UNIVERSIDAD RAFAEL LANDIVAR

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

Material recopilado, adaptado y editado por:
I!a" Li#$et% Carra&a de M'de&
()ate*ala, eero de +,,-"
LABORATORIO DE BIOQUIMICA
El la$oratorio de BIOQUIMICA tiee co*o prop.#ito itrod)cir al e#t)diate de Ciecia# de la
Sal)d a la e/peri*etaci. 0)1*ica $iol.!ica co*o parte del proce#o de co#olidaci. de
cooci*ieto# te.rico# ad0)irido# e lo# c)r#o# $2#ico#" Se i*parte #i*)lt2ea*ete co el
c)r#o te.rico"
OB3ETIVO DEL LABORATORIO
El al)*o co*preder2 la i*portacia de la i4e#ti!aci. e/peri*etal, tato para la !eeraci.
de )e4o cooci*ieto, co*o para la co5ir*aci. de cooci*ieto# te.rico# ad0)irido# a tra4'#
del apredi&a6e e el a)la, a#1 co*o la i*portacia de #e!)ir la# *edida# de #e!)ridad al e#tar
detro de ) la$oratorio de Q)1*ica
1
INSTRUCCIONES (ENERALES
LABORATORIO DE BIOQU7MICA
El la$oratorio #e ec)etra or!ai&ado co tre# di5erete# #e#ioe#:
SESION 8:
Recorrido por la# i#talacioe# del Tecol.!ico y recooci*ieto de lo# la$oratorio#
a#i!ado#
Re!i#tro de al)*o# para di#tri$)ci. de lo# !r)po# de la$oratorio
SESION +:
A#i!aci. de lo# !r)po# de la$oratorio y *e#a# de tra$a6o
Se e#t)diar2 la# re!la# de #e!)ridad y or*a# de tra$a6o e el la$oratorio, a#1 co*o la
peli!ro#idad de la# #)#tacia# e ideti5icaci. y )#o del e0)ipo $2#ico de #e!)ridad"
Se e/plicar2 lo relacioado co la redacci. de ) i5or*e de la$oratorio, ci5ra#
#i!i5icati4a#, to*a de dato#, reali&aci. de c2lc)lo# de icertid)*$re# y aotaci. de
o$#er4acioe# i*portate#"
SESION 9 EN ADELANTE:
Se reali&ar2 4aria# pr2ctica# de la$oratorio, la# c)ale# e#tar2 e#tr)ct)rada# de la #i!)iete
*aera:
Acti4idad tie*po
I!re#o y etre!a de prepractica, dia!ra*a de 5l)6o y reporte po#tpractica : *i)to#
Re4i#i. de e0)ipo de la$oratorio : *i)to#
Reali&aci. del e/a*e corto : *i)to#
I#tr)ccioe# !eerale# de la practica : *i)to#
Reali&aci. de la practica de la$oratorio :: *i)to#
Etre!a de re#)ltado# de la practica : *i)to#
Sello y 5ir*a del *a)al de la$oratorio : *i)to#
De4ol)ci. del e0)ipo de la$oratorio : *i)to#
8" MATERIAL DE LABORATORIO
El e#t)diate c)eta e la *e#a de tra$a6o a#i!ada co )a $ade6a co EQUI;O <
REACTIVOS de la$oratorio, del c)al e# re#po#a$le" Al iicio y al 5ial de cada #e#i., el
e#t)diate de$e re4i#ar #) !a4eta para cerciorar#e 0)e todo e#t' co*pleto y e $)e e#tado y
e ca#o cotrario, de$e reportarlo co el a)/iliar ate# de iiciar la pr2ctica"
Todo e#t)diate 0)e 0)ie$re o da=e al!> *aterial, aparato o e0)ipo, de$e repoerlo, #ie*pre y
c)ado c)*pla co la# e#peci5icacioe# del e0)ipo da=ado y pre#etado la 5act)ra de co*pra
re#pecti4a"
+" REQUISITOS ;ARA REALI?AR LAS ;R@CTICAS
E# i*portate 0)e el e#t)diate te!a pre#ete, 0)e de$e c)*plir co lo# #i!)iete# re0)i#ito#
para la reali&aci. de la# pr2ctica#, de otra *aera #e le aotar2 )a a)#ecia i6)#ti5icada:
Bata de al!od. A*a!a lar!a y de$a6o de la# rodilla#B y toallaCli*piador
2
Lete# de #e!)ridad
F.#5oro#, eti0)eta# o *arcador c)ado #e re0)iera"
El Ma)al de La$oratorio
Al i!re#ar al la$oratorio:
Lle4ar %ec%o el dia!ra*a de 5l)6o del procedi*ieto 0)e corre#pode a la pr2ctica e el
l)!ar 0)e idica el i#tr)cti4o"
Etre!ar i5or*e de la pr2ctica aterior A#i aplicaB"
Aotar e el eca$e&ado de la pr2ctica la 5ec%a de reali&aci. de la pr2ctica y el
>*ero de !r)po de la$oratorio"
Da$er e#t)diado y co*predido el procedi*ieto de la pr2ctica a reali&ar, ate# de
etrar al la$oratorio y co*pletar lo 0)e el c)e#tioario pre4io le idi0)e, #olicitado el
#ello del departa*eto al *o*eto de i!re#ar a la pr2ctica"
Toda o$#er4aci. o c2lc)lo reali&ado d)rate la pr2ctica de$er2 aotarlo e el l)!ar 0)e
idica e el i#tr)cti4o y #olicitar el #ello de la )idad al 5iali&ar la pr2ctica"
Ate# de retirar#e del la$oratorio, de$er2 pedir al a)/iliar del la$oratorio 0)e re4i#e #)
!a4eta de la$oratorio para la e/teder la #ol4ecia"
Lle4ar ) 5.lder co 5a#teer A!ac%oB para colocar lo# i5or*e# de cada )a de la#
pr2ctica# de la$oratorio 0)e el i#tr)ctor le 4aya etre!ado re4i#ado#"

9" ASISTENCIA
La a#i#tecia e# o$li!atoria, #e pierde el derec%o i!re#ar al la$oratorio Ay #e pierde el derec%o
de e/a*e 5ial del c)r#oB co *2# de + a)#ecia# 6)#ti5icada# o i6)#ti5icada# Si ) e#t)diate
5alta a )a #e#i. de la$oratorio, o tedr2 derec%o a repoer, a)0)e la a)#ecia #ea
6)#ti5icada" Se co#idera )a a)#ecia 6)#ti5icada pre#etar )a e/c)#a por tra$a6o o certi5icado
*edico"
E" EVALUACIFN
La ota del la$oratorio #e o$tiee de la #i!)iete *aera:
;ara e5ecto de o$teer el pro*edio de la ota de i5or*e# y e/2*ee# corto#, la# a)#ecia#
6)#ti5icada# o #e co#iderar2 e el >*ero total"
Reporte de la$oratorio:
El i5or*e de la$oratorio de$e ela$orar#e de ac)erdo co el 5or*ato dado para cada
pr2ctica y etre!ar#e al 5iali&ar la #e#i. o c)ado el i#tr)ctor #e lo idi0)e"
E/2*ee# corto#
Lo# e/2*ee# corto# e4al>a el c)e#tioario pre4io, el a#pecto te.rico, el procedi*ieto, re!la#
y or*a# de #e!)ridad, t'cica# y e0)ipo de la$oratorio, trata*ieto e#tad1#tico de dato#" El
e/a*e p)ede #er oral o e#crito"
Sello# e el i#tr)cti4o: toda practica reali&ada de$er2 #er #ellada y 5ir*ada por el a)/iliar de
la$oratorio y #er4ir2 co*o cotrol de a#i#tecia y de derec%o al reporte po#t practica"
:" ASISTENCIACCOM;ORTAMIENTO LABORATORIO
E toda# la# practica# de la$oratorio# #e e4al)ar2 la aplicaci. correcta de la# re!la# de
#e!)ridad y la# t'cica# de la$oratorio, do*iio de la teor1a, o$6eti4o# y procedi*ieto# de la
pr2ctica a reali&ar y co*porta*ieto per#oal detro del *i#*o"
NOTA: Si ) e#t)diate co*ete 5ra)de e al!)o de lo# co*poete# de la e4al)aci. y
de#arrollo de la pr2ctica, #e act)ar2 co5or*e al RE(LAMENTO DE NORMAS DE
CONVIVENCIA de la URL"
-" CONTENIDO DEL INFORME DE LABORATORIO
C)ado #e idi0)e, de$er2 etre!ar i5or*e co lo# #i!)iete# coteido# e el orde detallado
y la )*eraci. re#pecti4a:
CONTENIDO ;UNTEO
I" S)*ario 8:
3
II" O$6eti4o# 8:
III" Re#)ltado# y O$#er4acioe# +,
IV" Iterpretaci. de Re#)ltado# 9,
V" Cocl)#ioe# 8,
VI" Bi$lio!ra51a ,:
VII" Ae/o# Ac)ado apli0)eB ,:
;ara apreder #o$re el coteido de cada )a de la# #eccioe# co#)ltar la #i!)iete re5erecia:
(UIA (ENERAL ;ARA REALI?AR TRABA3OS DE INVESTI(ACION EN LA URL, Co*pedio
de L)i# Ac%eradio S)a&o y Dilda Ca$allero# de Ma&arie!o#" UNIVERSIDAD RAFAEL
LANDIVAR, VICERRECTORIA ACADEMICA"
G" DESCRI;CION (ENERAL DE LAS ACTIVIDADES RELACIONADAS CON LAS
;RACTICAS DE LABORATORIO
E cada )a de la# pr2ctica# #e ec)etra lo# #i!)iete# coteido#:
I" SECCION DE OB3ETIVOS
El al)*o de$e leer pre4ia*ete lo# o$6eti4o# relacioado# co la pr2ctica y to*arlo# e c)eta
d)rate el de#arrollo de la *i#*a" A#1 *i#*o de$er2 e#t)diar e #) li$ro de te/to lo# pricipio#
e 0)e #e 5)da*eta la pr2ctica y el procedi*ieto a #e!)ir"
II" SECCION DE INSTRUCCIONES ;REC;RACTICA
El al)*o de$e leer la# re5erecia# citada# y cote#tar la# pre!)ta# detallada# e cada
pr2ctica ate# del d1a de i!re#o a la pr2ctica relacioada, de$e etre!ar #) i#tr)cti4o al
i#tr)ctor de la$oratorio para #) #ello corre#podiete" E#te #ello e# re0)i#ito para #) i!re#o a
la$oratorio" El al)*o 0)e o %aya co*pletado la #ecci. NO TENDRA DERECDO A
IN(RESAR AL LABORATORIO, por lo tato '#ta #e co#idera co*o )a ia#i#tecia"
E e#ta #ecci., c)ado el ca#o lo a*erite, el al)*o de$er2 etre!ar ) re#)*e o ) i5or*e
de i4e#ti!aci. pre4io al i!re#o a la$oratorio, o $ie )a %o6a de #e!)ridad del prod)cto o
prod)cto# 0)1*ico# 0)e 4a a )tili&ar#e d)rate la pr2ctica" VEA EN LA SECCION DE ANEHOS
) *odelo de %o6a# de #e!)ridad"
III" AL IN(RESO A LA ;R@CTICA
LA ASISTENCIA DEBE SER ;UNTUAL AL LABORATORIO
INDIVIDUAL:
CE/a*e corto: relacioado co el te*a de la pr2ctica Ateor1a o procedi*ieto e/peri*etalB"
EN (RU;O:
8" Etre!a de Dia!ra*a de 5l)6o A#i aplica, del procedi*ieto e/peri*etalB VEA EN LA
SECCION DE ANEHOS ) *odelo de dia!ra*a de 5l)6o"
IV" DESARROLLO DE LA ;R@CTICA
8" Se!)ir i#tr)ccioe# del dia!ra*a de 5l)6o y aotar la# *odi5icacioe# re#pecti4a# #i el
ca#o lo a*erita"
+" Aotar DATOS y la# OBSERVACIONES del e/peri*eto de 5or*a i*ediata e la %o6a
corre#podiete, NUNCA trate de *e*ori&ar lo# re#)ltado#, de$e aotarlo# co
$ol1!ra5o"
9" Cote#tar la# pre!)ta# del c)e#tioario Ac)ado #e idi0)eB
V" AL SALIR DEL LABORATORIO
8" Sellar %o6a de cotrol de a#i#tecia a la practica
4
+" Etre!a de e0)ipo li*pio y co*pleto Atodo e0)ipo da=ado de$e repoer#e 8 #e*aa
de#p)'# co*o *2/i*o para poder teer derec%o a i!re#ar a la #i!)iete pr2cticaB
VI" INSTRUCCIONES ;OSTC;R@CTICA
8" Cote#tar pre!)ta# del c)e#tioario o e#cri$ir ) reporte de la$oratorio #e!> #e detalle
e cada )a de la# pr2ctica#, la etre!a e# o$li!atoria"
REGLAMENTO DE LABORATORIOS PARA ESTUDIANTES, TESISTAS E
INVESTIGADORES
CAPITULO I
Disposiciones Generales.
ARTCULO ! Este Reglamento es de observancia general y obligatoria para
estudiantes y toda persona autorizada que se encuentre dentro de las
instalaciones del laboratorio.
ARTCULO "! Alcance: Complejo de laboratorios TEC (Facultades de: Ciencias
de la salud !ngenier"a Ambientales y Agr"colas Ciencias #ur"dicas y $ociales%.
CAPITULO II
Nor#as Generales.
a% &os estudiantes deber'n acatar las normas de conducta siguientes:
ARTCULO $! (o se permiten el ingreso ni el consumo de alimentos y bebidas
al laboratorio.
ARTCULO %! (o se permite la mani)estaci*n a)ectiva entre los compa+eros de
laboratorio que pongan en riesgo la seguridad.
ARTCULO &! ,antener celulares y localizadores personales apagados durante
la pr'ctica del laboratorio.
ARTCULO '! -ueda estrictamente pro.ibido los juegos bromas correr dentro
del laboratorio as" como darle otro uso al equipo y/o materiales que no sean el
destinado para las pr'cticas.
ARTCULO (! 0ara la ejecuci*n de pr'cticas de laboratorio que no sean las
ordinarias deber' contar con la supervisi*n de un docente o au1iliar.
5
b% &os estudiantes deber'n acatar las normas de seguridad siguientes:
ARTCULO )! &as puertas e1teriores e interiores deber'n estar siempre libres
de obst'culos accesibles y en posibilidad de ser utilizadas ante cualquier
eventualidad.
ARTCULO *! 2eber' utilizar vestuario adecuado: zapatos cerrados bajos
pantalones largos cabello recogido no usar ropa .olgada joyer"a grande ni
gorras.
ARTCULO +! El equipo de protecci*n personal es obligatorio para realizar una
pr'ctica de laboratorio.
ARTCULO ! &os alumnos que trabajan en cada laboratorio deber'n conocer
las medidas de seguridad establecidas as" como la ubicaci*n de e1tintor contra
incendio duc.a lava3ojos control maestro del gas interruptores de corriente de
seguridad ()lipones% llave maestra del suministro de agua.
c% (ormas de ingreso:
ARTCULO "! Todo usuario debe observar y respetar el .orario asignado para
los laboratorios.
ARTCULO $! 2ebe presentarse obligatoria y puntualmente a todas las sesiones
del laboratorio.
ARTCULO %! 2eber' contar con aceptables condiciones de salud y no debe
encontrarse bajo e)ectos de cualquier medicamento droga o bebida alco.*lica
que pueda disminuir su capacidad de concentraci*n y que ponga en riesgo la
seguridad del laboratorio.
ARTCULO &! El estudiante deber' llevar a la estaci*n de trabajo 4nicamente
los accesorios necesarios para su pr'ctica. &os bolsones bolsas y otras
pertenencias las deber'n dejar en el 'rea asignada para este e)ecto.
ARTCULO '! se pro."be el ingreso de personas ajenas al laboratorio y la salida
temporal de los alumnos.

d% (ormas de operaci*n:
ARTCULO (! &as gu"as o manuales de cada laboratorio son de uso obligatorio
para realizar el proceso de ense+anza3aprendizaje. 2ebe leer las pr'cticas de
laboratorio antes de ingresar a la misma porque ser'n sujetos a evaluaci*n seg4n
criterio del catedr'tico.
ARTCULO )! &os laboratorios se encuentran en condiciones adecuadas de
)uncionamiento y limpieza el cuidado y conservaci*n del mismo es
responsabilidad del usuario que permanezca en 5l.
ARTCULO *! En caso de alg4n desper)ecto o problemas con el equipo se
deber' in)ormar al encargado de laboratorio inmediatamente.
ARTCULO "+! Antes de operar cualquier equipo el alumno debe estar seguro
que sabe cual es el )uncionamiento adecuado. En caso que no este seguro es su
responsabilidad preguntar al encargado.
ARTCULO "! Antes de utilizar cualquier equipo debe llenar el )ormato de control
en el caso que sea aplicable.
ARTCULO ""! 0ara retirar equipo en calidad de pr5stamo deber' llenar una
solicitud y contar con la aprobaci*n de coordinaci*n. 2e no devolver el equipo y
cristaler"a en las condiciones que se le entrego deber' reponerlo.
6
ARTCULO "$! $e asignar' a cada alumno una estaci*n de trabajo no esta
permitido utilizar otra posici*n sin el permiso del catedr'tico. &a cual debe quedar
limpia y seca al terminar cada pr'ctica y el material usado lavado.
ARTCULO "%! En los laboratorios donde sea aplicable al concluir la pr'ctica
deber' lavarse las manos.
CAPITULO III
Acci,en-es
ARTCULO "&! En caso de accidente se deber' proceder lo m's pronto posible
para brindar la atenci*n necesaria bajo las instrucciones del catedr'tico o
encargado. Comunic'ndose de ser necesario a las e1tensiones de emergencia
6666 Cl"nica de $alud 7879 o se acudir' a Alerta ,edica T/9:99 ;omberos
T/97<.
CAPITULO IV
Sanciones.
ARTCULO "'! El incumplimiento del presente reglamento llevara a que la
persona sea sancionada por el docente de la siguiente manera:
a. 0rimera Amonestaci*n: verbal.
b. $egunda Amonestaci*n: e1pulsi*n de la pr'ctica y
c. =na tercera vez se noti)icara a la )acultad para sancionarlo en la clase
respectiva. En todos los casos se enviar' un reporte escrito a la =nidad
de (ormas de Convivencia Estudiantil >=(CE3.
d. El alumno que no posea el vestuario y equipo de protecci*n adecuados
para la pr'ctica de laboratorio no podr' realizar la pr'ctica con la perdida
de los puntos correspondientes.
CAPITULO V
Si-.aciones Especiales.
ARTCULO "(! Cualquier situaci*n no prevista en el presente reglamento deber'
ser presentada ante la autoridad que aprueba el reglamento.
CAPITULO VI
Nor#as espec/0icas para la1ora-orios 2.e .-ilicen Reac-i3os
ARTCULO ")! &as pr'cticas que requieren uso de sustancias t*1icas necesitan
una preparaci*n previa. Al iniciar la pr'ctica deber'n conocer la to1icidad de las
sustancias sus caracter"sticas manipulaci*n adecuada y su disposici*n )inal.
ARTCULO "*! Toda sustancia t*1ica o in)lamable debe almacenarse siempre en
'reas espec")icas y per)ectamente se+aladas. El trabajo con sustancias t*1icas o
vol'tiles deber' .acerse dentro de las campanas de e1tracci*n localizadas en
cada laboratorio. (unca deber'n tomarse )rascos por la tapa o el asa lateral.
$iempre deber'n tomarse con ambas manos una en la base y la otra en la parte
media.
ARTCULO $+! (unca pruebe ni .uela las sustancias qu"micas a menos que el
procedimiento lo se+ale.
7
ARTCULO $! &a manipulaci*n de 'cidos concentrados debe realizarse dentro
de la campana de e1tracci*n.
ARTCULO $"! 0ara medir vol4menes de 'cidos o bases concentrados use
probetas o buretas nunca pipetas ni pipeteadores mec'nicos.
ARTCULO $$! (unca mezcle sustancias desconocidas a menos que el
procedimiento lo indique.
ARTCULO $%! Cuando prepare sustancias qu"micas no altere la t5cnica
establecida para ello. =na vez preparada la soluci*n debe rotularla indicando
composici*n concentraci*n )ec.a nombre y el nombre de la persona que la
prepar*.
ARTCULO $&! Antes de usar un reactivo qu"mico o una soluci*n lea
cuidadosamente la etiqueta para identi)icar el contenido tome e1actamente la
cantidad necesaria y tape el recipiente.
ARTCULO $'! (unca devuelva sobrantes de sus mediciones a los )rascos
originales para evitar contaminaci*n.
ARTCULO $(! Al dejar de usar los reactivos o soluciones regr5selos a su lugar
de almacenamiento esto )acilitar' su trabajo e1perimental y el de sus
compa+eros.
ARTCULO $)! Tenga siempre su mesa de trabajo con el m"nimo de riesgos
potenciales. En casos de derrame limpie inmediatamente con una toalla .4meda.
ARTCULO $*! En caso de salpicadura de un 'cido o una base en la piel o en la
bata enju'guelo inmediatamente. E1cepto en el caso de 'cido sul)4rico ya que
deber' enjuagarse con una soluci*n de bicarbonato de sodio.
ARTCULO %+! &as sustancias vol'tiles los desec.os org'nicos requieren
tratamiento especial y no se deben desec.ar en el lavatrastos. (unca debe
mezclar desec.os org'nicos con 'cidos y o1idantes. &os desec.os qu"micos se
deben poner en botellas apropiadas y rotuladas. 2esec.e todas las sustancias
siguiendo las indicaciones del catedr'tico o instructor siempre .abr' un envase
en la campana de e1tracci*n rotulado.
ARTCULO %! &as sustancias no t*1icas no in)lamables y solubles en agua
pueden ponerse en el lavatrastos siempre usando cantidades grandes de agua
para lavarlos del sistema. $i .ay alguna duda pregunte a su au1iliar o instructor.
ARTCULO %"! Cuando se calientan soluciones o sustancias que desprenden
gases corrosivos o t*1icos debe usarse la campana de e1tracci*n.
ARTCULO %$! &os procesos de evaporaci*n deben ser vigilados continuamente
ya que un recipiente calentado despu5s de que se evapore el l"quido que
contiene puede rajarse o e1plotar.
8
PRACTICA NO. 1
AMINOACIDOS I
TITULACION DEL ACIDO GLUTAMICO

I" OB3ETIVOS
+"
Coocer la# di5erete# 5or*a# e 0)e p)ede e/i#tir lo# a*io2cido#"
Deter*iar el p)to i#oel'ctrico de ) a*io2cido a partir de )a !r25ica"
II" ;REC;RACTICA
E#t)die el cocepto de AMINOACIDOS, SU CLASIFICACION < EL SI(NIFICADO DE ;UNTO
ISOELECTRICO"
Da!a )a cla#i5icaci. de ali*eto# a!r1cola# 0)e #e c)lti4a e ()ate*ala y 0)e cotiee
a*io2cido# y e#cri$a ) detalle e 5or*a de ta$la"
III" EQUI;O < REACTIVOS
+ B)reta de :,*L
8 6)e!o de pi&a# de $)reta
+ 4a#o# de precipitado# de E,, *L
8 $al. a5orado de +:, *L
+ pipeta# 4ol)*'trica# de 8, *L
+ *atrace# de +:, *L
8 4arilla de a!itaci.
8 4idrio de relo6
8 e#p2t)la
8 poteci.*etro
8 $ala&a
Marcador Aal)*o#B
Cita ad%e#i4a Aal)*o#B
A!)a de#tilada
Acido Clor%1drico 8M
Didr./ido de Sodio 8 M
(l)ta*ato *oo#.dico 8I
Feol5taleia
V" ;ROCEDIMIENTO EH;ERIMENTAL
;ROCEDIMIENTO A
;repare +:, *L de )a #ol)ci. de !l)ta*ato *oo#.dico 8 M, )#e a!)a de#tilada a pD G
co*o di#ol4ete"
Deter*ie el 4alor de pD de la #ol)ci. preparada
To*e do# al1c)ota# de 8,*L cada )a, de la #ol)ci. y col.0)ela# e 4a#o de precipitado#
#eparado#
Al pri*er 4a#o de precipitado# adicioe ) 4ol)*e de NaOD 8 M, %a#ta 0)e la #ol)ci.
alcace ) ;D 88" Aote el 4ol)*e a!re!ado" ()arde e#te 4a#o de precipitado#
Aideti510)elo rot)l2doloB 0)e #er2 )tili&ado para el ;ROCEDIMIENTO B"
Al #e!)do 4a#o de precipitado# adicioe ) 4ol)*e de a!)a de#tilada de pD G
apro/i*ada*ete i!)al al 4ol)*e de NaOD a!re!ado e ici#o E" Ideti5i0)e el 4a#o de
precipitado# y aote el 4alor de pD de e#ta )e4a #ol)ci."
Colo0)e e )a $)reta )a #ol)ci. de DCl 8 M
Iicie la tit)laci., a!r'!)elo# 4ol>*ee# de DCl #e!> lo idi0)e el i#tr)ctor
;ROCEDIMIENTO B
Iicie la tit)laci. co DCl 8 M co la #ol)ci. ideti5icada del ;ROCEDIMIENTO A"
CUESTIONARIO ;OST ;RACTICA
a" Co#tr)ya )a !r25ica de tit)laci. del 2cido !l)t2*ico co DCl co lo# dato# o$teido# e la
pri*era y #e!)da parte de la pr2ctica ApD 4r#" Vol)*e de DCl a!re!ado, pD 4r#" Vol" DClB
$" Deter*ie e 5or*a !r25ica el p)to i#oel'ctrico ApD 4r#" 4ol)*e de DCl a!re!adoB
9
c" U$i0)e la# re!ioe# 0)e #e pre#eta e la !r25ica y localice la# 5or*a# i.ica# del 2cido
!l)t2*ico 0)e e/i#te d)rate la tit)laci., deri4ada# de lo# !r)po# al5a y $eta Acar$o/iloCa*ioB
d" E#cri$a la reacci. de ioi&aci. del 2cido !l)t2*ico
PRACTICA No. 2
PROTEINAS
AISLAMIENTO DE CASEINA DE LECHE

I" OB3ETIVOS
Separar y di5ereciar lo# di#tito# co*poete# de la lec%e
II" INSTRUCCIONES ;REC;R@CTICA
TRAER MUESTRA DE LECDE DE DIFERENTE ORI(EN ACABRA, VACA, ETC"B, $)#car la
cocetraci. apro/i*ada de la ca#e1a de 5)ete ai*al e !Jl"
LEER DOCUMENTOS SOBRE: CASEINA A0)' e#, de dode #e o$tiee, cocetraci., 5)eteB
III" EQUI;O < REACTIVOS
Va#o de precipitado# de 8,, *L
(otero#
E#p2t)la
;apel idicador de pD
Cetr15)!a de *e#a y t)$o# c.ico# de 8: *L
E#t)5a
Matra& Kita#ato
E*$)do B)c%er
Bo*$a de 4ac1o
;apel 5iltro
Ba=o Maria
REACTIVOS
Lec%e Aal)*o#B
Sol)ci. de Acido Ac'tico al 8,I
Etaol al L-I
lV" ;ROCEDIMIENTO EH;ERIMENTAL
aB colocar : *L de lec%e e ) 4a#o de precipitado# y caletar e )a e#t)5a a E,
O
C d)rate :
*i)to#"
$B A=adir !ota a !ota Acido Ac'tico al 8,I, a!itado co#tate*ete" Aali&ar *ediate papel
idicador el pD de la *e&cla, 0)e de$e #er pr./i*o a : A4er color del papel de pDB"
O$#er4ar 0)e #e prod)ce ) precipitado $laco"
cB Tra#4a#arla #)#pe#i. a t)$o# c.ico# de cetr15)!a
dB Cetri5)!ar 8, *i)to#
eB Depo#itar el #o$readate e el 4a#o de precipitado# y a=adir : !ota# de Acido Acetico 8, I
y co*pro$ar #i precipita *2#"
10
5B Filtrar a coti)aci.: re#)#peder el precipitado e la *1i*a catidad de a!)a y
depo#itarlo #o$re ) papel 5iltro Apre4ia*ete pe#adoB, 0)e #e coloca detro del e*$)do
B)c%er" E#te #e a6)#ta #o$re el *atra& Kita#ato, #e %)*edece y #e coecta a la tro*pa de
4ac1o co el 5i de 5acilitar la 5iltraci."
!B Ua 4e& #eco #i de#coectar el 4ac1o, #e a=ade 8,*L de a!)a de#tilada para la4ar el
precipitado y l)e!o #e a=ade - *L de etaol de L-I" De6ar )o# *i)to# #ecado e el
e*$)do"
%B Se to*a el 5iltro y #e coloca e la e#t)5a a 8,,
,
C d)rate 8 %ora"
iB Tra# el proce#o de #ecado #e pe#a el 5iltro A0)e cotedr2 la prote1aB"
VII" CUESTIONARIO ;OSTC;R@CTICA
;ARTE A AE/a*e CortoB
Idi0)e el tipo de lec%e )tili&ada e el e/peri*eto
Deter*ie la cocetraci. e !Jl de la ca#e1a
Deter*ie el redi*ieto de la e/tracci. AIB
PRACTICA No. 3
DESNATURALIZACION DE PROTEINAS
I" OB3ETIVO
Vi#)ali&ar a la# prote1a# por *edio de ca*$iar #) e#tr)ct)ra ati4a"
II" INSTRUCCIONES ;RE;RACTICA
Cocepto# por re4i#ar
;rote1a#, a*io2cido#, co*po#ici. 0)1*ica de la clara de %)e4o, co*po#ici. 0)1*ica de la
lec%e, 5actore# 0)e a5ecta la #ol)$ilidad de la# prote1a#, precipitaci., 5iltraci., e#tr)ct)ra
ati4a de la# prote1a# y de#at)rali&aci."
Lea la #i!)iete i5or*aci.
II"8 Itrod)cci.
La# prote1a# #o )a cla#e de $iopol1*ero# 0)e de#e*pe=a )a eor*e 4ariedad de
5)cioe#: )a# tra#porta, otra# al*acea *ol'c)la# pe0)e=a#, otra# *2# co#tit)ye !ra
parte de la or!ai&aci. e#tr)ct)ral de la# c'l)la# y lo# te6ido#" Q)i&2# la# *2# i*portate# de
toda# la# prote1a# #ea la# e&i*a# 0)e #o lo# catali&adore# 0)e pro*)e4e la eor*e
4ariedad de reaccioe# 0)e 5or*a el *eta$oli#*o" Cada tipo de c'l)la e todo# lo# or!ai#*o#
po#ee 4ario# *ile# de cla#e# de prote1a# para c)*plir la !ra 4ariedad de 5)cioe#"
;ara *ateer la *)ltiplicidad de #)# 5)cioe#, la# prote1a# #o *ol'c)la# e/tre*ada*ete
co*ple6a# 0)e tiee )a e#tr)ct)ra deter*iada 5or*ada por la #ec)ecia de5iida de )idade#
de e#tr)ct)ra 0)1*ica co*)e# a toda# la# prote1a# y 0)e #o lo# a*io2cido#" La# prote1a#
tiee )a e#tr)ct)ra tridi*e#ioal e#pec15ica dada por ple!a*ieto# de #) cadea, dic%a
e#tr)ct)ra de$e *ateer#e para 0)e la prote1a e6er&a #) 5)ci., e#to i*plica 0)e e/i#ta
iteraccioe# etre lo# a*io2cido# 0)e co5or*a la# prote1a# y la# *ol'c)la# del *edio
Aa!)a 5)da*etal*eteB, ad0)iriedo )a co5or*aci. at)ral de *2/i*a e#ta$ilidad la c)2l
o de$e perder#e"
III" MATERIAL < EQUI;O
D)e4o cr)do Aal)*o#B
S)l5ato de a*oio #.lido
Lec%e 5re#ca Aal)*o#B
11
Sal
A!)a
Dielo
Fra#co# pe0)e=o# de 4idrio Aal)*o#B
Li*. Aal)*o#B
Va#o de precipitado# para $a=o de Maria
Via!re Blaco Aal)*o#B
;apel 5iltro para ca5etera Aal)*o#B
Va#o# de precipitado#
T)$o# de e#ayo
Ba=o de *ar1a
Color 4e!etal Aal)*o#B
Acetoa
Alco%ol
(otero#
E#p2t)la
A!itador
IV" ;ROCEDIMIENTO
8"CCAMBIO DE SOLVENTE
C Ro*per co c)idado por la *itad ) %)e4o 5re#co
C E#c)rrir la clara a ) 5ra#co
C ;oer ) poco de clara de %)e4o e ) 4a#o de precipitado# y a!re!ar a!)a
C Me&clar #)a4e*ete
C De6ar !otear acetoa %a#ta otar ) ca*$io
C Aotar lo 0)e #e o$#er4a
+"C CAMBIO DE TEM;ERATURA
C A!re!ar a!)a a ) 4a#o de precipitado# para $a=o de Maria apro/i*ada*ete a la *itad y
poer a caletar
C Colocar e )a *atra& ) poco de la clara de %)e4o o$teida y a!re!arle# a!)a
C A!itar para 0)e #e *e&cle
C Itrod)cir el *atra& e el $a=o de Maria c)ado el a!)a e#t' %ir4iedo y de6ar + *i)to#
C Co *)c%o c)idado #acar el *atra& y o$#er4ar 0)e %a #)cedido co el %)e4o
9"C CAMBIO DE pD
C E do# *atrace# de#ec%a$le# tra#parete# colocar %a#ta la *itad lec%e 5re#ca
C Marcar cada )o de lo# *atra& co lo# >*ero# 8 y +
C A!re!ar )a# !ota# de color 4e!etal a a*$o# *atrace# y a!itar
C Al *atra& 8, a!re!ar poco a poco co ay)da de ) !otero la *i#*a catidad de 4ia!re $laco
y *e&clar #)a4e*ete
C Al *atra& +, a!re!ar la *i#*a catidad de 6)!o de li*. y *e&clar
C O$#er4ar lo 0)e acotece e lo# *atra& y de6ar repo#ar )o# +, *i)to#
C Filtrar co la ay)da de ) colador y papel 5iltro por #eparado cada )o de lo# *atrace#
C Reci$ir el l10)ido e 5ra#co# de 4idrio
C O$#er4ar lo# papele# 5iltro y el l10)ido 0)e #e 5iltr.
C Aotar e dode #e 0)ed. el color
E"C CAMBIO EN LA CONCENTRACIFN DE SALES
C Colocar ) poco de clara de %)e4o e )a t)$o de e#ayo
C A!re!ar ) poco de a!)a y *e&clar
C Co )a e#p2t)la a!re!ar poco a poco el pol4o del 5ertili&ate y *e&clar
C Coti)ar a!re!ado 5ertili&ate %a#ta o$#er4ar al!> ca*$io
C Dacer la# re#pecti4a# aotacioe# de lo# ca*$io# y di#c)tir #)# re#)ltado
Variate#
Utili&ar #al de *e#a e l)!ar del #)l5ato de a*oio, e5riar e l)!ar de caletar, %er4ir ) %)e4o,
5re1r ) %)e4o, e*plear alco%ol e l)!ar de la acetoa"
V" ;OSTC;RACTICA
Icl)ye: Car2t)la, Marco Te.rico, Cocl)#ioe# y Bi$lio!ra51a
De#cri$a cada )a de la# tra#5or*acioe# de la prote1a del %)e4o e cada #ecci. del
procedi*ieto" 3)#ti5i0)e cada )a de la# o$#er4acioe# aotada#"
12
PRACTICA No. 4
ENZIMAS
I" OB3ETIVO
De*o#trar 0)e la# reaccioe# $iol.!ica# o #o e#pot2ea#"
O$#er4ar y co*preder 0)e la# e&i*a# acelera y cotrola la# reaccioe# 0)1*ica# e lo#
#ere# 4i4o#"
II" INSTRUCCIONES ;REC;RACTICA
Cocepto# a re4i#ar: Catali&ador, e&i*a, reacci. 0)1*ica, reacci. e&i*2tica, acti4idad
e&i*2tica, co5actor, co#er4aci. de lo# ali*eto#"
III" EQUI;O < REACTIVOS
8, 4a#o# de#ec%a$le# tra#parete# Aal)*o#B
8 #o$re de le4ad)ra #eca de paader1a Aal)*o#B
A&>car Aal)*o#B
8 *a&aa Aal)*o#B
8 ta$leta de 4ita*ia C, Aal)*o#B
8 li*. Aal)*o#B
8 papa Aal)*o#B
Al*id. Aal)*o#B
Tapa# de re5re#co Aal)*o#B
8 $otecito de A!)a o/i!eada Aal)*o#B
Mi!a de pa Aal)*o#B
8, tapa# $laca# de re5re#co Aal)*o#B
Daria para pa#tel Aal)*o#B
A!)a
8 plac%a de caleta*ieto
Sol)ci. yodo
Dielo
IV" ;ROCEDIMIENTO
aB ;re#ecia de poli5eol o/ida#a de *a&aa
Moler )a pa#tilla de 4ita*ia C %a#ta 0)e 0)ede ) pol4o 5io
Cortar )a *a&aa por la *itad
Colocar e )a *itad de la *a&aa el pol4o de la 4ita*ia C, proc)rado 0)e 0)ede $ie
e#paciado
De6ar a*$a# *itade# de *a&aa a te*perat)ra a*$iete d)rate -, *i)to# y o$#er4ar lo#
ca*$io# de coloraci.
$B ;re#ecia de la# e&i*a# del *eta$oli#*o de la le4ad)ra
13
Colocar e E 4a#o# )a catidad i!)al del pol4o de le4ad)ra
A=adir a todo# lo# 4a#o# ) poco de a&>car y de a!)a caliete
Marcar lo# 4a#o# co lo# #i!)iete# t1t)lo#: caliete, 5r1o, 2cido y #al
U 4a#o colocarlo #o$re el %ielo
Otro 4a#o colocarlo e ) $a=o de a!)a caliete y *ateerlo a#1 ca*$iado cada cierto
tie*po el a!)a caliete del $a=o
A otro 4a#o a=adirle )a pe0)e=a catidad de 6)!o de li*.
El >lti*o 4a#o a!re!arle )a c)c%arada de #al
De6ar todo# lo# 4a#o# d)rate -, *i)to# y al 5ial o$#er4ar la acti4idad de la# e&i*a#
por la prod)cci. de $i./ido de car$oo 0)e #e 4e e la 5or*aci. de e#p)*a
cB ;re#ecia de a*ila#a #ali4al
Colocar e + tapa# $laca# de re5re#co por #eparado al*id. y *i!a6. de pa"
A=adirle a a*$a# )a# !ota# de #ol)ci. de yodo dil)ido y 4er el color a&)l 0)e #e
5or*a"
Ma#ticar ) poco de *i!a6. de pa por )o# + a 9 *i)to#"
Colocar el *i!a6. *a#ticado e )a tapa de re5re#co y a=adirle )a# !ota# de #ol)ci.
dil)ida de yodo"
O$#er4ar 0)' coloraci. #e 5or*a"
dB ;re#ecia de catala#a de papa
Colocar e ) 4a#o de#ec%a$le a!)a o/i!eada %a#ta la *itad
Cortar )a re$aada de papa
;oer la re$aada de papa e el 4a#o co el a!)a o/i!eada
Ver la acti4idad de la catala#a por el $)r$)6eo de o/1!eo 0)e #e de#prede"
VI" ;OST ;R@CTICA
Idicar e cada ca#o c)2l e# la reacci. 0)e #e e5ect>a co cada e&i*a
Idicar 0)e 5actore# p)ede alterar la acti4idad de la# e&i*a#
Idi0)e 0)e pa#o# %ay 0)e #e!)ir para la co#er4aci. de lo# ali*eto# e relaci. co la#
reaccioe# e&i*2tica#"
14
PRACTICA No. 5
RECONOCIMIENTO DE GLUCIDOS
I" OB3ETIVOS
8" Ideti5icaci. de !l>cido#"
+" Didr.li#i# del elace de ) di#ac2rido
II" ;RE;RACTICA
III" EQUI;O < REACTIVOS
M)e#tra# de !l>cido#:
(l)co#a 8I
Malto#a 8I
Lacto#a 8I
Sacaro#a 8I
Al*id. 8I
T)$o# de e#ayo
(radilla,
BeacKer#
Mec%ero"
Reacti4o de Fe%li! A y Fe%li! B
L)!ol
DCl dil)ido +,I
Bicar$oato de #odio 8,I
IV" ;ROCEDIMIENTO
Reacci. de Fe%li!:
To*ar la *)e#tra 0)e #e 0)iera aali&ar Aor*al*ete )a catidad de 9 *L"B
A=adir 8 *L" de Fe%li! A y 8 *L" de Fe%li! B" El l10)ido del t)$o de e#ayo ad0)irir2 ) 5)erte
color a&)l"
Caletar el t)$o al $a=o Mar1a o directa*ete e ) *ec%ero de La$oratorio"
La reacci. #er2 po#iti4a #i la *)e#tra #e 4)el4e de color ro6oCladrillo"
La reacci. #er2 e!ati4a #i la *)e#tra 0)eda a&)l, o ca*$ia a ) too a&)lC4erdo#o"
F)da*eto: Se $a#a e el car2cter red)ctor de lo# *oo#ac2rido# y de la *ayor1a de lo#
di#ac2rido# Ae/cepto la #acaro#aB" Si el !l>cido 0)e #e i4e#ti!a e# red)ctor, #e o/idar2 dado
l)!ar a la red)cci. del #)l5ato de co$re AIIB, de color a&)l, a ./ido de co$re AIB, de color ro6oC
aara6ado"
Reacci. del L)!ol:
E#te *'todo #e )#a para ideti5icar poli#ac2rido#" El al*id. e cotacto co )a# !ota# de
Reacti4o de L)!ol Adi#ol)ci. de yodo y yod)ro pot2#icoB to*a ) color a&)lC4ioleta
caracter1#tico"
;oer e ) t)$o de e#ayo )o# 9 *L" del !l>cido a i4e#ti!ar"
A=adir )a# !ota# de l)!ol"
Si la di#ol)ci. del t)$o de e#ayo #e tora de color a&)lC4ioleta, la reacci. e# po#iti4a"
F)da*eto: La coloraci. prod)cida por el L)!ol #e de$e a 0)e el yodo #e itrod)ce etre la#
e#pira# de la *ol'c)la de al*id."
No e# por tato, )a 4erdadera reacci. 0)1*ica, #io 0)e #e 5or*a ) co*p)e#to de icl)#i.
0)e *odi5ica la# propiedade# 51#ica# de e#ta *ol'c)la, apareciedo la coloraci. a&)l 4ioleta"
Ba#2dote e e#ta caracter1#tica te 4oy a propoer ) pe0)e=o 6)e!o de *a!ia 0)e te 4a a
#orpreder:
Ua 4e& 0)e te!a# el t)$o de e#ayo co el al*id. y el l)!ol, 0)e te %a$r2 dado )a
coloraci. 4ioleta, calieta el t)$o a la lla*a y d'6alo e5riar"
V)el4a a caletar y e5riar c)ata# 4ece# 0)ieraM Md.de e#t2 el colorM
15
INVESTI(ACION DE A?UCARES REDUCTORES
;oer la# *)e#tra# de !l>cido# e lo# t)$o# de e#ayo"
Reali&ar la ;r)e$a de Fe%li! co*o #e idica al pricipio de p2!ia"
De#p)'# de caletar o$#er4ar lo# re#)ltado#" E#to# re#)ltado# o# idica 0)e lo# a&>care#:
!l)co#a, *alto#a y lacto#a tiee car2cter red)ctor"
A?UCARES NO REDUCTORES
Co*o #e 4e1a e la e/periecia 8 la #acaro#a da$a la reacci. de Fe%li! e!ati4a, por o
pre#etar !r)po# %e*iacet2lico# li$re#"
A%ora $ie, e pre#ecia del 2cido clor%1drico ADClB y e caliete, la #acaro#a #e %idroli&a
de#co*poi'do#e e lo# do# *oo#ac2rido# 0)e la 5or*a A!l)co#a y 5r)cto#aB"
T'cica: To*ar )a *)e#tra de #acaro#a y a=adir )a# 8, !ota# de 2cido clor%1drico al 8,I"
Caletar a la lla*a del *ec%ero d)rate ) par de *i)to#" De6ar e5riar y reali&ar la ;r)e$a de
Fe%li!" O$#er4a el re#)ltado" La reacci. po#iti4a o# dice 0)e %e*o# co#e!)ido ro*per el
elace OC!l)co#1dico de la #acaro#a" ASe reco*ieda ate# de aplicar la reacci. de Fe%li!,
e)trali&ar co $icar$oato, Fe%li! #ale *e6or e ) *edio 0)e o #ea 2cido"B
;OLISACARIDOS NALMIDONC
El poli#ac2rido al*id. #e colorea de a&)lC4ioleta e pre#ecia de yodo, de$ido o a )a
reacci. 0)1*ica, #io a la 5i6aci. del yodo e la #)per5icie de la *ol'c)la del al*id., 5i6aci.
0)e #.lo tiee l)!ar e 5r1o"
T'cica:
Colocar e )a !radilla *)e#tra# de di#tito# !l>cido#"
A=adir : !ota# de L)!ol e cada )o de lo# t)$o# de e#ayo"
O$#er4ar lo# re#)ltado#"
Co e#te *'todo p)ede ideti5icar#e el al*id."
V" ;OST;RACTICA
Etre!ar Reporte
1. CRONOGRAMA DE PRCTICAS
Prctica Nombre de la prctica Semana a impartirse
8 Etre!a de cri#taler1a Se*aa del +- al 9, de *ayo
+ Tit)laci. del 2cido !l)t2*ico Se*aa del + al - de 6)io
16
9 Ai#la*ieto de ca#e1a de la lec%e Se*aa del L al 89 de 6)io
E De#at)rali&aci. de prote1a# Se*aa del 8- al +, de 6)io
5 Enzimas Semana del 23 al 27 de junio
6 Reconocimiento de glcidos Semana del 30 de junio al 4 de
julio
7
Entrega de cristalera
Semana del 7 al 11 de julio
BIBLIOGRAFIA PARA CONSULTA Y REFERENCIAS
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17
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"nters estC en las a7l"#a#"$nes #lAn"#as @-e a7are#en en #ada te*a.
11. ?B"$@-A*"#a? 0B ed. Mat%e5s, C.D., =an 4$lde, D.E. ' A%ern, D.G. Ed. Add"s$n )esle'. 2>>2. Un b-en te!t$
de B"$@-A*"#a 9eneral. M-' #$*7let$ ' a#t-al".ad$. B-en$s es@-e*as e "l-stra#"$nes.
12. ?B"$@-A*"#aE la base *$le#-lar de la ,"da? 0B ed. M#Dee T, M#Dee, /.R. Ed. M# Gra5 4"ll Intera*er"#ana,
2>>0. Un b-en te!t$, #$n eFer#"#"$s ' a7l"#a#"$nes #lAn"#as al G"nal de #ada #a7At-l$.
10. HBas"# Med"#al B"$#%e*"str'. A Cl"n"#al A77r$a#%I. Mar&s, 1.B, Mar&s, A.1 and S*"t%, C.M. )"ll"a*s and
)"l&"ns.1<<8. PerGe#ta*ente ada7tad$ a l$s #$nten"d$s de -n #-rs$ bCs"#$ de B"$@-A*"#a en Med"#"na.
Es@-e*as #larAs"*$s ' *-#%$s #as$s #lAn"#$s en #la,e de %-*$r.
13. HB"$@-A*"#aI. (B ed. Ber9, /., T'*$#.&$, /. Str'er, L. Ed. ).4. Re,ert. 2>>0. Otr$ #lCs"#$ de la B"$@-"*"#a.
Re#$*endable 7ara l$s te*as de C#"d$s n-#le"#$s e "nG$r*a#"+n 9ent"#a.
Pa9"nas 5eb -t"l".adas ' #$ns-ltadas 7ara la elab$ra#"+n ' ada7ta#"+n de este *an-al
1. %tt7EJJellab$rat$r"$.ser,"t.$r9Jb"$@-"*"#a.%t*
2! %tt7EJJ555.*$n$9raG"as.#$*JtrabaF$s1<Jlab$rat$r"$6b"$@-"*"#aJlab$rat$r"$6
b"$@-"*"#a.s%t*lK#(
0. %tt7EJJ555.-*.esJbb*b"JA'-das1$#entesJPra#t"#asJMed"#"naJPra#t"#asLab$rat$r"$JPra#t"
#a>;.%t*
4! %tt7EJJ555.F$sea#$rtes.#$*J7ra#t"#asJ9l-#"d$s.%t*
5! %tt7EJJellab$rat$r"$.ser,"t.$r9
6! %tt7EJJ555.F$sea#$rtes.#$*J7ra#t"#asJl"7"d$s.%t*
:. %tt7EJJ5550.-sal.esJLdeleGnJFa,aJal-*n$sJ$re9an$J%-es(.%t*K1
;. %tt7EJJ555.arra&"s.esJLrGl-en9$J7r$te"nas.%t*l
18
9! %tt7EJJ555.arra&"s.esJLrGl-en9$Jb"$@-"*"#a.%t*l
10! %tt7EJJ555.-*.esJbb*b"JA'-das1$#entesJPra#t"#asJOd$nt$l$9"aJOd$6Pra#t"#a>1.%t*
11. %tt7EJJsebb*.b@.-b.esJB"$ROMJ#$nten"d$Ja,Mb"$*$JMat1b.%t*l
19