UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGIA
MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA (VII SEMESTRE)

D.R. Cesar Mamani Catacora

TEMA PRACTICO: TINCION DE GRAM


MATERIALES

Mesa de trabajo
Frotis ya realizado
Soluciones de, cristal violeta, yodo lugol, acetona, safranina.
Microscopio
2 mecheros de bunsen
Aceite de inmersin
Asas bacteriolgicas
Agua destilada
Vaso de precipitado de 50 ml
Cajas petri con medio de cultivo
Campo de esterilizacin
Papel secante
Torundas de algodn

INVESTIGACION DE TINCION DE GRAM:
El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram.
positivas como Graham negativas).
El lugol est formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio), el cual est
presente para solubilizar el yodo. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en
solucin acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la
misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran,
mientras que los Gram negativos s lo hacen.
Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la
coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas
permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una tincin de
contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al trmino del protocolo, las
Gram positivas se vern azul-violceas y las Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la
tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina)
Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En
este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se cubre con solucin de uno de los colorantes de
violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de
violeta de metilo y se aade luego una solucin de yodo, que se deja durante el mismo tiempo
que la anterior; despus se lava el portaobjetos con alcohol hasta que ste no arrastre ms
colorante.
Sigue a tal tratamiento una coloracin de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida,
pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.
Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, an despus de tratarlos con un
decolorante, y el color no se modifica al aadir ste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y
toman el segundo.
Los que fijan el violeta, se califican de grampositivos, y los que pierden la primera coloracin y
retienen la segunda, de gramnegativos. Basndonos pues, en la reaccin Gram, podemos
clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos.


PASOS PARA LA TECNICA DE TINCION DE GRAM:

prepara el frotis y fijar a calor
colocar la preparacin con la solucin de cristal violeta sumergirla durante(1mn)
lavar con solucin yodada (lugol)
cubrir el frotis durante con solucin lugol durante (1mn)
escurrir y decolorar con alcohol hasta que no arrastre mas cristal violeta
lavar con agua corriente
contrastar con la solucin safranina
lavar con agua corriente y secar al aire
observar con el microscopio con una gota de aceite de inmersin en objetivo (100x)



DESARROLLO:

Los materiales como las asas bacteriolgicas no tienen nada que ver con la tincin de Gram.,
solo se volvieron a poner ala mesa por que algunos de los alumnos no pudieron completar la
prctica a su tiempo y si haba algn error en la tincin se tena la oportunidad de volver hacer el
frotis e intentar de nuevo la tincin.

Se llevo el portaobjetos al lavamanos, se colocaron recipientes con las soluciones de (acetona,
yugol, cristal violeta, safranina), se tomo el portaobjetos y se sumergi en el recipiente donde
contena el cristal violeta durante 1mn, despus se sumergi en el yodo lugol durante 1mn, se
lavo con la acetona hasta que ya no escurriera mas cristal violeta, posteriormente se sumergi en
la safranian durante 1mn y finalmente se lavo con agua corriente, se seco al aire libre y sle
coloco una gota de inmersin para fijarlo en el microscopio con objetivo 1000x.


DESARROLLO GRAFICO




Cristal violeta durante 1mn




Yodo lugol durante 1mn










Se vaco acetona para limpiar el cristal violeta hasta que ya no escurriera ms de este.







Se vaco safranina durante 1mn






Se lavo con agua corriente para limpiarlo de la safranina y se seco al aire libre.






Sle acho una pequea gota de aceite de palo (aceite de inmersin) para su vista en el
microscopio.







Se observo atravs del microscopio con objetivo 100x






Se observaron bacilos, de color rojo y por lo tanto los microorganismos son gramnegativos.




CONCLUSION

Las bacterias que se observaron salieron de color rojo y eso quiere decir que salieron
gramnegativas y supimos como manejar la tincin de Gram. Aunque hubo muchos errores, pero
para la otra saldr mucho mejor.