Professional Documents
Culture Documents
TriniCLOT Protein S
S .
TriniCLOT Protein S
. ,
S.
Xa, C
. 5 ,
. ,
S .
DiScipio ..1 S
( S Seattle) 1977.
S 635
(69 000 kD) 320 nM .
S 15 80
3.2 S
,
.
S .
S
1980 Walker3
S
C
V. C,
S
.
S.4,5,6 S
.7 60%
S
C4b. , S
.8
.
S
C4b
.9
S.
in vitro
TriniCLOT PS Activator Reagent, 4 x 1 ml, T1602A
1 ml
C, Xa
.
TriniCLOT PS Dilution Buffer ( 10X), 2 x 2,5 ml, T1602B
2,5 ml
, , 0,2 M NaCl, 0,03 M HEPES
Polybrene 1,2 U/ml
.
TriniCLOT PS Control Plasma, 2 x 0,5 ml, T1602C
0,5 ml
.
TriniCLOT PS Depleted Plasma, 4 x 1 ml, T1602D
1 ml
S
S.
1. TriniCLOT PS Activator Reagent:
1 ml I.
(18-25C) 20
, .
2. TriniCLOT PS Dilution Buffer:
25 ml
I.
3. TriniCLOT PS Control Plasma:
0,5 ml I.
(18-25C) 20 , .
.
4. TriniCLOT PS Depleted Plasma:
1 ml I.
(18-25C) 20 , .
0,025 M
I
37C
25 ml
100-1000 l
( 2500 x g)
T1902 TriniCLOT Calcium Chloride 0.025 M
T4101 TriniCHECK Control 1
T4104 TriniCHECK Abnormal Control
T5102 TriniCAL Reference Plasma
/
. ,
.
,
,
2-8C.
:
1. TriniCLOT PS Activator Reagent:
2-8C 4 .
-20C 30 .
2. TriniCLOT PS Dilution Buffer:
2-8C 30 .
3. TriniCLOT PS Control Plasma:
,
2-8C.
4. TriniCLOT PS Depleted Plasma:
2-8C 4 .
-20C 30 .
3,2% (0,109 M). ,
1 500 x g 15 .
CLSI H21
.10
, S
FDA
B (HBsAg), C (HCV)
1 (HIV-1).
HBsAg,
HCV, HIV-1 ,
.
,
.
.
.
30 .
.
1. TriniCLOT PS Activator 0,025 M
37C
. .
2. 0,1 ml TriniCLOT PS Depleted Plasma 0,1 ml
. 2
37C.
3. 0,1 ml TriniCLOT PS Activator .
5 37C.
4. 0,1 ml 0,025 M.
.
.
.
. (PNP),
,
S. PNP
20 .
,
S (TriniCAL Reference Plasma,
. T5102).
S
:
1 ml :
* ,
( 12,5%) 0%.
.
: ,
S
100%,
: .
500 l:
30 .
S
( x) ( y)
(mm)
. ,
S
.
S, ,
S .
S ,
,
.
.
. .
S
.
,
. S
.
S
,
.
S
. S
55-160%.11 ,
.12 S
10-15%
.9
S
.13 S
S .
() S
C4b (C4bBP).
S
C. S,
S
S C4bBP.
S
S, S
S.14
, S
, .
, S
S
C4bBP.
1,2 U/ml
S.
.
S
V Leiden.
,
.
.
.
.
.
S
0,868 78
, y = 0,913x + 17,2.
(CV):
TriniCLOT Protein S
S 0 100%
.
PORTUGUS
UTILIZAO PREVISTA
O TriniCLOT Protein S destina-se determinao quantitativa da actividade da Protena S no
plasma humano.
RESUMO E PRINCPIO
O teste TriniCLOT Protein S um ensaio de plasma baseado na formao de cogulo.
No ensaio, so misturadas diluies de plasma do paciente com plasma sem Protena
S. Um reagente contendo Factor Xa, Protena C activada e fosfolpidos adicionado
mistura. Aps um perodo de 5 minutos de incubao, adicionado cloreto de clcio
para iniciar a formao de cogulos. Nestas condies, o aumento do tempo de
coagulao directamente proporcional concentrao de Protena S no plasma do
paciente.
DiScipio et al1 foram os primeiros a identificar a Protena S (S de Seattle) em 1977.
A Protena S humana uma glicoprotena de cadeia nica de 635 aminocidos
(69 000 kD) que circula no plasma numa concentrao de cerca de 320 nM. O gene
da Protena S activa tem 15 exes e ocupa mais de 80 kilobases no Cromossoma 3.2
A Protena S uma protena dependente da Vitamina K, sintetizada principalmente no
fgado, mas tambm no endotlio e possivelmente nos megacaricitos. possvel que
estas trs fontes de Protena S desempenhem um papel significativo na regulao da
hemstase.
A Protena S no parecia ser o precursor do zimogneo da protease serina e no era
conhecida nenhuma funo at 1980 quando Walker3 revelou que a Protena S bovina
funciona como cofactor da Protena C na inactivao do Factor V activado. A importncia
biolgica da regulao da coagulao pela via que envolve a Protena C, a Protena S e
a trombomodulina foi rapidamente substanciada por estudos clnicos. Foi documentada
uma associao entre trombose e deficincias parciais da Protena S em algumas
famlias.4,5,6 A Protena S foi tambm encontrada na superfcie de clulas endoteliais e
nas plaquetas.7 Aproximadamente 60% da Protena S do plasma humano est
estreitamente ligado protena de ligao ao C4b. Assim, os nveis plasmticos de
Protena S podem no reflectir completamente a sua biodisponibilidade.8 Este complexo
no apresenta actividade de cofactor anticoagulante. Os estudos sugerem que a Protena
S pode desempenhar um papel no sistema complementar, mediando a associao da
protena de ligao ao C4b s superfcies celulares danificadas ou activadas para expor
fosfolpidos carregados negativamente.9 Isto pode representar outro mecanismo
regulador importante para a Protena S.
REAGENTE
Para uso em diagnstico in vitro
DESCRIO DO REAGENTE
TriniCLOT PS Activator Reagent, 4 x 1 ml, T1602A
Cada frasco contm 1 ml de material liofilizado contendo Protena C humana activada,
Factor Xa bovino e fosfolpido de crebro de coelho.
TriniCLOT PS Dilution Buffer (10X Concentrate), 2 x 2,5 ml, T1602B
Cada frasco contm 2,5 ml concentrados para diluio da amostra, que, aps
reconstituio, contm 0,2 M NaCl, 0,03 M HEPES e uma quantidade suficiente de
Polybrene para neutralizar at 1,2 U/ml de heparina numa amostra de plasma.
TriniCLOT PS Control Plasma, 2 x 0,5 ml, T1602C
Cada frasco contm 0,5 ml de plasma humano normal citratado liofilizado.
TriniCLOT PS Depleted Plasma, 4 x 1 ml, T1602D
Cada frasco contm 1 ml de plasma humano liofilizado ao qual se retirou a Protena S por
imunoadsoro numa coluna de anticorpos caprinos imobilizados para a Protena S humana.
PREPARAO DO REAGENTE
1. TriniCLOT PS Activator Reagent
Reconstituir com 1 ml de gua desionizada de Tipo I. Deixar repousar temperatura
ambiente (18-25C) durante 20 minutos para uma dissoluo completa.
2. TriniCLOT PS Dilution Buffer
Diluir o contedo de um frasco em 25 ml de gua desionizada de Tipo I.
3. TriniCLOT PS Control Plasma
Reconstituir com 0,5 ml de gua desionizada de Tipo I. Homogeneizar suavemente e
deixar repousar temperatura ambiente (18-25C) durante 20 minutos para uma
dissoluo completa. Transferir para um tubo de ensaio de plstico.
4. TriniCLOT PS Depleted Plasma
Reconstituir com 1 ml de gua desionizada de Tipo I. Homogeneizar suavemente e
deixar repousar temperatura ambiente (18-25C) durante 20 minutos para uma
dissoluo completa.
MATERIAIS ADICIONAIS NECESSRIOS
Analisador de coagulao foto-ptico automtico ou temporizador de coagulao mecnico
ou cronmetro
Soluo de cloreto de clcio 0,025 M
gua desionizada de Tipo I ou equivalente
Incubadora ou banho de gua a 37C
Proveta graduada de 25 ml
Pipeta de volume varivel de 100-1000 l
Papel milimtrico
Centrifugadora (com capacidade para 2500 x g)
MATERIAIS DISPONVEIS
T1902 TriniCLOT Calcium Chloride 0.025 M
T4101 TriniCHECK Control 1
T4104 TriniCHECK Abnormal Control
T5102 TriniCAL Reference Plasma
INSTRUMENTOS
Esto disponveis aplicaes/adaptaes do mtodo para analisadores individuais, a
pedido; contacte o seu representante local.
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
Antes da reconstituio, os reagentes mantm a sua estabilidade at data de validade
indicada no rtulo do frasco, quando armazenados a 2-8C.
Aps reconstituio:
1. TriniCLOT PS Activator Reagent:
Armazenar a 2-8C e utilizar nas 4 horas seguintes. O reagente activador reconstitudo
pode ser congelado a -20C durante 30 dias.
2. TriniCLOT PS Dilution Buffer:
Armazenar a 2-8C durante 30 dias.
3. TriniCLOT PS Control Plasma:
O plasma reconstitudo mantm a sua estabilidade durante uma hora, quando
armazenado a 2-8C.
4. TriniCLOT PS Depleted Plasma:
Armazenar a 2-8C e utilizar nas 4 horas seguintes. O plasma pode ser congelado a
-20C durante 30 dias.
COLHEITA E ARMAZENAMENTO DAS AMOSTRAS
So colhidos nove volumes de sangue num volume de 3,2% (0,109 M) citrato de sdio.
Imediatamente aps a colheita de sangue, as amostras so centrifugadas a 1 500 x g
durante 15 minutos. Consulte a verso mais recente do documento CLSI H21 para obter
mais instrues relativamente colheita e armazenamento de amostras.10
PROCEDIMENTO
ADVERTNCIAS E PRECAUES
Cada unidade de dador utilizada na preparao do reagente activador, bem como os
plasmas sem protena e de controlo foram testados mediante um mtodo licenciado da
FDA e revelaram no ser reactivos a antignios de superfcie do vrus da Hepatite B (HBsAg),
Hepatite C (VHC) e da Imunodeficincia Humana Tipo 1 (VIH-1). Dado que nenhum mtodo
de teste pode assegurar com toda a certeza a inexistncia de HBsAg, VHC, VIH-1 ou outros
agentes infecciosos, este reagente devem ser manuseado de acordo com as recomendaes
aplicveis a qualquer amostra de soro ou sangue humano potencialmente infeccioso.
Para assegurar resultados exactos e reproduzveis, utilize pipetas calibrados e cumpra os
procedimentos recomendados, com especial realce para os tempos e temperatura de
incubao.
Este teste no deve ser utilizado como nico meio de diagnstico. Deve ser seguido um
esquema de testes standard de coagulao.
As diluies de padro e de amostras devem ser armazenadas em gelo seco e testadas nos
30 minutos seguintes.
PROCEDIMENTO DE TESTE
Esto disponveis aplicaes especficas do instrumento, a pedido.
1. Transfira o TriniCLOT PS Activator e o cloreto de clcio 0,025 M para dentro dos poos
de reagente a 37C do analisador de coagulao. Incube durante dois minutos, no
mnimo.
2. Adicione uma diluio de 0,1 ml de TriniCLOT PS Depleted Plasma e 0,1 ml de plasma
de teste a uma cuvete de coagulao. Incube durante 2 minutos a 37C.
3. Adicione 0,1 ml de TriniCLOT PS Activator pr-aquecido cuvete. Incube durante
exactamente 5 minutos a 37C.
4. Adicione 0,1 ml de cloreto de clcio 0,025 Mpr-aquecido. Inicie o analisador e registe
o tempo de coagulao.
Recomenda-se que cada amostra de teste e de controlo seja testada em duplicado. O
resultado final ser a mdia dos resultados duplicados.
Calibrao Do Ensaio
Deve ser criada uma nova curva padro de cada vez que o ensaio efectuado. Deve ser
utilizada um pool de plasma normal (PPN), recolhida mediante o mesmo procedimento
que o plasma de teste, para a preparao dos padres de calibrao da Protena S. Para
a preparao deste PPN, devem ser utilizados pelo menos 20 dadores normais.
Poder tambmser utilizado plasma de referncia, preparado para fins comerciais, emque
se determinou o nvel de Protena S (TriniCAL Reference Plasma Cat no. T5102).
Prepare os padres de Protena S, as amostras de controlo e de plasma de pacientes
imediatamente antes do teste, da seguinte forma:
Preparao manual de diluies de 1 ml para uma curva padro:
*Emanalisadores automticos, o ponto mais baixo ser uma diluio mnima (cerca de 12,5%)
e no um padro "verdadeiro" de 0%. Consulte a documentao especfica do analisador.
Nota: Se utilizar plasma de referncia disponvel comercialmente, dever ser utilizada a
concentrao de Protena S atribuda emvez de 100%, e para cada diluio a actividade em
%dever ser calculada da seguinte forma: valor atribudo multiplicado pelo factor de diluio.
Preparao manual de diluies de amostra e de controlo de 500 l:
Armazene as diluies em gelo seco e teste nos 30 minutos subsequentes.
Curva de Calibrao
Faa o traado da actividade da Protena S dos padres de calibrao (eixo x) versus tempo
de coagulao mdio (eixo y) em papel milimtrico linear. Desenhe a linha que melhor liga
os pontos resultantes. Para as amostras de pacientes e de controlo, determine a
percentagem de actividade da Protena S, interpolando a partir da curva padro. Nos
pacientes com anticoagulante de lpus ou com uma actividade anormalmente elevada da
Protena S, para os quais foram utilizadas mltiplas diluies, corrija o nvel de Protena
S com o factor de diluio. Se os nveis de Protena S corrigidos continuarem a no ser
concordantes, muito provvel que a amostra de paciente tenha um inibidor muito forte,
para o qual no possvel determinar um nvel exacto de actividade com este ensaio.
A curva de calibrao apresentada abaixo apenas um exemplo. Os utilizadores devero
criar uma nova curva padro sempre que o ensaio for efectuado. No utilize o exemplo de
curva apresentado abaixo.
CONTROLO DE QUALIDADE
O plasma de controlo da Protena S includo no kit pode ser utilizado como controlo
primrio ou secundrio. Os controlos s devem ser includos se utilizar reagentes recm-
reconstitudos. O nvel de Protena S obtido para cada plasma de controlo deve estar
compreendido no intervalo especificado pelo fornecedor ou pelo laboratrio. Se as
amostras de controlo de qualidade no produzirem nveis de Protena S situados dentro
dos intervalos especificados para qualquer plasma de referncia, em algum dos ensaios,
o ensaio dever ser repetido.
RESULTADOS
RESULTADOS PREVISTOS
O valor da Protena S habitualmente expresso sob a forma de percentagem relativa,
por comparao com o valor de um plasma padro ou um pool de plasma normal. O
intervalo normal esperado para a Protena S de 55-160%.11 Contudo, cada laboratrio
dever determinar o seu prprio intervalo normal.12 Os homens tm 10-15% mais
Protena S plasmtica que as mulheres e a concentrao aumenta ligeiramente, em
ambos os sexos, com a idade.9 Uma diminuio da Protena S est associada a uma
maior incidncia de tromboembolismo.13 Uma diminuio da actividade da Protena S
no indica necessariamente uma diminuio da concentrao plasmtica de Protena S.
A Protena S (total) est presente no plasma sob a forma de protena livre e de protena
ligada protena de ligao ao C4b (C4bBP). S a Protena S livre funciona como cofactor
para a Protena C activada. Quando h diminuio da actividade da Protena S,
importante estabelecer os nveis plasmticos tanto da Protena S como da Protena S
ligada a C4bBP. Foram descritos trs tipos de deficincia congnita de Protena S,
consoante os nveis relativos de actividade da Protena S, da Protena S livre e da Protena
S total.14
Os nveis de Protena S podem ainda diminuir em caso de doena heptica e durante a
teraputica com antigoagulantes. Alm disso, a actividade da Protena S e o antignio da
Protena S livre pode ser reduzida em caso de doena inflamatria, em que os nveis de
C4bBP so elevados.
COMPORTAMENTO FUNCIONAL
A presena de um nvel de heparina superior a 1,2 U/ml ou de anticoagulantes de lpus
na amostra pode interferir nos resultados do ensaio, prolongando o tempo de
coagulao e produzindo um valor artificialmente elevado de Protena S. Teste estas
amostras com mltiplas diluies. Os mtodos funcionais para a Protena S podem ser
influenciados pela presena de uma mutao do Factor V de Leiden.
Para assegurar resultados exactos e reproduzveis, utilize pipetas calibradas e cumpra os
procedimentos recomendados, com especial realce para os tempos e temperatura de
incubao. Este teste no deve ser utilizado como nico meio de diagnstico. Deve ser
seguido um esquema de testes standard de coagulao.
O utilizador final dever estabelecer caractersticas de desempenho do produto para o
mtodo ou kit especfico utilizado. Os estudos efectuados com um analisador automtico
com deteco foto-ptica produziram os resultados apresentados abaixo.
Exactido
Um estudo realizado com outro kit de Protena S comercialmente disponvel produziu um
coeficiente de correlao de 0,868 em 78 amostras testadas, com uma equao de
regresso de y = 0,913x + 17,2.
Preciso
Observaram-se os seguintes coeficientes de variao (CV):
Sensibilidade
O TriniCLOT Protein S foi concebido para produzir uma curva padro linear para nveis de
Protena S entre 0 e 100%, quando traado conforme definido.
POLSKI
PRZEZNACZENIE
Test TriniCLOT Protein S jest przeznaczony do ilociowego oznaczania aktywnoci
biaka S w ludzkim osoczu.
OPIS I ZASADY DZIAANIA
Test TriniCLOT Protein S jest oparty na analizie procesu krzepnicia osocza. W
niniejszym badaniu rozcieczone roztwory osocza pacjenta s mieszane z osoczem
pozbawionymbiaka S. Nastpnie do mieszaniny dodawany jest odczynnik zawierajcy
czynnik Xa, aktywne biako C i fosfolipidy. Po 5 minutowej inkubacji do roztworu zostaje
dodany chlorek wapnia, aby rozpocz proces formowania skrzepu. W tych warunkach
wyduenie czasu krzepnicia jest wprost proporcjonalne do stenia biaka S w osoczu
pacjenta.
DiScipio i wsppracownicy1 jako pierwsi zidentyfikowali ludzkie biako S (S od pierwszej
litery nazwy miasta Seattle) w 1977 r. Biako S jest jednoacuchow gilkoprotein
skadajc si z 635 aminokwasw (masa 69 000 kD), ktra kry w osoczu w steniu
okoo 320 nM. Gen biaka S skada si z 15 egzonw i obejmuje wicej ni 80 kilozasad
na chromosomie 3.2 Biako S jest zalen od witaminy K protein syntetyzowan gwnie
w wtrobie, ale rwnie w rdbonku i prawdopodobnie w megakariocytach. Jest
moliwe, e wszystkie trzy rda biaka S maj istotne znaczenie w regulacji
hemostazy.
Okazao si, e biako S nie jest prekursorem proteinazy serynowej, a jego funkcja
zostaa poznana dopiero w 1980 r., kiedy Walker3 ogosi, e woowe biako S spenia
rol kofaktora dla aktywnego biaka C w procesie inaktywacji aktywowanego czynnika
V. Wkrtce potembiologiczne znaczenie regulacji krzepnicia drog dziaania biaka C,
biaka S i trombomoduliny zostao potwierdzone wynikami bada klinicznych. W
niektrych rodzinach udokumentowano zwizek pomidzy zakrzepic i czciowym
niedoborem biaka S.4,5,6 Biako S zostao rwnie znalezione na powierzchni komrek
rdbonka i pytek krwi.7 U czowieka okoo 60% osoczowego biaka S jest cile
poczone z biakiem wicym C4b. Zatem osoczowe poziomy biaka S mog nie w
peni odzwierciedla jego biodostpno.8 Ten kompleks biakowy nie posiada
aktywnoci antykoagulacyjnej kofaktora. Zasugerowano, i biako S moe odgrywa
rol w ukadzie dopeniacza, poredniczc w poczeniu pomidzy biakiem wicym
C4b a powierzchniami komrek, ktre zostay uszkodzone lub pobudzone do
odsonicia ujemnie naadowanych fosfolipidw.9 Moe to wskazywa na inny wany
mechanizm regulacyjny, w ktrym bierze udzia biako S.
ODCZYNNIK
Do diagnostyki in vitro
OPIS ODCZYNNIKA
TriniCLOT PS Activator Reagent, 4 x 1 ml, T1602A
Kada fiolka zawiera 1 ml liofilizowanego materiau z ludzkim aktywnym biakiem C,
woowym czynnikiem Xa i krliczym fosfolipidem mzgowym.
TriniCLOT PS Dilution Buffer (10X stony), 2 x 2,5 ml, T1602B
Kada fiolka zawiera 2,5 ml koncentratu, ktre po rozcieczeniu zawieraj 0,2 M NaCl,
0,03 M HEPES i odpowiedni ilo Polybrene, aby zneutralizowa do 1,2 U/ml
heparyny w prbce osocza.
TriniCLOT PS Control Plasma, 2 x 0,5 ml, T1602C
Kada fiolka zawiera 0,5 ml liofilizowanego prawidowego osocza ludzkiego z
dodatkiem cytrynianu.
TriniCLOT PS Depleted Plasma, 4 x 1 ml, T1602D
Kada fiolka zawiera 1 ml liofilizowanego ludzkiego osocza, ktre zostao pozbawione
biaka S metod immunoadsorpcji z zastosowaniem kolumny z unieruchomionymi
przeciwciaami kozimi przeciw biaku S.
PRZYGOTOWANIE ODCZYNNIKA
1. TriniCLOT PS Activator Reagent:
Rozpuci odczynnik z trombin w 1 ml destylowanej lub demineralizowanej wody.
Pozostawi w temperaturze pokojowej (1825C) przez 20 minut do cakowitego
rozpuszczenia.
2. TriniCLOT PS Dilution Buffer:
Rozpuci zawarto jednej fiolki w 25 ml destylowanej lub demineralizowanej
wody.
3. TriniCLOT PS Control Plasma:
Rozpuci odczynnik z trombin w 0,5 ml destylowanej lub demineralizowanej
wody. Delikatnie wymiesza i pozostawi w temperaturze pokojowej (1825C)
przez 20 minut do cakowitego rozpuszczenia. Przenie do plastikowej probwki
przeznaczonej do badania.
4. TriniCLOT PS Depleted Plasma:
Rozpuci odczynnik z trombin w 1 ml destylowanej lub demineralizowanej wody.
Delikatnie wymiesza i pozostawi w temperaturze pokojowej (1825C) przez 20
minut do cakowitego rozpuszczenia.
WYMAGANE MATERIAY DODATKOWE
Automatyczny fotooptyczny analizator koagulacji lub mechaniczne urzdzenie do
pomiaru czasu krzepnicia, bd te stoper
0,025 M roztwr chlorku wapnia
Woda dejonizowana typ 1 lub odpowiednik
Inkubator lub ania wodna o temperaturze 37C
Cylinder z podziak 25 ml
Pipety o zmiennych objtociach 1001000 l
Papier milimetrowy
Wirwka (do 2500 x g)
DOSTPNE MATERIAY
T1902 TriniCLOT Calcium Chloride 0.025 M
T4101 TriniCHECK Control 1
T4104 TriniCHECK Abnormal Control
T5102 TriniCAL Reference Plasma
APARATURA
Informacje dotyczce zastosowania/moliwoci adaptacji metody w poszczeglnych
urzdzeniach analizujcych dostpne s na yczenie. W celu ich uzyskania naley
skontaktowa si z lokalnym przedstawicielem.
PRZECHOWYWANIE I TRWAO
Przed rozpuszczeniem odczynniki zachowuj trwao przed upywem daty wanoci
na etykiecie fiolki, jeli s przechowywane w temperaturze 28C.
Po rozpuszczeniu:
1. TriniCLOT PS Activator Reagent:
Przechowywa w temperaturze 28C i zuy w cigu 4 godzin. Rozpuszczony
odczynnik z aktywatorem moe by zamroony do -20C przez 30 dni.
2. TriniCLOT PS Dilution Buffer:
Przechowywa w temperaturze 28C przez 30 dni.
3. TriniCLOT PS Control Plasma:
Rozpuszczone osocze jest stabilne przez godzin, jeli przechowuje si je w
temperaturze 28C.
4. TriniCLOT PS Depleted Plasma:
Przechowywa w temperaturze 28C i zuy w cigu 4 godzin. Osocze moe by
zamroone do -20C przez 30 dni.
POBIERANIE I PRZECHOWYWANIE PRBEK
Naley pobra dziewi czci objtoci krwi na jedn objto 3,2% (0,109 M)
cytrynianu sodu. Prbki, natychmiast po pobraniu, naley odwirowa z
przyspieszeniem 1500 x g przez 15 minut. W celu uzyskania dodatkowych informacji
na temat pobierania prbek oraz ich przechowywania, naley zapozna si najnowsz
wersj dokumentu H21 opracowanego przez CLSI.10
SPOSB POSTPOWANIA
RODKI BEZPIECZESTWA I OSTRONOCI
Kady dawca jednostki krwi uytej do przygotowania odczynnika z aktywatorem,
osocza pozbawionego biaka S i osocza kontrolnego by przebadany, metod
posiadajc licencj FDA, w kierunku WZW B (HBsAg), WZW C (HCV) i ludzkiego wirusa
niedoboru odpornoci Typu 1 (HIV-1). Wyniki byy ujemne. adna znana metoda
pomiarowa nie jest w stanie zapewni penej gwarancji braku HBsAg, HCV, HIV-1 lub
innych czynnikw zakanych w materiale badawczym, dlatego te z prbkami powinno
si postpowa tak, jak z potencjalnie zakanymi produktami surowicy lub krwi.
Aby zapewni waciwe i powtarzalne wyniki, naley uywa kalibrowanych pipet i
kontrolowa, zgodnie z zaleceniami, ze szczegln uwag wartoci czasu inkubacji i
temperatury.
Niniejszy test nie powinien by uywany jako jedyna metoda diagnostyczna. Naley
przestrzega podstawowych zasad zwizanych z badaniem parametrw krzepnicia.
Rozcieczone roztwory standardowe i prbek powinny by przechowywane na mokrym
lodzie i zbadane w cigu 30 minut.
METODA WYKONANIA TESTU
Aplikacje przeznaczone do konkretnych urzdze s dostpne na yczenie.
1. Przenie odczynnik z aktywatorem TriniCLOT PS Activator oraz chlorek wapnia
0,025 M do pojemnikw na odczynniki w urzdzeniu pomiarowym w temperaturze
37C. Inkubowa przez co najmniej dwch minut.
2. Doda 0,1 ml TriniCLOT PS Depleted Plasma i 0,1 ml rozcieczonego osocza
badanego do kuwety koagulacyjnej. Inkubowa przez 2 minuty w temperaturze
37C.
3. Doda 0,1 ml uprzednio ogrzanego aktywatora TriniCLOT PS Activator do kuwety
pomiarowej. Inkubowa przez 5 minut w temperaturze 37C.
4. Doda 0,1 ml wczeniej ogrzanego roztworu chlorek wapnia 0,025 M. Wczy
zegar i zmierzy czas krzepnicia.
Zaleca si dwukrotne przeprowadzenie bada prbek materiau oraz prbek
kontrolnych. Wynik kocowy stanowi rednia z dwch pomiarw.
Kalibracja Testu
Za kadym razem naley stworzy now krzyw standardow. Mieszanina
nagromadzonego osocza, ktre zostao pobrane w ten sam sposb, co materia do
badania, powinna zosta wykorzystana do stworzenia standardowych krzywych
kalibracji dla biaka S. Potrzeba co najmniej 20 zdrowych dawcw w celu przygotowania
nowej mieszaniny osocza.
Mona rwnie zastosowa osocze referencyjne, w ktrym okrelono poziom biaka S
(TriniCAL Reference Plasma, nr katalogowy T5102).
Przygotowa roztwory standardowe biaka S, prbki osocza kontrolnego i osocza
pacjenta, tu przed rozpoczciem analizy, w nastpujcy sposb:
Rczne przygotowanie 1 ml rozciecze do krzywej standardowej:
* W urzdzeniach automatycznych najniszy punkt stanowi minimalne rozcieczenie
(okoo 12,5%), a nie prawdziwy standard 0%. Naley zapozna si z dokumentacj
konkretnego urzdzenia.
Uwaga: Podczas uywania osocza referencyjnego dostpnego na rynku, naley
stosowa przypisan warto stenia biaka S zamiast 100%; dla kadego
rozcieczenia % aktywnoci jest obliczany nastpujco: przypisana warto pomnoona
przez wspczynnik rozcieczenia.
Rczne przygotowanie 500 l prbki i rozciecze kontrolnych:
Rozcieczone roztwory powinny by przechowywane na mokrym lodzie i zbadane w
cigu 30 minut.
Krzywa Kalibracji
Na papier milimetrowy ze skal liniow nanie warto % aktywnoci biaka S w
stosunku do standardw kalibracyjnych (o x) i wartoci redniego czasu krzepnicia
(o y). Wykreli lini najlepiej dopasowan do punktw otrzymanych na wykresie. W
przypadku prbek pacjenta i kontrolnych naley okreli % aktywnoci biaka S przez
interpolacj z krzywej standardowej. U pacjentw z antykoagulantem toczniowym lub
z nieprawidowo wysokim poziomem aktywnoci biaka S, u ktrych zastosowano
rozcieczenia wielokrotne, naley skorygowa wartoci poziomu biaka S o odpowiedni
czynnik rozcieczenia. Gdy nadal poziomy biaka S nie zgadzaj si, to w prbkach
pacjenta znajduje si najprawdopodobniej bardzo silny inhibitor, ktry nie pozwala na
okrelenie poziomu aktywnoci biaka w tym tecie.
Poniej pokazano jedynie przykad krzywej kalibracji. Za kadym razem naley
stworzy now krzyw kalibracyjn. Nie uywa krzywej narysowanej poniej.
KONTROLA JAKOCI
Osocze kontrolne zawarte w zestawie, moe zosta uyte jako kontrola pierwszo- lub
drugorzdowa. Kontrole naley przeprowadza ze wieo rozpuszczonymi
odczynnikami. Warto poziomu biaka S, otrzymana podczas kadego oznaczenia
kontrolnego, powinna si zawiera w przedziale okrelonym przez sprzedawc lub
laboratorium. Jeli pomiary kontrolne w ktrymkolwiek badaniu nie mieszcz si w
dopuszczalnych zakresach stenia biaka S, okrelonych dla kadego osocza
referencyjnego, to procedur naley powtrzy.
WYNIKI
OCZEKIWANE WYNIKI
Warto biaka S jest z reguy wyraana jako wzgldny wynik procentowy, odniesiony
do wartoci otrzymanych dla osocza standardowego lub mieszaniny prawidowego
osocza. Oczekiwany prawidowy zakres wartoci dla biaka S wynosi 55160%.11
Niemniej jednak kade laboratorium moe ustali wasny przedzia wartoci.12
Mczyni maj 1015% wicej osoczowego biaka S ni kobiety i u obu pci stenie
wzrasta z wiekiem.9 Obnienie poziomu biaka S jest zwizane ze wzrostem czstoci
wystpowania przypadkw zatorowoci.13 Obnienie poziomu aktywnoci biaka S nie
oznacza od razu zmniejszenia jego stenia w osoczu. Biako S (frakcja cakowita) jest
obecne jako frakcja wolna oraz zwizana z biakiem C4b (C4bBP). Tylko frakcja wolna
biaka S dziaa jako kofaktor w procesie aktywacji biaka C. W momencie spadku
aktywnoci biaka S jest istotne, aby ustali osoczowe poziomy zarwno wolnej, jak i
zwizanej z C4bBP frakcji tego biaka. W zalenoci od wzgldnych poziomw
aktywnoci biaka S, frakcji wolnej i frakcji cakowitej, zidentyfikowano trzy rodzaje
wrodzonego niedoboru biaka S.14
Poziomy biaka S mog by rwnie zmniejszone w chorobach wtroby i podczas
terapii przeciwzakrzepowej. Dodatkowo aktywno biaka S i antygenu wolnej frakcji
tego biaka mog by obnione w chorobach zapalnych, w czasie trwania ktrych
poziomy biaka C4bBP s zwikszone.
CHARAKTERYSTYKA DZIAANIA
Obecno heparyny w steniu wikszym 1,2 U/ml lub stwierdzenie antykoagulantu
toczniowego w prbce mog mie wpyw na wynik testu przez wyduenie czasu
krzepnicia i sztuczne zwikszenie wartoci biaka S. Wykonaj testy dla prbek przy
rozcieczeniach wielokrotnych. Obecno mutacji czynnika V Leiden moe mie wpyw na
funkcjonalne metody oznaczania biaka S.
Aby zapewni waciwe i powtarzalne wyniki, naley uywa kalibrowanych pipet i
kontrolowa, zgodnie z zaleceniami, ze szczegln uwag wartoci czasu inkubacji i
temperatury. Niniejszy test nie powinien by uywany jako jedyna metoda
diagnostyczna. Naley przestrzega podstawowych zasad zwizanych z badaniem
parametrw krzepnicia.
Uytkownik kocowy powinien ustali charakterystyk dziaania produktu w stosunku
do wykorzystanych metod i sprztu. Badania przy uyciu automatycznego analizatora
koagulacji z fotooptycznym systemem detekcji day ponisze wyniki.
Dokadno Pomiaru
Badania przy uyciu innego dostpnego na rynku zestawu do oznaczania biaka S
wykazay wspczynnik korelacji rzdu 0,868 dla 78 przebadanych prbek z
rwnaniem regresji
y = 0,913x + 17,2.
Precyzja
Zaobserwowano nastpujce wspczynniki wariancji (CV):
Czuo
Test TriniCLOT Protein S zosta stworzony w taki sposb, aby krzywa kalibracyjna bya
liniowa dla wartoci poziomw biaka S w przedziale pomidzy 0 a 100%.
REFERECES / RFRENCES / LITERATUR /
REFERENCIAS / RIFERIMENTI / /
REFERNCIAS / LITERATURA
1. Discipio, R. G., et al. A comparison of human Prothrombin, factor IX (Christmas
Factor) factor X (Stuart Factor) and Protein S. Biochemistry 1977, 16: 698-706.
2. Schmidel, D. K. Organization of the human Protein S genes. Biochemistry 1990,
16: 7845 7852.
3. Walker, F. J. Regulation of activated Protein C by a new protein. A possible function
for bovine Protein S. Journal of Biological Chemistry 1980, 255: 5521-5524.
4. Comp, P. C., et al. Familial Protein S deficiency is associated with recurrent
thrombosis. Journal of Clinical Investigations 1984, 74: 2082-2088.
5. Broekmans, A. W., et al. Hereditary Protein S deficiency and venous
thromboembolism. A study in three Dutch families. Thrombosis and Haemostasis
1985, 53: 273-277.
6. Kamiya, T., et al. Inherited deficiency of Protein S in a Japanese family with recurrent
venous thromboembolism. A study of three generations. Blood 1986, 67: 406-410.
7. Sschwarz, H. P., et al. Identification and quantification of Protein S in human
platelets. Blood 1985, 66: 1452-1455.
8. Dahlbck, Bjrn. Interaction between vitamin K-dependant Protein S and the
complement C4b-binding protein. Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1984,
10: 139-148.
9. Broze, G. J., et al. Biochemistry and Physiology of Protein C, Protein S, and
Thrombomodulin. In: Colman, et al., eds. Hemostasis and Thrombosis: Basic
Principles and Clinical Practice, Third Edition 1994. Philadelphia, PA: J. B.
Lippincott Company, 259-275.
10. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Collection, Transport, and
Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and
Molecular Hemostasis Assays; Approved Guideline - Fifth Edition. CLSI document
H21-A5 Vol. 28, No. 5, 2008.
11. Boyer-Neumann, C., et al. Comparison of functional assays for Protein S. Thrombosis
and Haemostasis 1993, 70: 946-950.
12. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Defining, Establishing, and
Verifying Reference Intervals in the Clinical Laboratory; Approved Guideline - Third
Edition. CLSI document C28-A3 Vol. 28, No. 30, 2008.
13. Bertina, R. M. Hereditary Protein S deficiency. Haemostasis 1995, 15: 241-246.
14. Comp, P. C. Laboratory evaluation of Protein S status. Seminars in Thrombosis and
Hemostasis 1990, 16 (2), 177-181.
ORDERING INFORMATION / INFORMATIONS GNRALES /
/ BESTELLINFORMATIONEN / INFORMACIN SOBRE
EL PEDIDO / INFORMAZIONI PER GLI ORDINI /
/ / INFORMAO
DE ENCOMENDA / INFORMACJA DOTYCZCA ZAMWIENIA
KIT TriniCLOT Protein S
Catalogue No. T1602
Kit Content Item Quantity
TriniCLOT PS Activator Reagent 4 x 1 ml
TriniCLOT PS Depleted Plasma 4 x 1 ml
TriniCLOT PS Dilution Buffer 2 x 2.5 ml
TriniCLOT PS Control Plasma 2 x 0.5 ml
Additional Products Available
Catalogue Number Item Quantity
T4101 TriniCHECK Control 1 10 x 1 ml
T4104 TriniCHECK Abnormal Control 10 x 1 ml
T5102 TriniCAL Reference Plasma 10 x 1 ml
Polybrene is a registered trademark of Abbott Laboratories.
CV (%)
Plasma normale
(Proteina S = 87%)
Plasma anormale
(Proteina S = 42%)
Intra-dosaggio 3,0 2,3
Inter-dosaggio 5,9 5,1
CV (%)
( S = 87%)
( S = 42%)
3,0 2,3
5,9 5,1
TriniCLOT
TM
Protein S
T1602 1 Kit
Plasma TriniCLOT PS Dilution Buffer
50 l 450 l
TriniCLOT PS Dilution Buffer
Osocze referencyjne lub mieszanina
zebranego osocza Biako S (%)
900 l 100 l 100
500 l 500 l 100% produktu standardowego 50
1 000 l - 0*
Osocze TriniCLOT PS Dilution Buffer
50 l 450 l
TriniCLOT
TM
Protein S
T1602 1 Kit
VK (%)
Prawidowe osocze
(Biako S = 87%)
Nieprawidowe osocze
(Biako S = 42%)
Wewntrzseryjny 3,0 2,3
Midzyseryjny 5,9 5,1
Protect from light
Conserver labri de la lumire
Lichtgeschtzt lagern
Conservar protegido de la luz
Conservare al riparo della luce
-
Chroni przed wiatem
Manter ao abrigo da luz
Fragile, handle with care
Fragile, manipuler avec prcautions
Zerbrechlich, mit Sorgfalt behandeln
Frgil, manipular con cuidado
Fragile, maneggiare con cura
,
Ostronie, kruche
Frgil, manipular com cuidado
Caution, consult accompanying documents
Attention, consulter la notice d'instructions
Achtung, Begleitdokumente beachten
Atencin, consultar instrucciones de uso
Attenzione, vedere le istruzioni per luso
,
Uwaga! Przed uyciem zapoznaj si z treci
zaczonej ulotki
Cuidado, consulte a documentao que
acompanha o equipamento
Trinity Biotech Plc
Bray, Co. Wicklow, Ireland
Tel. 353 1 2769800
Fax. 353 1 2769888
www.trinitybiotech.com
USA ENQUIRIES:
Trinity Biotech USA
2823 Girts Road,
Jamestown, NY 14701.
USA
Tel. 1800 325 3424
Fax. 908 898 1539
Consult Instructions for Use
Consulter les instructions dutilisation
Gebrauchsanweisung beachten
Consulte las instrucciones de uso
Consultare le istruzioni per luso
o
Sprawd w instrukcji uycia
Consultar as Instrues de Utilizao
Temperature limitation
Limites de temprature
Temperaturbegrenzung
Lmite de temperatura
Limiti di temperatura
Przechowywa w okrelonej temperaturze
Limites de Temperatura
Use by
Date limite d'utilisation
Verwendbar bis
Fecha de caducidad
Utilizzare entro
Data wanoci
Uso por
Add
Ajouter
Hinzuf
Aadir
Aggiungere
Doda
Adicionar
Catalogue number
Rfrence du catalogue
Bestellnummer
Nmero de catlogo
Numero di catalogo
A
Numer katalogowy
Nmero do catlogo
Manufacturer
Fabricant
Hersteller
Fabricante
Fabbricante
K
Producent
Fabricante
+
For in vitro Diagnostic Use
Usage diagnostique in vitro
In-vitro-Diagnostika
Para diagnstico in vitro
Per uso diagnostico in vitro
in vitro
Do diagnostyki in vitro
Para uso diagnstico in vitro
Sodium Azide
Azide de sodium
Natriumazid
Azide sdica
Sodio azide
Azydek sodu
Azida de sdio
Batch code
Code du lot
Chargenbezeichnung
Cdigo de lote
Codice del lotto
A
Kod partii
Cdigo do Lote.
Contains sufficient for <n> tests
Contenu suffisant pour n tests
Inhalt ausreischende fr <n> Prfungen
Contenido para <n> ensayos
Contenuto sufficiente per "n" test
<n>
Wystarczajcy do wykonania <n> testw
Contedo Suficiente para <n> Testes
T1602-29A
07/2010
Xn
Harmful
Nocif
Gesundheitsschdlich
Nocivo
Nocivo
Szkodliwy
Nocivo
Xi
Irritant
Irritant
Reizend
Irritante
Irritante
Dranicy
Irritante
Toxic
Toxique
Giftig
Txico
Tossico
Toksyczny
Txico
Corrosive
Corrosif
tzend
Corrisivo
Corrosivo
rcy
Corrosivo
GUIDE TO SYMBOLS / GUIDE DES SYMBOLES /
SCHLSSEL ZU DEN SYMBOLEN / GUIA DE
SIMBOLOS / GUIDA AI SIMBOLI /
/ GUIA PARA OS SMBOLOS /
LEGENDA SYMBOLI
(sec)
Tem
p de coagulao (seg.)
TriniCLOT PS Dilution Buffer PNP S (%)
900 l 100 l 100
500 l 500 l 100% 50
1 000 l - 0*
TriniCLOT PS Dilution Buffer
50 l 450 l
TriniCLOT PS Dilution Buffer Plasma de Referncia ou PPN Protena S (%)
900 l 100 l 100
500 l 500 l de padro de 100% 50
1 000 l - 0*
VK (%)
Plasma normal
(Protena S = 87%)
Plasma patolgico
(Protena S = 42%)
Intra-ensaio 3,0 2,3
Inter-ensaio 5,9 5,1
TriniCLOT
TM
Protein S
T1602 1 Kit
Czasy krzepnicia (sek)
Biological Risks
Risques biologiques
Biogefhrdung
Riesgo biolgico
Rischio biologico
Zagroenie Biologiczne
Risco Biolgico