII expressiontothecentral/adaxial domain.KAN activityrestricts
expressionoftheauxin transporterPIN1intheperipheryofthehypocotyls,negativelyregulatingauxin
responses.TheYABBY (YAB)geneFILAMENTOUSFLOWER (FIL)isfirstexpressedatthelateglobularstage,
markingtheabaxial sideofcotyledonprimordia.StudiesofleafdevelopmentshowthatYAB genesprimarily
promotetheoutgrowthofleafblades,perhapsbyinterpretingthejuxtapositionofadaxial andabaxial cellfates
attheleafmargin,andthattheroleofthesegenesinspecifyingabaxial fateissecondary.
A formao do meristema apical caulinar no embrio
depende de uma rede de interaco gnica que regula
a dorsiventralidade adaxial/abaxial
17
A formao do meristema apical caulinar no embrio
depende de uma rede de interaco gnica que regula a
dorsiventralidade adaxial/abaxial
(A) Estado de embrio globular de Arabidopsis. Expresso de
genes de polaridadeadaxial como HDZIPIII define um grupo
central, adaxial de clulas. Expresso de genes de polaridade
abaxial como KANADI define o domnio abaxial.
O i li d l t l i l d O pice caulinar desenvolve-se numa poro central apical do
domnio adaxial (riscado negro).
A unio dos domnios adaxial e abaxial no primrdio cotiledonar
define os locais de crescimento dos futuros cotildones.
(B) Estado de embrio cordiformeaps emergncia dos
cotildones.
(C) Nos embries com sobre expresso de KANADI ou sem
funoHD-ZIP III (triplos mutantes phabulosa, phavoluta,
revoluta) no h edificao adaxial e no se forma pice
caulinar.
(D) Plntulas silvestre ( esq.) e triplo mutante phb phv rev (
dir.). A plntula silvestre tem 2 cotildones com
dorsiventralidadeadaxial /abaxial e produziuvrias folhas a
partir de um pice caulinar activo. O triplo mutante phb phv rev
formou dois cotildones s com desenvolvimentoabaxial, sem
dorsiventralidade(a forma achatada lmina - requer
justaposiodos domnios adaxial e abaxial). No se forma ou
no h actividade de pice caulinar.
M.K. Barton (2010) Developmental Biology 341: 95113. Fig. 3.
Os genes KNOX1 actuam em parte
estimulando a sntese de citocinina
Mutante stm1
Arabidopsis
Mutante stm1
expressando IPT sob
o promotor STM
STM IPT CK
Arabidopsis
o promotor STM
ReprintedfromYanai, O., et al. (2005). Arabidopsis KNOXI Proteinsactivatecytokininbiosynthesis. Curr Biol. 15: 1566-1571, withpermissionfromElsevier.
O mutante shootmeristemless1 (stm1) no forma meristema apical caulinar. Este
mutante pode ser recuperado pela aplicao de citocinina (CK) ou pela expresso
de IPT, gene que codifica para uma enzima da biossntese da citocinina no SAM.
STM um factor de transcrio que induz a expresso de um gene IPT
Adenosinephosphate-isopentenyltransferase(IPT)
18
Sobre-expresso de genes KNOX1 aumenta
estado indeterminado e a complexidade foliar
Arabidopsis Tabaco Milho
Ganho de
Arabidopsis Tabaco Milho
funo no
primrdio foliar
Chuck, G., Lincoln, C., andHake, S. (1996) KNAT1induceslobedleaveswithectopicmeristemswhenoverexpressedinArabidopsis. Plant Cell 8: 1277-1289. ; Reprinted
bypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd: Hake, S., andOri, N. (2002) Plant morphogenesisandKNOX genes. Nat. Genet. 31: 121 122.
KNOX-OE WT
KNOX-OE (sobre-
expreso)
WT WT
KNOX-OE
KNOX-OE
As clulas no primrdio foliar ficam
determinadas
As clulas nos primrdios so
funcionalmente distintas das do funcionalmente distintas das do
meristema
Ficamdeterminadas
Poethig, R.S. andSussex,I.M. (1985) Thedevelopmental morphologyandgrowthdynamicsof thetobaccoleaf. Planta165: 158-169.
Figure3Copyright (1985) Planta. Reprintedwithkindpermissionof Springer Science+BusinessMedia.
19
Genes especficos dos primrdios
promovem a diferenciao
ARP genes
ARP deriva de 3 genes, ASYMMETRIC LEAF1,
ARP
ARP
ROUGH SHEATH2, and PHANTASTICA
Os genes ARP codificamfactores de transcrio MYB
Expressam-se emclulas dos primrdios foliares
Promovemcrescimento determinado e diferenciao.
MYB (myeloblastosis) family of transcription factors
As actividades dos genes ARP e
KNOX1 so mutuamente antagonistas
As 2 classes de factores de
ARP
As 2 classes de factores de
transcrio so mutuamente
repressivas e ajudama estabelecer a
identidade do primrdio emergente
KNOX1
20
O mRNA de
ASYMMETRIC LEAF1
(AS1) expressa-se nos
cotildones mas no cotildones mas no
no meristema
ARP
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd:. Byrne, M.E., Barley, R., Curtis, M., Arroyo, J .M., Dunham, M., Hudson, A., andMartienssen,
R.A. (2000) Asymmetric leaves1 mediatesleaf patterningandstemcell functioninArabidopsis. Nature408: 967-971.
KNOX1
No mutante stm,
AS1 expressa-se
no meristema
(seta) (seta)
Silvestre stm
mutant
ARP
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd:. Byrne, M.E., Barley, R., Curtis, M., Arroyo, J .M., Dunham, M., Hudson, A., andMartienssen,
R.A. (2000) Asymmetric leaves1 mediatesleaf patterningandstemcell functioninArabidopsis. Nature408: 967-971.
21
Perda das funes dos genes ARP
assemelha-se sobre-expresso de KNOX1
rs2 WT rs2 WT rs2
Ganho de
funo no
Silvestre as1
funo no
primrdio foliar
KNOX-OE
ReprintedbypermissionfromMacmillanPublishers, Ltd:. Byrne, M.E., Barley, R., Curtis, M., Arroyo, J .M., Dunham, M., Hudson, A., andMartienssen, R.A. (2000) Asymmetric leaves1 mediatesleaf patterningand
stemcell functioninArabidopsis. Nature408: 967-971. Reproducedwithpermission fromSchneeberger, R., Tsiantis, M., Freeling, M., Langdale, J . Development (1998) 125: 2857-2865.
Silvestre as1
KNOX OE
I. Mutantes que no mantm a actividade proliferativa no pice caulinar
(Cont.)
wuschel (wus) um mutante de
Arabidopsis que no mantemo pice
caulinar (SAM) funcional. Mutantes wus caulinar (SAM) funcional. Mutantes wus
formam pices deficientes que terminam
prematuramente o crescimento aps terem
formado algumas folhas. Esta deficincia
em wus interpretada como uma depleo
de clulas proliferativas no meristema.
Posteriormente, surgem ectopicamente
pices caulinares secundrios com
primrdios foliares. A formao destes
meristemas de segunda ordem, durante o g ,
desenvolvimento vegetativo, leva
produo de numerosas folhas em roseta.
Durante o desenvolvimento de
inflorescncias os mutantes wus
apresentam um crescimento anormal
entrecortado com o aparecimento
progressivo de escapos florais de entre
conjuntos de folhas.
22
Mutantes wuschel
Mutantes de Arabidopsis com
SAM achatado. Formamflores
com poucas peas.
A flor de wuschel (dir.) s tem 1
estame e no tem pistilo.
A flor silvestre (esq.) apresenta 6
estames e pistilo central. p
wuschel silvestre
A depleo do SAM em wus parece ser o resultado de um forte
contributo das clulas proliferativas para a formao de orgos. p p g
Normalmente WUS deve impedir a diferenciao celular, mantendo a
populao de clulas proliferativas.
Trabalhos com duplos mutantes stm / wus mostraram que STM episttico
relativamente a WUS. Os mutantes stm e wus tm efeitos semelhantes mas
no esto no mesmo trajecto gentico.
EmPetunia hybrida tambmse identificarammutantes que no formamou Em Petunia hybrida tambm se identificaram mutantes que no formam ou
no matmo SAM nos embries. Os mutantes no apical meristem (nam)
no ultrapassam o estado de plntula e geralmente no produzem primeiras
folhas. Nas plntulas nam o SAM substituido por um grupo de clulas
grandes e vacuolizadas.
NAM foi clonado e no semelhante a outros genes com funes conhecidas.
O gene NAM expressa-se numa regio anelar nos limites do meristema apical
e dos primrdios; admite-se que NAM intervemna delimitao do SAM.
23
II. Mutantes com produo excessiva de clulas proliferativas no SAM
Vimos que durante o crescimento apical do
caule h um fluxo contnuo de clulas da
zona perifrica do pice para a zona
morfognica (zona de formao de orgos).
clavata 1 silvestre
As clulas que intervm na formao dos
rgos so substitudas pelas clulas
resultantes de divises das iniciais na zona
perifrica. O funcionamento do pice
depende da manuteno desta populao de
clulas.
H mutantes de Arabidopsis com deficincia
na manuteno equilibrada das populaes
de clulas naquelas regies.
clavata 1 mutante com um SAM maior
durante o crescimento vegetativo e
d ti reprodutivo.
Vrios alelos
meristemas grandes com muitos orgos
em vrios verticilos,
fasciao
proliferao excessiva do pice caulinar
(cl 1 no afecta o pice radicular, sugerindo
que no uma deficincia no controlo da
diviso celular).
Mutantes clavata
Contrariamente aos mutantes
shoot meristemless e wuschel, os
mutantes clavata tmum pice
caulinar maior do que o das
plantas silvestres devido a uma
proliferao excessiva de clulas.
O embrio do mutante clavata1
(clv1-4) tem um SAM maior, com
Imagens de seccionamento ptico de pices corados com iodeto de
propdio para marcar os ncleos.
mais clulas do que o das plantas
silvestres.
Os mutantes clavata formam
peas florais adicionais a partir
dos meristemas florais
Clavata 3, c/ ptalas e estames
adicionais e um pistilo muito
largo
silvestre
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Os padres filtcticos so alterados nos
mutantes com meristemas sobre-dimensionados
Mutantes de Arabidopsis e Zea mays p y
com meristemas sobre-dimensionados
ReproducedwithpermissionfromClark, S.E., Running, M.P., andMeyerowitz, E.M. (1993). CLAVATA1, aregulator of meristemandflower development in
Arabidopsis. Development 119: 397-418. J ackson, D., andHake, S. (1999). Control of phyllotaxyinmaizebytheabphyl1 gene. Development 126: 315-323.
Wild-type
alterna
abphpyl1
oposta
Wild-type
helicoidal
clavata1
aleatria
Mutante stm (no mantm a actividade
proliferativa)
STM mantm as clulas no estado
i d t i d indeterminado
Mutante wus (depleo de clulas
proliferativas)
WUS mantm a populao de clulas
proliferativas/indiferenciadas
Mutante clv (pice muito desenvolvido,
excesso de clulas proliferativas)
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Manuteno do SAM
Interaco de CLV1, CLV3 e WUS
As clulas que expressam
WUS produzem um sinal p
que confere identidade
zona central - mantm as
clulas no estado
indiferenciado - e promove a
expresso de CLV3 na
tnica do SAM.
CLV3 transportada para as
camadas mais profundas, p ,
liga-se protena CLV1 e
inibe a expresso de WUS -
deste modo as clulas
diferenciam-se -.
Esta regulao mantm o
tamanho da zona central.
Trajecto de sinalizao CLAVATA
Os produtos dos 3 loci CLAVATA (CLV1, CLV2 e
CLV3) codificam componentes de um trajecto de
sinalizao que regula a expresso de WUSCHEL
(WUS codifica umfactor de transcrio c/ um (WUS codifica um factor de transcrio c/ um
homeodomnio)
CLV3expressa-se predominantemente nas clulas da
L1 e L2 da zona central, enquanto que CLV1 se
expressa nas clulas da L3 da zona central.
A expresso de WUS est confinada a algumas
clulas da zona central clulas-mes. Estas clulas
formam um centro de organizao que promove a
identidade das clulas-mes atravs de um sinal
para as camadas celulares adjacentes. Este sinal
promove tambma expresso de CLV3, o qual
subsequentemente activa o trajecto de sinalizao
CLV1, conduzindo represso da expresso WUS.
Este feedback negativo limita o tamanho da
populao de clulas-mes regulando o tamanho
do centro organizador.
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Trajecto de sinalizao CLAVATA
CLV1 codifica um receptor tipo cinase (RLK) de
serina/treonina (Ser/Thr) com domnio extracelular
com repeties ricas em Leu (LRRs)
CLV2 codifica uma protena tipo receptor (RLP)
semelhante a CLV1, mas sem domnio cinase
intracelular
CVL1 forma de um heterodmero com CLV2
para actividade cnase o complexo requer um pptido
codificado por CLV3
CLV3 origina umpptido de 96 aa que secretado CLV3 origina um pptido de 96 aa que secretado
interage com o complexo receptor CLV1/CLV2
Bases moleculares da retroaco CLV-WUS
Os receptores CLV1 (cinase) e CLV2 (protena)
formam um heterodmero inactivo (185 kDa), na
membrana das clulas da zona central, atravs
de ligaes dissulfito (S) entre pares de
sistenas conservadas ladeando repeties ricas
em leucina (LRR).
CLV1 deve formar tambm dmeros com outros
receptores receptores.
Interaces entre o ligando CLV3 e o domnio
externo LRR do heterodmero originam
autofosforilao de CLV1 e o
subsequentemente recrutamento de outras
protenas intracelulares.
O complexo activado (450 kDa) associa-se com
uma GTPase semelhante a Rho (ROP), que
deve estar envolvida na transduo de sinal.
ROP pode ligar-se ao complexo activado atravs de uma
pequena protena de ligao. Outro componente do complexo
activo a protena fosfatase(KAPP) que modular a actividade
CLV1. No so conhecidos os componentes a jusante no
trajecto de sinalizao CLV, mas parece que incluem MAPKs.
ambguo o papel da fosfatase2C POLTERGEIST (POL) no
trajecto de sinalizao CLV Pode actuar como regulador trajecto de sinalizao CLV. Pode actuar como regulador
negativo do trajecto de sinalizao CLV, ou como regulador
positivo de WUS.
O sinal inibe a expresso de WUS com
consequente diferenciao celular (diminuio
da actividade meristemtica)
na ausncia de CLV3 o gene WUS est activo,
levando expresso de CLV3
o reconhecimento de CLV3 conduz diminuio
da expresso de WUS
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Manuteno do SAM
Proliferao celular/Diferenciao celular
STM inibe a expresso de ASYMMETRIC
LEAF1 (AS1);
Por sua vez AS1 inibe a expresso de Por sua vez AS1 inibe a expresso de
KNAT1 e KNAT2.
Assim, no meristema a expresso de
STM ao inibir a expresso de AS1
possibilita a expresso de KNAT1 e
KNAT2.
proliferao celular
Nos locais de formao dos primrdios
foliares desaparece a expresso de STM
Nestes locais de iniciao foliar a inibio Nestes locais de iniciao foliar a inibio
(sub-regulao) de STM (por diminuio
da sensibilidade/receptores a STM),
permite a sobre-regulao da expresso
de AS1;
Deste modo, AS1 expressa-se nos
primrdios foliares e bloqueia a
expresso de KNAT1 e KNAT2.
diferenciao celular
M.K. Barton / Developmental Biology 341 (2010) 95113
O controlo da actividade das clulas-
mes (estaminais) no SAM depende
de sinais provenientes do meristema
bem como de sinais das folhas.
A actividade das clulas-mes que especificam o tamanho da zona central - reprimida pelo pptido CLAVATA3. CLAVATA3 limita o tamanho da zona
de expresso de WUSCHEL (limitando talvez a transcrio de WUSCHEL). WUSCHEL promove a atividade das clulas-mes e regula positivamente a
atividade CLAVATA3, gerando assim um feedback que estabiliza a atividade das clulas-mes na planta. WUSCHEL determina uma regio de elevada g q p g
sensibilidade citoquinina. Por sua vez, os nveis WUSCHEL, so aumentados pela citocinina. A biossntese de Citocinina aumentada pela expresso
de genes KNOX no meristema, por sua a expresso destes aumentada por nveis elevados de citocininas. Note-se que as regies de elevada atividade
de auxina (primrdios foliares) e elevada atividade de citocinina (meristema central) esto claramente separadas no meristema. As fronteiras (roxo
escuro) entre meristema e primrdios foliares adjacentes ficam estabelecidas num determinado momento entre os estados P0 e P1 e so marcadas pela
expresso dos genes CUPSHAPED COTYLEDON e LATERAL SUPRESSOR (LAS). medida que as folhas maturam, as fronteiras continuam a
expressar estes genes e adicionam outros reguladores, como BLADE-ON PETIOLE (BOP, roxo claro). YABBY expressa-se no domnio abaxial da folha.
Actua no autonomamente, atravs do produto gene LATERAL SUPPRESSOR, para promover o destino adaxial e promover a atividade das clulas-
mes no meristema.
medida que LATERAL SUPRESSOR expresso na fronteira adaxial da folha e o meristema, o efeito de YABBY sobre a expresso de LATERAL
SUPRESSOR poderia ser atravs do papel de YABBY na promoo do desenvolvimento adaxial. YABBY mostrado a actuar numa folha relativamente
madura, mas poderia actuar numa folha mais prxima do meristema, por exemplo, numa folha na fase P1. Uma vez a folha separada fisicamente do
meristema BOP expressa-se na fronteira folha- meristema; contudo, tambm afecta a atividade das clulas-mes no meristema. Ainda, em mais um
caso de sinalizao folha - meristema, produtos gnicos de SQUAMOSA BINCING PROTEIN-LIKE (SPL) sintetizados na folha diminuem a taxa de
produo de folhas dentro do meristema.