NewsLab - edio 74 - 2006 108

Meio de Cled: Proposta de Modificao Visando

Melhoria na Identificao de Uropatgenos
Carlos Augusto Albini
1
, Helena Aguilar P. H. M de Souza
2
, Silmara Batista de Carvalho
3
1 - Farmacutico-Bioqumico UFPR. Professor Adjunto II do Depto. de Patologia Mdica UFPR. Especialista em Bacteriologia UFPR. Mestre em Educao
UEPG. Diretor da Newprov. Diretor do Ncleo de Estudos de Bacteriologia de Curitiba
2 - Farmacutica-Bioqumica UFPR. Especialista em Bacteriologia UFPR. Chefe da Seo de Bacteriologia do HC de Curitiba. Chefe do Depto. de Controle
de Qualidade em Microbiologia da Newprov. Diretora do Ncleo de Estudos de Bacteriologia de Curitiba
3 - Aluna do Curso de Ps-Graduao da Pontifcia Universidade Catlica do Paran. Farmacutica-Bioqumica UEPG. Diretora Tcnica do Unilab
Laboratrios Clnicos em Ponta Grossa, PR. Membro da Comisso de Controle de Infeco Hospitalar do Santana Unimed Hospital em Ponta Grossa, PR
Trabalho apresentado para obteno de ttulo de especialista no curso de ps-graduao lato sensu em Microbiologia -
Pontifcia Universidade Catlica do Paran
Artigo
A cultura de urina a anlise microbiolgica mais
realizada no laboratrio de microbiologia humana
e o meio de CLED (Cistina Lactose-Eletrlito-Deficien-
te) o meio de isolamento primrio rotineiramente
mais empregado. O meio fornece uma diferencia-
o colonial baseada na fermentao da lactose
pelos bacilos gram-negativos. O objetivo do presen-
te estudo foi comparar o meio de CLED tradicional
com uma modificao do meio original. Acrescen-
tou-se triptofano para propiciar a leitura de indol,
substituiu-se lactose por celobiose, adicionaram-se
substratos para propiciar a leitura do gs sulfdrico
e fenilalanina para diferenciao de bactrias feni-
lalanina positivas. Aps incubao a 35 2C por
24 horas, comparou-se o desenvolvimento colonial
nos dois diferentes meios e procedeu-se identifica-
o bioqumica usando os mtodos convencionais.
Em 145/ 198 (73%) das uroculturas positivas, os uro-
patgenos foram identificados de maneira correta
utilizando apenas a morfologia colonial e as provas
preliminares no meio modificado. O benefcio que o
meio propiciou pode representar um avano no di-
agnstico microbiolgico das infeces urinrias,
pois reduziu tempo e custos relativos identificao
de uropatgenos.
Palavras-chave: Meio de CLED, urocultura, in-
feces do trato urinrio
Resumo Summary
Urine culture is the most performed microbiological
analysis in the human microbiology lab and CLED (Cystine
Lactose-Electrolyte-Deficient) is the mdium most routinely
used for isolation. Medium provides a colonial differentia-
tion from lactose fermentation by gram-negative bacilli. The
present study aims to compare traditional CLED medium
and a modification of the original medium. Tryptophan was
added in order to get sulfidric gas reading and phenylala-
nine to differentiation the positive phenylalanine bacteria.
After incubation at 35 2C for 24 hours colonial develo-
pment was compared in both different media and bioche-
mical identification was conducted using conventional
methods. In 145/ 198 (73%) of positive urocultures, uro-
pathogens were correctly identified just by using colonial
morphology and the preliminary tests of the modified me-
dium. The result provided by the medium may represent an
advance in microbiologic diagnosis of urinary infection,
then reduced time and costs relative from uropathogens
identification.
Keywords: CLED medium, urine cultures, urinary tract
infections
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NewsLab - edio 74 - 2006 110
N
I ntroduo I ntroduo
os laboratrios de anlises cl-
nicas, no setor de microbiolo-
gia, o maior nmero de solicitaes
de exames consiste de amostra de
urina para urocultura, j que faz
parte do sumrio dos exames de
rotina, por exemplo, nas consultas
pr-natais, sendo a infeco urin-
ria uma das patologias mais co-
muns em todas as idades. Consi-
derando-se que o nmero de exa-
mes elevado, o tempo para a re-
alizao - 24h a 48h (semeadura,
isolamento e identificao) e a difi-
culdade enfrentada pelos laborat-
rios quanto aos baixos valores es-
tipulados pelos convnios e planos
de sade, urge a busca de inova-
es que venham agilizar a reali-
zao, bem como, melhorar a ques-
to do custo-benefcio.
Tal situao para a qual se bus-
cam alternativas evidencia-se por
ser a infeco do trato urinrio (ITU)
uma das doenas infecciosas mais
freqentes na prtica mdica. A
grande maioria das infeces uri-
nrias caracterizada pela presen-
a de um nmero elevado de leu-
ccitos na amostra (piria), sendo
importante verificar a contagem de
leuccitos associada presena de
microorganismos (bacteriria).
importante ressaltar que h situa-
es em que infeces urinrias
podem apresentar leucometria nor-
mal ou, somente, pouco elevada,
especialmente em pacientes pedi-
tricos (Zunino, 1993).
Para um diagnstico preciso de
infeces urinrias, bacterianas ou
no, a fase pr-analtica funda-
mental. A amostra clnica geralmen-
te colhida por mico espont-
nea (jato intermedirio), da primei-
ra urina da manh; outros mto-
dos como puno supra-pbica,
cateterizao ou sonda vesical so
menos praticados. O procedimen-
to de coleta deve ser muito bem
supervisionado seguindo protoco-
los especficos (Koneman, 2001).
A cultura quantitativa da urina
continua apresentando as mais
adequadas taxas de sensibilidade
e especificidade para o diagnstico
de ITU, sendo considerada pelo
NCCLS (National Committee for Cli-
nical Laboratory Standards), como
padro ouro. Um mtodo semi-
quantitativo habitualmente utiliza-
do a semeadura em meio de cul-
tivo propcio ao crescimento e dife-
renciao da maioria dos uropat-
genos, como o meio de CLED, com
ala bacteriolgica calibrada de vo-
lume conhecido. As culturas devem
ser incubadas em estufa a 37

C por
24h. A desvantagem da metodolo-
gia o tempo de obteno de re-
sultados completos, pois em geral
o mdico necessita iniciar o trata-
mento antes de receber os resulta-
dos de identificao e o teste de
susceptibilidade dos microorganis-
mos envolvidos (Oplustil, 2000).
Escherichia coli seguramen-
te o patgeno mais comum em
ITU, responsvel por cerca de
85% das infeces comunitrias
e por 50% das infeces hospita-
lares. O segundo agente mais co-
mum o Staphylococcus sapro-
phyticus, seguido de outras ente-
robactrias, tais como Klebsiella
spp., Proteus spp., Enterobacter
spp. e Citrobacter spp. (Sobel,
1991. Mobley and Warren, 1996.
Bailey and Scott's, 1998).
Sobre os patgenos a informa-
o fornecida rapidamente pode
ser muito til em algumas situa-
es e, para tanto, tcnicas auto-
matizadas, quando disponveis,
so alternativas interessantes,
especialmente em hospitais. Con-
tudo, os mtodos automatizados
tm custo superior aos mtodos
manuais e, muitas vezes, no so
remunerados de forma adequada
pelos convnios mdicos.
Os meios mais utilizados para
a realizao da urocultura, so
gar CLED e gar MacConkey e,
em alguns laboratrios, utiliza-se
tambm o gar sangue. O meio
de CLED utilizado para a cultura
e contagem de bactrias gram-
positivas e gram-negativas, sen-
do um meio no-seletivo e pouco
diferencial; contm lactose e de-
vido a uma deficincia de eletrli-
tos inibe o "vu" ou "swarming"
de cepas de Proteus spp. em sua
superfcie, o que levaria inviabi-
lizao da cultura DIFCO, 1984)
No meio de CLED desenvolve-
se a grande maioria das bactrias
patognicas urinrias, permitindo
inclusive identificar suas respecti-
vas colnias. A presena de bac-
trias contaminantes como difte-
rides, lactobacilos e outros infor-
ma sobre os cuidados que foram
tomados ou no, quando da coleta
da amostra de urina.
Embora o gar CLED propicie o
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Material e mtodos
crescimento da maioria dos uro-
patgenos, tanto gram-positivos
quanto gram-negativos, como fer-
mentadores e no-fermentadores
de glicose, alguns microorganis-
mos exigentes raramente implica-
dos em ITUs no se desenvolvem
no meio (por ex.: Haemophilus in-
fluenzae) (Pilonetto, 1994).
O gar CLED foi idealizado em
1960 por Sandys e modificado em
1965 por Mackey e Sandys com a
supresso da sacarose e a adio
de cistina, com o intuito de me-
lhorar o crescimento de "colnias
ans" de coliformes cistina-depen-
dentes, ficando conhecido como
Cistina-Lactose-Eletrlito-Defici-
ente (CLED) (Pilonetto, 1994).
A frmula atual do gar CLED
que se segue pode apresentar va-
riao de acordo com o fabricante:
Extrato de carne 3 g/L
Peptona 4 g/L
Triptona 4 g/L
L-cistina 0,128g/L
Lactose 10 g/L
gar bacteriolgico 15 g
Azul de bromotimol 0,02 gL
*pH final: 7,3 0,2 a 25C
(DIFCO, 1984)
A proposta para modificao
a seguinte:
Peptona de casena 4 g/L
Peptona bacteriolgica4 g/L
Extrato de carne 3 g/L
Celobiose 10 g/L
L-cistina 0,128 g/L
Azul de bromotimol
sol. 1,5% 1,4 mL
gar bacteriolgico 15 g
Substratos para H2S e
fenilalanina-desaminase 1,35 g/L
*pH final: 7,3
Assim, algumas experincias j
foram realizadas como no caso de
identificao rpida de Escherichia
coli isoladas em uroculturas pelas
provas: indol ("spot test"), oxida-
se ("spot test") e fermentao da
celobiose (Pilonetto, 1994, p. 7),
previstas em meio de CLED nor-
mal, o qual, segundo o autor, no
correspondeu ao "spot test", im-
plicando em uma modificao no
meio utilizado. "Contudo esta mo-
dificao traz alguns problemas.
A cor do meio fica ligeiramente
mudada, o odor caracterstico da
E. coli no se mostra to pronun-
ciado e o seu custo aumentado"
(ibidem, p. 31).
Na experincia, o referido au-
tor salienta a possibilidade de uti-
lizao do esquema prtico para
identificao da bactria alvo de
sua pesquisa, aponta as vanta-
gens obtidas como a rapidez, a
economia e a simplicidade meto-
dolgica, embora ressalte as va-
riaes ocorridas quanto ao meio
modificado e a preciso dos re-
sultados obtidos. Assim, reco-
menda que as cepas no identifi-
cadas pelas provas presuntivas
sejam identificadas pelo mtodo
convencional.
O objetivo principal do trabalho
foi comparar o meio de cultura gar
CLED tradicional com uma modifi-
cao do meio proposto pela New-
prov Produtos para Laboratrios
Ltda. A metodologia de pesquisa
utilizada foi analtico-comparativa,
sendo realizada uma triagem das
amostras, semeadura das amostras
significativas nos dois meios (tra-
dicional e modificado) e compara-
o da morfologia colonial.
Material e mtodos
O presente trabalho foi desen-
volvido no Unilab Laboratrios Cl-
nicos S/C Ltda, em Ponta Grossa
- PR, onde foram realizadas as cul-
turas de amostras de urina de
pacientes da rotina do laborat-
rio, em biplacas de gar CLED e
MacConkey e em placas de gar
CLED modificado, sendo o ltimo,
fornecido pela empresa Newprov
Produtos para Laboratrios Ltda.
Foram analisadas 208 amostras
de urina hospitalares e ambula-
toriais, de pacientes de ambos os
sexos, vrias faixas etrias e ra-
as, recebidas no Unilab Labora-
trios Clnicos, no perodo de ou-
tubro de 2003 a maro de 2004.
Foi realizada colorao de Gram
de gota de urina no centrifugada,
obtida pelo jato mdio, para todas
as amostras. A visualizao de pelo
menos uma bactria por campo de
1000X indicou provvel presena de
um nmero superior a 100.000 UFC/
mL, em amostras adequadamente
coletadas (Clarridge et al., 1998).
Na seqncia foram semeadas
as amostras significativas, as que
apresentaram pelo Gram, pelo
menos uma bactria por campo
de 1000X e/ou leucocitria, em
biplacas de CLED e MacConkey,
utilizadas pelo laboratrio Unilab
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Resultados
na sua rotina. Em seguida seme-
aram-se as mesmas amostras no
meio de CLED modificado.
Incubou-se em estufa a 35
2C por 24 horas, observou-se o
crescimento bacteriano e proce-
deu-se a identificao.
Como controle de qualidade do
desempenho dos meios foram pre-
viamente testadas cepas-padro:
Staphylococcus aureus (ATCC
25923); Proteus mirabilis (ATCC
25933); Klebsiella pneumoniae
(ATCC 13883); Enterobacter cloa-
cae (ATCC 13047); Enterococcus
faecalis (ATCC 29212); Enterobac-
ter aerogenes (ATCC 13048);
Pseudomonas aeruginosa (ATCC
27853); Salmonella typhimurium
(ATCC 14028); Serratia marces-
cens (ATCC 8100); Shigella flex-
neri (ATCC 12022); Burkholderia
cepacia (ATCC 17759); Proteus
vulgaris (ATCC 13315); Staphylo-
coccus no-produtor de coagulase
(ATCC 12228); Streptococcus pyo-
genes (ATCC 19615); Morganella
morganii (cepa selvagem); Sta-
phylococcus saprophyticus (cepa
selvagem); Streptococcus agalac-
tiae (cepa selvagem); Citrobacter
diversus (cepa selvagem); Provi-
dncia alcalifaciens (cepa selva-
gem); Escherichia coli (ATCC
25922), fornecidas pela Newprov
para a confirmao da eficcia de
ambos os meios de CLED (tradici-
onal e modificado).
Paralelamente, observou-se a
fermentao da lactose no gar
CLED tradicional e realizou-se a
identificao bacteriana utilizan-
do o mini kit para enterobactrias
da Newprov (Albini et al, 2003).
Resultados
Das 208 amostras analisadas,
a maioria foi identificada presun-
tivamente como E. coli direta-
mente no meio, num total de 125
cepas (60 %). As outras bactri-
as identificadas constam na Ta-
bela 1. Confirmando a identifica-
Tabela 1. Comparao do desenvolvimento colonial entre o meio de CLED tradicional e modificado
Bactria isolada N de Cepas CLED modificado CLED tradicional
Citrobacter freundii 03 centro preto amarelas
Enterobacter aerogenes 05 amarelas incolores
Enterobacter cloacae 02 amarelas incolores
Enterobacter gergoviae 01 amarelas incolores
Enterococcus faecalis 07 puntiformes alaranjadas puntiformes amarelas
Escherichia coli 125 incolores brilhantes grandes amarelas brilhantes grandes
Estafilococo no produtor de coagulase 04 pequenas brancas opacas pequenas amarelas opacas
Klebsiella pneumoniae 08 gomosas amarelas gomosas amarelas
Proteus mirabilis 15 incolores com centro escuro colnias incolores
enegrecendo o meio
Pseudomonas aeruginosa 04 pigmentadas (marrom acentuado) incolores
Serratia marcescens 05 incolores incolores
Staphylococcus aureus 08 brancas opacas amarelas opacas
Staphylococcus saprophyticus 05 brancas pequenas brancas pequenas
Mista E. coli +Proteus spp. 03 incolores com o gar enegrecido indistinguveis
Mista Serratia spp. +Proteus spp. 01 incolores com o gar enegrecido indistinguveis
Mista Enterobacter spp. +Proteus spp. 01 amarelas com o gar enegrecido indistinguveis
Mista Enterococo +E. coli 01 incolores com algumas colnias indistinguveis
puntiformes alaranjadas
Negativas (piria sem bacteriria) 06 __________ _________
Contaminao 04 Vrias espcies indistinguveis Vrias espcies indistinguveis
Total 208 __________ __________
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o pelo mini kit para enterobac-
trias, todas as cepas de Esche-
richia coli foram identificadas cor-
retamente.
No grfico 1 confirmam-se os
dados apresentados na Tabela 1,
mostrando-se que a E. coli foi o
uropatgeno de maior freqncia
nas amostras analisadas, seguin-
do-se do Proteus mirabilis.
Quanto s caractersticas fsi-
co-qumicas do meio modificado,
houve mudana na cor e odor das
bactrias. A E. coli perdeu o odor
caracterstico de "fermento de
po" e a cor amarela, no caso das
fermentadoras de lactose (Figura
1), em relao ao CLED tradicio-
nal, j que o meio testado no
mais permite leitura da fermen-
tao da lactose e sim da celobio-
se (Figura 2).
O meio modificado manteve-se
eletrlito-deficiente, como o tra-
dicional (Figura 3), portanto, con-
tinuou inibindo o "swarming" do
Proteus em sua superfcie, permi-
tindo que o gnero fosse identifi-
cado diretamente na placa, atra-
vs do enegrecimento do meio,
causado pela produo de H2S
(Figura 4).
A modificao propiciou verifi-
cao da fermentao da celobio-
se, sendo que nenhuma cepa de
E. coli fermentou o acar, que,
segundo Koneman (2001), at 2%
das E. coli podem utiliz-lo. Devi-
do concentrao de 1g/L de trip-
tofano do meio, foi possvel a re-
alizao da leitura de indol na pla-
ca (Figura 5). Todas as 125 cepas
de E. coli analisadas eram oxida-
se negativas e indol positivas (se-
gundo Koneman, 2001), 98% das
E. coli so produtoras de indol.
As amostras de Citrobacter
freundii apresentaram colnias
com centro preto (100%), carac-
tersticas da produo de H2S e,
simultaneamente, as colnias ob-
tidas foram fracas fermentadoras
da celobiose, tal fato relatado
Figura 1. Colnias de E. coli embiplaca
de CLED e MacConkey
Grfico 1. Freqncia de cepas isoladas do meio de CLED modificado
Figura 2. Colnias de E. coli emplaca
de CLED modificado
Figura 3. Colnias de Proteus mirabilis
embiplaca de CLED e MacConkey
Figura 4. Colnias de Proteus mirabilis
emplaca de CLED modificado
61%
2% 4%
8%
2%
2%
4%
1%
2%
2%
3%
3%
2%
1%
0%
3%
Citrobacter freundii
Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
Enterobacter gergoviae
Enterococcus faecalis
Escherichia coli
Estafilococo no produtor de
coagulase
Klebsiella pneumoniae
Proteus mirabilis
Pseudomonas aeruginosa
Serratia marcescens
Staphylococcus aureus
Staphylococcus saprophyticus
Mistas
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por Konemann (2001). A prova do
indol foi negativa para as trs ce-
pas encontradas, sendo que se-
gundo o autor, apenas 33% dos
C. freundii produzem o indol. No
meio tradicional, as colnias eram
lactose positivas e se pareciam
muito com E. coli.
As colnias de Serratia spp.
apresentaram uma grande seme-
lhana com as de Escherichia coli
no meio modificado, mas, na reali-
zao da prova do indol, definiu-
se, pois todas as cepas apresenta-
ram-se indol negativas (Figura 6).
Das oito cepas encontradas de
Klebsiella spp., todas fermenta-
ram celobiose e no produziram
indol, sendo identificadas pelo kit,
como Klebsiella pneumoniae.
Com as cepas de Enterobacter
spp observou-se pronunciada fer-
mentao de celobiose, ocorren-
do a viragem na cor do meio, de
verde (Figura 7) para amarelo in-
tenso (Figura 8).
O CLED modificado ainda fa-
vorece a visualizao de colni-
as mistas, por exemplo, Proteus
+ E. coli, pois neste caso, o Pro-
teus spp. enegreceu o meio e a
E. coli produziu indol. J a Ser-
ratia spp. + Proteus spp., ocor-
reu igual a anterior, s no hou-
ve produo de indol pela Ser-
ratia spp. No desenvolvimento
paralelo de Proteus spp. + Ente-
robacter spp. (Figura 9), o CLED
modificado apresentou-se celo-
biose positiva, portanto, colni-
as amarelas, mas, com algumas
reas enegrecidas.
No que diz respeito ao cresci-
Figura 5. Colnias de E. coli em placa
de CLED modificado produtoras de indol
Figura 6. Colnias de E. coli emplaca
de CLED modificado produtoras de indol
e colnias de Serratia spp. semproduo,
respectivamente
Figura 7. Colnias de Enterobacter
spp. em biplaca de CLED e MacConkey
Figura 8. Colnias de Enterobacter
spp. em placa de CLED modificado
Figura 9. Colnias mistas de
Enterobacter spp. e Proteus spp. em
placa de CLED modificado
Figura 10. Colnias de Staphylococcus
spp. embiplaca de CLED e MacConkey
Figura 11. Colnias de Staphylococcus
spp. emplaca de CLED modificado
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Discusso
mento de uropatgenos gram-po-
sitivos (CGP), as caractersticas
coloniais so muito semelhantes
no meio tradicional (Figura 10) e
modificado (Figura 11).
O nico bacilo gram-negativo
no-fermentador da glicose, oxi-
dase positivo presente foi a Pseu-
domonas aeruginosa, apresentan-
do-se pigmentada de marrom, com
odor adocicado fraco, comparan-
do-se s do meio tradicional.
Todas as cepas foram identi-
ficadas corretamente pelos m-
todos convencionais, para a ra-
tificao da identificao bioqu-
mica nos dois meios utilizados:
CLED e CLED modificado.
Nas 198 amostras positivas, ob-
servou-se em 145 (73%) das amos-
tras que a identificao bacteriana
foi realizada de maneira correta ape-
nas utilizando-se a morfologia co-
lonial. Os microorganismos identi-
ficados foram E. coli (125/145;
86%), Proteus spp. (15/145; 10%)
e Serratia spp. (5/145; 3,5%).
Discusso
No laboratrio de bacteriologia
o exame mais executado o de
cultura de urina. O objetivo deste
estudo foi avaliar o desempenho
de um meio modificado, ou seja,
as vantagens em termos de faci-
lidade e rapidez na identificao
dos principais uropatgenos.
Na produo do CLED modifi-
cado, usou-se como base o gar
CLED, e como um dos aditivos o
triptofano, o qual importante
para a verificao da produo da
lobiose com colnias de aspecto
gomoso (capsuladas), sendo que
foi necessria a realizao de pro-
vas bioqumicas complementares,
j que a semelhana macroscpi-
ca foi grande.
O gnero Proteus pode ser dis-
tinguido das demais enterobact-
rias rapidamente, j que o meio
possui quantidade de triptofano
suficiente para permitir a leitura
da produo de H2S.
Na amostragem estudada,
nenhuma cepa de E. coli fermen-
tou celobiose. Para laboratrios
onde uroculturas so rotineira-
mente semeadas em gar Mac-
Conkey alm do CLED, seria vi-
vel a substituio da biplaca pelo
CLED modificado, pela facilidade
na identificao presuntiva de al-
gumas bactrias. Isto gera uma
economia efetiva, pois evita a re-
alizao de provas bioqumicas.
Quanto identificao de cocos
gram-positivos, no foi muito fa-
cilitada, pela semelhana com que
as colnias se apresentaram em
relao ao meio tradicional, ape-
nas com algumas diferenas na
colorao das colnias. Nenhuma
prova bioqumica pode ser lida di-
retamente no meio e as colnias
foram identificadas separadamente
pelos mtodos convencionais.
O aparecimento de culturas mis-
tas chamou a ateno pela facili-
dade da distino das cepas, pois
no caso de E. coli e Proteus spp. o
gar CLED modificado mostrou-se
enegrecido em uma pequena por-
o, mas as colnias mostraram-
se incolores com gar verde nor-
enzima triptofano-desaminase no
caso de bactrias pertencentes aos
gneros Proteus ou Providncia.
A lactose foi substituda por ce-
lobiose, com a finalidade de diferen-
ciar E. coli de outros uropatgenos.
A produo do gs sulfdrico foi
avaliada pela presena da cor ne-
gra, produzida a partir de subs-
tratos especficos incorporados ao
meio destacou-se o Proteus spp.
O indol foi revelado pelo acrs-
cimo do Reativo de Kovacs, dire-
tamente sobre as colnias desen-
volvidas no meio modificado.
Avaliando-se as principais pro-
vas bioqumicas, que no objetivo
proposto foram avaliadas direta-
mente na placa, observa-se que
na identificao presuntiva de E.
coli obteve-se sucesso em quase
todas as amostras; excetuando-
se apenas as culturas mistas. A
identificao foi realizada em ape-
nas um minuto, incluindo leitura
e observao do aparecimento de
uma cor vermelho-rsea intensa.
No houve nenhuma cepa de E.
coli no produtora de indol, tanto
pelo mtodo rpido quanto pelo
convencional.
No desenvolvimento da pesqui-
sa no apareceram cepas como
Klebsiella oxytoca e Citrobacter
diversus, que possuem caracters-
ticas macroscpicas semelhantes
s da Escherichia coli e so 99%
indol-positivas. Em contrapartida,
apresentam-se 100% e 99% ce-
lobiose-positiva, respectivamente.
Quanto identificao de Kle-
bsiella spp. e Enterobacter spp.,
ambas so fermentadores de ce-
119 NewsLab - edio 74 - 2006
NewsLab - edio 74 - 2006 120
Concluso
mal em outra poro. Alm disso,
ao pingar o Reativo de Kovacs na
poro enegrecida, a prova do in-
dol mostrou-se negativa, confir-
mando presuntivamente ser Pro-
teus, j nas colnias incolores a
prova foi positiva, indicando a pre-
sena de E. coli naquela poro.
Na cultura onde se desenvol-
veu Serratia spp. + Proteus spp.
o gar CLED modificado mostrou-
se enegrecido em uma pequena
poro, mas as colnias mostra-
ram-se incolores com gar verde
normal em outra poro. Alm dis-
so, ao pingar o Reativo de Kovacs
na poro enegrecida a prova do
indol mostrou-se negativa, confir-
mando presuntivamente se tratar
de Proteus, e nas colnias incolo-
res tambm foi negativa, indican-
do a presena de Serratia spp.
naquela poro.
No caso de Enterobacter spp.
+ Proteus spp., o gar CLED mo-
dificado mostrou-se enegrecido
em uma pequena poro; mas as
colnias mostraram-se amarelas
com gar amarelo em outra por-
o, ao pingar o reativo de Kovacs
a prova de indol foi negativa. Os
resultados deram indcios das co-
lnias amarelas serem fermenta-
doras de celobiose (Enterobac-
ter spp. ou Klebsiella spp.); as
colnias foram isoladas e identi-
ficadas bioquimicamente como
Enterobacter aerogenes e Pro-
teus mirabilis.
O nico erro que poderia ocor-
rer na identificao das E. coli se-
ria confundir com Shigella flexne-
ri, pois 50% das cepas so indol
positivas, mas, em contrapartida,
so muito raras em urina.
Concluso
O gar CLED modificado pode
substituir com eficcia o gar
CLED tradicional, em uroculturas,
visto que, das amostras inocula-
das, no houve inibio no cresci-
mento de nenhuma cepa; e a pra-
ticidade que oferece na identifi-
cao presuntiva de Escherichia
coli, com rapidez, economia e sim-
plicidade metodolgica, justifican-
do sua utilizao.
Recomenda-se o uso em labo-
ratrios de pequeno, mdio e
grande portes e sugere-se aos que
usam MacConkey em paralelo,
que substituam-no por medida de
economia, j que o CLED modifi-
cado ter custo aumentado em
relao ao tradicional.
Embora apenas as cepas de Es-
cherichia coli, Proteus spp. e Ser-
ratia spp. tenham sido identifica-
das direta e definitivamente pelo
meio modificado, sem a necessi-
dade de provas complementares,
o desempenho do meio proposto
trouxe avanos, pois muitas cepas
puderam ser avaliadas presuntiva-
mente de modo mais sugestivo, j
que o CLED modificado propicia a
verificao de algumas provas bi-
oqumicas adicionais.
O nmero de amostras identi-
ficadas utilizando-se apenas a
morfologia colonial indica uma efe-
tiva reduo de custos do exame
bacteriolgico de urina.
Sugere-se que novos estudos
sejam realizados, utilizando-se um
nmero maior de amostras, para a
possibilidade de encontrar maior
nmero e variedade de cepas.
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