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Espectrometra
de Masas
de Masas
Q. Georgina Duarte Lisci
Q. Georgina Duarte Lisci
Facultad de Qumica
Facultad de Qumica
UNAM
UNAM
Investigador (es) Ao Contribucin
J .J . Thompson
1912
Primer espectrmetro de masas
Dempster
1918
Electro-ionizacin y enfoque magntico
Stephens
1946
Analizador de Tiempo de Vuelo (TOF)
Nier-J ohnson
1952
Instrumentos de doble enfoque
Paul, Steinwedel,
Raether, Reinhard y
von Zahn
1953
-58
Analizador cuadrupolar
Wiley y McLaren
1955
Diseo avanzado del analizador de tiempo
de vuelo (TOF)
Gohlke y
McLafferty
1956
Cromatografa de Gases/Espectrometra de
Masas
Beynon
1956
Espectrometra de Masas de alta resolucin
Munson y Field
1966
Ionizacin Qumica
INTRODUCCIN
INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Cronologa de la EM
INTRODUCCIN
INTRODUCCIN
Cronologa de la EM
Cronologa de la EM
Investigador (es) Investigador (es) A A o o Contribuci Contribuci n n
Dole, Mack, Hines, M.
Ferguson y Alice
1968
Ionizacin por
Electro-spray (ESI)
McLafferty
1973
Cromatografa de
Lquidos/Espectrometra
de Masas
Barber, Bordoli, Sedgwick,
Tyler, Surman y
Vickerman
1981
Bombardeo de
tomos rpidos
(FAB)
Blakely y Vestal
1983
Ionizacin por
Termo-spray
Yamashita, Fenn, Aleksandrov,
Gall, Krasnov, Nikolaev,
Pavlenko, Shkurov, Dokl,
Baramy Garacher
1984
Aplicacin de la
ionizacin por Electro-
spray (ESI) en
macromolculas
J . J . Thompson, 1912
J . J . Thompson, 1912
J
J
oseph
oseph
J
J
ohn
ohn
Thompson, 1912
Thompson, 1912
Ventajas de la
Ventajas de la
Espectrometra de Masas
Espectrometra de Masas
Identificacin de una substancia en presencia de otras similares Identificacin de una substancia en presencia de otras similares
Informacin estructural, energas de enlaces, cintica, Informacin estructural, energas de enlaces, cintica,
fisicoqumica, etc. fisicoqumica, etc.
Tcnica rpida (anlisis en lnea en tiempos reales, control de Tcnica rpida (anlisis en lnea en tiempos reales, control de
procesos enzimticos, metablicos, etc) procesos enzimticos, metablicos, etc)
Por qu es importante la
Por qu es importante la
Espectrometra de Masas?
Espectrometra de Masas?
Porque es una tcnica analtica poderosa
Porque es una tcnica analtica poderosa
utilizada para:
utilizada para:
Sistema
Sistema
de
de
bombeo
bombeo
Sistema de entrada
Sistema de entrada
Fuente
Fuente
de
de
I ones
I ones
(Cmara de Ionizacin)
(Cmara de Ionizacin)
ptica Inica
ptica Inica
Analizador Msico
Analizador Msico
Detector
Detector
Lnea
Lnea
de
de
transferencia
transferencia
(CG
(CG
-
-
EM)
EM)
Sistema de Bombeo
Sistema de Bombeo
Tipos
Tipos
de
de
Bombas
Bombas
de
de
Vaco
Vaco
Sistemas de Entrada
Sistemas de Entrada
Muestras Puras
Muestras Puras
Entrada directa
Entrada directa
Sonda de Introduccin Directa (DIP)
Sonda de Introduccin Directa (DIP)
Sonda de Exposicin Directa (DEP)
Sonda de Exposicin Directa (DEP)
Mezclas
Mezclas
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Gases
Cromatografa de Lquidos
Cromatografa de Lquidos
Electrocromatografa
Electrocromatografa
Electroforesis Capilar
Electroforesis Capilar
Extraccin de Fludos Supercrticos
Extraccin de Fludos Supercrticos
Sonda de Insercin Directa (DIP)
Sonda de Insercin Directa (DIP)
Sonda de Esposicin Directa (DEP)
Sonda de Esposicin Directa (DEP)
La muestra en disolucin se coloca en un tubo capilar de vidrio
Temperatura mxima: 300
o
C
Diferentes velocidades de Calentamiento
Posibilidad de calentamiento directo de la muestra (sin solubilizar)
La muestra en disolucin se coloca en un filamento
Calentamiento balstico
Rampas de temperatura programables
Alcanza hasta 1000
o
C
Entrada Directa
Entrada Directa
Tipos de Ionizacin
Tipos de Ionizacin
Ionizacin en Fase Gaseosa: Ionizacin en Fase Gaseosa:
Ionizacin y Desorcin: Ionizacin y Desorcin:
Bombardeo de Partculas: Bombardeo de Partculas:
Ionizacin a Presin Ionizacin a Presin
Atmosfrica: Atmosfrica:
Desorcin Lasser Desorcin Lasser
Electroionizacin (EI) Electroionizacin (EI)
Ionizacin Qumica (CI) Ionizacin Qumica (CI)
Desorcin de Campo (FD) Desorcin de Campo (FD)
Ionizacin de Campo (FI) Ionizacin de Campo (FI)
Bombardeo de Atomos Rpidos Bombardeo de Atomos Rpidos
(FAB) (FAB)
Espectrometra de In Msico Espectrometra de In Msico
Secundario (SIMS) Secundario (SIMS)
Electroespray (ESI) Electroespray (ESI)
Termospray Termospray
Ionizacin Qumica a Presin Ionizacin Qumica a Presin
Atmosfrica (APCI) Atmosfrica (APCI)
Ionizacin por desorcin lasser en Ionizacin por desorcin lasser en
matriz asistida (MALDI) matriz asistida (MALDI)
CMARA DE IONIZACIN
CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Ionizacin Electrnica
+
-
+
Hacia el Analizador
Magneto
Magneto
+
+
+
+
+
+
+
+
-
-
-
-
Target
Filamento
Repeledor
CMARA DE IONIZACIN
CMARA DE IONIZACIN
Ionizacin Electrnica
Ionizacin Electrnica
R-O-R
. .
R-O-R
+
.
R-CH CH-R
:: R-CH CH-R
+
. :
R-CH
2
CH
2
-R
:
R-CH
2
CH
2
-R
+
.
70 70 eV eV de energa de energa
Produce el Ion Molecular y una gran cantidad de Produce el Ion Molecular y una gran cantidad de iones iones
con diferentes estados de energa con diferentes estados de energa
Aquellos Aquellos iones iones con gran cantidad de energa interna con gran cantidad de energa interna
( (vibracional vibracional, rotacional y electrnica) liberan esta , rotacional y electrnica) liberan esta
energa por medio de la fragmentacin energa por medio de la fragmentacin
Los Los iones iones con baja energa permanecen intactos (Ion con baja energa permanecen intactos (Ion
Molecular) Molecular)
Es la tcnica de ionizacin ms comn Es la tcnica de ionizacin ms comn
Es la tcnica de ionizacin de la que se obtiene ms Es la tcnica de ionizacin de la que se obtiene ms
informacin informacin
Todas las bibliotecas comerciales disponibles estn Todas las bibliotecas comerciales disponibles estn
basadas en los espectros obtenidos por esta ionizacin basadas en los espectros obtenidos por esta ionizacin
Es la ionizacin que ms se utiliza con el sistema CG Es la ionizacin que ms se utiliza con el sistema CG- -EM EM
Ionizacin Electrnica
Ionizacin Electrnica
CMO SE GENERA UN
CMO SE GENERA UN
ESPECTRO DE MASAS POR IE?
ESPECTRO DE MASAS POR IE?
Analizador
Detector
Cmara de Ionizacin
Espectro de Masas m/z
%
Filamento
Filamento
Ionizacin Electrnica
Ionizacin Electrnica
Metanol (CH
Metanol (CH
3 3
OH, P.M. 32)
OH, P.M. 32)
33
32
31
30
29
17
15
12
C
16
O
1
H
13
C
Ionizacin Qumica
Ionizacin Qumica
Es
Es
una tcnica
una tcnica
de
de
ionizacin significativamente ms
ionizacin significativamente ms
suave
suave
que
que
IE.
IE.
Se
Se
utiliza cuando
utiliza cuando
en el
en el
espectro por
espectro por
IE no
IE no
aparece
aparece
el ion
el ion
molecular,
molecular,
para confirmar
para confirmar
el ion molecular o
el ion molecular o
para
para
aumentar
aumentar
la
la
intensidad
intensidad
de
de
algunos iones fragmento
algunos iones fragmento
a
a
masas altas
masas altas
.
.
Se
Se
utiliza
utiliza
un gas
un gas
reactivo
reactivo
(
(
metano
metano
,
,
isobutano
isobutano
,
,
amonaco
amonaco
, etc.)
, etc.)
que
que
es
es
ionizado
ionizado
por
por
IE. Los
IE. Los
iones
iones
resultantes
resultantes
reaccionan
reaccionan
con
con
las
las
molculas
molculas
del
del
analito
analito
que
que
se
se
encuentran
encuentran
en la
en la
fuente
fuente
, con
, con
transferencia
transferencia
de
de
carga
carga
(
(
protn
protn
)
)
las molculas neutras
las molculas neutras
del
del
analito
analito
se
se
transforman
transforman
en
en
iones
iones
.
.
Algunos
Algunos
iones
iones
moleculares
moleculares
son
son
demasiado
demasiado
inestables
inestables
para
para
permanecer
permanecer
intactos
intactos
an
an
utilizando esta tcnica
utilizando esta tcnica
.
.
CH
4
+
e
-
2 CH
4
-
e
+
+
.
.
CH
4
+
+
.
+
CH
4
CH
5
+
+
CH
3
+
CH
5 +
+
M
MH
CH
4
Ionizacin Qumica
Ionizacin Qumica
Reacciones
Reacciones
analito
Protonacin
IE IQ
Malatin
(Pesticida)
P.M. 330
Ionizacin Qumica
Ionizacin Qumica
Ejemplo
Ejemplo
Ionizacin
Ionizacin
por FAB
por FAB
n.
n.
La
La
diferencia entre
diferencia entre
GC/ MS y LC/ MS son
GC/ MS y LC/ MS son
las
las
t
t
cnicas
cnicas
de
de
ionizaci
ionizaci
n
n
utilizadas
utilizadas
(no el
(no el
analizador
analizador
)
)
Analizadores
Analizadores
m
m
s
s
utilizados
utilizados
:
:
Sector
Sector
Magn
Magn
tico
tico
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Trampa
Trampa
de
de
Iones
Iones
Tiempo
Tiempo
de
de
Vuelo
Vuelo
Sector Magntico
Sector Magntico
Magneto
Cmara de ionizacin
Detector
Cmara de
Ionizacin
Sector magntico
Sector magntico
: El campo magntico ejerce una
: El campo magntico ejerce una
fuerza perpendicular al movimiento del ion para
fuerza perpendicular al movimiento del ion para
deflectar los iones de acuerdo a su
deflectar los iones de acuerdo a su
momento
momento
.
.
Sector elctrico
Sector elctrico
: El campo elctrico ejerce una fuerza
: El campo elctrico ejerce una fuerza
perpendicular al movimiento del ion para deflectar los
perpendicular al movimiento del ion para deflectar los
iones de acuerdo a su
iones de acuerdo a su
energa cintica
energa cintica
.
.
Al salir los iones de la cmara de ionizacin tienen
Al salir los iones de la cmara de ionizacin tienen
diferente velocidad, para obtener una mejor
diferente velocidad, para obtener una mejor
resolucin es necesario adicionar un sector elctrico
resolucin es necesario adicionar un sector elctrico
que colime o rena los iones de acuerdo a su energa
que colime o rena los iones de acuerdo a su energa
cintica.
cintica.
Sector Magntico
Sector Magntico
y Sector Elctrico
y Sector Elctrico
Doble Sector
Doble Sector
m/z=B
m/z=B
2 2
r
r
2 2
/2V
/2V
Sector Magntico
Sector Magntico
Doble sector
Doble sector
Geometra
Geometra
Nier
Nier
-
-
Johnson
Johnson
Geometra Inversa: Geometra Inversa:
1. 1. Sector Magntico Sector Magntico
2. 2. Sector Elctrico Sector Elctrico
Sector Electrosttico
Ventajas
Ventajas
:
:
Excelente resoluci
Excelente resoluci
n de
n de
masa
masa
Excelente exactitud
Excelente exactitud
de
de
masa
masa
Excelente sensibilidad
Excelente sensibilidad
Desventajas
Desventajas
:
:
Precio
Precio
:
:
Sistemas
Sistemas
de alto
de alto
costo
costo
Adquisici
Adquisici
n
n
espectral lenta
espectral lenta
(
(
tiempos
tiempos
de an
de an
lisis
lisis
largos)
largos)
Sector Magntico
Sector Magntico
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Todos los
valores de m/z
entran
Un valor
de m/z
sale
+
-
+
-
Separacin basada en la estabilidad del valor de m/z dentro
de los campos de RF y CD sobre las barras cuadrupolo
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Ventaja
Ventaja
:
:
Precio
Precio
: el
: el
sistema menos caro
sistema menos caro
del
del
mercado
mercado
Desventajas
Desventajas
:
:
Los l
Los l
mites de
mites de
detecci
detecci
n no son
n no son
tan
tan
buenos como
buenos como
en
en
otros sistemas
otros sistemas
Adquisici
Adquisici
n
n
espectral lenta
espectral lenta
(
(
tiempos
tiempos
de an
de an
lisis
lisis
largos)
largos)
Rango
Rango
de
de
masas limitado
masas limitado
Cuadrupolo
Cuadrupolo
Filamento Filamento
Paso de los electrones Paso de los electrones
Salida de los iones Salida de los iones
Detector Detector
Centro de la trampa Centro de la trampa
Parte superior del electrodo Parte superior del electrodo
Parte inferior del electrodo Parte inferior del electrodo
Trampa de Iones
Trampa de Iones
Trampa de Iones
Trampa de Iones
Ventajas
Ventajas
:
:
Capacidad para
Capacidad para
MS/MS
MS/MS
Precio
Precio
: no tan
: no tan
bajo como los
bajo como los
cuadrupolares
cuadrupolares
L
L
mites de
mites de
detecci
detecci
n
n
mejores que
mejores que
los cuadrupolares
los cuadrupolares
Desventajas
Desventajas
:
:
Reacciones
Reacciones
ion
ion
-
-
mol
mol
cula
cula
Adquisici
Adquisici
n
n
espectral lenta
espectral lenta
(
(
tiempos
tiempos
de an
de an
lisis
lisis
largos)
largos)
Rango
Rango
de
de
masas limitado
masas limitado
Trampa de Iones
Trampa de Iones
El detector es colocado en el punto focal
El detector es colocado en el punto focal
para asegurar una ptima resolucin msica
para asegurar una ptima resolucin msica
Detector
Detector
Tiempo de Vuelo (TOF)
Tiempo de Vuelo (TOF)
Con Reflectrn
Con Reflectrn
Reflectrn
Reflectrn
Ventajas
Ventajas
:
:
s
s
grandes
grandes
Buena
Buena
resoluci
resoluci
n y
n y
exactitud
exactitud
de
de
masas
masas
Excelente sensibilidad
Excelente sensibilidad
La
La
mas
mas
r
r
pida adquisici
pida adquisici
n
n
espectral
espectral
(
(
los tiempos
los tiempos
m
m
s
s
cortos
cortos
de an
de an
lisis
lisis
)
)
Desventaja
Desventaja
:
:
Precio
Precio
:
:
tiende
tiende
a ser m
a ser m
s
s
caro que los
caro que los
sistemas cuadrupolares
sistemas cuadrupolares
y
y
algunas
algunas
trampas
trampas
de
de
iones pero menos costoso
iones pero menos costoso
que los
que los
de
de
sectores
sectores
Tiempo de Vuelo (TOF)
Tiempo de Vuelo (TOF)
Sistema CG/ EMTOF
Sistema CG/ EMTOF
En el En el sistema sistema MS/TOF MS/TOF las abundancias las abundancias de de los iones permanecen los iones permanecen
constantes constantes a a travs travs de de todo todo el el pico cromatogrfico pico cromatogrfico. . Esto es Esto es la clave la clave
de de los algoritmos automatizados que permiten los algoritmos automatizados que permiten descubrir descubrir
seales seales de de compuestos que coeluyen compuestos que coeluyen. .
El software
El software
identifica automticamente las posiciones
identifica automticamente las posiciones
de
de
los picos
los picos
en el
en el
cromatograma a
cromatograma a
n aqu
n aqu
nea
nea
base.
base.
Algoritmo
Algoritmo
de
de
Deteccin
Deteccin
Automtica
Automtica
de
de
Picos
Picos
Enmascaramiento
Enmascaramiento
y
y
Coelucin
Coelucin
Propylene Glycol
139Analitos
16minutos
139Analitos
16minutos
95 Analitos
1 hora15minutos
95 Analitos
1 hora15minutos
Anlisis Tradicional
Anlisis Tradicional
de
de
Petrleo
Petrleo
(
(
Nafta
Nafta
)
)
Anlisis
Anlisis
Elemental
Elemental
(
(
Combustin
Combustin
-
-
Reduccin
Reduccin
)
)
La
La
informacin
informacin
obtenida
obtenida
se
se
reporta
reporta
como
como
porcentajes
porcentajes
de
de
elementos
elementos
(C, H, N, S,
(C, H, N, S,
y O).
y O).
Hay
Hay
rompimiento
rompimiento
de
de
todos
todos
los
los
enlaces
enlaces
Anlisis por
Anlisis por
Espectrometra
Espectrometra
de
de
Masas
Masas
En
En
Espectrometra
Espectrometra
de
de
Masas
Masas
la
la
energa
energa
impartida por
impartida por
el
el
haz
haz
de
de
electrones
electrones
a la
a la
molcula rompe
molcula rompe
algunos
algunos
de
de
los
los
enlaces.
enlaces.
Porciones
Porciones
grandes
grandes
de la
de la
estructura
estructura
de la
de la
molcula
molcula
permanecen intactas
permanecen intactas
permitiendo
permitiendo
la
la
identificacin
identificacin
del
del
analito
analito
.
.
Resolucin
Resolucin
Clculo de Masa
Clculo de Masa
3 diferentes formas de calcular el Peso Molecular:
3 diferentes formas de calcular el Peso Molecular:
Masa Promedio:
Masa Promedio: Se utiliza el peso atmico (es el
promedio de todos los istopos) para cada
elemento. C=12.01115, H=1.00797, O=15.9994,
N=14.00674
Masa Monoisotpica:
Masa Monoisotpica: Se utiliza la masa exacta
del istopo ms abundante de cada elemento.
C=12.000000, H=1.007825, O=15.994915,
N=14.003074
Masa Nominal:
Masa Nominal: Se utiliza la masa ntegra del
istopo ms abundante de cada elemento. C=12,
H=1, O=16, N=14
Resolucin
Resolucin
Es la capacidad de un espectrmetro
Es la capacidad de un espectrmetro
para distinguir entre dos iones con
para distinguir entre dos iones con
masas cercanas.
masas cercanas.
Se expresa como
Se expresa como
R=m/
R=m/
m
m
, donde
, donde
m
m
es
es
la diferencia de masas entre los dos
la diferencia de masas entre los dos
iones y
iones y
m
m
la masa nominal del in de
la masa nominal del in de
menor masa.
menor masa.
Resolucin
Resolucin
CO
+
.
N
2
+
.
+
C
2
H
4
.
CO
+
.
N
2
+
.
+
C
2
H
4
.
27 28 29
27.9949 28.0061
28.0313
Baja Resolucin Baja Resolucin Alta Resolucin Alta Resolucin
Resolucin
Resolucin
Ejemplo
Ejemplo
Masa
Nominal
Masa
Monoisotpica
Masa Promedio
C
17
H
32
236 236.2504 236.44459
C
16
H
28
O 236 236.2140 236.40096
C
15
H
28
N
2
236 236.2252 236.40389
Resolucin
Resolucin
Ejemplo
Ejemplo
Diferencia entre Masas
Monoisotpicas
C
17
H
32
y C
16
H
28
O 236.2504-236.2140=0.0364
C
17
H
32
y C
15
H
28
N
2
236.2504-236.2252=0.0252
C
15
H
28
N
2
y C
16
H
28
O 236.2252-236.2140=0.0112
Resolucin = R = m /
Resolucin = R = m /
m
m
Resol uci n necesari a
C
17
H
32
y C
16
H
28
O 236.2140 / 0.0364= 6,489
C
17
H
32
y C
15
H
28
N
2
236.2252 / 0.0252= 9,374
C
15
H
28
N
2
y C
16
H
28
O 236.2140 / 0.0112= 21,090
Exactitud de Masa
Exactitud de Masa
Exactitud de Masa
Exactitud de Masa
=
=
m/z Calculada
m/z Calculada
m/z Observada
m/z Observada
m/z Calculada
m/z Calculada
x 10
x 10
6 6
Ejemplo:
Ejemplo:
400.0020
400.0020
400.0000 =
400.0000 =
400.0020
400.0020
0.002
0.002
x10
x10
6 6
= 4.99 ppm
= 4.99 ppm
400.0020
400.0020
Exactitud: 2 mmu (miliunidades) o 5 ppm
Exactitud: 2 mmu (miliunidades) o 5 ppm
Sensibilidad
Sensibilidad