Cuantificacin de las clulas formadoras de

anticuerpo, mediante la tcnica de Jerne

Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Laboratorio de Inmunologa L-121
Prez Prez Jos Manuel ____________
Prez Sevilla Alma Beatriz ____________
Equipo 3, Grupo 2802



rganos linfoides

Los rganos linfoides se clasifican como primarios o secundarios, en funcin de su participacin
en los procesos de diferenciacin, maduracin y especializacin de las clulas linfoides.

Primarios: en ellos las clulas linfoides (linfocitos), adquieren el grado de diferenciacin y
maduracin que requieren para el adecuado desempeo de sus funciones inmunolgicas. Los
rganos son:
medula sea en mamferos
bolsa de Fabricio en aves
timo en ambos

Secundario: es el sitio de concentracin de clulas linfoides, ocurren las interacciones entre las
clulas y los antgenos que dan origen a las repuestas inmunitarias. Estos rganos son:
bazo
ganglios linfticos
placa de Peye
ganglios linfticos mesentricos
tejido linfoide asociado a los bronquios

El bazo

Localizado en la regin supramesoclica del abdomen, detrs del estomago, envuelto por una
capsula fibrosa de la que se desprenden tuberculas que dividen parcialmente y sostiene al
parnquima esplnico. La masa esplnica consta de una porcin conocida como pulpa blanca,
donde se concentran las clulas linfoides, y una porcin llamada pulpa roja, donde se encuentran
las otras clulas de la sangre.

Pulpa Roja: destruye a los eritrocitos viejos y que han perdido funciones
Pulpa Blanca: se encuentran los linfocitos T y los linfocitos B, que se activan en presencia
de antgenos.

La funcin del bazo es participacin en repuesta inmunitaria, rgano de filtracin sangunea y es
donde se retienen y destruyen la mayora de las clulas circulante envejecidas


Inmunidad
Inmunidad es un trmino que describe el estado de tener suficientes defensas biolgicas para
evitar la infeccin, enfermedad, u otra invasin biolgica no deseada. La inmunidad involucra
tanto a componentes especficos y no especficos. Los componentes no especficos actan como
barreras o como eliminadores de patgenos para detener la infeccin por microorganismos antes
de que puedan causar la enfermedad. Otros componentes del sistema inmunolgico se adaptan
ellos mismos a cada nueva enfermedad encontrada y son capaces de generar inmunidad especfica
contra el germen patgeno.
La inmunidad adaptativa o especfica a menudo se subdivide en dos grandes tipos dependiendo de
cmo se introdujo la inmunidad. Pueden subdividirse an ms, dependiendo de la cantidad de
tiempo que dura la proteccin. La inmunidad pasiva es a corto plazo, y normalmente dura slo
unos pocos meses, mientras la proteccin va inmunidad activa dura ms tiempo, y es a veces de
por vida.
Una subdivisin ms de la inmunidad adaptativa se caracteriza por las clulas involucradas; la
inmunidad humoral es el aspecto de la inmunidad que es mediado por anticuerpos secretados,
mientras que la proteccin proporcionada por inmunidad celular involucra slo linfocitos T. La
inmunidad humoral es activa cuando el organismo genera sus propios anticuerpos, y pasiva
cuando los anticuerpos son transferidos entre individuos. Asimismo, la inmunidad celular es activa
cuando las clulas T propias del organismo son estimuladas y pasiva cuando las clulas T vienen de
otro organismo




La inmunidad humoral se caracteriza por la produccin de Ig o Ac (anticuerpos) que se dividen en
diversas clases: IgG, IgM,IgA, IgE e IgD. La inmunidad celular se caracteriza por la produccin de
linfocitos T sensibilizados especficamente hacia un Ag (antgeno).


Se entiende por inmunidad activa el proceso mediante el cual los organismos producen sus
propios anticuerpos o linfocitos T sensibilizados, generndose, por lo tanto memoria
inmunolgica.


Inmunidad activa

Respuesta inducida una vez producido el contacto con Ag
Respuesta inmune formada por anticuerpos y linfocitos T
Confiere resistencia a largo plazo (produccin Ab)
Lenta progresin de la resistencia y la necesidad de contacto prolongado con el antgeno

La inmunidad pasiva es aquella en la que reciben un anticuerpo o linfocitos preformados en otro
organismo.

Inmunidad

Respuesta basada en anticuerpos ya existentes en otro hospedero transmitidos de forma natural
a travs de la placenta o a travs del calostro forma de proteccin rpida, pero de corta duracin

Inmunidad Innata

Respuesta no especifica
Respuesta rpida, inmediata
Mediada por clulas :macrfagos, neutrofilos, basofilos
Mediada componentes humorales: complemento citocinas, IL
Sin memoria inmunolgica



Inmunidad adaptativa


Respuesta especifica contra patgenos y antgenos
Tiempo de demora para una respuesta maxima
Mediada por celulas :Linfocitos T y B
Mediada por componentes:Complemento Conduce a Memoria


Respuesta inmune celular

La primera fase de la inmunidad celular es el reconocimiento de antgenos extraos dentro del
organismo por clulas B a travs de su receptor de membrana. Sin embargo, a pesar de la
interaccin con antgeno, la clula B no se activa hasta ser estimulada por una lnea de linfocitos T
llamados linfocitos T cooperadores. Esa unin, clula B: linfocito cooperador, estimula la
expansin clonal y diferenciacin de los linfocitos B, los cuales:

Secretan anticuerpos primeramente de tipo IgM
Cambian de isotipo, bien sea IgG, IgA o IgE, dependiendo del estmulo adecuado
Maduran a anticuerpos de alta afinidad por el antgeno inicial
Remanentes de la lnea producida permanecern como linfocito B de memoria.

La respuesta de anticuerpos en contra de los antgenos no proteicos (lpidos, polisacridos) no
requieren la participacin de linfocitos T cooperadores, por lo que son llamados Antgenos T-
Independientes.
Las clulas que producen los anticuerpos son clulas plasmticas, un tipo especial de linfocito B
que se especializa en la produccin de un anticuerpo particular y especfico.

Respuesta humoral primaria

La cantidad de anticuerpo secretado por clulas plasmticas y la clonacin de estas mismas clulas
la primera vez que entra en contacto el receptor con el antgeno encuentran su mximo
aproximadamente a los 7 das de la primera infeccin (5-10 das). Habitualmente, la respuesta
mxima de anticuerpos son del isotipo IgM, por encima de IgG, inducida por todo tipo de
inmungeno. La dosis necesaria para la inmunizacin generalmente debe ser relativamente alta,
ptimamente con la presencia de adyuvantes para los antgenos proteicos.

Respuesta humoral secundaria

Una infeccin repetida por un mismo antgeno activa los linfocitos de memoria creados como
consecuencia de la respuesta humoral primaria. La respuesta, entonces, se inicia ms
rpidamente, al cabo de unos 3 das. Por su parte, la respuesta mxima de anticuerpos es mayor,
con una intensidad de 100 a 1000 veces la respuesta primaria, y es principalmente del isotipo IgG
(en ciertas situaciones de los isotipos IgA e IgE). Tambin dura ms tiempo, haciendo que su
declive sea ms lento. Es una respuesta inducida por antgenos proteicos y slo son requeridas
bajas dosis de antgenos infectantes, sin necesidad de adyuvantes.

Respuesta humoral primaria vs. Secundaria
Respuesta primaria Respuesta secundaria
Dura 5-10 das para instalarse Habitualmente 3 das para instalarse
Respuesta mxima de anticuerpos
menor
Respuesta mxima de anticuerpos mayor
Generalmente IgM > IgG
Aumento relativo de IgG y de IgA e IgE en ciertos
casos
Menor afinidad media por anticuerpos Afinidad madurada y mayor por anticuerpos
Inducida por cualquier inmungeno Inducida slo por antgenos proteicos
Dosis de inmunizacin relativamente
alta
Inducida por baja dosis de antgenos
Adyuvantes requeridos ptimamente Adyuvantes no necesarios usualmente






Reacciones de hemolisis.

El complemento (C) fija los complejos Antgeno (Ag)-Anticuerpo (Ac) (Ag-Ac) y forma un complejo
Ag-Ac-C y si Ag es una clula, se produce lisis. Si la clula es un eritrocito, se libera la hemoglobina
despus de la lisis. Este fenmeno se conoce como hemolisis. Midiendo la cantidad de
hemoglobina liberada, se consigue una expresin de la amplitud de la hemolisis, y, por lo tanto, de
una cantidad de complejo Ag-Ac.
Las placas hemolticas fueron desarrolladas por Niels Jerne, en 1963. Esta prueba es para el
estudio de las bases celulares de la reaccin inmune, lo que la reaccin de precipitacin
cuantitativa es la inmunoquimica. El mtodo de placas hemolticas da la idea del nmero de
clulas formadoras de anticuerpo en una poblacin. Estas clulas se denominan clulas
formadoras de palca (CFP). El principio de la prueba consiste en que si las clulas productoras de
anticuerpos contra un antgeno de eritrocito se suspenden en una capa de agar que contengan los
antgenos de eritrocito, el anticuerpo secretado por una clula se difundir a travs del agar,
reaccionara con los eritrocitos, y formara un complejo localizado, antgeno-anticuerpo. Cuando se
aade complemento a la capa de eritrocito-linfocito, solo aquellos eritrocitos que han reaccionado
con el anticuerpo se fijarn el complemento y se consumara su lisis, estos producen zonas
localizadas de hemolisis. Estas zonas locales reciben el nombre de placas por que se parecen a las
que produce un bacterifago.

Los linfocitos obtenidos del animal sensibilizado y una suspensin de clulas indicadoras (GRC), se
mezclan y se distribuye en un medio semislido (agarosa). Los GR pueden ser el antgeno o
pueden estar sensibilizados con el antgeno que se est investigando. Con la adicin de
complemento, los GR se lisan y en las placas se hacen visible un halo de hemolisis alrededor de
cada linfocito B capaz de producir anticuerpos. Los CFP se cuantifican como placas por bazo, placas
por cultivo o placas por 106 clulas probadas. El mtodo da una medida cuantitativa de las clulas
productoras de anticuerpo contra un antgeno.

Las placas que se obtienen directamente, representan principalmente clulas que producen IgM,
pues este anticuerpo tiene una alta eficiencia hemoltica. Para demostrar clulas que sintetizan
IgG, es necesario favorecer la unin del complemento al complejo eritrocito- anticuerpo IgG,
aadiendo antes suero anti-IgG de conejo; esta tcnica constituye la llamada de (placas
indirectas) y se utiliza para identificar distintas clulas, que fabriquen anticuerpos pertenecientes
a diferentes subclases, suponiendo que se posea los antisueros de conejo apropiados. Este
mtodo es de amplia aplicacin, al ser posible recubrir la superficie del eritrocito con
multiplicidad de antgenos como el polisacrido de neumococo, o uniendo grupos haptnicos a la
superficie del eritrocito.

La tcnica tiene diferentes usos, uno de ellos es demostrar, en forma experimental, la
sensibilizacin previa de una animal frente a un antgeno, estudiando in-vitro la capacidad de los
linfocitos B para producir anticuerpos, y analizando el fenomeno de la interaccion celular
requerida tanto durante la presentacaion del antigeno como en el proceso de activacion de la
clula B por la clula T.

Modificaciones de la tcnica de Jerne

Se han realizado diversas modificaciones a la tcnica original de Jerne, entre las que se
encuentran las siguientes:

Golub, Mishell y Dutton: Esta modificacin emplea toxoide de difteria, con la finalidad de obtener
una mayor cantidad de anticuerpos.

Schwartz Braun: Es una prueba con bacterina, emplea E.coli muertas por calor. Se lleva a cabo con
clulas del bazo + E. col viva + agar+MEM. Se le adiciona complemento y permite

Nossal, Warner y Lewis: Inmuniza a conejo con Salmonella typhi; emplea Clulas de ganglios
linfticos, Sangra al conejo a los 5 das y un segundo conejo a los 21 das Observa una primera
respuesta que es IgM (respuesta primaria) y IgG (respuesta secundaria).

Cunningham y Szemberg: Emplea portaobjetos en lugar de placas, no utiliza azarosa. Emplea
clulas+GRG+MEM.


Referencias:

Bellanti A.J. Inmunologa. 3 Ed. Mxico: Panamericana, 1986: 188-192.
Goldsby R. A. et al. Inmunologa. 5 Ed. Mxico: Mac Graw Hill, 1992: 154-155.
Rojas E. O. Inmunologa de memoria.2 Ed. Mxico: Panamericana, 2001:162-163.
Stites P.D. inmunologa humana y bsica. Mxico: Panamericana, 1994: 351-352.

























































































Es evidente que la penetracin de sustancias
extraas en el organismo, en forma natural o
inducida, ya sean bacterias o sustancias
qumicas de naturaleza proteica, estimulan el
desarrollo de otras sustancias, los anticuerpos,
que reacciona con la sustancia estimulante o
antgena.

Los hematies de oveja y otros se han
utilizado no solo en ensayos directos si no
tambin como portadores de numerosos
antgenos capaces de fijarse qumicamente a
su superficie
La tcnica de placa de Jerner ha tenido
buena aceptacin para determinar el
desarrollo de clulas productoras de
anticuerpo en el bazo de un ratn durante la
induccin de una respuesta inmune, la
tcnica presenta ventajas de detectar
pequeos nmeros de clulas productoras
de anticuerpo, entre poblaciones de gran
tamao. Mishell y Dutton han aplicado una
tcnica que se basa en los linfocitos de la
sangre perifrica para medir la produccin in
vitro de anticuerpos para eritrocitos de oveja
Los rganos linfoides se clasifican de
la siguiente forma:















La funcin de los rganos primarios
es nica e imprescindible; mientras que
de los secundarios redundante y
prescindible.

Los rganos secundarios son sitios
donde ocurre el contacto entre las
clulas linfoides y los antgenos. El
contacto entre estos elementos induce a
la proliferacin celular y la sntesis de los
mediadores solubles de la respuesta
inmune (anticuerpos y citocinas). El Bazo
se divide en pulpa blanca rica en
folculos linfoides y centros germinales y
pulpa roja abundante en macrfagos,
eritrocitos, escasos linfocitos y clulas
plasmticas.

Los anticuerpos de la clase IgM son
terceros en cuanto su concentracin en
sangre. Su estructura polimrica les
confiere gran capacidad neutralizante de
las toxinas y aglutinante de los
microorganismos. Slo esta clase de
anticuerpos de las IgG son capaces de
activar el sistema del complemento por la
llamada va clsica; ste tipo de
anticuerpo es el predominante en las
etapas tempranas de las respuestas
inmunes primarias.

La tcnica de Jerne est basada es
una hemlisis localizada, como se puede
apreciar en la siguiente figura:













evaluar bacterinas por tiempo.

Modificaciones de la tcnica de Jerne

Se han realizado diversas
modificaciones a la tcnica original de
Jerne, entre las que se encuentran las
siguientes:

Golub, Mishell y Dutton: Esta
modificacin emplea toxoide de difteria,
con la finalidad de obtener una mayor
cantidad de anticuerpos.

Schwartz Braun: Es una prueba con
bacterina, emplea E.coli muertas por
calor. Se lleva a cabo con clulas del
bazo + E. col viva + agar+MEM. Se le
adiciona complemento y permite
Nossal, Warner y Lewis: Inmuniza a
conejo con Salmonella typhi; emplea
Clulas de Ganglios linfticos, Sangra al
conejo a los 5 das y un segundo conejo
a los 21 das Observa una primera
respuesta que es IgM (respuesta
primaria) y IgG (respuesta secundaria.
Cunningham y Szemberg: Emplea
portaobjetos en lugar de placas, no utiliza
azarosa. Emplea Clulas+GRG+MEM
+C, es una tcnica sensible, observa
anticuerpos aglutinantes.

Poduval: Emplea Toxoide de difteria,
linfocitos +GR sensibilizados +MEM+ C,
Se obtiene hemoglobina liberada que se
cuantifica con medidor de ELISA; la
evaluacin de anticuerpos se hace en
base a la hemoglobina liberada

Las aplicaciones que tiene la
tcnica de Jerne son mltiples, entre
las cuales se encuentra la deteccin
de enfermedades infecciosas,
alergias, enfermedades autoinmunes,
compatibilidad en trasplantes,
estudios de endocrinologa, y el
estudio de vacunas tanto para
bacterias como para virus.