AULAS PRTICAS - LABORATRIOS

1: INFORMAES GERAIS

Os objetivos fundamentais das Prticas so:
a) Fornecer ao aluno uma contextualizao dos contedos tericos, de preferncia,
atrelados ao futuro desenvolvimento de sua atividade profissional.
b) Desenvolver no aluno uma cultura cientfica adequada, no trato dos aspectos
acadmicos e pessoais, enquanto presente no laboratrio.
c) Promover a interao entre alunos, professores e tcnicos, para resolver com
eficincia, as situaes emergentes no desenvolvimento dos trabalhos prticos.
d) Desenvolver uma postura profissional do aluno, atravs discusses e avaliao dos
conceitos tratados.

1.1. Procedimento no Laboratrio.
Para o desenvolvimento das aulas prticas sugerimos a formao de grupos de
no mximo quatro alunos. Estes grupos sero formados conforme as preferncias
pessoais e no sofrero alteraes durante o semestre, exceto por motivos especiais.

1.1.1. Obrigaes do Aluno:
Preparar-se corretamente para a realizao da aula prtica, lendo o roteiro e as
bibliografias sugeridas quando seja necessrio, para que possa desenvolver com
segurana as tarefas solicitadas, no roteiro.
Procurar organizar o grupo de trabalho, no sentido de dividir as tarefas (em forma de
rodzio) de cada prtica. O grupo deve manter um caderno de laboratrio atualizado
em relao s anotaes de dados, fluxogramas, clculos, grficos e resposta das
questes solicitadas.
Confeccionar o relatrio (um relatrio por grupo de trabalho), levando em
considerao as sugestes que sero fornecidas adiante. Este relatrio dever ser
entregue antes do incio da aula seguinte. Fora deste prazo, este no ser mais
aceito.
Usar jaleco, limpar o material da bancada e dos equipamentos, ser uma prtica
obrigatria do aluno, que ser conferida e avaliada, permanentemente.


1.1.2. Obrigaes do Professor:
Fornecer os materiais, reagentes e equipamentos necessrios para o correto
desenvolvimento das atividades prticas.
Colocar os avisos pertinentes nas dependncias do laboratrio e ao uso dos
aparelhos.
Tomar providncias para a reposio de material e consertos dos equipamentos
quando necessrio.
Avaliar o comportamento profissional do aluno (presena, pontualidade, preparao
em cada aula).
Avaliar os trabalhos prticos segundo o comportamento individual do aluno (defesa
do relatrio), bem como, dos trabalhos em grupo (confeco dos relatrios).


1.2. Confeco do Relatrio.
O relatrio uma necessidade para comunicar os resultados do nosso trabalho e
divulgar nossas idias por escrito. Todo relatrio tem que ser claro, conciso e exato. Um
relatrio com estas qualidades facilitar a colaborao ou a resposta esperada de seus
superiores e de seus colegas. Por este motivo, a arte da boa comunicao por escrito
no um luxo, uma questo de sobrevivncia profissional.
A confeco do relatrio somente possvel com o uso de um caderno de
laboratrio bem organizado. As anotaes do caderno devem ser organizadas, sempre
que possvel, com a ajuda de diagramas, desenhos e tabelas, dando detalhes de todos
os procedimentos utilizados. As identificaes dos reagentes e equipamentos so
informaes teis, na repetio e/ou na discusso da experincia.

Na confeco do relatrio sugere-se o seguinte roteiro de atividades:

1. Identificao (Dever estar contido na Capa).
Nmero do grupo e nome dos integrantes do mesmo.
Ttulo do experimento, local e data da realizao da aula.

2. Introduo.
Faa um resumo curto da teoria relevante prtica.
Seja original e breve. No seja exibicionista, nem faa ostentao esnobe de
seus conhecimentos. Lembre-se que a introduo serve de base para o leitor.
Use tempo verbal no presente.

3. Material e Mtodos.
Registrar os materiais e identificar os equipamentos utilizados na descrio da
metodologia. Quando necessrio descreva as caractersticas do aparelho, a pureza ou
purificao de reagentes.
Com o auxlio de esquemas e desenhos, resumir o procedimento utilizado. No
copiar o roteiro da aula prtica. A apresentao quase sempre cronolgica e escrita
no tempo verbal no passado.

3. Resultados e discusso.

Iniciar os pargrafos apresentando as tabelas ou figuras. As tabelas
devem estar corretamente identificadas em termos de variveis e unidades. A
este respeito, recomenda-se colocar um ttulo em cada tabela, com informaes
sobre o sistema; por exemplo: Presso de Vapor do Etanol de 30 a 50
0
C. Cada
coluna da tabela encabeada com o smbolo da varivel (P,T, M, ...), separada
da unidade e da potncia de dez quando necessria, por uma barra; por
exemplo, se o primeiro valor da coluna de presso 101.000 pascal; deveria ser
colocado no cabealho da coluna, P/(10
5
Pa), a seguir o primeiro valor seria 1,01.
O mesmo critrio deve ser utilizado para identificar as variveis (coordenadas)
dos grficos.
Os resultados de preferncia devem ser apresentados graficamente, desta
forma facilitam a anlise pelo leitor. No esquea que uma boa representao
grfica substitui muitas palavras.
Indicar um exemplo de cada clculo efetuado na confeco das tabelas, fazendo
a referncia equao utilizada em cada caso. Quando h dvida em relao s
unidades, faa uma anlise dimensional, usando o Sistema Internacional (SI).
Procurar sempre relacionar quantitativamente os dados sob o ponto de
vista da preciso e exatido, interpret-los criteriosamente, observando os
aspectos de medidas e objetivos propostos. Ao comparar a metodologia e os
resultados com os da literatura, no esquecer de citar as referncias, nem
deixar de mencionar as condies experimentais em cada caso.

5. Concluso.
Concluir sobre os objetivos da experincia, em relao aos
conhecimentos adquiridos para a sua formao. Sugerir modificaes ou
mesmo a substituio da aula, por outra que atinja os objetivos propostos.

6. Bibliografia.
As referncias devem ser numeradas na seqncia de aparecimento no relatrio.
Observar como devem ser relacionados livros e artigos de revistas, considerando que
estas ltimas possuam abreviaturas de domnio internacional. Exemplos:
1. SHOEMAKER, D. P.; GARLAND, C. W. Experiments in Physical Chemistry. 2
a

ed. New York: McGraw Hill, 1967.
2. COMPBELL, R. D., Journal Chem. Educ., 39: 348, 1992.





AULA PRTICA 1 - Atividade enzimtica da catalase
PARAMENTAO
vetada a entrada de alunos que no estejam com todos os EPIs obrigatrios
(Jaleco, cala comprida e sapato totalmente fechado).
LIMPEZA DE MATERIAIS
Durante a utilizao do laboratrio e ao trmino das atividades o aluno dever
zelar pela limpeza, organizao e conservao do espao, equipamentos e
materiais por ele utilizados; e ao trmino dos experimentos prticos os alunos
devero efetuar a limpeza das vidrarias por eles utilizadas;
FICHA TCNICA DOS REAGENTES UTILIZADOS NA PRTICA
Perxido de hidrognio:
- Um lquido viscoso e poderoso oxidante.
- incolor temperatura ambiente e apresenta caracterstico sabor amargo.
Quantidades pequenas de perxido de hidrognio gasoso ocorrem naturalmente no ar.
- O perxido de hidrognio instvel e quando perturbado, rapidamente se decompe
em oxignio e gua com liberao de calor.
- Embora no seja inflamvel, poderoso agente oxidante que pode sofrer
combusto espontnea em contato com matria orgnica ou alguns metais como o
cobre ou o bronze.
TTULO
. Atividade enzimtica da catalase

OBJ ETIVO
. Observar fatores que influenciam na velocidade de uma reao catalisada por uma
enzima, tais como concentrao do substrato e temperatura

INTRODUO TERICA
As enzimas so protenas especializadas na catlise de reaes biolgicas.
Elas esto entre as biomolculas mais notveis devido a sua extraordinria especificidade e
poder cataltico, que so muito superiores aos dos catalisadores produzidos pelo homem.
Praticamente todas as reaes que caracterizam o metabolismo celular so catalisadas por
enzimas.
Como catalisadores celulares extremamente poderosos, as enzimas aceleram a velocidade
de uma reao, sem no entanto participar dela como reagente ou produto.
As enzimas atuam ainda como reguladoras deste conjunto complexo de reaes. As
enzimas so, portanto, consideradas as unidades funcionais do metabolismo celular.
Alguns fatores influenciam a velocidade enzimtica (atividade da enzima): temperatura, pH,
variao da [E], variao da [S] e ao de ativadores e inibidores (hormnios). As enzimas
sendo protenas apresentam estruturas ou nveis de organizao, assim sendo toda enzima
tem uma temperatura e um pH ideal de ao.
Dentre os fatores que podem provocar alteraes na atividade enzimtica, a temperatura
pode ser destacada como o mais importante. Conforme discutido anteriormente, para
desempenhar sua funo biolgica, as protenas devem estar em seus estados nativos, com
suas estruturas primria, secundria, terciria e, quando for o caso, quaternria, ntegras. O
calor um dos fatores que podem destruir essa integridade, provocando o fenmeno
conhecido como desnaturao protica. As enzimas, como protenas, tambm esto sujeitas a
esse processo, que podem ocasionar a perda, algumas vezes reversvel, de atividade.










MATERI AS / VI DRARI AS / REAGENTES

MATERIAIS VIDRARIAS REAGENTES
Balana,
Sal de cozinha,
Estante para tubos
de ensaio
Tela de amianto
Cx de fsforos


Bqueres de 250mL
Pipetas graduadas de 2mL
Soluo concentrada de
perxido de hidrognio
(H2O2)

Suporte para tubos
de ensaios
Caneta de
retroprojetor
Rgua
Fgado de boi, Gelo
Pipetas de Pasteur de
plstico
Tubos de ensaio
Basto de vidro,





Trip, bico de bunsen
gua destilada,

Banho-maria, Banho
de Gelo Salina 0,85%
Termmetro

PROCEDI MENTOS DETALHADOS
1. Efeito da concentrao do substrato:
a) Marcar 5 tubos de ensaios ( Cuidado para selecionar tubos de mesmo dimetro)
com as seguintes diluies: 1/1; ; ; 1/8; 1/16.
b) Adicionar 2,0 mL de gua destilada nos tubos 1/1 a 1/16.
c) No primeiro tubo (1/1), adicionar 1,0 mL da soluo concentrada de H2O2 e a partir
deste fazer a diluio nos demais tubos.
d) Adicionar em cada tubo, rapidamente, aproximadamente 1 gota do extrato de
fgado e observar a reao.
e) Aps este tempo, com o auxlio da rgua, medir a altura da coluna de gs formada
no tubo e anotar este valor na tabela abaixo
Diluio cm

1/1 ___________
1/2 ____________
1/4 ____________
1/8 ____________
1/16 ___________

f) Fazer um grfico (cm X diluio) com os dados da tabela acima.
g) Interpretar o grfico
2. Efeito da temperatura:
a) Marcar 3 tubos de ensaio de mesmo dimetro com os seguintes rtulos:
Temperatura 37C, gelo, e alta temperatura.
b) Adicionar 1,0mL de extrato de fgado em cada tubo.
c) Colocar o tubo rotulado com gelo em gua com bastante gelo;
d) Colocar o tubo rotulado com alta temperatura em um bquer com gua para
aquecer no bico de gs, at a gua ferver;
e) Colocar o tubo rotulado com temperatura 37C no banho-maria e mant-lo em
temperatura adequada.
f) Medir a temperatura de todos os tubos e anotar.
g) Adicionar em cada tubo, rapidamente, aproximadamente 0,5 mL da soluo de
H2O2 e observar a reao
h) Anotar os resultados
COMO PROCEDER COM OS RESDUOS
- As solues devem ser descartadas cada uma em um recipiente diferente para
depois ser descartado pelo tcnico em local adequado.

QUESTIONRIO
Levando-se em considerao que a quantidade de gs uma medida indireta da
atividade da catalase, qual seria a temperatura mais adequada para a sua atividade?
2. Baseando-se nos resultados desta prtica, quais so os fatores que afetam a
atividade enzimtica? E como eles afetam a atividade enzimtica?
3. Quando uma soluo de enzima aquecida, ocorre uma progressiva perda de
atividade cataltica com o tempo, devido desnaturao da enzima. Uma soluo de
enzima fosfofrutoquinase incubada a 45C perde 50% de sua atividade em 12 min..
Entretanto, quando a mesma enzima incubada a 45C na presena de uma grande
concentrao de seu substrato, ela perde 3% de sua atividade em 12 min.. Explique
por que isso acontece.
4. Por que guardamos a carne na geladeira? E no freezer? As enzimas estariam
totalmente inativadas pela temperatura no freezer? Em qual temperatura teramos a
inativao completa da enzima?

















AULA PRTICA 2:
EXTRAO DE DNA DE MORANGO (Fragaria ananassa ROSACEAE)
Os morangos que consumimos hoje so resultado de cruzamentos de espcies
diferentes que ocorriam naturalmente na Europa (Frana e Rssia) e nas
Amricas (Chile e Estados Unidos). Prestam-se muito bem para a extrao de
DNA porque so fceis de serem macerados e quando maduros produzem
pectinases e celulases, que so respectivamente as enzimas que degradam os
reforos celulares de pectina e a celulose. Alm disso, os morangos atuais so
octaplides, ou seja, possuem 8 genomas!

MATERIAL NECESSRIO:
Morangos maduros (30 morangos, 2 para cada grupo)
Cpsula de porcelana para amassar os morangos
Tubo de ensaio
Bequer para recolher o filtrado
Funil de vidro
Filtro de papel (destes usados para coar caf) com a base
Detergente domstico
Sal de cozinha
Pipeta volumtrica para escorrer o lcool pelas paredes do tubo de ensaio e
medir o filtrado( 2 de 10ml para cada grupo)
lcool gelado (colocado no congelador por 1 noite)
Basto de vidro
gua Quente (70
o
75
o
C)


PROCEDIMENTO
Colocam-se 2 morangos em uma cpsula de procelana, umas 5 gotas de
detergente, uma pitada de sal de cozinha e um pouco de gua quente. Macera-
se tudo e filtra-se. Coloca-se 10ml do filtrado no tubo de ensaio , sobre o
filtrado o mesmo volume de lcool gelado( 10ml), com cuidado para que forme
uma fase sobre o filtrado. Aguarda-se um pouco e observa-se o DNA saindo do
filtrado e passando para a fase do lcool.
Com o auxlio do basto de vidro, fazendo-se movimentos giratrios, pode-se
pescar os filamentos que so as molculas de DNA.
Tpicos para discusso

1. Sobre as estruturas celulares e qual a sua composio
As membranas, celular e nuclear so compostas principalmente por lipdeos.
As protenas encontram-se aprisionadas na bicamada lipdica.

Os organismos celulares so compostos por protenas, cidos nuclicos (DNA
e RNA), envolvidos por uma membrana.

As paredes celulares das clulas vegetais so compostas essencialmente por
polissacardeos.

As pequenas estruturas celulares so compostas por substncias com
diferentes propriedades qumicas, pelo que os procedimentos experimentais
devem ser definidos de modo a separar um determinado constituinte celular
das restantes partes, sem causar muitos danos.

2. Onde se encontra o DNA na clula
Cerca de 99% do DNA encontra-se no ncleo da clula, o restante encontra-se
em locais especficos como exemplo, nas organelas (mitocndria e os
cloroplastos possuem o seu prprio DNA). Apesar dessas organelas terem o
seu prprio cromossomo elas no podem contar somente com a sua
informao contida neles, elas necessitam de genes especiais situados em
noutras organelas e, na maioria dos casos, nos cromossomos nucleares.

3. Sobre a funo dos reagentes usados na experincia
3.1. Sal
A adio do sal (NaCl) no incio da experincia proporciona ao DNA um
ambiente favorvel. O sal contribui com ons positivos e negativos. Os positivos
neutralizam a carga negativa do DNA, e os negativos as histonas, permitindo
que o complexo DNA+Histonas no se repila mais e ento se enovele. Se no
fosse a presena do sal, ele poderia desintegra-se. Um outro fato, que o sal
aumenta a densidade do meio, o que facilita a migrao do DNA para o lcool.

3.2. Detergente
O detergente afeta a permeabilidade das membranas, que so constitudas, em
parte, por lipdeos. Com a ruptura das membranas os contedos celulares,
incluindo as protenas e o DNA, so liberados e dispersam-se na soluo. A
funo de algumas dessas protenas manter o DNA enrolado numa espiral
muito apertada.

3.3. lcool
O DNA no se dissolve no lcool. Como resultado, o DNA precipita-se. Ele
aparece superfcie da soluo porque menos denso que a gua e a mistura
aquosa dos restos celulares.