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UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJA

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIA E TECNOLOGIA AMBIENTAL
CURSO DE MESTRADO EM CINCIA E TECNOLOGIA AMBIENTAL



AVALIAO DO IMPACTO AMBIENTAL DO FORMICIDA MACEX: UTILIZAO
DE UMA BATERIA DE BIOTESTES AQUTICOS PARA ANLISE
TOXICOLGICA




Renan Chiprauski Testolin








Itaja, SC, julho 2013

ii

UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIA E TECNOLOGIA AMBIENTAL
CURSO DE MESTRADO EM CINCIA E TECNOLOGIA AMBIENTAL



AVALIAO DO IMPACTO AMBIENTAL DO FORMICIDA MACEX: UTILIZAO
DE UMA BATERIA DE BIOTESTES AQUTICOS PARA AVALIAO
TOXICOLGICA


Renan Chiprauski Testolin

Dissertao apresentada Universidade do Vale
do Itaja, como parte dos requisitos para
obteno do grau de Mestre em Cincia e
Tecnologia Ambiental.

Orientador: Claudemir Marcos Radetski, Dr.





Itaja, SC, julho 2013

iii

AGRADECIMENTOS

Ao professor Dr. Claudemir Marcos Radetski, pela orientao, confiana, amizade e
disponibilidade para o desenvolvimento deste trabalho.

A minha famlia, em especial aos meus pais Sergio e Iris, meu irmo Alexandre e a
minha companheira Tatiane, pelo apoio incondicional.

A colega de curso e grande amiga, Albertina.

Aos colegas do Laboratrio de Remediao Ambiental.

A Universidade do Vale do Itaja UNIVALI.

A todos aqueles, que direta ou inderatamente, contriburam para este trabalho.




















iv

RESUMO
As formigas desempenham um papel fundamental na ecologia dos ecossistemas. No
entanto, quando as formigas se tornam indesejveis causam prejuzos econmicos, sendo
ento combatidas com aplicao de formicidas. Por outro lado, o aumento da conscincia
ambiental e um maior rigor na legislao ambiental conclamam por uma diminuio da
toxicidade dos agrotxicos para minimizar/eliminar os impactos ambientais causados por
estes produtos. Uma alternativa para este problema a utilizao de formicidas naturais em
substituio aos produtos mais txicos disponveis atualmente no mercado. Para a
comercializao dos agroqumicos exige-se testes prvios para avaliar possveis impactos
ambientais sobre os organismos terrestres e aquticos no-alvos. Assim, o objetivo deste
estudo foi o de avaliar o impacto ambiental no ecossistema aqutico causado pelo formicida
natural Macex. Testes ecotoxicolgicos com algas, peixes, bactrias e dfnias, bem como
testes de fitogenotoxicidade com Vicia faba e de hidrlise do diacetato de fluorescena
(atividade microbiolgica) foram usados na avaliao, sendo que os resultados permitiram
estabelecer a concentrao mxima deste formicida que no causa toxicidade significativa
nas espcies testadas. Os resultados dos testes de ecotoxicidade, com as concentraes
testadas de 0,03 at 2,0 g L
-1
, apresentaram valores de CE50 (ou CI50) variando de 0,49 (P.
subcapitata) a > 2,0 g L
-1
(D. rerio). J para o teste de fitogenotoxicidade com V. faba, as
concentraes testadas foram de 0,06 a 2,0 g L
-1
, onde se observou a formao de
microncleos somente na concentrao mais alta.

Palavras-chaves: Formigas; Agrotxicos; Ecotoxicologia aqutica, Vicia faba.









v

ABSTRACT
Ants play a key role in the ecology of the terrestrial ecosystems. However, when ants
become undesirable, these organisms can cause economic losses and are then countered
by the application of insecticides. But increased environmental awareness and more
stringent environmental legislation calls for a reduction in the toxicity of pesticides, in order to
mitigate the environmental impacts caused by these products. An alternative to this problem
is the use of natural insecticides that can replace the currently commercialized toxic
pesticides. Prior to marketing, agrochemicals must undergo testing to assess possible
environmental impacts on aquatic and terrestrial non-target organisms. Thus, the objective of
this study was to assess the environmental impact on the aquatic ecosystem caused by the
natural pesticide Macex. For this purpose, ecotoxicity tests with algae, fish, daphnids and
bacteria, as well as tests with Vicia faba and fluorescein diacetate hydrolysis (microbial
activity), were performed in this evaluation. The results enabled us to establish that the
maximum concentration of this pesticide that does not cause significant toxicity to the tested
species. The EC50 (or IC50) values ranged from 0.49 (Pseudokirchneriella subcapitata) to >
2.0 g L
-1
(Danio rerio). In the phytogenotoxicity test with Vicia faba, the tested concentrations
ranged from 0.06 to 2.0 g L
-1
, but micronuclei formation was observed only at the highest
concentration.

Keywords: Ants; Pesticides; Aquatic biotests, Vicia faba test.







vi

SUMRIO

LISTA DE FIGURAS ................................................................................................... 8
LISTA DE TABELAS .................................................................................................. 9
SIGLAS E ABREVIAES ...................................................................................... 10
1 INTRODUO ................................................................................................... 11
2 OBJETIVOS ....................................................................................................... 14
2.1 Objetivo Geral ........................................................................................................ 14
2.2 Objetivos especficos ............................................................................................. 14
3 REVISO BIBLIOGRFICA .............................................................................. 15
3.1 Formigas................................................................................................................ 15
3.2 Aspectos Econmicos-Ambientais Relativos s Formigas ..................................... 17
3.3 Agrotxicos ............................................................................................................ 20
3.4 Testes ecotoxicolgicos ......................................................................................... 29
4 MATERIAIS E MTODOS.................................................................................. 33
4.1 Preparao do Txico ............................................................................................ 33
4.2 Testes de Ecotoxicidade ........................................................................................ 33
4.2.1 Teste Lumistox com a bactria Aliivibrio fischeri .................................................. 34
4.2.2. Teste de inibio do crescimento das algas Pseudokirchneriella subcapitata . 34
4.2.3 Teste de imobilidade com Daphnia magna .......................................................... 35
4.2.4. Teste com peixe Danio rerio ........................................................................... 35
4.2.5. Determinao da atividade enzimtica pela hidrlise da FDA. ........................ 36
4.3 Teste de Genotoxicidade ....................................................................................... 36

vii

4.2.6 Teste de genotoxicidade com Vicia faba ......................................................... 36
4.4. Anlise estatstica dos dados dos testes de ecotoxicidade .................................... 37
5 RESULTADOS ................................................................................................... 38
5.1 Teste de estabilidade toxicolgica do macex ......................................................... 38
5.2 Teste de toxicidade com Aliivibrio fischeri. ............................................................. 39
5.3 Teste de toxicidade com Pseudokirchneriella subcapitata. .................................... 40
5.4 Testes de Ecotoxidade do Macex com Daphnia magna. ........................................ 42
5.5 Testes de Ecotoxidade do Macex com Danio rerio ................................................ 43
5.6 Teste da Hidrlise Enzimtica do FDA ................................................................... 44
5.7 Teste de Genotoxicidade com Vicia faba ............................................................... 45
6 DISCUSSO ...................................................................................................... 48
7 CONCLUSO ..................................................................................................... 52
8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................. 54
9 ANEXOS............................................................................................................. 66
9.1 Artigos ................................................................................................................... 66







viii

LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Ingredientes ativos mais comercializados no Brasil em 2009 em toneladas.
FONTE: IBAMA, 2010. ......................................................................................................... 22
Figura 2 Locais potenciais de ao dos inseticidas sobre o axnico e o terminais pores
do nervo. Fonte: ECOBICHON, 2001................................................................................... 24
Figura 3 - Clculo da rea total de um formigueiro. FONTE: ZANETTI et al. 2005............... 27
Figura 4 Fluxograma dos testes usados na avaliao ecotoxicolgica e genotxica do
formicida Macex. .................................................................................................................. 33
Figura 5 Valores de luminescncia para as bactrias Aliivibrio fischeri expostas
diferentes concentraes do formicida Macex durante 30 minutos. ..................................... 39
Figura 6 - Valores mdios da variao da fluorescncia da alga Pseudokirchneriella
subcapitata exposta diferentes concentraes de Macex durante 72 h. ............................ 41
Figura 7 - Valores mdios de Daphnia magna imobilizada aps 48 h de exposio a
diferentes concentraes de Macex. .................................................................................... 42
Figura 8 - Valores mdios da variao da absorbncia devido hidrlise do FDA por
microorganismos presentes nas guas expostos diferentes concentraes de Macex
durante 72 h......................................................................................................................... 44
Figura 9 - Mdia ( DP) da frequncia de microncleos (Mcn/1000 clulas) e ndice mittico
(IM, %) em razes de Vicia faba expostas 48h ao formicida Macex HM (hidrazida maleica):
controle positivo. .................................................................................................................. 46





ix

LISTA DE TABELAS
Tabela 1 reas de plantio florestal com Eucalyptus e Pinus nos Estados do Brasil. FONTE:
ABRAF capturado em 2012 ................................................................................................. 19
Tabela 2 - Formicidas, dosagens e pocas de aplicao de alguns formicidas
comercializados no Brasil. FONTE: GALLO et al. 2002. ...................................................... 26
Tabela 3 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para as algas P. subcapitata expostas
diferentes concentraes do formicida Macex. Os valores so de 4 testes iniciados com 24 h
de intervalo usando a mesma soluo estoque de Macex no preparo das diluies. ........... 38
Tabela 4 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para as bactrias Aliivibrio fischeri expostas
diferentes concentraes do formicida Macex. .................................................................... 40
Tabela 5 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para as algas P. subcapitata expostas
diferentes concentraes do formicida Macex. .................................................................... 41
Tabela 6 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para Daphnia magna expostas diferentes
concentraes do formicida Macex. ..................................................................................... 43
Tabela 7 - Valores mdio de letalidade de Danio rerio, aps 96 h de exposio diferentes
concentraes de Macex. .................................................................................................... 43
Tabela 8 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para microorganismos aquticos expostos
diferentes concentraes do formicida Macex. .................................................................... 45
Tabela 9 - Ecotoxicidade do Macex obtidos atravs de quatro espcies de organismos- teste
e outros dados de ecotoxicidade para formicidas comercializados a base de sulfluramida,
fipronil e clorpirifos. .............................................................................................................. 49





x

SIGLAS E ABREVIAES

ABNT Associao Brasileira de Normas Tcnicas
ABRAF Associao Brasileira de Produtores de Florestas Plantadas
CCEO Concentrao Com Efeitos Observveis
CE50 Concentrao Efetiva (para 50% dos organismos expostos)
CI50 Concentrao Inibidora (para 50% dos organismos expostos)
CL50 Concentrao Letal (para 50% dos organismos expostos)
COT Carbono Orgnico Total
CSEO Concentrao Sem Efeitos Observveis
DBO Demanda Bioqumica de Oxignio
DQO Demanda Qumica de Oxignio
FDA Diacetato de Fluorescena
IBAMA Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais
ISO International Organization for Standardization
MCN Microncleos
USEPA United States Environmental Protection Agency


11

1 INTRODUO
As formigas so um dos grupos de organismos que apresentam grande diversidade
de espcies na Terra e esto presentes em todos os ecossistemas terrestres, exceto em
regies polares, algumas ilhas ocenicas e grandes altitudes (WARD, 2006). Com relao a
diversidade, abundncia relativa e impactos ecolgicos, as formigas desempenham um
papel importante em muitas comunidades, exibindo vrias funes como organismos
detritvoros, predadores e herbvoros. Nos ecossistemas tropicais as formigas so um
componente notvel, constituindo mais de 15% da biomassa animal total desses
ecossistemas (BEATTIE & HUGHES, 2002).
Com relao aos insetos que se apresentam em sociedade, as formigas so as que
mais se adaptaram s cidades, sendo que no Brasil estima-se que das 2000 espcies de
formigas existentes, aproximadamente 50 espcies so pragas urbanas causando prejuzos
na jardinagem e nas plantaes urbanas (e.g., nos parques alimentando-se de sementes e
desfolhando plantas) (CAMPOS-FARINHA et al., 2002). J na agricultura, os prejuzos
econmicos podem ser tanto na produo como no armazenamento. Tambm causam
problemas em locais onde se manipulam alimentos, instituies de pesquisa, biotrios,
zoolgicos, museus, cabines de eletricidades e centrais telefnicas, pois so portadores de
grmens que podem contaminar estes diferentes locais.
Visando a proteo das culturas, o atual sistema de produo agrcola faz uso de
produtos qumicos estranhos s condies naturais dos agroecossistemas. Esta utilizao
de produtos qumicos visa controlar populaes de organismos em desequilbrio, plantas
daninhas e doenas que proliferam de maneira desordenada em funo de ambientes
favorveis ao desenvolvimento destes organismos que so popularmente denominados de
pestes (MOREIRA et al., 1996)
Dentre os produtos qumicos estranhos aos ecossistemas naturais esto os
pesticidas que tambm recebem a denominao de produtos agrotxicos ou fitosanitrios,
os quais so molculas sintetizadas para afetar determinadas reaes bioqumicas de
insetos, microrganismos, animais e plantas que se quer controlar ou eliminar. Busca-se
desenvolver agrotxicos com efeito especfico em um dado organismo a ser eliminado, e
assim, evitar que o efeito se manifeste nos outros seres que compem os ecossistemas.
Contudo, a introduo de agrotxicos no ambiente agrcola pode provocar perturbaes ou
impactos ambientais, pois podem exercer uma presso de seleo nos organismos e alterar

12

a dinmica do ecossistema natural, tendo como conseqncia, mudanas na estrutura e na
funo do ecossistema (SPADOTTO et al., 2004). Por outro lado, Tiepo et al. (2010)
definiram Pesticidas Verdes como biocidas naturais ou sintetizados produzidos de acordo
com os princpios da qumica verde e que agem de forma especfica sobre um alvo preciso,
com o mnimo de efeitos prejudiciais ou nocivos sobre os componentes no-alvos presentes
no ecossistema onde o produto foi aplicado. O Pesticida Verde na verdade uma
concepo ideal de um agrotxico.
Enquanto as indstrias qumicas se esforam para desenvolver agrotxicos menos
impactantes para o meio-ambiente, os governos exigem, alm dos estudos toxicolgicos
visando a proteo da sade humana, estudos ecotoxicolgicos que mostram a previso de
impacto ambiental destes produtos no ambiente antes de autorizar a comercializao dos
mesmos. Nesse contexto, os testes ecotoxicolgicos tem se consolidado como ferramenta
importante para a compreenso dos impactos potenciais provocados por agentes qumicos
nas comunidades biolgicas. Em decorrncia da possibilidade de estender/extrapolar
resultados da ecotoxicidade obtido com um organismo-teste para um grande nmero de
organismos presentes no meio natural, esses biotestes tem sido empregados no
gerenciamento, manejo e monitoramento do meio-ambiente. Assim, para o planejamento de
polticas ambientais, criao de legislao especfica e controle das emisses de efluentes,
procede-se avaliao de riscos ambientais e, para tanto, dados ecotoxicolgicos e
genotoxicolgicos precisam ser gerados e usados nos setores de vigilncia ambiental e de
sade publica (LOURENO, 2006).
Existe no mercado um formicida de composio natural denominado Macex e que,
teoricamente, no deveria causar impacto ambiental significativo. Pelo fato deste produto
ser usado no ecossistema terrestre, os poucos dados ecotoxicolgicos existentes na
literatura cientfica privilegiam este compartimento. Assim, Tiepo et al. (2010) sugeriram que
o formicida Macex seja classificado como pesticida verde com base em testes de toxicidade
com organismos terrestres: vegetais (Brassica oleracea, Lactuca sativa , Mucuna aterrima),
aneldeo (Eisenia fetida) e colmbolas (Folsomia cndida). A literatura no
registra resultados de ecotoxicidade aqutica e nem de genotoxicidade do Macex e sabe-se
que a maioria dos agrotxicos usados nos ecossistemas terrestres acabaro por atingir o
ecossistema aqutico, entrando em contato com os microorganismos e com os
macroorganismos que compem este ecossistema. essa falta de dados ecotoxicolgicos
em organismos do meio aqutico que justifica a escolha deste pesticida como objeto de

13

estudo nesta dissertao. Um teste de fitogenotoxicidade de importncia fundamental,
visto que as alteraes genticas so efeitos parte, no sendo observados nos testes
ecotoxicolgicos clssicos. A gerao de dados preliminares servir de base para futuras
avaliaes de risco ecolgico que busquem um gerenciamento otimizado deste produto
usado no controle das formigas que causam danos s culturas vegetais. Assim, o presente
trabalho est vinculado ao laboratrio de Remediao Ambiental UNIVALI, onde o mesmo
realiza estudos cientficos nos diagnsticos ambientais e nas avaliao dos efeitos
ecotoxicolgicos e genotoxicolgicos dos compostos qumicos liberados no meio ambiente.















14

2 OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GERAL
Utilizar uma bateria de biotestes aquticos para avaliao preliminar da ecotoxicidade
e genotoxicidade potencial do formicida Macex.
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS
Determinar as concentraes letais, efetivas ou inibidoras (ao nvel de 50%)
do formicida natural Macex para as espcies Danio rerio, Daphnia magna,
Scenedesmus subspicatus e Aliivibrio fischeri;
Determinar se o formicida natural Macex genotxico ou no com o uso da
espcie Vicia faba;
Determinar a concentrao efetiva (ao nvel de 50%) do formicida Macex nos
microorganismos presentes nas guas naturais;
Estabelecer as Concentraes Sem Efeito Observado (CSEO) para todas as
espcies testadas a fim de basear futuros estudos de anlise de risco
ecolgico, permitindo o estabelecimento de valores-limites legais para este
produto no meio-ambiente;









15

3 REVISO BIBLIOGRFICA
3.1 FORMIGAS
As formigas so um dos grupos de maior sucesso na histria dos metazorios
terrestres. Em mdia, as formigas apresentam de 15% a 20% da biomassa terrestre animal,
e em regies tropicais onde as formigas so especialmente abundantes, podem chegar a
25% ou mais. A famlia Formicidae soma mais de 9.500 espcies descritas e com nmero
estimado de 3.000 a 9.000 espcies desconhecidas para a cincia (SCHULTZ, 2000).
Constituem importantes componentes dos ecossistemas, no s por apresentarem uma
grande biomassa animal, mas tambm porque as formigas agem como engenheiros dos
ecossistemas (HOLLDOBLER & WILSON, 1986). Essa alta biodiversidade torna esses
organismos altamentes sensveis aos impactos ambientais, podendo reduzir essa
biodiversidade (FOLGARAIT, 1998)
As formigas cortadeiras, pertencentes tribo Attini, famlia Formicidae e subfamlia
Myrmicinae, representando um grupo especial de formigas associadas vegetao. Neste
grupo encontram-se os gneros Atta e Acromyrmex. Embora existam outros gneros, estes
assumem pouca importncia no forrageamento de plantas cultivadas (GIESEL, 2007). A
tribo Attini (Hymenoptera: Formicidae) compreende 14 gneros com aproximadamente 230
espcies de formigas descritas, que se especializaram em uma dieta essencialmente
fungvora (SCHULTZ & BRADY, 2008).
Um formigueiro tpico formado internamente por dezenas ou centenas de cmaras
(panelas) subterrneas ligadas entre si e com a superfcie por meio de galerias (canais).
Nas diversas panelas, as formigas cultivam o jardim de fungo, criam suas larvas e
depositam lixo. Externamente, o formigueiro apresenta um monte de terra solta, formado
pelo acmulo de terra extrada das cmaras, alm de pequenos montculos e numerosos
orifcios, denominados olheiros, os quais servem para ventilao, limpeza ou entrada de
material vegetal coletado (HOLLDOBLER & WILSON, 1986). Dos olheiros de trabalho saem
trilhas ou carreiros, que so os caminhos externos percorridos pelas formigas operrias
procura de material vegetal. As trilhas geralmente so superficiais e limpas (facilmente
notadas) e muitas vezes bastante longas; terminam em olheiros que nem sempre indicam a
localizao das panelas do formigueiro (DELLA LUCIA & MOREIRA, 1993; ANJOS et al.,
1998).

16

A populao do formigueiro constituda por indivduos morfologicamente distintos,
de acordo com suas funes na colnia. Estas formigas possuem castas permanentes e
temporrias. As castas permanentes em Atta so compostas por uma fmea ptera (rainha)
fundadora do sauveiro (casta reprodutiva) e por operrias (fmeas estreis) que
representam a maior parte da populao e executam as mais variadas tarefas necessrias
ao funcionamento do formigueiro. Nas castas temporrias, esto os machos (bitus) e
fmeas aladas (ias ou tanajuras), que aparecem nos formigueiros adultos anualmente,
garantindo a reproduo das espcies (DELLA LUCIA et al., 1993a; GALLO et al., 2002). As
operrias do gnero Atta so facilmente identificadas pela presena de trs pares de
espinhos no dorso do trax (ANJOS et al., 1998; GALLO et al., 2002).
Devido aos vrios efeitos que podem causar na cadeia trfica, as consequncias
ecolgicas da ao das formigas sobre um ecossistema pode ser muito variado. No caso
das espcies herbvoras, isto , cortadeiras que cultivam um fungo simbionte, conhecido
que sua atividade cortadora nem sempre negativa sobre a flora. Como estas espcies
cortam geralmente partes especficas de plantas, podem regular o crescimento diferencial
em uma mesma planta ou entre diferentes espcies de plantas, acelerando o crescimento
de flores, por exemplo, ou de espcies vegetais especficas. Por sua vez, estas formigas
acumulam grande quantidade de nutrientes em um s lugar, permitindo o crescimento de
certos vegetais que no podem sobreviver em solo pobre dos arredores, exercendo desta
forma, o papel de recicladores de nutrientes (BRASIL, 2012).
Outro efeito importante das formigas sobre um ecossistema a predao sobre
outros insetos e artrpodos (HOLLDOBLER & WILSON, 1986). Algumas espcies so muito
eficientes como predadoras. o caso das formigas-de-correo que arrasam com toda a
fauna de uma zona, obrigando a colnia a migrar continuamente em busca de novos
ambientes. A presso depredadora destas e de outras formigas to importante que muitos
organismos tm desenvolvido, durante sua evoluo, mecanismos de defesa especficos
contra formigas. o caso de muitas vespas, cupins, mariposas e plantas (BRASIL, 2012).
Algumas espcies de formigas encontram-se associadas s atividades antrpicas
causando incmodo, infestando aparelhos eletrnicos e podendo ainda causar srios
problemas na sade pblica quando a infestao se d em hospitais (CAMPOS-FARINHA et
al, 2002)

17

Segundo Boaretto & Forti (1997), para o controle de formigas cortadeiras de folhas
pode-se usar mtodos mecnicos, culturais, biolgicos e qumicos. O controle mecnico (ou
manual) praticamente no utilizado, em virtude de ser de viabilidade restrita a pequenas
reas e ninhos com at 4 meses de idade. Mtodos qumicos para controle de formigas
cortadeiras so os mais frequentemente utilizados, sendo o produto qumico aplicado
diretamente nos ninhos, nas formulaes em p, lquido ou lquidos nebulizveis, ou
apresentado na forma de iscas granuladas que so aplicadas nas proximidades das
colnias. J o controle biolgico certamente uma rea promissora de pesquisa, mas
atualmente est clara a necessidade de conhecimentos biolgicos bsicos para que
estratgias de controle para formigas cortadeiras possam ser de fato aplicadas. O preparo
do solo como arao e gradagem podem ser importantes na eliminao de sauveiros iniciais
e quenquenzeiros.
Entre os fatores comportamentais que podem influenciar no controle das formigas
cortadeiras destacam-se: a comunicao qumica, a sensibilidade olfativa, a capacidade de
aprendizagem, a seletividade e a produo de substncias antibiticas. A comunicao
qumica (via odores) muito importante na defesa e na agressividade, na seleo de
plantas, nas atividades sociais, corte e acasalamento e em outros tipos de comportamento.
Essa comunicao qumica essencial no sucesso das colnias de cortadeiras (MARINHO
et al., 2006), sendo que estas causam impactos econmicos significativos, o que abordado
na seo seguinte.

3.2 ASPECTOS ECONMICOS-AMBIENTAIS RELATIVOS S FORMIGAS
No Brasil existem muitas reas reflorestadas que apresentam problemas com as
formigas. Por exemplo, as formigas cortadeiras esto entre as pragas mais importantes em
fazendas brasileiras, porque seus ataques vorazes ocorrem durante o ano todo, se
espalhando pelo pas. O dano imenso, trazendo prejuzos s culturas pequenas e
grandes, culturas de frutas e legumes e pastos, sendo assim consideradas tambm como a
praga "nmero 1 entre as empresas de reflorestamento (BRASIL, 2012), o que se tem se
verificado tambm com outras espcies de formigas em outros pases (GUTRICH et al.,
2007).
Entre os problemas silviculturais dessas florestas implantadas, sobressaem as
formigas cortadeiras dos gneros Atta (savas) e Acromyrmex (quenquns), que

18

alcanaram o nvel de praga pela magnitude dos prejuzos que causam aos plantios de
pastagens ou florestais (MACARONI et al., 1963; NICKELE et al., 2009). Os danos das
formigas cortadeiras so mais expressivos nas plantas exticas do que nas nativas, isso se
deve provavelmente devido baixa co-evoluo existente entre esses grupos (DELLA
LUCIA & VILELA, 1993).
Assim, as pastagens tm seu desenvolvimento prejudicado, pois o ataque de
formigas leva morte das plntulas e m formao do pasto. Alm do mais, as formigas
competem diretamente com o gado pelo recurso forrageiro da rea. Estudos demonstram
que 10 sauveiros adultos ocupam uma rea de 715 m e consomem em mdia 21 kg de
capim por dia, o equivalente a um boi em regime de pasto (GALLO et al., 2002).
No Brasil, as espcies vegetais mais usadas nos reflorestamentos so o Pinus e o
Eucalyptus, sendo que as formigas cortadeiras destacam-se como as principais pragas,
principalmente nas fases de pr-corte (reas de reforma ou conduo da floresta) e aps o
plantio ou no incio da conduo de brotao.
Segundo a Associao Brasileira de Produtores de Florestas Plantadas (ABRAF,
2013), a rea ocupada de plantios em 2011 de Eucalyptus e Pinus no Brasil totalizou
6.515.844 h sendo 74,8% correspondente rea de plantios de Eucalyptus e 25,2% aos
plantios de Pinus. A Tabela 1 apresenta os valores das reas de plantio das respectivas
espcies acima citadas nos diferentes estados do Brasil. Percebe-se na Tabela 1 que os
estados do Paran e Santa Catarina se destacam em reas reflorestadas por Pinus por
causa do clima predominante, pois a espcie rende mais em climas temperados, suportando
melhor temperaturas mais baaixas.
As formigas cortadeiras causam danos significativos em plantios homogneos, os
quais favorecem o desenvolvimento dessas pragas pela falta de predadores naturais nas
reas de plantio. Assim, essas formigas so consideradas como fatores limitantes ao
desenvolvimento da cultura, causando tanto perdas diretas, como a morte e a reduo do
crescimento de mudas e rvores; quanto indiretas, como a diminuio da resistncia das
rvores a outras pragas (ANJOS et al., 1993).



19

Tabela 1 reas de plantio florestal com Eucalyptus e Pinus nos Estados do Brasil. FONTE:
ABRAF capturado em 2012
Florestas Plantadas no Brasil (Km
2
)
UF Eucalyptus Pinus Total %
MG 1.401.787 75.408 1.477.195 22,70%
SP 1.031.677 156.726 1.188.403 18,20%
PR 188.153 658.707 846.860 13,00%
BA 607.440 21.520 628.960 9,70%
SC 104.686 538.254 642.941 9,90%
RS 280.198 164.806 445.004 6,80%
MS 475.528 11.871 487.399 7,50%
ES 197.512 2.546 200.058 3,10%
PA 151.378 - 151.378 2,30%
MA 165.717 - 165.717 2,50%
GO 59.624 10.760 70.384 1,10%
AP 50.099 445 50.543 0,80%
MT 58.843 - 58.843 0,90%
TO 65.502 850 66.352 1,00%
PI 26.493 - 26.493 0,40%
RJ 8.844 - 8.844 0,10%
OUTROS 470 - 470 0,00%
TOTAL 4.873.951 1.641.893 6.515.844 100,00%

Segundo Zanetti et al. (2002), o ataque realizado pelas formigas cortadeiras de
maneira intensa e constante, podendo ocorrer danos em qualquer fase do desenvolvimento
da planta, ocasionados por cortes de folhas, brotos, ramos finos e flores, os quais so
carregados para o interior de ninhos subterrneos, dificultando o seu controle.
Zanetti et al. (2002; 2004) descrevem dados quantitativos sobre o impacto das aes
das formigas sobre plantas. Assim, estudos com Eucalyptus saligna demonstraram que as
rvores desfolhadas 100 % deixaram de produzir cerca de 40% da madeira no ano
seguinte desfolha e que as rvores com 50% de desfolha reduziram a produo da
madeira em 13,2% no ano seguinte, comparativamente s rvores no desfolhadas. J para
o caso da espcie Pinus caribaea atacada pelas formigas, o crescimento em altura das
rvores diminuiu em 12%, enquanto o dimetro diminuiu de 17,4% e a mortalidade mdia
aumentou em 11,7%. Quando rvores de Eucalyptus grandis de 6 meses de idade so

20

desfolhadas, elas tem 99,3% de probabilidade de morrerem, enquanto diminuem seus
crescimentos de altura e dimetro em 31,7% e 25,1%, respectivamente, provocando uma
reduo de 61,6% na produo da madeira, comparativamente s rvores no desfolhadas.
As rvores com idade de 1 a 3 anos so as mais susceptveis aos ataques das formigas,
sendo que um desfolhamento total retarda significativamente o crescimento das mesmas,
mas dois ou trs desfolhamentos consecutivos geralmente levam as plantas morte. Ainda
segundo Zanetti et al. (2002), estudos demonstraram que a perda de rendimento em volume
de madeira na espcie Pinus spp provocada por 5 formigueiros de Atta sexdens ficou em
14% e que quando a densidade de formigueiros da espcie Atta laevigata for maior que
30/ha em plantios de Pinus caribaea com menos de 10 anos de idade, h uma reduo de
mais de 50% na produo de madeira/ha. De uma maneira geral, h uma perda anual de
0,87% na produo do volume de madeira de Eucalyptus para cada 2,76 m
2
de sauveiro/ha
(ZANETTI et al., 2004).
Para evitar todas estas perdas produtivas, as empresas de reflorestamento tem
empregado o controle qumico de formigas cortadeiras de forma sistemtica, atravs de
iscas, termonebulizao e fumigantes, sendo o aspecto econmico das operaes de
grande importncia, em virtude dos altos custos envolvidos (FORTI & BOARETTO, 1997).
Nesse sentido, 75% dos custos e do tempo gasto no controle de pragas florestais dizem
respeito ao combate das formigas cortadeiras (ZANETTI et al., 2002)
Algumas consideraes sobre o uso de agrotxicos so abordadas nas seo
seguinte.

3.3 AGROTXICOS
Os agrotxicos e afins so definidos como os produtos originrios de processos
fsicos, qumicos ou biolgicos que so destinados ao uso nos setores de produo, no
armazenamento e beneficiamento de produtos agrcolas, nas pastagens, na proteo de
florestas (nativas ou implantadas) e de outros ecossistemas, e tambm de ambientes
urbanos (jardins e indstriais), cuja finalidade seja alterar a composio da flora ou da fauna,
a fim de preserv-las da ao danosa de seres vivos considerados nocivos, podendo ser
ainda substncias e produtos empregados como desfolhantes, dessecantes, estimuladores
e inibidores de crescimento (BRASIL, 2002).

21

Segundo Pope (2005), agrotxicos so substncias ou mistura de substncias
destinadas a prevenir, destruir, repelir ou mitigar qualquer praga (roedores, insetos,
nematides, fungos, plantas daninhas, de outras formas de planta terrestre ou aqutico ou
vida animal ou vrus, bactrias ou outros microorganismos, exceto os vrus, bactrias, ou
outros microrganismos sobre ou dentro do homem. Pode ser tambm qualquer substncia
ou mistura de substncias destinadas utilizao de um regulador de crescimento de
planta, desfolhantes, dessecantes. No termo agrotxico esto includos os termos
herbicidas, inseticidas, nematicidas, fungicidas e fumigantes do solo, sendo que estas
substncias representam um grupo diversificado de produtos qumicos inorgnicos e
orgnicos (IMFELD & VUILLEUMIER, 2012).
De uma forma resumida, os agrotxicos tm como objetivo o controle dos seres vivos
considerados indesejveis para a conservao de outros seres vivos, produtos ou do meio
ambiente. Os agrotxicos possuem em sua composio substncias qumicas txicas,
denominadas ingredientes ativos, que interferem na atividade biolgica normal dos seres
vivos alvos de controle. O ingrediente ativo o agente qumico, fsico ou biolgico que
confere eficcia aos agrotxicos e afins (BRASIL, 1989).
A Figura 1 apresenta os ingredientes ativos para os quais h maior comercializao
de agrotxicos no Brasil. No entanto, no levantamento desses dados foi utilizado apenas
valores declarados em marcas comerciais de produtos formulados.

22


Figura 1 Ingredientes ativos mais comercializados no Brasil em 2009 em toneladas. FONTE:
IBAMA, 2010.
Quando aplicados diretamente no solo, os agrotxicos podem ser degradados por
vias qumicas, por fotlise ou por ao de microorganismos. Contudo as molculas com alta
persistncia, ou seja, baixas taxas de degradao podem permanecer no ambiente sem
sofrer qualquer alterao por um longo perodo (AMARANTE JUNIOR et al., 2006). Essas
molculas podem ser adsorvidas pelas partculas do solo, dessorvidas a partir dessas
mesmas partculas, sofrer lixiviao e atingir os lenis subterrneos ou sofrer carreamento
e atingir guas superficiais (VIJVER et al., 2008). J nos ambientes aquticos, os
agrotxicos podem sofrer adsoro ou dessoro das partculas de sedimentos, ser
degradados por vias qumicas, biolgicas ou fotlise, bem como ser volatilizados. No ar, as
molculas na forma de gs ou de vapor podem ser transportadas por muitos quilmetros,
atingindo reas a grandes distncias da regio de aplicao (AMARANTE JUNIOR et al.,
2006).
Para o presente trabalho, o interesse sobre agrotxicos recai mais especificamente
sobre os inseticidas, os quais so produtos base de substncias qumicas ou agentes
biolgicos, de ao direta ou indireta, que provocam a morte dos insetos. Quimicamente,
podem ser classificados de diferentes modos, sendo que uma delas a diviso dos

23

inseticidas em trs grandes grupos: os organoclorados; os inibidores da colinesterase
(fosforados orgnicos e carbamatos) e os piretrides naturais e sintticos (IBAMA, 2010).
Segundo Costa (2008), os inseticidas desempenham um papel mais relevante no
controle dos insetos (como pragas), particularmente nos pases em desenvolvimento. Todos
os inseticidas qumicos em uso hoje so neurotxicos e agem por interferncia no sistema
nervoso dos organismos-alvo. O sistema nervoso central dos insetos altamente
desenvolvido e no to diferentes dos mamferos, bem como o sistema nervoso perifrico
que tambm apresenta semelhanas com os organismos superiores (ECOBICHON, 2001).
Desta maneira os inseticidas no so seletivos em relao a espcie alvo no que diz
respeito a toxicidade e os mamferos, incluindo os humanos, so altamente sensveis a sua
toxicidade. Quando essa seletividade existe, esta muita vezes, devido as diferenas na via
de desintoxicao existentes entre insetos e humanos (COSTA 2008).
Muitos inseticidas afetam o sistema nervoso em diferentes locais. O desenvolvimento
desses compostos tem sido baseado em relaes especficas estrutura/atividade
requerendo a manipulao de uma estrutura qumica bsica com intuito de se obter uma
forma ideal que afeta uma reao bioqumica especfica em um organismo alvo. Esses
locais ou reaes especficos e/ou mecanismo de ao pode ser semelhantes em todas as
espcies, no entanto, a dosagem (nvel de exposio e durao) ir ditar a intensidade dos
efeitos biolgicos. Os locais potencias de ao dos inseticidas e suas interferncias no
transporte de ons de sdio, potssio, clcio e cloretos nas membranas celulares podem ser
visto na Figura 2 onde ocorre a inibio das atividades enzimticas especificas ou a
contribuio para a liberao e/ou a persistncia dos transmissores qumicos nas
terminaes nervosas (ECOBICHON, 2001).

24


Figura 2 Locais potenciais de ao dos inseticidas sobre o axnico e o terminais pores do
nervo. Fonte: ECOBICHON, 2001.
Entre a diversidade de produtos em que os invertebrados podem ser expostos, os
inseticidas so o grupo com os maiores efeitos, seguido dos fungicidas. Isto em parte
devido presena de receptores especficos bioqumicos (e.g., colinesterases, canais de
ons) que so os alvos da ao inseticida e que so encontradas em todas as espcies de
insetos (STRAALEN, 2004).
Os efeitos dos inseticidas (ou de qualquer agrotxico) sobre a microflora do solo so
de suma importncia, devido ao fato de que muitas funes microbianas so fundamentais
para a produo agrcola, sustentabilidade do solo e da qualidade ambiental (TOPP, 2003).
O mecanismo de ao dos inseticidas em organismos microbianos pode ser diferente do

25

que os apresentados para os organismos alvos (i.e., insetos). Em microorganismos, os
inseticidas tem apresentado interferncia na respirao, na fotossntese, em reaes de
biossntese, bem como no crescimento, diviso e composio molecular (DELORENZO et
al., 2001).
A literatura registra dados sobre a eficcia dos formicidas atualmente mais
comercializados no Brasil, os quais so: sulfluramida, fipronil e clorpirifs. A sulfluramida (N-
etilperfluoroctano sulfonamida) o ingrediente ativo da isca granulada de Mirex-S Max,
Dinagro-S, AttaMax e Pikapau sendo esses os produtos mais comercializadas no Brasil.
Para esses produtos de isca granulado (0,6% de ingrediente ativo), Cameron (1990) relatou
que 1,8 g.m
-2
de formigueiro foi suficiente para controlar a formiga A. texana. O metablito
perfluoroctano sulfonamida (DESFA), atua no organismo no processo de fosforilao
oxidativa, em nvel mitocondrial, interrompendo a produo de ATP (SCHNELLMAN &
MANNING, 1990).
O clorpirifos (O, O-dietilo O-3 ,5,6-tricloro-2-piridil fosforotioato) como formicida em
isca comercializado no Brasil como Fersol 480 EC e Landrin-F, entre outros. Oliveira &
Zanuncio (1997) testaram este produto a base de clorpirifos para o controle da formiga Atta
laevigata, mas as iscas so eficazes apenas quando a aplicao realizada
simultaneamente com um processo de fumigao (FORTI et al, 2003; TOMLIN, 2000). O
Clorpirifs age por contato e ingesto. Como todo inseticida organofosforado, o clorpirifs
liga-se ao centro estersico da acetilcolinesterase (AChE), impossibilitando-a de exercer sua
funo, ou seja, hidrlise do neurotransmissor acetilcolina (ACh), em colina e cido actico.
Nos insetos, interfere com a transmisso dos impulsos nervosos, levando-os paralisia e
morte (TOMLIN, 2000).
O fipronil, comercializado como Blitz, Frontline, Regent 800 WG e outros, apresenta
ao txica retardada na colnia de formigas, sendo eficaz em testes de laboratrio a uma
concentrao de 5 ppm (FORTI & BOARETTO, 1997). O fipronil pertence famlia dos
fenilpirazis. Seu mecanismo de ao baseia-se no bloqueio pr e ps-sinptico da
passagem dos ons cloro pelos neurotransmissores (cido gama amino butrico GABA),
matando os organismos por hiper-excitao (TOMLIN, 2000).
A Tabela 2 nos mostra as dosagens de alguns inseticidas comumentemente usados
no combate de formigas cortadeiras.

26

Tabela 2 - Formicidas, dosagens e pocas de aplicao de alguns formicidas comercializados no
Brasil. FONTE: GALLO et al. 2002.
Formicida Dosagem/m
2

Compasso (rea mdia
de uma aplicao)
poca
aconselhvel
Lquido
fenitrotion
(Sumithion 50 E)
5 ml + 0,5 L gua 2 m
2
Chuvosa
clorpirifs (Lorsban
480)
5 ml + 0,5 L gua 2 m
2
Chuvosa
P
fipronil (Reagente
800 WG)
0,25 g + 0,5 L
gua
50 ml/olheiro (aplicar em
2 olheiros)
-
permetrina (K-
Othrine 2%)
30 g 3 m
2
Seca
Iscas
fipronil (Blitz) 10 g - Seca
sulfuramida (Mirex-s) 10 g - Seca

A rea do formigueiro que determina a dosagem da maioria dos formicidas. Dentre
as formas de calcular essa rea, destaca-se a seguir o mtodo da rea total de terra solta.
Por meio desse mtodo, a rea obtida atravs da multiplicao do maior comprimento pela
maior largura da rea ocupada pelos montculos de terra solta (ZANETTI et al., 2005). Para
economizar na quantidade de formicida usado, pode-se calcular rea individual de cada
ninho. As dimenses podem ser medidas com o auxlio de uma trena, ou com passadas
largas de aproximadamente 1 metro.

27


rea Total = comprimento AB x comprimento CD () = olheiro de abastecimento.
Figura 3 - Clculo da rea total de um formigueiro. FONTE: ZANETTI et al. 2005.

Forti et al. (2003) compararam a eficincia formicida de iscas formulados com
sulfluramida 0.3% (Mirex-S Max e Dinagro-S), fipronil 0.003% (Blitz) e clorpirifos
0.125% (Pikapau) no controle da formiga Atta capiguara, cortadora de gramneas. Foram
avaliados a frequncia de transporte das iscas, a devoluo das iscas, a frequncia de corte
e cargas, a quantidade de formigas e a quantidade de solo solto nos ninhos. Estes
parmetros foram avaliados durante 232 dias aps o tratamento e os autores concluram
que as iscas dos produtos Blitz e Pikapau no foram adequados para o controle de Atta
capiguara, enquanto que Mirex-S Max (8 g m
-2
) e Dinagro-S (10 g m
-2
) apresentaram alta
eficincia no controle das formigas.
Atualmente, o controle de formigas cortadeiras em reas reflorestadas tem sido feito
quase que exclusivamente com a aplicao de inseticidas convencionais, que podem
provocar impactos negativos ao ambiente e ao homem. Alternativamente ao uso de
inseticidas sintticos, surgem outros produtos e mtodos de controle, como o uso de
produtos naturais, os quais tm sido utilizados para controlar pragas animais, doenas de
plantas e ervas daninhas, desde os tempos antigos. As plantas tm sido as mais
importantes fontes de pesticidas naturais durante sculos e preparaes padronizadas para
o ingrediente(s) ativo(s) atravs de mtodos analticos modernos tornou-se disponvel nas
ltimas dcadas, tornando possvel a fabricao de produtos confiveis (UJVRY, 2010).
Um produto considerado alternativo por sua composio natural o formicida Macex,
fabricado pela Macex do Brasil, localizada na cidade de Caador, SC. A empresa afirma em
seu site (www.macex.com.br) que este formicida eficaz contra as formigas cortadeiras dos

28

gneros Atta e Acromyrmex, os quais so os gneros que causam maior impacto nas
plantaes brasileiras. A composio qumica do Macex a seguinte: cafena (0,04%),
cidos graxos (palmtico -1.5%, oleico -1.9%, linoleico 6.2% e esterico -0.4%), sendo que
polpas de ma e de ctricos agem como agentes atraentes.
Uma reviso da literatura no mostrou dados toxicolgicos para os cidos graxos
concluindo-se que deve ser a cafena o ingrediente ativo deste formicida. A cafena um
alcalide da famlia metilxantina, agindo como um produto qumico de defesa em certas
plantas e mostrando propriedades repelentes ou txicas (ARAQUE et al., 2007). As
metilxantinas, incluindo a cafena e a teofelina, so naturalmente produzidas em frutos,
sementes e folhas de certas espcies de chs, caf, cacau e cola. Entretanto, as
metilxantinas naturais e sintticas inibem a alimentao dos insetos e tambm so
pesticidas, nas concentraes encontradas nas plantas. Esses efeitos so ocasionados
principalmente pela inibio da atividade de fosfodiesterase e um aumento no ciclo
intracelular do monofosfato de adenosina. J em concentraes mais baixas, as
metilxantinas so sinrgicos potentes de outros pesticidas por ativar a adenilato ciclase, a
qual cataliza a converso de ATP AMPc em insetos (NATHANSON, 1984).
Enquanto a cafena pode ser considerado um inseticida (ARAQUE et al., 2007), seria
interessante avaliar se o produto Macex apresenta um impacto ecotoxicolgico quando em
contato com diferentes organismos que compem os ecossistemas. O conhecimento pelo
diagnstico ecotoxicolgico dos problemas causados pelo uso de agrotxicos de suma
importncia para uma viso prospectiva na avaliao do impacto ambiental das atividades
relacionadas agricultura, incluindo o uso de inseticidas. Essa informao pode subsidiar o
desenvolvimento de alternativas que conduzem sustentabilidade dos agroecossistemas
(MOREIRA et al., 1996). Assim, com respeito s caractersticas do Macex, no se tem dados
ecotoxicolgicos deste formicida no ecossistema aqutico, mas Tiepo et al. (2010)
publicaram um artigo abordando a ecotoxicidade deste produto sobre organismos terrestres
incluindo plantas (Brassica olaracea, Lactuca sativa e Mucuna aterrima), aneldeos (Eisenia
foetida), colmbolas (Folsomia candida) e microorganismos (hidrlise do diacetato de
fluorescena FDA). O estudo mostrou que a maior concentrao testada (i.e., 50 g kg
-1
de
solo seco) no apresentou toxicidade para os organismos testados. Esta ausncia de
toxicidade para estes diverssos organismos fez com que os autores sugerissem que o
formicida Macex fosse considerado um formicida ambientalmente correto, isto , com baixo
impacto sobre os organismos no-alvos (TIEPO et al., 2010).

29

3.4 TESTES ECOTOXICOLGICOS
Segundo Loureno (2006), os testes ecotoxicolgicos constituem o elemento
fundamental da Ecotoxicologia, os quais permitem avaliar o efeito da relao entre dose,
tempo de resposta e efeitos dos organismos em teste, possibilitando estimar o potencial
txico do agente qumico testado. O mesmo autor ainda cita que o potencial txico de uma
substncia calculado por meio de vrios parmetros que caracterizam sua ao, no em
um individuo isolado, mas em uma populao. Os organismos vivos podem exibir diferentes
reaes a uma mesma substncia txica, dependendo do metabolismo prprio da espcie,
das quantidades absorvidas e do tempo de exposio. Desta forma, os parmetros de
avaliao de toxicidade podem compreender desde alteraes fisiolgicas, bioqumicas e
histolgicas e at a letalidade. Os testes de toxicidade so divididos basicamente em dois
tipos, o agudo e o crnico, podendo ainda estes serem estticos (sem renovao do meio) e
dinmicos (com renovao do meio).
A ecotoxicidade, assim como a toxicidade humana, seja crnica ou aguda, muito
varivel entre os agrotxicos. Produtos muitos txicos para um organismo podem no ser
para outros e vice-versa. Entretanto, organismos muitos sensveis a um dado agrotxico
podem no ser expostos a ele em concentraes ou doses superiores aos nveis txicos
sendo que a exposio funo da biodisponibilidade do agrotxico ao organismo-teste
(SPADOTTO, 2006).
A mensurao da sensibilidade (resposta) de um organismo frente qualidade do
seu ambiente em funo do tempo pode ser denominada de biomonitoramento, o qual pode
ser a nvel bioqumico, fisiolgico, morfolgico e comportamental (KNIE & LOPES, 2004).
Toda essa sensibilidade depende no somente do fator a ser monitorado, mas tambm do
nvel nutricional, idade do organismo, sexo, fase de desenvolvimento, caractersticas
genticas, competio entre indivduos ou espcies, alm de fatores laboratoriais/ambientais
como luminosidade e temperatura do local onde o organismo exposto (MAGALHES &
FERRO FILHO, 2008).
A escolha dos organismo-testes geralmente segue alguns critrios, tais como:
abundncia e disponibilidade; representao ecolgica; cosmopolitismo da espcie;
conhecimento da sua biologia, fisiologia e hbitos alimentares; estabilidade gentica e
uniformidade de suas populaes; baixo ndice de sazonalidade; sensibilidade constante e
apurada; importncia comercial; facilidade de cultivo em laboratrio e, se possvel, a espcie

30

deve ser nativa para a melhor representatividade dos ecossistemas estudados (KNIE &
LOPES, 2004).
Varias espcies de organismos vem sendo empregadas internacionalmente em
testes de toxicidade, gerando subsdios importantes para uma melhor avaliao e
caracterizao dos efeitos agudos e crnicos de diversos agentes txicos por si s ou
quando presentes em corpos receptores. Em outros termos, os testes de ecotoxicidade so
ferramentas muito importantes nas avaliaes de riscos ecolgicos provocados por produtos
qumicos. Dentre os principais grupos de organismos utilizados em ensaios laboratoriais,
destacam-se: microalgas, microcrustCCEOs, equinides, poliquetas, oligoquetas, peixes e
bactrias, representando os mais diversos ecossistemas e nveis trficos (MAGALHES;
FERRO FILHO, 2008).
Assim, os testes de toxicidade so ferramentas desejveis para avaliar a qualidade
das guas e/ou a carga poluidora de efluentes, uma vez que somente as anlises fsico-
qumicas tradicionalmente realizadas (e.g., DQO, DBO, COT, concentraes de metais e de
outras substncias de carter orgnico ou inorgnico), cujos limites encontram-se
estabelecidos nas legislaes ambientais, no so capazes de distinguir entre as
substncias que afetam os sistemas biolgicos e as que so inertes no ambiente e, por isso,
no so suficientes para avaliar o potencial de risco ambiental dos contaminantes
(BOUDOU & RIBEYRE, 1989; FERRARI et al., 2004; PANDARD et al., 2006).
Segundo Warne (2003), em uma mistura, trs tipos de efeitos combinados so
referenciados: potenciao, sinergismo e antagonismo. A potenciao descreve os casos
em que a toxicidade da mistura igual esperada por adio do efeitos txicos de cada um
dos elementos da mistura. J o sinergismo descreve casos em que a toxicidade da mistura
est mais elevada do que o esperado se a mistura fosse aditivo. Por ltimo, o antagonismo
de uma mistura realada quando a sua toxicidade menor do que a soma das toxicidades
do substncias que compem a mistura (WANE, 2003; PANOUILLRES et al., 2007).
Um outro tipo de resposta paralela toxicidade clssica a genotoxicidade, a qual
so agresses ao material gentico. H muito tempo j se conhece que no meio-ambiente
existem muitos agentes fsicos e qumicos capazes de provocar alteraes no material
gentico dos seres vivos (KIHLMAN, 1956), definidos aqui como agentes genotxicos. O
interesse maior de estudar os agentes genotxicos que esta classe de poluentes ameaa
a integridade dos ecossistemas, pois estes dependem da sobrevivncia e reproduo das

31

espcies/populaes. Nesse sentido, a proteo das espcies/populaes depende do
desenvolvimento de sistemas eficazes de deteo de agentes genotxicos no ar, na gua e
no solo. Uma abordagem mais pragmtica do ponto de vista ambiental a realizao de
testes in vivo e/ou in situ, os quais durante suas execues experimentais integram as
muitas variveis ambientais que podem influenciar no potencial genotxico de uma
substncia qumica (KLEKOWSKI, 1982; SANDHU et al., 1994). Entre os organismos que
podem ser usados nestas avaliaes genotxicas, os vegetais ocupam um lugar de
destaque (GRANT, 1994, COTELLE et al., 1999)
Dentre os vegetais que podem ser utilizados, o teste com a espcie Vicia faba pode
ser considerado um dos mais simples (MA, 1982), permitindo variaes experimentais
maiores, o que de interesse para o presente projeto. O teste com V. faba geralmente
baseado em aberraes cromossmicas e/ou formao de microncleos que podem ter
origem clastognica (quebra de cromossomos pelo txico) ou aneugnica (no-migrao de
algum cromossomo durante a diviso celular), sendo inclusive padronizado por
organizaes como a Associao Francesa de Normalizao (AFNOR) e Organizao
Internacional de Padronizao (ISO) para o caso da deteco de guas e solos
contaminados (AFNOR, 2004; ISO, 2010).
Com relao ao impacto do formicida sobre os micro-organismos aquticos, a
hidrlise de FDA um mtodo que avalia a atividade hidroltica indiscriminada e tem sido
correlacionada positivamente com a respirao dos micro-organismos no solo (SCHNRER
& ROSSWALL, 1982). Em particular, a atividade enzimtica proporciona catlise de diversas
reaes que so necessrias ao ciclo de vida dos microrganismos, na decomposio de
resduos orgnicos durante o ciclo de nutrientes e na formao da matria orgnica e na
estrutura do solo (BURNS, 1978). Diversas pesquisas utilizando FDA para determinar a
atividade enzimtica j foram evidenciadas. As atividades enzimticas (FDA, urease e
glicosidase) serviram como indicadoras do potencial da funcionalidade dos ecossistemas e,
aliadas aos demais atributos biolgicos, tornam-se boas indicadoras da qualidade
microbiolgica de uma amostra (CARVALHO, 2005).
Por outro lado, as alteraes de comportamento podem ser resultantes dos efeitos
txicos e o comportamento dos organismos intoxicados permite explorar os possveis
mecanismos de intoxicao envolvidos na ao dos txicos (HODGSON, 2010). As
formigas, sendo organismos eussociais (vivendo em comunidades), podem ter suas

32

mobilidades, comportamento e percepes alteradas pela influncia do txico absorvido,
pois sabe-se que mudanas de comportamento podem ter bases fisiolgicas e/ou
neurolgicas (HODGSON, 2010). Qualquer mudana de comportamento nos organismos
que vivem em comunidade pode inviabilizar a cooperao entre os organismos e destruir a
comunidade (AYASSE et al., 2001).

















33

4 MATERIAIS E MTODOS
A Figura 4 apresenta a sequncia metodolgica utilizada neste trabalho para a
avaliao do formicida. Os testes de ecotoxicidade foram realizados no Laboratrio Ecotec,
localizado no municpio de Balnerio Camburi. J os testes de genotoxicidade e hidrolise
do FDA foram realizados no laboratrio de Remediao Ambiental da UNIVALI. As
metodologias empregadas no presente estudo foram baseadas em trabalhos publicados e
so descritas a seguir.
Preparao do
Macex
Teste de
estabilidade
toxicolgica
Testes
ecotoxicolgicos
Teste da hidrlise
enzimtica do
FDA
Teste de
Genotoxicidade
Resultados

Figura 4 Fluxograma dos testes usados na avaliao ecotoxicolgica e genotxica do
formicida Macex.

4.1 PREPARAO DO TXICO
Como o formicida Macex comercializado na forma de pequenos gros (iscas),
este foi macerado usando um almofariz e pilo, obtendo assim um p que foi
homogeneizado em gua destilada levemente aquecida, com intuito de facilitar a diluio e
com uma temperatura mxima de 45 C para que no ocorra a degradao trmica dos
compostos, em um perodo de duas horas, sob agitao na concentrao de 5 g L
-1
. Em
seguida houve a diluio desta soluo em diferentes concentraes que foram usadas na
exposio dos organismos-testes.

4.2 TESTES DE ECOTOXICIDADE
Para a realizao dos testes ecotoxicolgicos foram utilizados neste trabalho cinco
organismos testes, sendo eles: Danio rerio, Daphnia magna, Scenedesmus subspicatus,
Aliivibrio fischeri e Vicia faba e uma mistura de microorgaanismos presentes nas guas
naturais.

34

4.2.1 Teste Lumistox com a bactria Aliivibrio fischeri
O teste bacteriano de inibio de luminescncia utilizando Aliivibrio fischeri
(anteriormente conhecido como Aliivibrio fischeri) como organismo-teste (Lumistox, Dr.Bruno
Lange, Dsseldorf, Alemanha) foi realizado de acordo com a norma ISO (1996), seguindo as
condies protocolares (23C 2C, com pH igual a 7 e tempo de exposio de 30 min.). O
reagente bacteriano liofilizado foi obtido a partir da Deutsche Sammlung von
Mikroorganismen und Zellkulturen (DSM # 7151 N, Braunschweig, Alemanha). Executou-se
trs ensaios diferente em duplicata a fim de avaliar a variabilidade do processo, onde o
composto 3,5 diclorofenol a 6 mg L
-1
foi utilizado com controle positivo. A diluio da
amostra de formicida que causou 50% de inibio de luminescncia das bactrias com
relao s bactriascontroles (CI50) foi calculada pelo programa acoplado ao equipamento
(Luminmetro), usando a interpolao grfica.

4.2.2. Teste de inibio do crescimento das algas Pseudokirchneriella subcapitata
A espcie de alga utilizada foi a Pseudokirchneriella subcapitata (no passado
conhecida por Selenastrum capricornutum) Chodat (cepa 86.81 SAG, Gttingen, Alemanha).
Realizaram-se trs testes com as algas de acordo com a ISO (1990), tendo, em cada teste,
trs replicas para cada concentrao e controle. Como controle positivo utilizou-se
dicromato de potssio. A densidade da mistura foi ajustada para 10.000 clulas.mL
-1
atravs
de diluio com meio ISO. J os frascos do ensaio foram incubados em um agitador (100
rpm), com iluminao contnua de 70 mE m
-2
s
-1
com lmpadas brancas fluorescentes (luz
fria) e temperatura de 23 2C. Aps 72 h de incubao, realizou-se a medio do efeito
inibidor com base na atividade fluorescente (excitao/emisso foram fixados em
comprimentos de ondas 488/685 nm) com um espectrofotmetro Shimadzu RF-551 (Kyoto,
Japo).
Alm disso, com intuito de verificar a estabilidade txica do Macex, foram realizados
4 ensaios com algas colocadas em microplacas (96 poos) em dias consecutivos de acordo
com o procedimento descrito no Radetski et ai. (1995), usando sempre a soluo de agente
txico preparada no primeiro dia. Nestes testes com as microplacas, a pr-cultura de algas
com idade de 3-d foi preparada de meio ISO concentrado 2 vezes. A densidade celular da
mistura foi ajustada a 40.000 clulas.mL
-1
e 110 L dessa soluo de algas foi micro

35

pipetado em 60 poos da microplacas (os poos exteriores no foram usados), onde
tambm foram acrescentados 110 L das solues txicas concentradas 2 duas vezes
(gua para os controles). Aos se misturarem, as solues de algas e de txico caem pela
metade pela diluio entre elas. Antes da incubao, cada microplaca foi selada em sacos
plsticos transparente para minimizar a evaporao durante o perodo de exposio. Ao fim
de 72 h, os contedos das microplacas foram novamente suspensos e o volume total de
cada poo foi micro-pipetado para uma frasco contendo 20 ml de uma soluo eletroltica
(Isoton II, Coulter-Frana, Paris, Frana). O fator de diluio foi estimado em 20/0,22, tendo
a evaporao sido inferior a 5%. As algas foram enumeradas com um contador Coulter
(modelo ZM, a abertura da clula de 70 mm). A determinao da porcentagem de inibio, a
rea sob a curva de crescimento foi calculada com apenas dois tempos de exposio
(exemplo 0 e 72 h). A determinao da concentrao inibidora de 50% do crescimento
(CI50) foi determinada pelo mtodo Probit.

4.2.3 Teste de imobilidade com Daphnia magna
O teste de imobilizao de Daphnia magna com durao de 48 horas foi realizado
em conformidade com a norma ISO (1999) 232C, utilizando 5 indivduos para cada
rplica (com menos de 24 horas de vida) em copos de vidro de 50 mL com 30 mL do meio
teste contendo o txico. Dois ensaios diferentes (em triplicatas) foram realizados para cada
concentrao do formicida e controle a fim de avaliar a variabilidade do processo, tendo o
dicromato de potssio com controle positivo 0,9 mg L
-1
. Aps 48 h de exposio foi
verificado o nmero de indivduos imobilizados, o que permitiu a determinao do valor de
CE50 atravs do teste de Fischer.
4.2.4. Teste com peixe Danio rerio
Os testes de toxicidade estticos foram conduzidos de acordo com a norma ISO
(1993) utilizando Danio rerio. As amostras de peixes zebras Danio rerio Hamilton Buchanan,
foram obtidos a partir de um fornecedor comercial (indivduos jovens, recm eclodidos) e
aclimatados s condies de teste com gua sem cloro (pH: 8,1; condutividade: 56 mS.cm
-1
;
OD: 10,5 mg L
-1
; dureza total: 88 mg mg L
-1
de CaCO3; alcalinidade: CaO 71 mg mg L
-1
) 9
dias antes da experincia. A concentrao de oxignio dissolvido nas solues-teste foi
medida no incio e no fim da experincia utilizando um eletrodo de Oxignio. Os peixes

36

foram expostos diferentes concentraes de Macex durante 96 h, com trs replicas de
quatro indivduos por diluio e colocados em frascos de 2,5 L de soluo de teste
ligeiramente arejadas sob 232C, onde para os controles foi utilizado gua da torneira sem
cloro. Realizaram-se dois diferentes testes para cada concentrao do txico a fim de
verificar a variabilidade do processo, sendo que para o controle positivo utilizou-se
dicromato de potssio (concentrao de 97 mg mg L
-1
). Aps 96 h de exposio foi
verificado o nmero de indivduos mortos, o que permitiu a determinao do valor de CI50
atravs do teste de Fischer.
4.2.5. Determinao da atividade enzimtica pela hidrlise da FDA.
O mtodo consiste em quantificar o Diacetato de Fluorescena [3,6-
diacetilfluoresceina (FDA)] hidrolisada em amostras que contm microorganismos. O teste
foi iniciado com a preparao de uma soluo tampo de fosfato de sdio 60 mM, pH 7,6
(8,7 g de K2HPO4 + 1,3 g KH2PO4 para 1 L de gua), sendo que o pH foi ajustado com o HCl
0,01M. As amostras de gua coletadas em campo foram distribudas em tubos de ensaios (5
mL de amostra) em trs repeties para cada amostra. Concluda esta fase, acrescentou-se
0,2 mL da soluo de FDA (concentrao final no tubo del 2 mg.mL
-1
). A preparao da
soluo de FDA foi feita pela dissoluo de 40 mg de Diacetato de Fluorescena (FLUKA)
em 1 mL acetona p.a. e 15 mL gua destilada. Posteriormente a esta etapa os frascos sem
formicida e com diferentes concentraes do formicida foram fechados com folhas de
alumnio e incubados na temperatura de 27C por at 72 h. As amostras foram analisadas
no espectrofotmetro 490 nm (Espectrofotmetro INSTRUTHERM, Modelo UV 1100). Os
resultados foram expressos de forma bruta, em valores de variao das unidades de
absorbncia. A determinao da concentrao inibidora de 50% da colorao (CI50) foi
determinada pelo mtodo Probit.

4.3 TESTE DE GENOTOXICIDADE
4.2.6 Teste de genotoxicidade com Vicia faba
Para os testes de genotoxicidade foram utilizadas sementes secas de
Vicia faba. Um protocolo j publicado foi adotado com pequenas modificaes para este
teste (AFNOR, 2004). As sementes foram deixadas em gua deionizada durante 24 h
e depois se colocar as sementes entre duas camadas de algodo molhado a 22 C para

37

durante 3 dias para que a germinao pudesse ocorrer. Aps a remoo das pontas das
razes primrias, as plantas foram colocadas em soluo nutritiva Hoagland a 22 C durante
4 dias para promover o desenvolvimento de razes secundrias. O formicida foi diludo
em soluo de Hoagland em uma srie de diluio partindo da concentrao de 5 g.L
-1
,
tendo como controle negativo uma soluo de Hoagland e controle positivo a hidrazida
maleica (10 M) (HM; CAS No. 123-33-1) diludo em soluo nutritiva de
Hoagland. Colocou-se 3 plantas de Vicia faba em cada recipiente contendo 100 mL da
soluo-teste em triplicatas por concentrao, sendo que a exposio ocorreu em
lugar escuro e com durao 72 horas sem renovao do meio de exposio. Aps a
exposio, as razes secundrias foram lavadas com gua deionizada em abundncia. Para
o teste de microncleo, a ponta de cada raiz foi cortada e fixada durante a noite em soluo
de Carnoy (25% de cido actico glacial: etanol 75%, v:v) a 4 C e armazenada, se
necessrio, em etanol a 70% a 4 C. Em seguida, as pontas de razes foram
hidrolisadas em HCl 1 N a 60 C durante 6 minutos e esmagadas entre uma lmina e uma
lamela, sendo coradas com soluo a 1% de aceto-orcena. As frequncias de
microncleos foram numeradas com 1.000 clulas por ponta de raiz (duas razes por rplica)
em um microscpio com aumento de 400X. Ao mesmo tempo, houve a anotao do nmero
de clulas mitticas. A razo entre o nmero de clulas na mitose e do nmero total
de clulas chamado o ndice mittico (IM), sendo este indicador de citotoxicidade,
enquanto que o nmero de microncleos indicador de gentoxicidade.

4.4. ANLISE ESTATSTICA DOS DADOS DOS TESTES DE ECOTOXICIDADE
A anlise estatstica foi realizada atravs de um microcomputador utilizando o
programa TOXSTAT 3.0. Utilizou-se o teste de William (P 0,05) para obter a concentrao
sem efeitos observveis (CSEO) e menor concentrao com efeitos observveis (CCEO),
aps a verificao da normalidade pelo teste de Shapiro-Wilk e a homogeneidade da
varincia pelo teste de Hartley. Em alguns casos (peixe e dafndeos) foi utilizados o teste de
Fischer (P 0.05). Por fim, os valores de CI50 ou CE50 foram calculados por interpolao
grfica ou anlise Probit.



38

5 RESULTADOS
5.1 TESTE DE ESTABILIDADE TOXICOLGICA DO MACEX
Em virtude da durao dos testes ecotoxicolgicos, procurou-se conhecer a
estabilidade txica do formicida Macex em soluo em funo do tempo. Assim, um
experimento foi concebido para verificar se os compostos sofriam degradao em soluo, o
que se poderia perceber pela diminuio de sua toxicidade em funo do tempo. Os
resultados dos testes realizados com a mesma soluo estoque do formicida, mas com
idades diferentes, so mostrados na Tabela 3.
Tabela 3 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para as algas P. subcapitata expostas diferentes
concentraes do formicida Macex. Os valores so de 4 testes iniciados com 24 h de intervalo
usando a mesma soluo estoque de Macex no preparo das diluies.
Dia CSEO (g L
-1
) CCEO (g L
-1
) CI50 (g L
-1
)
Intervalo de
Confiana
(95%)
1
0,06 0,12 0,63

0,52 0,60
2
0,03 0,06 0,49
3
0,06 0,12 0,59
4
0,06 0,12 0,55


As leituras para os testes foram realizadas durante 4 dias com intervalo de 24 horas,
totalizado para o ultima leitura um total de 7 dias aps o preparo da soluo estoque. Os
resultados da Tabela 3 mostram que o Macex em soluo estvel para o perodo testado,
pois se contarmos desde o dia do preparo da soluo estoque at o ltimo dia do ltimo
teste. Assim, no conjunto dos dados obtidos, a CI50 mdia dos 4 testes foi de 0,56 g L
-1
com
um desvio-padro de 0.06 g L
-1
e um coeficiente de variao de 10.6%. Esta estabilidade
txica do Macex assegura que os resultados dos testes no sofreram nenhum vis devido
degradao intrnseca do produto em soluo. A estabilidade da toxicidade do produto pode
ser explicada pela composio do formicida, pois os cidos graxos e a cafena no so
facilmente degradados ou hidrolisados em soluo com pH prximo do neutro. Entretanto,

39

no se realizou analise qumica para cada leitura e sim, s para a soluo estoque a qual
mostrou valor similar concentrao nominal com variao de concentrao menor do que
10 % entre a concentrao medida e a concentrao nominal.

5.2 TESTE DE TOXICIDADE COM ALIIVIBRIO FISCHERI.
O teste de ecotoxicidade mais realizado no mundo em termos de custo e rapidez o
que utiliza a bactria marinha bioluminescente Aliivibrio fischeri, o qual recebe o nome de
Microtox ou Lumistox. Nesse teste medida a reduo da luminescncia emitida
naturalmente pela bactria quando ela posta em contato com um agente txico, o qual
inibe a atividade da enzima luciferase. O tempo de durao do teste varia entre 15 e 60 min.
Este teste considerado rpido, sensvel, fcil de executar e de baixo custo que pode ser
utilizado no controle da poluio das guas e efluentes industriais, tendo este teste o maior
banco de dados ecotoxicolgicos. Em termos de amostras testadas. Apesar dessas
vantagens um teste criticado por empregar uma bactria marinha de pouco significado
ecolgico (ZAGATTO e BERTOLETTI, 2006), no entanto, o metabolismo e o comportamento
da A. fischeri parecido com os das bactrias heterotrficas presentes no meio ambiente.
Conforme mostra a Figura 4, houve diferena significativa na luminescncia
bacteriana entre os microrganismos controles e os que foram expostos ao formicida Macex.

Figura 5 Valores de luminescncia para as bactrias Aliivibrio fischeri expostas diferentes
concentraes do formicida Macex durante 30 minutos.


40

Assim, para A. fischeri, o valor de CI50 foi de 0,89 g L
-1
, enquanto os valores de
CSEO e CCEO foram de 0,12 g L
-1
e 0,25 g L
-1
, como podem ser vistos na Tabela 4. Os
valores dos coeficientes de variao, geralmente menores que 15%, so aceitveis, visto
que a literatura preconiza como valor aceitvel de at 20%. Baseado nesses valores obtidos
nos testes, o Macex apresenta baixa toxicidade, podendo assim concluir que a quantidade
solubilizada do formicida no meio ambiente no afetar significativamente a atividade
bacteriana dos ecossistemas aquticos. O nico estudo de ecotoxicologia aqutica sobre o
Macex encontrado na literatura e que usou A. fischeri, mostrou uma CI50 de 0,98 g L
-1
, com
CSEO e CCEO de 0,25 e 0,50 g L
-1
, o que so valores muito prximos daqueles obtidos no
presente trabalho (BURGA-PEREZ et al., 2013).
Tabela 4 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para as bactrias Aliivibrio fischeri expostas
diferentes concentraes do formicida Macex.
Macex
(g L
1
)
Luminescncia
CV
(%)
CSEO
(g L
1
)
CCEO
(g L
1
)
CI50
(g L
1
)
Intervalo de
confiana (95%)
0 1,23 15,2
0,12 0,25 0,89 0,87-0,91
0,03 1,21 12,8
0,06 1,28 9,5
0,12 1,19 13,7
0,25 1,04 10,6
0,5 0,89 12,3
1 0,4 15,9

5.3 TESTE DE TOXICIDADE COM PSEUDOKIRCHNERIELLA SUBCAPITATA.
Quando se trata de um teste crnico em meio aqutico relativamente rpido, as algas
ocupam lugar de destaque, pois a cada cerca de 20 h, uma nova gerao de algas
formada. Os ensaios com algas tambm possibilitam determinar o potencial de eutrofizao
que os outros organismos aquticos no medem. A Figura 5 mostra os resultados dos
ensaios de inibio do crescimento das algas P. subcapitata expostas diferentes
concentrao de Macex.

41


Figura 6 - Valores mdios da variao da fluorescncia da alga Pseudokirchneriella
subcapitata exposta diferentes concentraes de Macex durante 72 h.
Aps anlise estattica obteve-se um valor de CI50 de 0,49 g L
-1
, CSEO de 0,06 g L
-1
e
CCEO de 0,12 g L
-1
(tabela 5) O estudo de Burga-Prez et al. (2013) com Macex e P.
subcapitata encontrou um valor de CI50 de 0,79 g L
-1
, com valores de CSEO e CCEO de
0,25 e 0,50 g L
-1
, respectivamente. Estes valores no so to prximos aos encontrados
neste trabalho realizado em Erlenmeyers, pois os testes realizados por Burga-Prez et al.
(2013) foram realizados em microplacas.
Tabela 5 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para as algas P. subcapitata expostas diferentes
concentraes do formicida Macex.
Macex
(g L
1
)
Fluorescncia
CV
(%)
CSEO
(g L
1
)
CCEO
(g L
1
)
CI50
(g L
1
)
Intervalo de
confiana (95%)
0 1,49 13,5
0,06 0,12 0,49 0,44-0,54
0,03 1,54 14,9
0,06 1,42 10,8
0,12 1,21 13,5
0,25 1,09 18,1
0,5 0,71 11,5
1 0,31 20,3


42

5.4 TESTES DE ECOTOXIDADE DO MACEX COM DAPHNIA MAGNA.
Na Ecotoxicologia, o uso de espcies de pequeno porte e ciclo de vida no muito
longo se mostram ideal nos estudos em laboratrios. A espcie Daphnia magna (entre
outros cladceros) tem o protocolo de cultivo em laboratrio bem estabelecido e no
apresenta muitas dificuldades para sua manuteno (ZAGATTO & BERTOLETTI, 2006). As
dfnias so importantes nas cadeias alimentares e so fonte significativa de alimento para
peixes, como tambm so sensveis a vrios contaminantes do ambiente aqutico (COSTA,
2008). Alm disso, a reproduo assexuada desses crustCCEOs por partenognese
garante a produo de organismos geneticamente idnticos permitindo, assim, a obteno
de organismos-teste com sensibilidade constante.
A Figura 6 mostra os resultados dos ensaios de mobilidade do cladcero Daphnia
magna expostos diferentes concentrao de Macex.

Figura 7 - Valores mdios de Daphnia magna imobilizada aps 48 h de exposio a diferentes
concentraes de Macex.
Os resultados da Tabela 5 mostram uma baixa toxicidade do formicida Macex face
ao cladcero Daphnia magna, uma vez que os valores CE50 foi de 0,68 g L
-1
e para o CSEO
o valor foi de 0,12 g L
-1
e CCEO de 0,25 g L
-1
, sendo esses valores prximos aos obtidos
para A. fischeri e P. subcapitata. No estudo de Burga-Perez et al. (2013), os valores de
CE50 encontrados para D. magna foi de 0,82 g L
-1
, enquanto os valores de CSEO e CCEO
foram respectivamente de 0,25 e 0,50 g L
-1
.

43

Tabela 6 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para Daphnia magna expostas diferentes
concentraes do formicida Macex.
Macex
(g L
1
)
Imobilidade
CV
CSEO
(g L
1
)
CCEO
(g L
1
)
CE50
(g L
1
)
Intervalo de
confiana (95%)
(%)
0 0 -
0,12 0,25 0,68 0,61-0,75
0,03 0 -
0,06 0 -
0,12 6,7 12,3
0,25 20 13,1
0,5 43,3 15,8
1 80 14,6

5.5 TESTES DE ECOTOXIDADE DO MACEX COM DANIO RERIO
Os principais representantes dos consumidores secundrios nas cadeias alimentares
so os peixes (GHERARDI-GOLDSTEIN et al., 1990). Diversas espcies de peixes so
utilizadas como bioindicadores. No Brasil a espcie mais utilizada o Danio rerio, o qual
vulgarmente conhecido como peixe paulistinha ou peixe zebra. Outra espcie recomendada
pela ABNT Pimephales promelas (ABNT, 2004). Os peixes, por serem considerados como
importante recurso alimentcio, podem ser a principal via de contaminao de produtos
qumicos txicos para o homem, via bioacumulao, da a sua importncia como
organismos indicadores.
A Tabela 7 mostra os resultados dos ensaios de letalidade do peixe Danio rerio
expostos diferentes concentrao de Macex.
Tabela 7 - Valores mdio de letalidade de Danio rerio, aps 96 h de exposio diferentes
concentraes de Macex.
Macex
(g L
1
)
Letalidade
(%)
CV
CSEO
(g L
1
)
CCEO
(g L
1
)
CL50
(g L
1
)
Intervalo de
confiana (95%)
0 0 -
1 2 >2 -
0,06 0 -
0,12 0 -
0,25 0 -
0,5 0 -
1 0 -
2 12,5 16,9

44

Os valores obtidos no teste de ecotoxicidade para Danio rerio nas diferentes
concentraes do Macex no foram suficiente para calcular uma CL50. Entretanto os valores
obtidos para CSEO e CCEO foram de 1,00 g L
-1
e 2,00 g L
-1
respectivamente. Assim os
resultados sugerem uma baixo impacto ambiental do Macex para peixes aps exposio
aguda.

5.6 TESTE DA HIDRLISE ENZIMTICA DO FDA
O impacto do Macex sobre a atividade hidroltica dos microorganismos presentes nas
guas naturais foi analizada pela variao da absorbncia relativa hidrlise do FDA, a qual
forma a fluorescena, deixando a soluo com colorao verde. Assim, a Figura 8 mostra os
resultados dos ensaios de variao da absorbncia provocada pela hidrlise da FDA quando
exposta aos microorganismos aquticos expostos diferentes concentrao de Macex.

Figura 8 - Valores mdios da variao da absorbncia devido hidrlise do FDA por
microorganismos presentes nas guas expostos diferentes concentraes de Macex durante
72 h.
Assim, para a hidrlise do FDA pelos microorganismos apresentados na Tabela 8, o
valor de CI50 foi > 1,0 g L
-1
, enquanto os valores de CSEO e CCEO foram de 0,25 g L
-1
e
0,50 g L
-1
. Estes valores podem ser comparados com os valores obtidos com o outro
microorganismo usado neste trabalho, a bactria A. fischeri, cujo valor de CI50 foi de 0,89 g
L
-1
, enquanto os valores de CSEO e CCEO foram de 0,12 g L
-1
e 0,25 g L
-1
. Poder-se-a

45

concluir que os microorganismos naturais so um pouco mais resistentes toxicidade do
Macex, mas mesmo assim, o valor da CI50 foi relativamente alto, com baixa probabilidade
de causar efeitos nefastos aos microorganismos, pois dificilmente encontraremos situaes
no meio ambiente onde o Macex estar em concentraes to elevadas quanto estas.
Tabela 8 - Valores de CSEO, CCEO e CI50 para microorganismos aquticos expostos
diferentes concentraes do formicida Macex.
Macex
(g L
1
)
Absorbncia
CV
(%)
CSEO
(g L
1
)
CCEO
(g L
1
)
CI50
(g L
1
)
Intervalo de
confiana (95%)
0 0,95 15,8
0,25 0,5 >1 -
0,03 0,99 16,9
0,06 0,88 17,8
0,12 1,02 16,5
0,25 0,87 17,0
0,5 0,71 14,9
1 0,61 14,2

5.7 TESTE DE GENOTOXICIDADE COM VICIA FABA
A Figura 3 apresenta o ndice mittico e as frequncias de microncleos obtidos na
exposio de Vicia faba em diferentes concentraes do formicida. As concentraes de
Macex at 0,25 g L
-1
no promoveram efeitos no ndice mittico da Vicia faba, mas as
concentraes de 0,5 e 2,0 g L
-1
apresentaram uma diminuio estaticamente significativa
no ndice mittico.
Em relao as frequncia de microncleos, foi observado a no-induo para
concentraes inferiores de 2,0 g L
-1
, enquanto que, o controle positivo (isto , B2) mostrou
um aumento significativo na frequncia de microncleos em comparao com o controle
negativo, ou seja, B1 (soluo Hoagland).






46

Mcn/1000 clulas

Figura 9 - Mdia ( DP) da frequncia de microncleos (Mcn/1000 clulas) e ndice mittico (IM,
%) em razes de Vicia faba expostas 48h ao formicida Macex HM (hidrazida maleica): controle
positivo.
* diferena estatisticamente significativa com relao ao controle (P 0.05)
** diferena estatisticamente significativa com relao ao controle (P 0.01).

Na literatura no h relatos sobre a genotoxicidade/mutagenicidade dos ingredientes
do Macex nas concentraes utilizadas para este estudo. A cafena, possvel ingrediente
ativo do Macex, foi relatada como sendo fracamente mutagnica em alguns modelos
animais no mamferos. Nos ensaios de Salmonella (teste de Ames), no houve
mutagenicidade e este composto (cafena) no teve efeitos significativo na frequncia de
induo nas trocas de cromtides irms (KIHLMAN & STURELID, 1978)
Apesar do nmero pequeno de ensaios utilizados neste estudo, esses resultados so
promissores em relao aos impactos ambientais a partir da genotoxicidade, pois enquanto
o Macex no apresenta este efeito, o formicida clorpirifos tem sido relatado como genotxico
para a espcie de peixe da espcie Channa punctatus e em leuccitos de ratos (ALI et al.,
2008; PORICHHA et al., 1998; RAHMAN et al., 2002.). Tambm h estudos relatando este
0
10
20
30
40
50
60
Formicida (g L
-1
)
12
IM (%)
Mcn
0 0.125 0.25 0.5 2 HM
0
2
4
6
8
10
IM
*
*
**
**
*

47

produto como genotxico para clulas de razes das plantas Crepis capilares, Allium cepa e
para ensaio de microncleo com Tradescantia (ASITA & MAKHALEMELE, 2008; DIMITROV
& GADEVA 1997; RODRIGUES et al., 1998).



















48

6 DISCUSSO
A crise de biodiversidade que se observa atualmente devido, entre outras causas,
presena de substncias qumicas txicas liberadas no meio ambiente. No caso dos
agrotxicos, um estudo recente analizou os ndices de biodiversidade de invertebrados em
riachos da Frana, Alemanha e Austrlia (BEKETOV et al., 2013). Estes autores
constataram perdas de at 42% para certas famlias e espcies, mesmo em regies onde o
uso de agrotxicos est bem regulamentada, obedecendo aos padres de proteo
ambiental. Para se evitar este tipo de problema, de fundamental importncia o uso dos
testes de ecotoxicidade antes de se liberar o produto para o mercado e mesmo depois de
ser liberado, pois pode haver casos em que as transformaes ambientais deixam os
metablitos do produto mais perigosos. Tambm podem existir espcies de organismos no
testados previamente que possam ser sensveis a este produto e/ou metablitos.
A Tabela 9 mostra baixos efeitos a curto prazo (testes agudos) de ecotoxicidade em
diferentes espcies de organismos aquticos. Com base nesses valores, possvel
descrever a toxicidade do Macex como no sendo altamente txico, apresentando CE(CI)50
maiores que 0,1 g L
-1
, limite aceito como sendo no txico (KAMRIN, 1977). Essa baixa
ecotoxicidade pode ser explicado pelo fato que os ingredientes do Macex no so txicos e
tambm pelo fato que o produto comercializado mostra baixa solubilidade em gua. Nesse
sentido, alguns estudos realizados em vrias regies do mundo mostram que a
porcentagem dos produtos utilizados na agricultura que atingem os ambientes aquticos
geralmente baixa (JURY et al., 1987; SOLOMON et al., 1996).
Deve-se salientar que os bioensaios utilizados para este estudo incluem organismos-
testes requeridos pela Diretiva 91/414/CEE para os novos produtos qumicos industriais
(MARTINS et al. 2007).







49

Tabela 9 - Ecotoxicidade do Macex obtidos atravs de quatro espcies de organismos- teste e
outros dados de ecotoxicidade para formicidas comercializados a base de sulfluramida,
fipronil e clorpirifos.
Organismos
Teste
Parmetros
(CI, CL ou
CE50)
Produto (mg L
-1
)
Macex Sulfluramida Fipronil Clorpirifos
Bacteria
Inibio de
luminescncia
890 (30
min)
-
> 100
(30 min)
2,8
(30 min)
Microorganismos Hidrlise FDA
>1000
(72 h)
- - -
Alga
Inibio de
crescimento
490
(72 h)
68,1 (96 h) 0,16 (96 h) 3,0 (96 h)
Dafnia Imobilidade
680
(48 h)
0,39 (48 h) 0,19 (48 h) 0,0017 (48 h)
Peixe Letalidade
> 2000
(96 h)
9,9 85 0,43

Segundo a classificao de toxicidade aguda da Organizao Mundial da Sade
(OMS), a sulfluramida classificada como pouco perigoso, enquanto finopropil e clorpirifos
so classificados como moderadamente perigosos. Entretanto, de acordo com os dados
publicados, a ecotoxicidade destes inseticidas diferente, com finopropil e clorpirifos sendo
classificados como altamentes ecotxicos (BARRON & WOODBURN 1995; GUNASEKARA
et al. 2007) e enquanto sulfluramida e considerando como ligeiramente ecotxico
(KRIEGER, 2001).
No caso do Macex, a classificao da OMS para testes de toxicidade em ratos,
permite classificar este inseticida como Improvvel que seja perigoso, onde o valor de CE
(CI ou CL)50 maior que 100 mg kg
-1
de peso corporal no teste oral agudo. Devido a este
elevado valor txico apresentado pelo Macex, este no pode ser classificado de acordo com
a Diretiva Europeia 93/67/CEE (Comisso Europia 1996). O principal composto ativo de
ao deste qumico (provavelmente a cafena), interfere com os sistemas semioquimicos e
no pode ser considerado um produto txico na concentrao presente no Macex. Isto
apoiado com base em observaes em campo, onde se verificou que as formigas no foram
mortas pela a ingesto do produto, mas sim na alterao comportamental e por
consequncia desestruturao social da colnia, levando as mortes individuais.
Com relao aos ensaios de genotoxicidade realizados neste estudo, aplicou-se um
teste ambiental baseado no ensaio de microncleos da V. Faba. Os nveis de citoxicidade

50

de um agente pode ser observado pelo ndice mittico, uma vez que este reflete o ndice de
freqncia da diviso celular, sendo considerado como um parmetro importante na
determinao da taxa de crescimento da raiz (FERNANDES et al. 2007). Os efeitos
adversos genotxicos e/ou mutagnicos dos pesticidas atravs da alterao genticas
induzidas nas sementes, leva alteraes na constituio gentica na populaes, o que
motivo de preocupao fundamental em se pensando em um ecossistema, pois um tempo
prolongado de exposio crnica pode levar a mudanas na estrutura do ecossistema
(WURGLER & KRAMERS 1992). Alm disso, a presena de genotoxinas em qualquer
compartimento ambiental indesejvel, em particular no ponto de vista de risco para os
humanos (WURGLER & KRAMERS, 1992).
Os resultados mostram que o formicida Macex apresenta genotoxicidade apenas em
concentraes muito altas (no realsticas), na ordem do ppmil para a V. faba. No entanto,
os resultados mostraram que o ndice mittico (IM) da V. faba diminuiu significamente em
uma concentrao de 0,5 mg L
-1
de formicida. O IM reflete a atividade mittica dos
meristemas e a diminuio deste ndice sinal de citoxicidade (AFNOR, 2004; SMAKA-
KINCL et al., 1996; NYAYAR et al., 2006). Alm disso, a inibio da multiplicao celular
prejudicar o crescimento das razes (FUSCONI et al., 2006; NOODN, 1969). Assim, o
aumento resultados da induo da diviso celular, evento que pode ser caracterizado
como prejudicial para as clulas (HOSHINA, 2002), mas ainda h pouca informao
disponvel na literatura em relao ao estudo relacionado ao ndice mittico e o
desenvolvimento das plantas.
Os diferentes compartimentos ambientais esto recebendo cada vez mais mais
produtos qumicos de variadas composies, os quais necessitam de avaliaes
ecotoxicolgicas, no s previamente colocao no mercado, como aps o uso no meio
ambiente para poder avaliar o impacto ambiental em funo das transformaes que
possam ter ocorrido durante a estadia e passagem da substncia nos diferentes
compartimentos. O contato desses produtos qumicos com os organismos desses
compartimentos acaba dificultando a compreenso de quais substncias so mais perigosas
para a fauna e para a flora. Os ensaios em laboratrio ajudam nessa compreenso, pois
pode-se trabalhar com uma nica substncia e assim, pode-se obter dados dos efeitos
dessa substncia em vrios tipos de organismos (PAULUS, 2005; KLAUSENER et al.,
2007).

51

Uma questo importante e que tem relao com o objetivo deste tabalho a
translocao/transferncia das substncias qumicas entre os compartimentos. Nesse
aspecto, o formicida natural Macex aplicado no solo, mas existe a possibilidade de que
parte do produto chegue no ecossistema aqutico, principalmente pelo fenmeno de
carreamento pelas guas das chuvas (PEREIRA et al., 2009; POGCEAN & GAVRILESCU,
2009), pois na forma de isca, este formicida resistente solubilizao e a via de entrada
deste formicida nos organismos a via gstrica. Como j citado, Tiepo et al. (2010)
publicaram um trabalho sobre a ecotoxicidade deste produto em alguns organismos
terrestres, contudo, at a elaborao deste projeto de dissertao, no se encontrou na
literatura nenhum trabalho de ecotoxicidade deste produto sobre organismos aquticos, com
exceo do trabalho de BURGA-PEREZ et al. (2013). Assim, os dados levantados nesta
dissertao podem servir de base para futuros trabalhos relativos ecotoxicidade do
formicida Macex.
Do ponto de vista etolgico, a base da estrutura social das formigas o sistema de
comunicao, sendo essencial para a troca de informaes entre esses insetos e
manuteno da ordem no formigueiro. Em virtude da falta de dados toxicolgicos da cafena
frente s formigas necessrio tambm outros estudos com insetos sociais da ordem
Himenoptera (por exemplo, abelhas e cupins) para avaliar os impactos do Macex nesse tipo
de espcies e pesquisas mais detalhadas para compreender o mecanismo de ao do
Macex com intuito de obter mais informaes sobre o efeito no sistema de comunicao, o
qual poderia justificar o conceito de formicida disruptor semitico nesses insetos sociais.







52

7 CONCLUSO
Com relao a ecotoxicidade do Macex, os resultados mostraram que a alga P.
subcapitata (CI50 de 0,49 g L
-1
para 72-h) foi a mais sensvel das espcies estudada seguido
por D. magna (CI50 de 0,68 g L
-1
para 48-h). As bactrias A. fischeri (CI50 0,89 g L
-1
para 30
min) apresentaram a menor toxicidade, juntamente com os microorganismos responsveis
pela hidrlise do FDA (CI50 >1,0 g L
-1
para 72 h) e o peixe D. rerio (CL50 > 2,0 g L
-1
para 24-
h). Com base nos dados obtidos a partir dos testes de ecotoxicidade, o formicida Macex
pode ser classificado como um produto de baixa toxicidade e baixo impacto sobre
organismos no-alvos.
Nas concentraes testadas no teste de genotoxicidade (0,06 1,0 g L
-1
), no foi
observado genotoxicidade, no entanto as concentraes de 0,5 g L
-1
e 2,0 g L
-1
mostraram
diminuio do ndice mittico para V. faba, sendo que para a concentrao de 2,0 g L
-1

houve um aumento significativo no nmero de microncleos. Assim, os resultados
mostraram que o Macex pode ser classificado como genotxico, mas em altas
concentraes em comparao a outros formicidas.
A possibilidade de lixiviao do Macex, evitando assim a disperso do mesmo no
meio ambiente e a interao das molculas do inseticida com as partculas do solo antes
destas atingirem as guas superficiais e subterrneas pode fazer com que a ecotoxicidade
potencial do Macex seja mais baixa comparativamente aos resultados dos biotestes em
laboratrio. Outro aspecto ambiental relacionado a utilizao de formicidas o fato de que
estes no so utilizados apenas no contexto agrcola, pois as formigas esto presentes
tambm em ambientes urbanos (GREY et al., 2005). Assim, o combate desses insetos por
autoridades pblicas, empresas privadas e manuteno de jardins particulares so
potenciais consumidores dos formicidas e a exposio das pessoas esses compostos
txicos poderia ser evitada utilizando produtos de baixa toxicidade. A baixa genotoxicidade e
ecotoxicidade deste formicida devido ao seu mecanismo de ao, o qual possivelmente
interfere nos sistema semioqumicos de comunicao entre os insetos, o que especifico
para os organismos da ordem dos Himenpteros.
Esses dados de toxicidade aqutica do Macex podem ser muito teis para gestores
ambientais e comunidade cientfica. Entretanto, devido ao nmero limitado de testes e
condies testadas, este estudo tambm deve ser considerado como uma investigao

53

inicial dos possveis problemas decorrentes da aplicao do formicida no ambiente, sendo
necessrio uma maior amplitude de testes buscando conhecer aspectos especficos deste
formicida frente a diferentes organismos.


















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9 ANEXOS
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