Uno de los aspectos ms importantes de los seres vivos es su capacidad de reproducirse.

Es
as como las especies pueden mantenerse a lo largo del tiempo. Te imaginas como se reproduce un
erizo de mar? Has hecho alguna vez fecundacin in vitro? Sabes que es una larva? Te invitamos a
explorar y conocer diferentes aspectos de la reproduccin en un organismo marino


El objetivo del trabajo de hoy es que realices
una fecundacin in vitro y sigas el desarrollo
embrionario del erizo de mar.

El trabajo lo realizaremos en grupos de no ms de
cuatro personas. Observa cuidadosamente las
preparaciones al microscopio, que no te lo cuente tu
compaero, ve las cosas por ti mismo. Prepara un
cuaderno de laboratorio y registra todo lo que
haces y todas las observaciones que te parezcan
importantes. Debes trabajar en forma rpida y
ordenada, porque esta actividad demora alrededor de
2 horas en su preparacin. Recuerda que ests
trabajando con organismos vivos por lo que debes
tener cuidado al manipularlos.
En el laboratorio de hoy trabajaremos con el erizo
negro (Tetrapygus niger). Este organismo marino es
muy utilizado en estudios reproductivos ya que es
fcil obtener sus gametos y lograr la fecundacin.

Actividad 1: El erizo de mar y su morfologa.

El objetivo de esta actividad es que logres diferenciar
las partes de un erizo. Slo necesitas papel y lpiz.

El erizo de mar es un organismo dioco,
es decir, los sexos masculino y femenino
se presentan en individuos separados. Sin
embargo a simple vista es imposible
distinguir uno de otro. El cuerpo de un erizo de mar
se divide en dos partes: una oral, que posee la
boca y est dirigida hacia el sustrato, y una parte
aboral que contiene la regin anal.
Con cuidado debes tomar un erizo y reconocer estas
dos zonas en el erizo. Son iguales?. Qu diferencias
observas?.


Actividad 2: Obtencin de gametos.

El objetivo de esta actividad es que conozcas una
tcnica para obtener los gametos en el erizo de mar.
Necesitas una bandeja, una jeringa, solucin de KCl
0.5 M, una cpsula de Petri, un vaso precipitado de
200 ml. y 150 ml. de agua de mar
Existen varias tcnicas usadas por los cientficos para
obtener gametos, la ms utilizada en erizos es una
denominada estmulo qumico, y consiste en aplicar
una solucin de KCl (cloruro de potasio) al 0,5 M .
Con ste mtodo el erizo evacua sus gametos y no
muere.

PRECAUCIN. Debes tener cuidado al
trabajar con KCl, ya que el uso indebido
puede causar daos a la salud.

Debes tomar el erizo e invertirlo (con la zona oral
hacia arriba) e inyectarle, 5 ml de solucin KCl 0,5M
con una jeringa, tal como aparece en la Figura 1.















Figura 1: Proceso de induccin a la liberacin de gametos
en erizo. Inyeccin de KCl en la cavidad interna
del erizo.
REPRODUCCIN IN VITRO
DE ERIZO DE MAR
Dientes



Debers esperar algunos segundos y observar. Qu
sucede?. Porqu crees que pasa esto?. Cmo crees
que se inducira la liberacin de gametos en la
naturaleza?.
Si el erizo es macho liberar un lquido de color
blanquecino, en cambio si es hembra el lquido ser
de color rojo.
El erizo macho debe ser colocarlo en una cpsula de
Petri sin agua de mar, como aparece en la Figura 2a,
la hembra debes dejarla en un vaso precipitado con
agua de mar (Figura 2b)

















Figura 2: (a) Erizo masculino inyectado con KCL puesto
sobre una cpsula de Petri. (b) Erizo femenino
inyectado con KCl puesto sobre un vaso pp.


Actividad 3: Observando los gametos.

El objetivo de esta actividad es que observes y
diferencies los gametos masculinos y femeninos del
erizo. Necesitas lpiz, papel, dos cubreobjetos, dos
portaobjetos, una cpsula de Petri y dos pipetas
Pasteur.

1.- Toma con una pipeta Pasteur un poco del lquido
blanquecino liberado por el erizo macho y deposita
una pequea gota en la cpsula de Petri, luego
agrega 10 gotas de agua de mar y mezcla. Coloca
una gota de esta solucin en un portaobjeto, ahora
coloca un cubreobjetos y observa al microscopio.
Qu observas?. Qu forma poseen los
espermatozoides?. Porque crees que se producen
tantos espermatozoides?. Dibuja en tu cuaderno de
laboratorio, un espermatozoide.

2.- Repite la experiencia ahora con el lquido rojizo.
Qu observas?. Porqu crees que el vulo es ms
grande que el espermatozoide?. Dibuja ahora un
vulo.


Actividad 4: La fecundacin.

El objetivo de esta actividad es observar el proceso
de la fecundacin. Necesitas dos vasos precipitados
de 200 ml., 500 ml. de agua de mar, 2 pipetas
Pasteur, un portaobjetos y un cubreobjetos.

A diferencia de los humanos, en la mayora
los organismos marinos la fecundacin es
externa, es decir, los gametos son
liberados al ambiente y la unin de estas
clulas se realiza en el mar.

Cmo crees que el espermatozoide encuentra al
vulo? Qu sucedera si se encontraran gametos de
especies diferentes? Cmo se asegura la naturaleza,
que gametos de distintas especies no se unan?.

1.- Debes dejar que los vulos decanten en el fondo
del vaso, con mucho cuidado debes eliminar el
sobrenadante (agua de coloracin amarillenta) y
agregar agua de mar limpia. Este procedimiento
debes realizarlo dos veces. De esta manera
eliminars una cubierta de gelatina que protege al
vulo y as ser ms fcil la unin de los gametos.

2.- Con una pipeta Pasteur extrae tres muestras de
vulos (lquido rojo) y depostalo en un vaso pp.
Agrega 150 ml de agua de mar. Luego extrae con
otra pipeta una muestra de espermatozoides y
depostala en el vaso pp. de los vulos.

Agita el vaso suavemente. Espera un minuto y saca
una gota de la solucin para observarla al
microscopio. Qu observas?. Qu est
sucediendo?. Dibuja lo que observas

2A 2B



Actividad 5: Desarrollo embrionario.

El objetivo de esta actividad es realizar un
seguimiento a los diferentes estados de desarrollo de
un erizo de mar, desde la primera divisin mittica
hasta la fase de Larva Pluteus.

Esta actividad debes realizarla en diferentes
intervalos de tiempo. A medida que vayan pasando
los das podrs observar las diferentes fases.

Necesitas un vaso precipitado de 200 ml. un
portaobjetos, un cubreobjetos y una pipeta Pasteur.

Deja el vaso precipitado con los huevos fecundados
en un lugar seguro a temperatura ambiente, y en los
tiempos indicados a continuacin, debes extraer una
muestra del vaso y depositarla en un portaobjetos,
para luego observarla al microscopio y dibujar lo que
observas.

Los estados de blstula, gstrula y larva
pluteus, son fases mviles, es decir,
poseen flagelos. Por lo tanto debes
observarlos con cuidado y hacer un
seguimiento para obtener un buen resultado.

Estado de desarrollo Tiempo
Primera divisin 1,5 a 2 horas
Segunda divisin 2,5 a 3 horas
Blstula 24 horas
Gstrula 2 das
Larva Pluteus 4 a 5 das


Saquemos conclusiones



1. Cmo afecta el hombre el desarrollo normal de
la reproduccin de los organismos marinos?

2. De que manera puedes contribuir t, a no
perturbar los procesos reproductivos de los
organismos marinos?

Los erizos y sus gametos se utilizan generalmente
como indicadores de estudios ambientales. Cuando
los cientficos observan interrupciones o alteraciones
en el desarrollo de estos organismos, se considera
como que algo est daando la vida en el mar.

Te sugerimos una experiencia que puedes realizar
para comprobar esto:

Agrega 1 ml. de vinagre a una solucin de
espermatozoides, y observa como este
compuesto (pH cido) afecta su movilidad.
Repite la experiencia agregando 1 ml. de
amonaco (pH bsico) 1 ml. de detergente.

Qu sucede al adicionar estos compuestos?
Qu pasa con la movilidad en las diferentes
soluciones?.

Puedes imaginar lo que sucede en los sectores
donde se eliminan aguas residuales? De que manera
crees que se ve afectada la reproduccin en estos
lugares? Qu suceder con la abundancia de los
organismos? Qu se puede hacer para evitar esto?


Averigua en que consiste la reaccin
acrosmica, que es la segmentacin, la
gastrulacin y la organognesis.

Ahora que ya has visto los diferentes estados de
desarrollo del erizo de mar, puedes construir un
esquema o maqueta de los estados de desarrollo de
este organismo marino.

Puedes realizar un panel mostrando los resultados del
experimento anterior y sealar como el hombre y sus
desechos afectan la vida marina, especialmente la
reproduccin.







Proyecto EXPLORA ED5/00/015
Universidad Catlica del Norte

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