CUANTIFICACIN DE UREA

OJETIVOS
Determinacin enzimtica de urea en suero y plasma.

INTRODUCCIN
La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del nitrgeno proteico en los seres
humanos. Constituye la fraccin ms abundante en nitrgeno no proteico. La cuantificacin de
urea tiene una gran importancia clnica, como en su elevacin es producto de trastornos de la
funcional renal o heptica, problemas diabticos, diabetes y otros. El siguiente informe pretende
explicar cmo hacer el ensayo in vitro y as determinar la cantidad de urea en el suero y plasma. La
intensidad de color producido por la reaccin qumica de los reactivos del kit VALTEK es
directamente proporcional con la cantidad de urea, de esta manera por colorimetra en el
espectrofotmetro se determinar la cantidad de urea en el plasma y suero.

Urea
La urea es un compuesto qumico cristalino e incoloro; de frmula CO(NH
2
)
2
. Se encuentra
abundantemente en la orina y en la materia fecal. Es el principal producto terminal del
metabolismo de protenas en el hombre y en los dems mamferos. La orina humana contiene
unos 20 g por litro, un adulto elimina de 25 a 39 g diariamente.
[cita requerida]
Es uno de los pocos
compuestos orgnicos que no tienen enlaces C-C o C-H.
En cantidades menores, se presenta en la sangre, en el hgado, en la linfa y en los fluidos serosos, y
tambin en los excrementos de los peces y muchos otros animales. Tambin se encuentra en el
corazn, en los pulmones, en los huesos y en los rganos reproductivos as como el semen. La urea
se forma principalmente en el hgado como un producto final del metabolismo. El nitrgeno de la
urea, que constituye el 80% del nitrgeno en la orina, procede de la degradacin de los diversos
compuestos con nitrgeno, sobre todo de los aminocidos de las protenas en los alimentos. En los
mamferos la urea se forma en un ciclo metablico denominado ciclo de la urea. La urea est
presente tambin en los hongos as como en las hojas y semillas de numerosas legumbres y
cereales.
[cita requerida]


Debido a su momento dipolar, la urea es soluble en agua y en alcohol, y ligeramente soluble en
ter. Se obtiene mediante la sntesis de Whler, que fue diseada en 1828 por el qumico alemn
Friedrich Whler, y fue la segunda sustancia orgnica obtenida artificialmente, luego del oxalato
de amonio.
Fisiologa

La urea se sintetiza en el cuerpo de muchos organismos como parte del ciclo de la urea , ya sea a
partir de la oxidacin de los aminocidos o a partir de amonaco . En este ciclo , grupos amino
donados por amoniaco y L - aspartato se convierten en urea , mientras que - L-ornitina , citrulina ,
L - argininosuccinato , y L - arginina actan como intermedios . La produccin de urea se produce
en el hgado y est regulado por la N- acetil glutamato . La urea se disuelve a continuacin en la
sangre ( en el rango de referencia de 2.5 a 6.7 mmol / litro ) y an ms transportado y se excreta
por el rin como un componente de la orina . Adems , se excreta una pequea cantidad de urea
(junto con cloruro sdico y agua ) en el sudor .

Los aminocidos de los alimentos ingeridos que no se utilizan para la sntesis de protenas y otras
sustancias biolgicas son oxidados por el cuerpo , dando la urea y dixido de carbono , como una
fuente alternativa de energa . [ 8 ] La va de oxidacin comienza con la eliminacin de la amino
grupo por una transaminasa , el grupo amino se introduce en el ciclo de la urea .

El amonaco ( NH3 ) es otro subproducto comn del metabolismo de compuestos nitrogenados . El
amonaco es ms pequeo mvil , ms voltiles y ms de la urea . Si se permite su acumulacin ,
amoniaco sera elevar el pH en las clulas a niveles txicos . Por lo tanto muchos organismos
convertir el amonaco en urea , a pesar de que esta sntesis tiene un coste de energa neta . Siendo
prcticamente neutro y altamente soluble en agua , la urea es un vehculo seguro para el cuerpo
para transportar y excretar el exceso de nitrgeno.

En el agua, los grupos amina se someten desplazamiento lento por molculas de agua , la
produccin de amoniaco y el anin carbonato . Por esta razn , viejo orina , rancio tiene un olor
ms fuerte que la orina fresca .

En los seres humanos

El manejo de la urea por los riones es una parte vital del metabolismo humano . Adems de su
papel como portador de nitrgeno residual , la urea tambin juega un papel en el sistema de
intercambio de contracorriente de las nefronas , que permite para la re - absorcin de agua y los
iones crticos de la orina excretada . La urea se reabsorbe en los tbulos colectores medulares
interiores de las nefronas , [ 9 ] lo que plantea la osmolaridad en el intersticio medular que rodea a
la rama ascendente delgada del asa de Henle , que a su vez hace que el agua se reabsorbe . Por la
accin del transportador de urea 2 , algunos de este reabsorbido de urea eventualmente fluir de
nuevo en la rama ascendente delgada del tbulo , a travs de los conductos colectores , y en la
orina excretada . Este mecanismo , que es controlada por la hormona antidiurtica , permite que
el cuerpo para crear la orina hiperosmtico , que tiene una mayor concentracin de sustancias
disueltas que el plasma de la sangre . Este mecanismo es importante para evitar la prdida de
agua , para mantener la presin de la sangre , y para mantener una concentracin adecuada de
iones de sodio en los plasmas sanguneos .

El contenido equivalente de nitrgeno ( en gramos ) de la urea ( en mmol ) se puede estimar por el
factor de conversin de 0,028 g / mmol . [ 10 ] Adems , 1 gramo de nitrgeno es
aproximadamente equivalente a 6,25 gramos de protena , y 1 gramo de protena se
aproximadamente equivalente a 5 gramos de tejido muscular . En situaciones tales como la
prdida de masa muscular , 1 mmol de urea excesiva en la orina ( como se mide por el volumen de
orina en litros multiplicado por la concentracin de urea en mmol / l ) corresponde
aproximadamente a una prdida de masa muscular de 0,67 gramos .
MARCO EXPERIMENTAL
Reactivos
Alcohol medicinal
Kit VALTEK:
o Suspensin de ureasa
o Ureasa
o Estabilizantes y persevantes
o Reactivo salicilato
o cido saliclico
o Nitro prusiato
o Reactivo hipoclorito
o Hipoclorito
o Hidrxido de sodio
o Solucin estndar
o Urea
o Equivalente Nitrgeno ureico
o Estabilizantes y persevantes no reactivos
Materiales
o Micro-pipetas del rango 10 100 y 100 1000 L
o Puntas de las micro-pipetas
o Tubos de ensayo
o Aguja
o Jeringa
o Algodn
Equipos
o Centrfuga
o Espectrofotmetro UV-VIS

Extraccin del plasma
Se extrae el plasma al insertar la aguja a una vena de la circulacin perifrica y con presin
negativa se lograr obtener un poco de sangre. Despus de extrado la sangre se llevar a una
centrifuga de tubos de ensayo y se extraer el sedimento, este es el plasma.
Ensayo in vitro de la cuantificacin de urea
Preparar el reactivo de trabajo, es la mezcla del Reactivo Salicilato y Suspensin de Ureasa
(proporcin 30mL: 1,5mL).





Adicionar el Rvo. de
trabajo y reposar
Reposar
Preparar el Rvo. de
trabajo
Leer los analitos en el espectrofotmetro UV-VIS a 600 nm.


Blanco Estndar MP
Muestra - - 0.01 mL
Estndar - 0.01 mL -
Reactivo de trabajo 1.00 mL 1.00 mL -
Incubar 5 min. a 3 min. 37C luego agregar:
Reactivo hipoclorito 1 mL 1 mL 1 mL
Mezclar e incubar 5 min. a 37C. Leer absorvancias

(NH
2
)2CO + 2H
2
O UREASA 2NH
3
+ CO
2
+ H
2
O
RESULTADOS
Absorbancia del estndar: 0,0363
Absorbancia de la MP: 0,2162
Clculos de anlisis

UREA (mg/dL)= FACTOR x ABSORBANCIA DE MP

1818,1x0,2162=393

DISCUSIN
El resultado obtenido rebasa los niveles fisiolgicos (10 50mg/dL) por lo que suponemos est
sujeta a una patologa renal y/o heptica severa.
El resultado nos lleva a la posibilidad de error del analista ya que sobrepasa muy ampliamente los
niveles fisiolgicos
El posible error del resultado puede deberse a una mala conservacin de los Reactivos del Kit
VALTEK.
La gran diferencia de la concentracin de obtenida con los valores fisiolgicos puede ser producto
de un descalabrado del equipo y/o y materiales
El resultado puede deberse a la suma de las discusiones anteriores
CONCLUSIN
Debe repetirse el anlisis para un resultado ms inocuo
La interaccin del amonio producido en la reaccin qumica interacciona con el salicilato e
hipoclorito en ambiente alcalino, y forma un compuesto coloreado. La intensidad de color
producido es directamente proporcional con la cantidad de urea en el plasma.

REFERENCIAS
Nelson, D. L., Lehninger, A. L., & Cox, M. M. (2008). Lehninger Principios de la Bioqumica.
Macmillan.
http://en.wikipedia.org/wiki/Urea
http://es.wikipedia.org/wiki/Urea