ECOTOXICOLOGIA

DEFINICIONES:

Es la ciencia que estudia los efectos txicos de
sustancias qumicas y agentes fsicos sobre los
organismos vivos, especialmente sobre poblaciones
y comunidades dentro de ecosistemas definidos.
Incluye el estudio de los caminos de transferencia de
estos agentes y sus interacciones con el ambiente
(TRUHAUT, 1977; BUTLER, 1978)

Es la ciencia que investiga los efectos de sustancias
sobre los organismos. El peligro sobre las
poblaciones de animales y plantas puede ser
determinado mediante el uso de datos existentes,
tomados del ambiente (Ecotoxicologa retrospectiva)
o mediante el desarrollo de ensayos especficos
(Ecotoxicologa prospectiva) (RUDOLPH and BOJ E,
1986)

Es la ciencia que se propone la la evaluacin, el
monitoreo y la prediccin del destino y efectos de
xenobiticos en el ambiente (MORIARTY, 1988)

Es la ciencia que intenta predecir los impactos de las
sustancias qumicas sobre los ecosistemas (LEVIN et
al., 1989)

Es el estudio de los efectos adversos o dainos sobre
los ecosistemas (WALKER et al., 1996)


ECOTOXICOLOGIA

OBJ ETIVOS:

Se propone la evaluacin, monitoreo y prediccin del
destino y los efectos de xenobiticos en el ambiente
(MORIARTY, 1988)


Est motivada por el deseo de mantener las
estructura y funcin naturales de los ecosistemas
INTEGRIDAD DEL ECOSISTEMA (HARRIS et al., 1990)
[Los ecosistemas son dinmicos; luego, puede resultar no
natural mantener el status quo]


La investigacin ecotoxicolgica resulta ser tambin
la investigacin del ecosistema (MATHES et al., 1991)


Se propone proveer una base cientfica que permitir
que las sustancias sean evaluadas con una cantidad
razonable de esfuerzo y costo. La informacin
obtenida provee la base para evaluaciones que
permitan determinar qu sustancias podrn ser
liberadas al ambiente, cules de ellas sern
ambientalmente tolerables y n qu cantidades
(RMBKE and MOLTMANN, 1997)






ECOTOXICOLOGIA


Es el estudio de la relacin dosis o concentracin
/ efecto de txicos liberados al ambiente sobre los
sistemas biticos incluyendo los niveles de
organizacin inferiores y superiores al nivel de
organismos



DAO AL ECOSISTEMA

Involucra tanto la estructura como la funcin del
sistema
La funcin slo es posible si se considera la
estructura
La estructura y la funcin no pueden ser
consideradas aisladamente
Importancia de las relaciones trficas (transferencia
de energa y nutrientes)





TOXICOLOGIA Y
ECOTOXICOLOGIA


TOXICOLOGIA:

Introduccin directa del txico en el organismo
Focaliza su atencin sobre una nica especie,
el hombre
Dosis (DL, DE - tiempo)

ECOTOXICOLOGIA:

Introduccin del txico en el medio
Focaliza su atencin sobre toda la biota
(estructura y funcin del ecosistema)
Considera los procesos de:
Transformacin
Degradacin
Secuestracin
Redistribucin
Bioacumulacin
Concentracin (CL, CE - tiempo)








TOXICOLOGIA ECOTOXICOLOGIA

COMPUESTO A SER ENSAYADO


ADMINISTRACION

A travs del ALIMENTO, INYECCION Introduccin en el MEDIO
INHALACION (DOSIS) DE ENSAYO
(CONCENTRACION)

PARTICION
TRANSFORMACION
DEGRADACION en el medio

CAPTURA por organismos


TRANSPORTE - METABOLISMO
dentro de organismos


REACCION CON EL SITIO SENSIBLE O BLANCO
en organismos


EFECTOS

expresados por el ORGANISMO expresados por
ORGANISMOS

expresados por

POBLACION

expresados por
COMUNIDAD

expresados por
ECOSISTEMA



QUIMICA AMBIENTAL
La deteccin de una sustancia no es evidencia de sus
efectos potenciales. Su relevancia ecotoxicolgica es
sujeto de controversia.

Aporta evidencia cuantitativa de la presencia de la
sustancia potencialmente txica = ANALISIS DE
RESIDUOS
Estudia los mecanismos y modelos de transporte, el
destino final y el impacto de los xenobiticos en el
ambiente abitico (KORTE, 1980, 1987)

Centra su atencin en la sustancia qumica, su ingreso,
presencia (concentracin), transporte, destino y
procesos de transformacin en el medio abitico
(BOURDEAU et al., 1989)

Se centra ms directamente en el destino de los
productos qumicos desde el momento de su aplicacin
hasta que alcanzan a su receptor biolgico
(STEINEMANN et al., 1990)


ECOTOXICOLOGIA (en sentido tcnico):

Estudia los efectos (a nivel infraindividual, individual,
supraindividual), mecanismos de accin y transporte,
metabolismo y mecanismos de detoxificacin de los
xenobiticos sobre el medio bitico




DEFINICIONES



ECOTOXICOLOGIA ACUATICA:

Es el estudio cuali y cuantitativo de los
efectos adversos de xenobiticos sobre los
ecosistemas acuticos



CONTAMINANTE:

Sustancia introducida en el ambiente como
resultado, por lo menos en forma parcial, de
la actividad humana y que produce efectos
adversos no deseados sobre los
organismos individuales y sobre el
ecosistema










ECOTOXICOLOGIA


ECOTOXICOLOGIA PROSPECTIVA O PREDICTIVA:
Evaluacin de la toxicidad antes de la produccin y
comercializacin del producto

ECOTOXICOLOGIA RETROSPECTIVA:
Evaluacin de la toxicidad ante la indicacin cierta o
sospecha de que el xenobitico produce efectos adversos
sobre el ecosistema


OBJETIVOS DEL ENSAYO DE TOXICIDAD:

Investigacin bsica
Criterio de calidad de agua
Evaluacin del impacto ecotoxicolgico o del riesgo
Monitoreo de un cuerpo de agua


IMPACTO ECOTOXICOLOGICO:
Interaccin entre el agente txico y el sistema bitico que
conduce a la interrupcin de la funcin armnica del
sistema
Cadena causal: agente - receptor - efecto
Se manifiesta cuando se exceden las variaciones normales
de las funciones del sistema






DEFINICIONES

TOXICIDAD:
Es la capacidad de una sustancia de causar algn
efecto nocivo sobre organismos vivos

Depende de:
Cantidad administrada o absorbida
Va de ingreso al organismo
Distribucin a lo largo del tiempo despus de su
administracin
Naturaleza y severidad del dao producido
Tiempo necesario para producir el efecto


RIESGO:
Es la frecuencia esperable de efectos adversos como
consecuencia de la exposicin al xenobitico


SEGURIDAD:
Se establece sobre la base del riesgo socialmente
aceptable, considerando las frecuencias esperadas
de los efectos adversos y de su severidad sobre el
hombre y el ecosistema





Ecosistemas


Composicin de la comunidad



Cambios en la poblacin



Respuestas a nivel de organismo individual



Cambios fisiolgicos



Cambios bioqumicos



Contaminante




Aumento del tiempo de respuesta


Aumento de la dificultad de vinculacin a productos qumicos
especficos


Aumento de la importancia ecolgica



Relaciones de vinculacin entre respuestas de diferentes niveles de
organizacin


NIVELES DE ORGANIZACION BIOLOGICOS
Caractersticas Estructurales y Funcionales



NIVEL ESTRUCTURA FUNCION


Descripcin de formas en ciertos
segmentos de tiempo


Evaluacin durante un
prolongado perodo de tiempo


CELULAS /
ORGANOS

Molculas, membranas, tejidos,
caminos metablicos, tipos de
clulas, tipo de rganos


Crecimiento, metabolismo,
conversin energtica,
detoxificacin

ORGANISMO

Especie, habitat, edad, estado, sexo

Metabolismo, crecimiento y
desarrollo, reproduccin, salud,
mortalidad, concentracin en
tejidos, comportamiento


POBLACION

Presencia, nmero de individuos,
densidad, dispersin, pirmide de
edades, relacin de sexos


Fertilidad, reproduccin,
eficiencia / produccin


COMUNIDAD

Nmero y composicin de especies,
relaciones de dominancia


Regulacin, funcin

ECOSISTEMA

Ubicacin geogrfica, clima, tipo,
sucesin, equilibrio

Resiliencia, estabilidad.
Degradacin,, filtracin,
produccin primaria,
bioretencin








TOXICO



Es el agente que puede producir un efecto
adverso
Dao referido a la estructura y funcin del
sistema
La introduccin puede ser:
deliberada (efluentes)
accidental (derrames)
El sitio de liberacin es:
no puntual
puntual
La cantidad liberada debe superar un nivel
umbral para que se manifieste el efecto
Se establece la relacin concentracin /
respuesta
Duracin de la exposicin
Ensayos de toxicidad







TIPOS DE TOXICOS


Segn su modo de accin:

No selectivos

Selectivos
Dificultad para establecer
interpolaciones entre especies
Mecanismos:
Presencia o ausencia de sitios
receptores
Alteracin en los procesos de
distribucin del txico

Relaciones estructura / actividad (QSAR)










TIPOS DE CONTAMINANTES


IONES INORGANICOS
Metales pesados : no biodegradables
Aniones: nitratos
Fosfatos

COMPUESTOS ORGANICOS
Hidrocarburos
Alcanos, alquenos, alquinos
Aromticos
Bifenilos policlorados (PCBs)
Dibenzodioxinas policloradas (PCDDs)
Dibenzofuranos policlorados (PCDFs)
Bifenilos polibrominados (PBBs)
Plaguicidas
Detergentes
Clorofenoles

COMPUESTOS ORGANOMETALICOS

ISOTOPOS RADIOACTIVOS

GASES
Ozono
Clorofluorocarbonos (CFCs)
Oxidos de carbono: CO2
Oxidos de nitrgeno: NO, NO2, NOX
Oxidos de azufre: SO2
CLASIFICACION DE PLAGUICIDAS


Segn organismo blanco


PLAGUICIDA ORGANISMO BLANCO

Acaricidas

Acaros y termitas


Algicidas

Algas

Bactericidas

Bacterias

Fungicidas

Hongos

Herbicidas

Plantas, usualmente malezas terrestres o
acuticas


Insecticidas

Insectos

Molusquicidas

Moluscos (caracoles y babosas)

Nematicidas

Nematodes (parsitos externos)

Rodenticidas

Roedores

Termiticidas

Termitas


Segn tipo de formulacin


PLAGUICIDA CARACTERISTICAS

Sprays

Insecticidas, herbicidas o fungicidas como
concentrados emulsificables, lquidos miscibles en
agua, polvos solubles en agua (mojables), soluciones
oleosas


Polvos

Insecticidas y fungicidas como agentes no diludos,
aerosoles de polvos


Granulados

Insecticidas, herbicidas y algicidas bajo la forma de
un carrier (transportador) inerte impregnado con el
plaguicida


Coatings

Insecticidas y fungicidas para tratamiento de semillas


Aerosoles

Insecticidas. Repelentes y desinfectantes bajo la
forma de spray, para aplicacin en interiores


Fumigantes

Lquidos evaporables o gases para tratamiento de
suelos y control de plagas en almacenajes con efecto
nematicida e insecticida


Cebos

Prcticamente, sin liberacin del i.a. en el ambiente;
el txico es ingerido por el organismo blanco
(insectos, moluscos y roedores) atrado por el
seuelo


Formulaciones
de liberacin
lenta

Insecticidas microencapsulados, lacas para pinturas
y bandas de resina para uso en interiores


Segn estructura qumica


INSECTICIDAS HERBICIDAS FUNGICIDAS

Organoclorados
(hidrocarburos
clorados)

Organofosforados
(steres de cido
fosfrico)

Carbamatos

Piretroides naturales
y sintticos

Dinitrofenoles

Organotinas

Microbianos



Algunos criterios usados para
la clasificacin:

En relacin a la poca de
siembra del vegetal a ser
protegido

En relacin al mecanismo
de exposicin (va suelo u
hojas)

En relacin al modo de
accin (herbicidas de
contacto, sistmicos)

En relacin a la estructura
qumica:

Acidos fenoxialifticos

Nitroanilinas

Ureas sustitudas

Carbamatos y
tiocarbamatos

Triazinas (heterocclicos
nitrogenados)

Derivados del fenol y
dinitrofenoles

Inorgnicos
(Sulfuro, cobre o
mercurio)

Orgnicos
(ditiocarbamatos)

Sistmicos
(bencimidazoles)

Antibiticos

(Existe gran
heterogeneidad
qumica)





BIODISPONIBILIDAD DE TOXICOS



En solucin


Adsorbidos sobre:

Slidos en suspensin
Sedimentos
Biota


Incorporados a la biota










CONCENTRACION DE TOXICOS
EN EL AMBIENTE



Concentracin TOXICO
Propiedades fsicas
Transporte Propiedades
qumicas
Fuentes
Tasa de ingreso




Transformacin ECOSISTEMAS
Propiedades fsicas
Destino Propiedades
qumicas







TRANSPORTE



Involucra, generalmente, mltiples medios:
aire, agua, suelo
Numerosos modelos, desde difusin simple
a ecuaciones multidimensionales complejas


AGUA:

Varios modelos distintos: fsiscos,
matemticos, etc.

Caracterizados por:
Simulacin de movimientos del agua,
Concentracin o tasa de carga del
contaminante

Dimensionalidad:
una (mayora)
dos (algunos)
tres o ms (muy pocos)








MEDIOS Y COMPARTIMIENTOS AMBIENTALES



MEDIO COMPARTIMIENTOS

AIRE

Atmsfera
Partculas en aire
Aerosoles
Nubes (vapor)
Biota


AGUA
(MEDIO ACUATICO)

Aguas superficiales
Sedimentos
Slidos en suspensin
Agua subterrnea
Biota

Ambiente marino
Ambiente dulceacucola
Ambientes salobres


TIERRA
(MEDIO TERRESTRE)

Suelo
Agua retenida entre los poros del
suelo
Atmsfera del suelo
Vegetacin superficial
Biota del suelo








PRINCIPALES RUTAS DE INGRESO DE CONTAMINANTES
ORGANICOS EN LOS ORGANISMOS

TIPO DE
ORGANISMO
RUTA DE INGRESO FUENTE DE CONTAMINANTES

Vertebrados
Terrestres
Sistema digestivo

Piel

Pulmones
Alimento y agua ingeridos

Superficies contaminadas

Aerosoles y partculas en aire
Vapor; gotas y partculas en aire
Invertebrados
terrestres
Tracto alimentario

Cutcula (insectos)
Paredes del cuerpo (lombrices)

Trqueas (artrpodos), vas areas
Alimento y agua

Superficies contaminadas
Ambiente contaminado (suelo)

Gotas y partculas en aire
Peces Branquias



Sistema digestivo
Contaminantes disueltos o
suspendidos en agua y
sedimentos

Alimento
Mamferos
acuticos y
aves
Sistema digestivo Alimento
Cantidades pequeas de agua
ambiental o agua ingerida (aves)
Anfibios Sistema digestivo



Piel
Alimento
Cantidades pequeas de agua
ingerida

Contaminantes disueltos o
suspendidos en agua y
sedimentos
Invertebrados
acuticos
Tracto alimentario


Superficies respiratorias
Alimento
Agua ingerida

Contaminantes disueltos o
suspendidos en agua y
sedimentos
Plantas Hojas



Races
Contaminantes en gotas o
partculas
Vapores

Contaminantes disueltos en agua
del suelo
CRITERIOS PARA EL ESTABLECIMIENTO
DE PRIORIDADES EN LA EVALUACION
DE TOXICOS



TIPOS DE XENOBIOTICOS:
Consumidos directamente por el hombre
Liberados directamente al ambiente
Contaminantes de otros productos


CARACTERISTICAS:
Indicacin cierta o sospecha de alta
toxicidad
Alta persistencia en el ambiente
Capacidad para inhibir mecanismos de
detoxificacin de organismos vivos
Acumulacin potencial en la biota y en el
ambiente
Tipo y tamao de las poblaciones potencialmente






DEFINICIONES
DOSIS: Es la cantidad de sustancia administrada a un
organismos, expresada como unidad / peso corporal

CONCENTRACION: Es la cantidad de sustancia
aplicada en el medio, expresada como unidad de
peso o volumen / volumen del medio


EFECTO: Es el cambio biolgico producido tanto en
el nivel de organismo individual como en niveles de
organizacin inferiores o superiores al individuo,
asociado a la exposicin al txico

RESPUESTA: Proporcin de la poblacin expuesta al
txico que manifiesta el efecto definido

EFECTO CUANTAL: No medible mediante una escala
de intensidad o severidad graduada; se expresa
como presente o no presente

EFECTO NO CUANTAL: Medible mediante una escala
de intensidad graduable





EFECTOS

AGUDO:
Corto tiempo de exposicin (horas, das)
Severidad (mortalidad)
Determinacin de la concentracin que causa la mortalidad del 50%
de la poblacin expuesta (CL50)

CRONICO, SUBCRONICO:
Exposicin simple o exposiciones repetidas de largo tiempo de
duracin
Tiempo de aparicin de los efectos
Efectos seleccionados:
Letal o subletal
Cambios en el comportamiento
Cambios fisiolgicos
Cambios bioqumicos
Cambios histolgicos
Reversible - irreversible (ensayos de recuperacin)

INTERACCION por exposicin a mezclas de txicos

EFECTO LETAL:
Causa la muerte por accin directa como consecuencia de la
exposicin a una determinada concentracin del agente txico

EFECTO SUBLETAL:
Se produce por debajo del nivel que causa la muerte directamente,
como resultado de la exposicin a una determinada concentracin
del agente txico







EFECTOS

CURVA CONCENTRACION-EFECTO:
Expresa la relacin entre concentracin y magnitud de un efecto
determinado, tanto a nivel individual como poblacional

CURVA CONCENTRACION-RESPUESTA:
Expresa la relacin entre concentracin y proporcin de individuos
que responden a un efecto determinado


MEZCLA DE AGENTES TOXICOS

La accin conjunta puede ser:
ADITIVA:
Magnitud del efecto o respuesta numricamente igual a la
suma de los efectos o respuestas de txicos individuales
COMBINADA:
Los txicos producen efectos diferentes o tienen distintos
modos de accin
MAYOR QUE LA ADITIVA - SINERGISMO:
La toxicidad de la mezcla es mayor que la esperada por la
simple suma de la toxicidad de los txicos individuales
MENOR QUE LA ADITIVA - ANTAGONISMO:
La toxicidad de la mezcla es menor que la esperada por la
simple suma de la toxicidad de los txicos individuales








CRITERIO PARA LA SELECCION DE
EFECTOS



Inequvoco
Relevante
Rpidamente observable
De fcil descripcin
Mensurable
Biolgicamente significativo
Reproducible
Screening tests: mortalidad
Subletalidad:
Crecimiento
Reproduccin
Cualitativo
Cuantitativo
Se establecen como ndices de toxicidad:
CL50,CE50 - tiempo













TEMPORAL SCALE

100000 years CAMBIO
CLIMATIC
O

10000 years




1000 years ROUTINE
EFFLUENT
S

ACID
DEPOSITION

100 years
10 years
1 year PESTICIDE
USE

1 month

SPILLS
1 day
PESTICIDE APPLICATION

1 second 1 m 1 mm 1 m 1 km 1000 km 10000 km

SPATIAL SCALE


ARRANGEMENT OF A VARIETY OF ANTHROPOGENIC HAZARDS ON SPATIAL AND TEMPORAL SCALES (Suter, 1994)





TEMPORAL SCALE

100000 years REGIONAL
DYNAMICS

10000 years


ECOSYSTEM
DYNAMICS


1000 years
MICRO-
ORGANISM
POPULATION



100 years
10 years
1 year POPULATION
DYNAMICS

1 month


MACRO-
ORGANISM
PHYSIOLOGY

1 day


MICRO-
ORGANISM
PHYSIOLOGY

1 second 1 m 1 mm 1 m 1 km 1000 km 10000 km

SPATIAL SCALE

ARRANGEMENT OF LEVELS OF BIOLOGICAL ORGANIZATION ON SPATIAL AND TEMPORAL SCALES (Suter, 1994)




DEFINICIONES

BIOENSAYO: Mtodo para evaluar la potencia relativa
de un agente sobre organismos vivos, mediante la
comparacin del efecto del agente con el de una
solucin patrn o standard

ENSAYO DE TOXICIDAD: Permite la deteccin y
evaluacin de la capacidad de un agente de producir
efectos txicos adversos sobre organismos vivos





















ENSAYOS DE ECOTOXICIDAD


CARACTERISTICAS COMUNES:


Exposicin de grupos de organismos
misma poblacin
en buenas condiciones de salud
con aclimatacin previa
Mantenimiento de condiciones ambientales
constantes y estandarizadas
Exposicin a concentraciones graduadas del
agente
Grupos control adecuados
Observacin de signos del efecto presentes
Medicin y registro detallado de efectos
biolgicos en grupos control y tratados
Observacin patolgica de grupos control y
tratados
Anlisis estadstico de resultados








TIPOS DE ENSAYOS


DE LABORATORIO: Reproduccin parcial de
las condiciones reales del ambiente

DE CAMPO: Organismos mantenidos en
contenedores adecuados (limnocorrales)
sometidos a las condiciones del medio


Segn sea la renovacin del medio:

ESTATICO: Se establece la concentracin del
txico al principio del ensayo; el medio no se
renueva

SEMIESTATICO: Renovacin peridica del
medio de ensayo y del txico

FLUJ O CONTINUO: Renovacin contnua del
medio de ensayo y txico







TIPOS DE ENSAYOS

Segn el tiempo de exposicin:

AGUDO: Perodo de exposicin corto en
relacin al tiempo de generacin del organismo
de prueba

SUBCRONICO: El perodo de exposicin cubre,
al menos, el 10% del tiempo de generacin del
organismo de prueba

CRONICO: El perodo de exposicin cubre, al
menos, una generacin del organismo de
prueba

DE REPRODUCCION: El perodo de exposicin
cubre, al menos, tres generaciones del
organismo de prueba

DE RECUPERACION: El perodo de exposicin
es seguido por la transferencia y observacin
en un medio no txico




METODOS DE ENSAYO (1)

Concentracin de efecto no observado (NOEC)
Mnima concentracin de observacin de efecto
(LOEC)


ENSAYOS DE TOXICIDAD AGUDA

Peces: mortalidad
Invertebrados: inmovilidad
Microalgas: crecimiento
Indices: CL50 - CE50 - tiempo
Ensayo independiente del tiempo (TI) (CL50 - CE50
incipiente)


ENSAYOS DE TOXICIDAD CRONICA

Ciclo de vida completo
Ciclo de vida parcial
Concentracin mxima aceptable de txico (MATC)
Valor crnico (VC)
NOEC < VC < LOEC





METODOS DE ENSAYO (2)



ENSAYOS CON ESTADIOS TEMPRANOS DE VIDA

Huevo - embrin - larva - alevino
Duracin: 1 2 meses



ENSAYOS DE BIOACUMULACION

Compuestos polares (hidroflicos)
Compuestos no polares (hidrofbicos)
Factor de bioacumulacin (BCF)
Coeficiente de particin n-octanol - agua
Bioconcentracin - biacumulacin -
biomagnificacin















INCERTEZAS EN DISTINTOS NIVELES DE INVESTIGACION
TIPO DE ENSAYO /
FUENTE DE DATOS
INCERTEZAS POSIBLES EN EXTRAPOLACION
ENSAYOS
MONOESPECIFICOSDE
LABORATORIO
Influencia de condiciones ambientales sobre la funcin concentracin - respuesta y el rgimen de exposicin
Un cierto estado del ciclo de vida como representativo del ciclo completo
Pocas especies seleccionadas por su facilidad de mantenimiento como representativas de la comunidad natural
No se considera la relacin con otras especies
Los efectos a nivel individual son aplicados a nivel poblacional sin mecanismos de compensacin o ajustes por
comportamiento
MICROCOSMOS Relaciones artificiales entre especies
Se excluyen importantes relaciones trficas
Los efectos de borde pueden causar alteraciones en resultados
No se considera la heterogeneidad espacial de los ecosistemas naturales en los que se toman las muestras
El enfoque y la metodologa se modifican sobre la base de su aplicabilidad y replicabilidad ms que en relacin
con su acercamiento a los efectos reales
Se excluyen factores climticos naturales
MESOCOSMOS O
MANIPULACION DE
ECOSISTEMAS
NATURALES
Se considera un ecosistema especfico como representativo de un tipo general de ecosistema
El "stress" generado por la aplicacin de una sustancia qumica determinada se supone representativo del
"stress" generado por sustancias no ensayadas
No se consideran los efectos de condiciones fsicas ambientales y climticas ni de eventos histricos sobre el
comportamiento del ecosistema
Replicabilidad insuficiente
Dificultad en recopilar datos relevantes para la determinacin de la relacin concentracin - respuesta en el
ecosistema
Prolongada duracin del experimento, relacionado con el tiempo requerido por el ecosistema para manifestar una
reaccin adecuada, medible y recuperable
MODELOS Formulaciones matemticas imprecisas o incorrectas
Efectos basados en una poco uniforme distribucin de los organismos en el campo (agregacin)
Insuficientes bases de datos para la verificacin del modelo
El modelo es aplicado a un nivel que excede el alcance de su capacidad a fin de obtener una evaluacin relevante
Sensibilidad de los resultados frente a la variacin de los parmetros seleccionados o del diseo del modelo.


DISEO DE ENSAYOS



Acercamiento por fases (TIER)

Ensayos simples de corto tiempo de
exposicin
Ensayos ms complejos




Controles concurrentes

Control de agua no tratada
Ensayo de control de solventes
Ensayo de referencia (producto qumico de
referencia)








CRITERIOS PARA LA SELECCION DE
PROTOCOLOS DE ENSAYO


Aceptacin de la comunidad cientfica
Capacidad de prediccin de los efectos de un
amplio rango de txicos sobre diferentes
organismos
Base estadstica - reproducibilidad
Rango de concentracin - duracin de la
exposicin
Datos obtenidos utilizables para la evaluacin
de riesgo
Costo - eficiencia
Sensibilidad - realismo
Ensayos uniespecficos
Ensayos multiespecficos
Experimentos de laboratorio en condiciones
controladas
Experimentos de campo con un alto nmero de
variables
Validacin






ESCALAS DE OBSERVACION EN
ENSAYOS DE TOXICIDAD


Espacial

Temporal

Organizacional

Estructural

Funcional


Ensayo de
laboratorio
uniespecfico
(cc - m
2
)


Horas - das

Organismo

Crecimiento
Reproduccin

Microcosmos
(cc-m)

Das - meses

Organismo
Poblacin
Comunidad

Produccin
Ciclo de vida
Cadena trfica


Ensayos de
campo


Das - aos

Idem

Idem

Monitoreo
ambiental


Aos

dem

dem








MEDIO TERRESTRE - ENSAYOS

EXPOSI-
CION
ORGANISMO DE
PRUEBA
EFECTOS OBSERVADOS

AGUDA
Lombriz de tierra

Mortalidad (CL50)
Ave (dosis oral nica)

Mortalidad (CL50)
Ave (dietaria) Mortalidad, peso corporal,
comportamiento, tasa de
alimentacin

Abejas (por contacto)

Mortalidad (CL50)
Abejas (oral)

Mortalidad (CL50)
Organismos benficos

Mortalidad, tasa de alimentacin

CRONICA
Ave (reproduccin) Mortalidad, tamao al alcanzar el
acoplamiento, cambios
morfolgicos de huevos, efectos
sobre cras

Microflora Actividad deshidrogenasa,
respiracin a corto plazo, ciclo
del nitrgeno

Lombriz de tierra

Reproduccin (NOEC)
Organismos benficos

Reproduccin (NOEC)




MEDIO ACUATICO - ENSAYOS

EXPOSI-
CION
ORGANISMO DE PRUEBA EFECTOS OBSERVADOS







AGUDA

Dos especies diferentes de peces
dulceacucolas,
Cnesterodon decemmaculatus,
Poecilia reticulata


Mortalidad (CL
50
96 hs)

Microcrustceo del zooplancton
(Daphnia sp.), Daphnia magna,
Daphnia spinulata


Inmovilidad (CE
50
48 hs)

Alga dulceacucola, Scenedesmus
acutus, S. quadricauda,
Selenastrum capricornutum


Inhibicin del crecimiento (CI
50
96 hs)


Crustceo bentnico, Hyalella
curvispina, Hyalella azteca


Mortalidad o inmovilidad (CL
50
10, 14 das,
CE
50
)











CRONICA

Pez dulceacucola
(estados tempranos
del ciclo de vida)


Mortalidad de alevinos y juveniles, peso corporal, longitud
del cuerpo, tasa de crecimiento


Pez dulceacucola
(reproduccin)


Mortalidad de adultos, mortalidad de alevinos, tiempo de
puesta, xito en la eclosin, peso y longitud del cuerpo de
adultos y alevinos, tasa de crecimiento, comportamiento


Microcrustceo del
zooplancton (ciclo de
vida completo)


Inmovilidad de adultos, nmero de huevos / hembra,
nmero de efipios / hembra, xito en la eclosin, tiempo de
eclosin, inmovilidad de nuevos ejemplares, tasa de
reproduccin, tasa de crecimiento, comportamiento


Crustceo bentnico
(ciclo de vida
completo)


Inmovilidad de adultos, nmero de huevos / hembra, xito
en la eclosin, tiempo de eclosin, inmovilidad de nuevos
ejemplares, tasa de reproduccin, tasa de crecimiento,
comportamiento


CALCULATION METHODS


GRAPHICAL METHOD

LC50
Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)
Subjective

BINOMIAL METHOD
LC50 (= 95% confidence intervals)
Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)

MOVING AVERAGE ANGLE METHOD
LC50 + 95% confidence intervals
Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)
Can be performed manually, but labor intensive

MODIFIED SPEARMAN-KARBER METHOD

LC50 + 95% confidence intervals
Can be performed with 0 or 1 partial kill(s)
The concentrations tested must cover the range 0% - 100% response

LICHFIELD AND WILCOXON METHOD
LC50 + 95% confidence intervals
At least 2 partial kills required
Can easily be performed manually
Subjective to a certain extend

PROBIT ANALYSIS

LC50 + 95% confidence intervals
At least 2 partial kills required
Is difficult to be performed manually










METODOS ESTADISTICOS RECOMENDADOS
PARA ENSAYOS DE TOXICIDAD CRONICA


DATOS OBSERVADOS

ESTIMACION DE CE50 NORMALIDAD DE DATOS
Anlisis Probit Test de Shapiro-Wilks


DISTRIBUCION NORMAL DISTRIBUCION NO NORMAL


HOMOGEINEIDAD DE VARIANZAS
Test de Bartlett


HOMOGENEIDAD HETEROGENEIDAD


IGUAL NUMERO DE IGUAL NUMERO DE
REPLICAS REPLICAS


NO SI SI NO

Test de t con Test de Dunnett Test de Steel Test de Wil--
ajuste de con ajuste (ranks) coxon (ranks)
Bonferroni de Bonferroni













FACTORES A CONSIDERAR EN EL
DISEO DE ENSAYOS DE
TOXICIDAD


Propiedades fsico-qumicas del producto
Pureza qumica
Presencia de impurezas
Seleccin del organismo de prueba
Variables ambientales



PROPIEDADES FISICO-QUIMICAS DEL
PRODUCTO


Estructura qumica: grupos funcionales
Estabilidad frente a distintos valores de pH
Propiedades fotoqumicas
Coeficiente de particin n-octanol/agua
Naturaleza lipoflica
Potencial de ionizacin
Tamao y forma de las partculas
Densidad






EL ORGANISMO DE PRUEBA




Diferencias en la sensibilidad entre las distintas
especies
Accesibilidad al txico
Tasa y modelo de metabolismo y excrecin
Mayor sensibilidad de los individuos juveniles
Influencia del estado salud / stress sobre la
sensibilidad



























CRITERIOS PARA LA SELECCION DEL
ORGANISMO DE PRUEBA


Amplio rango de sensibilidad (batera de ensayos con distintos
organismos)
Sensibilidad constante de la poblacin utilizada
Alta disponibilidad y abundancia (amplia distribucin geogrfica)
Estabilidad gentica y uniformidad de las poblaciones usadas en los
ensayos
Organismos autctonos o representativos del ecosistema que se evala
Conocimiento de su biologa, fisiologa y hbitos nutricionales
Preferencia por especies de importancia recreacional, comercial o
ecolgica
Disponibilidad de ejemplares a lo largo de todo el ao
Sencillo mantenimiento y cultivo en condiciones de laboratorio
Preferencia por especies de tamao reducido para facilitar la obtencin de
gran nmero de datos
Existe un limitado nmero de especies standard:
algas fitoplanctnicas
crustceos: Daphnia, camarones, Artemia
peces
rotferos
anfpodos
En ensayos de campo pueden utilizarse especies no estandarizadas


















PROCEDIMIENTOS Y CONDICIONES PARA
UNA BUENA PRACTICA DE LABORATORIO


PERSONAL INSTALACIONES
-Calificacin -Mantenimiento y manipu-
-Responsabilidades lacin de organismos de
-Direccin prueba
-Funciones para garantizar -Manipulacin y almacena-
la calidad miento de reactivos
-Espacio para el desarrollo
de los ensayos



EQUIPAMIENTO OPERACIONES TOXICO
DE LABORATORIO
-Localizacin -Procedimientos operacio- -Manipulacin
-Mantenimiento nales para ensayos, man- y almacena-
-Calibracin tenimiento de organismos miento
y preparacin de solucio- -Caracteriza-
nes cin


REGISTRO DE DATOS


INFORME DE RESULTADOS
-Localizacin
-Recuperacin















GOOD LABORATORY PRACTICE




OECD : Organisation for Economic Cooperation and
Development, ISBN 92-64-12367-9, Paris 1982.



U.S.A.: United States Environmental Protection Agency, Title
40 Code of Federal Regulations Part 160 (FIFRA)
Federal Register, 29 November 1983, and
Subsequent Amendment Federal
Register 17 August 1989.

United States Environmental Protection Agency, U.S. EPA
2185, Good Automated Laboratory Practices, 8 October 1995



J apan: J apan Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, 59
NohSan, Notification N 3850, Agricultural Production
Bureau, 10 August 1984.



U.K.: Good Laboratory Practice, the United Kingdom
Compliance Program, Department of Health and
Social Security 1986 and Subsequent Revision,
Department of Health 1989.













INTERRELACIONES ENTRE LOS FACTORES QUE
DETERMINAN LA SELECCION DE UN PROTOCOLO
DE ENSAYO



Mnimo
VALOR ECONOMICO

Costo

Duracin

Equipamiento Entrenamiento del
personal
Costo, representa-
tividad, sensibili- Captura y mante-
dad nimiento de orga-
nismos.


PROTOCOLO DE ENSAYO

Eleccin del organismo Eleccin del criterio



Representatividad Sensibilidad
ecolgica


Mximo VALOR BIOLOGICO
SECTION 12


REPORT PREPARATION

(Adapted from USEPA, 1989c)


The following general format and content are recommended for the report:


12.1 INTRODUCTION

1. Permit number
2. Toxicity testing requirements of permit
3. Plant location
4. Name of receiving water body
5. Contractor (if contracted)
a. Name of firm
b. Phone number
c. Adress


12.2 PLANT OPERATIONS

1. Product(s)
2. Raw materials
3. Operating schedule
4. Description of waste treatment
5. Schematic of waste treatment
6. Retention time (if applicable)
7. Volume of discharge (MGD, CFS, GPM)
8. Design flow of treatment facility at time of sampling


12.3 SOURCE OF EFFLUENT, RECEIVING WATER AND DILUTION
WATER
1. Effluent samples
a. Sampling point
b. Sample collection method
c. Collection dates and times
d. Mean daily discharge on sample collection date
e. Lapsed time from sample collection to delivery
f. Sample temperature when received at the laboratory
g. Physical and chemical data

2. Receiving Water Samples
a. Sampling point
b. Sample collection method
c. Collection dates and times
d. Streamflow at time of sampling and 7Q10
e. Lapsed time from sample collection to delivery
f. Sample temperature when received at the laboratory
g. Physical and chemical data

3. Dilution Water Samples
a. Source
b. Collection date(s) and time(s) (when applicable)
c. Pretreatment
d. Physical and chemical characteristics (pH, hardness,
salinity, etc.)


12.4 TEST CONDITIONS
1. Toxicity test method used (title, number, source)
2. Endpoint(s) of test
3. Deviations from reference method, if any, and reason(s)
4. Date and time test started
5. Date and time test terminated
6. Type and volume of test chambers
7. Volume of solution used per chamber
8. Number of organisms per test chamber
9. Number of replicate test chambers per treatment
10. Feeding frequency, and amount and type of food
11. Acclimation temperature of test organisms (mean and range)
12. Test temperature (mean and range)






12. 5 TEST ORGANISMS
1. Scientific name
2. Age
3. Life stage
4. Mean lenght and weight (where applicable)
5. Source
6. Diseases and treatment (where applicable)


12.6 QUALITY ASSURANCE
1. Reference toxicant used routinely, source
2. Date and time of most recent reference toxicant test; test results and
current cusum chart
3. Dilution water used in reference toxicant test
4. Physical and chemical methods used


12.7 RESULTS
1. Provide raw toxicity data in tabular form, including daily records of
affected organisms in each concentration ( including controls)
2. Provide table of endpoints: LC50, NOEC, LOEC, etc.
3. Indicate statistical methods used to calculate endpoints
4. Provide summary table of physical and chemical data
5. Tabulate QA data


12.8 CONCLUSIONS AND RECOMMENDATIONS
1. Relationship between test endpoints and permit limits
2. Action to be taken






















BIOMARCADOR


Son las respuestas biolgicas a los txicos ambientales los
que dan una medida de la exposicin y, a veces, del efecto
txico (WALKER et al., 1997)


Pueden ser respuestas a nivel molecular, celular o del
organismo entero.


Representan una medida del efecto relacionado con la
presencia de niveles particulares de un contaminante.
Proveen un medio de interpretar niveles ambientales de
contaminantes en trminos biolgicos.





















BIOMARCADORES A DIFERENTES
NIVELES DE ORGANIZACIN


NIVEL DE ORGANIZACIN EJ EMPLO DE BIOMARCADOR

Molcula unida a un
receptor

TCDD unido a un receptor
acetilcolina
Nonilfenoles unidos a un
receptor de estrgeno


Respuesta bioqumica

Induccin de monooxigenasas
Inhibicin de
acetilcolinesterasas


Alteraciones fisiolgicas

Grosor de la cscara de huevo
(aves)
Feminizacin de embriones


Efectos a nivel del individuo

Cambios de comportamiento
Crecimiento










EVALUACION DEL RIESGO



Proceso de estimacin de la probabilidad de que ciertas actividades
produzcan determinados efectos adversos




SEGURIDAD Y SALUD HUMANAS ECOSISTEMAS




EVALUACION DEL RIESGO EVALUACION DEL RIESGO
HUMANO ECOLOGICO




EVALUACION DEL RIESGO GLOBAL




INVOLUCRA




EVALUACION DE LA EVALUACION DE LOS
EXPOSICION EFECTOS

Define el movimiento del agente Define el impacto asociado a
desde la fuente hasta su destino distintos niveles de stress.
final ltimo.
Origen o fuente
Transporte
Destino final






EVALUACION DEL RIESGO RELATIVO



OBJ ETIVO: Desarrollo de indicadores del riesgo total, los que pueden
ser utilizados en el proceso de toma de decisiones.


Es el paso ms difcil en el proceso de Evaluacin del riesgo

Existe carencia de una metodologa de evaluacin slida,
ampliamente aceptada


Integracin de los factores de riesgo con el costo econmico y social
de la toma de decisin

El apropiado balance entre estas dos clases de factores conduce a
acuerdos entre la comunidad cientfica y los organismos polticos
encargados de la toma de decisiones























EVALUACION DE EFECTOS ECOLOGICOS


Sobre la base de:

1. CLASIFICACION AMBIENTAL

Ambiente urbano
Ambiente productivo
Ambiente natural
Ambiente de uso mltiple


2. DESARROLLO DE FACTORES DE PESO



3. EVALUACION DE RECEPTOR/ES REPRESENTA-TIVOS

Seleccin de especies representativas a nivel poblacional, de
comunidad y de procesos ecolgicos

Seleccin de indicadores apropiados de los efectos que se
manifiestan sobre los receptores representativos


4. EVALUACION DE LA FUNCION CONCENTRACION-
RESPUESTA

Recoleccin de datos, teniendo en cuenta:
Tipo de efecto medido
Condiciones de exposicin
Forma de experimentacin

Determinacin de la potencial recuperacin de poblaciones y
procesos expuestos







EL PROBLEMA DE LA EVALUACION DE LA RELACION
CONCENTRACION - RESPUESTA

1. ENFOQUE DIRECTO

Completa batera de ensayos
Implementacin simultnea
Resultados altamente confiables
Alto consumo de tiempo y elevado costo

2. ENFOQUE EN FASES O ETAPAS

Secuencia de actividades de ensayo
Utilizacin de los resultados de las etapas precedentes para el
diseo de cada fase subsiguiente

FASE 1
Exposicin aguda
Ensayos monoespecficos
Evaluacin rpida y grosera del riesgo relativo

FASE 2 Y SUBSIGUIENTES
Exposiciones de mayor duracin
Ensayos multiespecficos
Mejor utilizacin de los recursos disponibles
Rpido acercamiento a los problemas prioritarios
Optima relacin costo - efectividad
Potencialmente, resulta posible omitir aspectos importantes
del riesgo ecolgico durante la FASE 1

3. ENFOQUE INTERMEDIO

Acercamiento en FASES, incluyendo ensayos de mayor tiempo
de exposicin durante la FASE 1
Puede existir redundancia de informacin en la FASE 1








LEGISLACION NACIONAL Y PROVINCIAL

NACIONAL:


Resolucin No. 440/98 y modificacin
2000 - Secretara de Agricultura,
Ganadera, Pesca y Alimentacin

Ley 24051/92 - Decreto
Reglamentario No. 831/93 - Residuos
Peligrosos

Ley 17319/67 - Decretos y
Disposiciones modificatorias -
Disposicin 52/97 - Hidrocarburos,
Exploracin, extraccin, refineras,
construccin, operacin y abandono de
oleoductos y poliductos - Proteccin
ambiental.


PROVINCIA DE BUENOS AIRES:


Ley 11720 y Decreto Reglamentario No.
806/97 - Residuos Especiales

Resolucin No. 601/98 - Secretara de
Poltica Ambiental - Residuos
txicos con prohibicin de ingreso al
territorio de la Provincia de Buenos
Aires.
















CLASE DE
NACIONES
UNIDAS


No. DE CODIGO
(LEY 11720)



CARACTERISTICAS
6.1
H6.1

Txicos (venenos) agudos: Sustancias o desechos que pueden
causar la muerte o lesiones graves o daos a la salud humana,
si se ingieren o inhalan o entran en contacto con la piel.

9
H10

Liberacin de gases txicos en contacto con el aire o el agua:
Sustancia o desechos que, por reaccin con el aire o el agua,
pueden emitir gases txicos en cantidades peligrosas.-

9
H11


Sustancias txicas (con efectos retardados o crnicos):
Sustancias o desechos que, de ser aspirados o ingeridos o de
penetrar en la piel pueden entraar efectos retardados o
crnicos, incluso la carcinogenia.-

9
H12

Ecotxicos: Sustancias o desechos que, si se liberan, tienen o
pueden tener efectos adversos inmediatos o retardados en el
ambiente debido a la bioacumulacin o los efectos txicos en
los sistemas biticos.-