PRODUCCION DE PROTEINA

UNICELULAR





































Guillermo Navas Mirn




INTRODUCCION



El trmino de protena unicelular se debe a la C.L.Wilson, del Instituto de
Tecnologa de Massachussets, ideado por l en 1966 para denominar a las protenas
producidas por microorganismos con aplicaciones en la alimentacin humana y animal.

Numerosos microorganismos han sido utilizados desde tiempos remotos en la
obtencin de productos alimenticios como la cerveza, queso, yogurt, vino., etc., pero en
estos alimentos los nutrientes principales no son las protenas propias de dichos
microorganismos.

Fue a partir de la Segunda Guerra Mundial cuando comenz ha investigarse el
cultivo de determinados microorganismos como fuente de protenas para su uso como
alimentos.

Muchos de los estudios llevados a cabo con diferentes microorganismos en
distintos medios de cultivo fueron sonoros fracasos en cuanto a la productividad, coste,
rendimiento en la produccin de protenas unicelulares. y su posible aplicacin a tal fin.

Determinadas especies de microorganismos como es el caso de Spirulina
maxima, eran consumidos con frecuencia, como en lagos de aguas alcalinas del Chad en
frica, y tambin los Aztecas en Mjico antes del descubrimiento del nuevo continente.

En Alemania durante la Primera Guerra mundial (1.914-1.918), la levadura
Saccharomyces cerevisae fue cultivada en melazas aireadas en presencia de sales de
amonio para su posterior uso como alimento, y ms tarde en la Segunda Guerra mundial
otra especie Candida utilis fue utilizada para igual fin.

Las especies de microorganismos objeto de estudio para la produccin de
protena unicelular pertenecen a algas, bacterias, levadura, mohos y hongos superiores.

El inconveniente que surgi, es que la mayora de estos sistemas requieren
grandes inversiones de capital e instalaciones relativamente complicadas e inadecuadas
para pases pobres que es precisamente donde se necesita este tipo de alimento. Sin
embargo, la Spirulina , sin grandes complicaciones tcnicas y sin costosas inversiones
puede ser la solucin para ellos.





A) PRODUCCION EN ALGAS

Las algas han sido cultivadas bajo condiciones de iluminacin solar artificial
en el caso de algas auttrofas y en la oscuridad en especies de metabolismo hetertrofo,
aunque la mayora de las producciones en masa han sido bajo condiciones
fotosintticas.

Investigaciones japonesas han dirigido su estudio a la identificacin de especies
con metabolismo hetertrofo en completa oscuridad, utilizando el carbono orgnico
como fuente energtica.

CULTIVO

Las especies seleccionadas para la produccin de protenas unicelulares son:
- Chlorella sorokiniana, - Scenedesmus acutus, - Scenedesmus quadricauda,
- Scenedesmus obliquus, -Spirulina maxima, y - Spirulina platensis.

Se cultivaran en cultivos puros y algunos en cultivos mixtos. En cultivos mixtos
abiertos en estanques, se observ la tendencia al dominio de una de las especies,
variando la especie predominante en funcin del medio de cultivo utilizado. El factor
limitante en cultivos abiertos por algas es la iluminacin, que depende de la duracin
del da, de la climatologa propia del lugar, y de la intensidad lumnica, fijndose como
lmite geogrficos para el cultivo en estanques de algas, las latitudes comprendidas entre
los 35 Norte y Sur.

As se estim que los requerimientos energticos para producir 1 Kg. de algas
sera de unos 35 Kwh. en el uso de iluminacin artificial, teniendo un rendimiento del
20% en cuanto a la conversin energtica.

En el caso de Chlorella sorokiniana, Shuler y Affeus (1.970) consiguieron
rendimientos mximos, en cuanto a la conversin de energa lumnica en energa
qumica, en torno al 12% con iluminacin artificial de 15,700 lm (36.000 fc); Mattherm
en (1969) obtuvo con una iluminacin artificial de 300.000 lm unas cantidades de algas
de 25 g/litro(peso en seco). Estos resultados terminaron convenciendo que el cultivo de
algas con luz artificial no era econmicamente rentable, por lo que siguientes estudios
se realizaron en estanques abiertos a expensas de la luz solar.

Las algas utilizan como fuente de carbono CO2 en el caso de organismos
fotosintticos; pero el problema que se plantea es que el aire presenta valores bajos de
CO2 debindose enriquecer el medio con CO2 por lo que se utiliz el CO2 desprendido
de la combustin de gases, en el cultivo de Spirulina maxima.

Aunque, se observ que la Spiriluna maxima creca en aguas alcalinas donde
abundaba el Na2CO3 y por tanto, no era necesario el enriquecimiento en CO2. Tambin
se vio que un exceso en CO2 y de amoniaco NH3 liberado en aguas residuales por
distintas bacterias limitaba el crecimiento de dichas algas.






En el caso de cultivos de algas con metabolismo hetertrofo, la fuente de
carbono debe ser de origen orgnico y como fuente representativa se utiliz Chlorella
regularis en cultivos en ausencia de luz.

Para la sntesis proteica de estos organismos es necesaria tambin una fuente de
nitrgeno por lo que el medio de cultivo deba presentar sales de amonio o nitratos junto
con fsforo y otros nutrientes minerales.

El crecimiento de algas en estanques se caracteriza porque las condiciones
aspticas no son mantenidas durante el tiempo que se desarrolla el cultivo; existiendo
una potencial contaminacin del cultivo por otras especies de algas, bacterias patgenas
y virus, vindose aumentado en el caso de determinadas especies que excretan
sustancias al medio que son nutrientes para estos posibles invasores.

En cultivos a gran escala se hace necesaria una agitacin mantenida con el fin de
suspender en el medio las clulas, evitando una sedimentacin y consiguiendo un
desarrollo mximo del cultivo en una escala de tiempo menor. Los rendimientos
obtenidos en estanques poco profundos con Spirulina maxima y Scenedesmus
quadricanda estn entorno al 12-15 g/m2/da (peso en seco).

Uno de los principales problemas que presenta cualquier cultivo de
microorganismos es la recoleccin final del producto, sobre todo si son necesarias
grandes cantidades de medio de cultivo ("agua y sustrato") y si adems su densidad de
poblacin est entorno a 1 2 gramos de peso en seco por litro como ocurre con la
Chlorella, Scenedesmus , ya que su crecimiento no es muy rpido en comparacin con
bacterias, por lo que se hace necesario concentrarlos mediante evaporacin o secado,
tambin se han probado floculantes, sulfato de aluminio, hidrxido de calcio. pero estos
floculantes no pueden ser retirados posteriormente y el uso del producto como alimento
no sera factible.

Pero las algas podran autoflocular en la superficie si subimos el pH por encima
de 9,5. El uso de resinas de intercambio inico son un buen mtodo para separar las
algas si se trabaja en un rango de pH de 2,8-3,5, aunque el uso de cido clorhdrico o
sulfrico para este fin hace que el proceso no sea econmicamente deseable; al igual
que el coste que supone el uso de mtodos combinados o no de concentracin por
centrifugacin y floculacin.

Para el caso de Spirulina maxima esto no se hace necesario puesto que flota de
forma natural en la superficie formando grupos cuando alcanza su mxima poblacin y
por tanto, puede ser recolectada con una mayor facilidad y menor coste.











B) BACTERIAS (NO FILAMENTOSAS Y ACTINOMICETOS)

Las bacterias tienen inters en la produccin de protena unicelular debido a que
presenta un tiempo de desarrollo y crecimiento reducido entorno a los 20-30 minutos de
generacin en comparacin con las 2 3 horas en levaduras y 16 horas o ms en algas,
mohos y hongos superiores.

Las bacterias utiliza diversas fuentes de carbono dependiendo de la especie que
se trate, tales como: hidratos de carbono, hidrocarburos, procedentes de desechos de
industrias papeleras, licoreras o petroqumicas.


CULTIVO

Son varios los factores que han determinado la seleccin de determinadas
bacterias para su aplicacin en la produccin de protena unicelular como son el tipo de
sustrato, pH en el que se desarrollan, temperaturas, estabilidad gentica, requerimiento
de aireacin, que sean susceptibles a bacterifagos as como su nula patogeneidad frente
al hombre, animales o plantas por infeccin directa o por produccin de determinadas
toxinas, como ocurrira con enterobacterias que presentan enterotoxinas que las hacen
no deseables para su uso en alimentacin, junto con la relativa facilidad para hibridarse
con el consecuente riesgo de que aparezca un hbrido patgeno.

En el crecimiento bacteriano la concentracin de sustrato y de nitrgeno si estn
entorno al 1-5% son valores bajos para el cultivo continuo, la relacin de carbono-
nitrgeno en el medio de cultivo debe mantenerse entorno a unos valores de 10:1 o
menor si queremos obtener un alto contenido en protenas y prevenir la acumulacin de
lpidos u otras sustancias como el poli-beta-hidroxibutirato; como fuentes de nitrgeno
se utilizan anhidro amnico o sales de amonio, tanto en bacterias como en
actinomicetes, adems el fsforo tambin es necesario pero no debe utilizarse en modo
de cido fosfrico industrial ya que est acompaado de arsnicos y fluoruros.

El agua generalmente contiene las cantidades necesarias de minerales pero en el
caso de agua de lluvia se hace necesario aadir cierta cantidad de sales minerales que
contengan hierro, magnesio y manganeso en forma de sulfatos o hidrxidos mejor que
como cloruros para evitar los posibles problemas de corrosin en los equipos de
fermentacin de acero inoxidable.

Durante el crecimiento de pH debe estar entre unos valores de 5-7 que es el ideal
para el desarrollo de la mayora de las bacterias as como la temperatura que ha de estar
entre unos valores estables, sobre todo en bacterias productoras de protenas unicelular
que utilizan como fuente de carbono hidrocarburos o alcoholes, como por ejemplo en el
caso del metano donde el calor generado es de unas 10 kcal por gramo de clula con un
rendimiento de clula de 1.0 gramo de clula por gramo de metano (Hammer 1.975),
por lo tanto, se hace necesario el uso de refrigeradores para mantener estable la
temperatura entorno a los 35-45 C segn la especie.

Es tambin importante la cantidad de oxigeno disponible en la produccin de
protena unicelular en bacterias aerbicas que usan como fuente de carbono
hidrocarburos, metanol o etanol. Mateles (1.971) present una relacin emprica para
determinar el oxigeno requerido para la produccin masa celular basado en los
componentes elementales tanto de la clula como de la fuente de carbono; as como el
peso molecular de la fuente de carbono y del rendimiento celular con respecto a la
cantidad de "carbono fuente" consumida. Estos datos tambin ayudan a determinar la
cantidad de calor generado que es de 0,11 Kcal/m.moles de O2 consumido.

Un cultivo en masa hace necesario unas condiciones de esterilidad as como
mantener una escrupulosa asepsia para evitar el crecimiento de otras especies no
deseables que contaminaran el cultivo, ya que si en un principio las condiciones
iniciales del medio hacen difcil que sean contaminado, conforme se desarrolla el
cultivo pueden aparecer productos de excrecin tales como aminocidos que son
suficiente alimento para determinados patgenos entricos.

En los aos 60 hubo un considerable inters en el uso de hidrocarburos lquidos
y gaseosos as como productos derivados de ellos como metanol y etanol.

Se investig a Methylococcus capsulatus para producir protena unicelular a
partir del metano, al igual que cultivos mixtos de Pseudomonas, Hyphomicrobium,
Acinetobacter y Flavobacterium,; de estos estudios se desprendi que una alta
productividad y rendimiento del proceso depende de la transferencia de oxigeno y
metano en forma gaseosa a la clula, as como la necesidad de sistemas de refrigeracin
para disipar el calor desprendido en el proceso y evitar la formacin de sustancias
inhibitorias durante el crecimiento.

No menos importante es el riesgo de posibles explosiones; por lo que requiere
trabajar por debajo de 12,1% de metano por volumen de oxigeno; teniendo en cuenta
todo lo anterior la produccin de protena a partir de metano y de otros hidrocarburos
como alcanos lquidos es ms costosa que con otras fuentes de carbono como metanol.

El metanol tiene la ventaja de ser soluble en agua, tener menor riesgo de
explosin que los hidrocarburos y presentar menos dificultades en la separacin o
recoleccin celular.

La bacteria de inters en la produccin de protena unicelular es Methylophilus
methylotrophus (Pseudomonas). En el que se utiliz un fermentador con micro
aireacin que tiene la ventaja de proporcionar una alta transferencia de oxigeno, disipar
el calor generado y proporcionar una homogeneizacin del lquido, as como una alta
productividad y escasa contaminacin a diferencia de los fermentadores convencionales.

Actinomycetes como Streptomyces han sido tambin ensayados en metanol pero
slo a escala de laboratorio. Debido al aumento de precio que han sufrido ultimamente
los derivados del petrleo como tambin el metanol por lo que se han utilizado como
sustratos azucares procedentes de industrias madereras, azucareras y otros residuos ricos
en estos componentes, como por ejemplo:
Brevibacterium y Cytophaga en desechos de maderas.
Pseudonomas dentrificans en vinazas de licoreras
Bacillus y Lactobacillus en productos ros en almidn.

Estudios sobre Rhodospeudomonas gelatinosa, una bacteria fotosinttica, en
cultivo continuo en un medio con salvado de trigo como sustrato produjo cantidades
significativas de protenas y vitaminas, pero no fueron del todo satisfactorias, por lo que
no se desarroll el cultivo.

Por otro lado, determinados Actinomycetes tienen la capacidad de producir
protena a partir de celulosa, sin la necesidad de usar refrigeradores, lo que motiv que
se buscaran especies potencialmente productoras de protena unicelular como,
Thermomonospora fusca que degradaba entre el 60-65% del papel finamente molido en
un tiempo que rondaba las 100 horas produciendo un 30% de protena.

Son varios los factores que afectan al desarrollo rendimiento y productividad de
bacterias para su uso en la produccin de protena unicelular ;estos factores son la
cantidad de oxgeno y sustrato transferido a la clula y el calor desprendido en el
proceso cuando se utilizan hidrocarburos o hidratos de carbono.

El rendimiento propio de bacterias y Actinomycetes con hidrocarburos est entre
0,80-1,20 g. de materia seca por gramo de sustrato utilizado. As para Methylococcus
capsulatus es de 1,00-1,03 g. de peso seco por gramo de metano. Esta variacin es
debida a la dificultad que existe al determinar el carbono disponible cuando se utilizan
sustratos gaseosos en cultivo continuo.

Para cultivos de bacterias en metanol los valores oscilan entre 0,48-0,50 g. que
en el caso de Pseudomonas es de 0,38-0,54 g. extracto de clula por gramo de sustrato.
Estos datos fueron obtenidos por Van Dijken y Harder en el ao 1.975.

En el caso de que el sustrato sea hidrato de carbono el rendimiento es de 0,35-
0,50 g. de estrato seco por gramo de sustrato; por ejemplo, Pseudomonos fluoreceus
(aerbica) con crecimiento en glucosa proporciona 0,51 g. de estrato seco por gramo de
sustrato.

Durante el desarrollo de la tecnologa especial durante los aos 60 se buscaron
microorganismos que reciclasen los excretos de tripulantes y el CO2 producido al
respirar por lo que condujo a la utilizacin de especies de Alcaligenes para que lo
convirtieran en alimentos en unas condiciones que requeran hidrgeno, oxgeno y CO2
en unas proporciones de 6:2:1 respectivamente obteniendo una produccin de 2 ,0 g. de
extracto seco por litro y hora en Alcaligenes eutrophus.

En cuanto a la recoleccin u obtencin celular se refiere surgen varias
contrariedades como es la cantidad de clulas por litro es de un valor de 10-20g. por lo
que, son necesarias importantes cantidades de agua para su cultivo, que luego ha de ser
retirada; adems su reducido tamao(1-2 micrmetros)y el presentar una densidad muy
similar a la del agua(1,003 g./cm3), hacen difcil y costoso su recoleccin cuando se
recurre a mtodos de centrifugacin o a tcnicas de filtrado. Si bien, el uso de
floculantes no es conveniente cuando el producto va ha ser destinado a alimentacin.

Acinetobacter cerificans puede ser concentrado si producimos espuma en la
superficie, alcanzando en dicha espuma concentraciones sustancialmente mayores. En
los aos 60 se desarroll un sistema de concentracin en el cual se aplicaban
conjuntamente ciclos de decantacin y centrifugacin obteniendo valores de 25 g. de
extracto seco por litro. En Methylomonas clara cultivada en metanol se separ del
medio mediante coagulacin electroqumica y centrifugacin obtenindose una espuma
seca.


C) LEVADURAS

Son numerosos los medios de cultivo que se han utilizado en levadura para su
posterior aplicacin alimenticia Las especies de principal inters son: Saccharomyces
cerevisiae y Saccharomyces carlsbergensis.

S.cerevisiae se utiliz como comida durante la Primera Guerra Mundial en
Alemania; esta levadura no utiliza ventosas y requiere suplementos con aminocidos y
vitaminas B tiamina, niacina, piridoxina, cido pantotnico e inoxitol presentes en
melazas y restos de caa de azcar.

En la Segunda Guerra Mundial Candida utilis fue producida como alimento en
Alemania cultivndola en restos de madera que eran ricos en pentosas, adems, estas no
requeran aminocidos o vitaminas para su desarrollo y se utilizaban sales de amonio
como fuente de nitrgeno.

Fue despus cuando se produjo el verdadero desarrollo de su cultivo. Los
criterios de seleccin en levadura para la produccin de protena unicelular es semejante
al de bacterias. Teniendo en cuenta que la mayora de las levaduras no son patgenas
para el hombre, animales y plantas ,las hacen potencialmente interesantes para tal fin.


CULTIVO

Para conseguir un alto contenido en protena hay que ajustar las proporciones
C:N en unos valores de 7:1 10:1 y las cantidades de sustratos(hidratos de carbono) han
de estar entorno al 1 5%, y en el caso, de hidrocarburo o alcoholes las concentraciones
son menores. En el genero Rhodotorula, elevadas proporciones de carbono-nitrgeno
produce un acumulo de cantidades importantes de lpidos.

Como fuente de nitrgeno se utiliza anhidro amnico y sales amnicas . El
anhidro amnico puede ser usado en combinacin con cido fosfrico(no industrial)
para controlar el pH que ha de mantenerse entre 3,5-4,5 para evitar la contaminacin por
bacterias.

Al igual que en bacterias se libera calor al crecer en medios con hidrato de
carbono, hidrocarburos o alcoholes, como por ejemplo, Candida utilis desarrollada en
vinaza residual de la industria licorera (rica en hidrato de carbono), genera 3.740-8.000
Kcal. por Kg. de sustrato. Para otras especies de Candida los valores obtenidos fueron
de 4.400-8.000 Kcal.-Kg. con unos rendimientos de 1,2-0.9 g. de clulas(peso en
seco)por gramo de sustrato utilizado.



Para el caso del metanol el calor producido es de 37 Kcal. por litro y hora con un
rendimiento de 5 g. por litro y hora. La cantidad de oxgeno consumido es de 0,12 Kcal.
por m.mol de oxgeno. La temperatura a la cual se desarrolla la levadura comprende
unos valores de 30-34C aunque hay especies capaces de desarrollarse activamente a
temperatura de hasta 45C. por lo que se hace necesario de fermentadores refrigerados
que mantenga los niveles de temperatura con unos valores de desarrollo mximo.

Para cultivos en hidratos de carbono, en condiciones aerbicas, requieren un
suministro constante de oxgeno con unos valores de 1 g. o menos de oxgeno por
gramo de clulas; y en el caso de cultivos en alcanos los requerimientos son mayores en
torno a los 2 g. de oxgeno por gramo de clulas, as, Laine y du Chaffaut determinaron
que la cantidad de oxgeno requerida en cultivo de hidrocarburo era 10-15 Kg. por m3 y
hora, lo que hace necesario el uso de fermentadores con micro aireacin para conseguir
una ptima aireacin y agitacin del medio. Para el control de la contaminacin del
cultivo en condiciones no estriles se necesita operar en un pH 6.0, aireacin con aire
estril y mantener en todo momento una alta poblacin de levaduras en el fermentador.

Candida utilis se utiliz para tratar residuos de industrias papeleras que de otro
modo seran difcilmente reciclables; la temperatura en estos cultivos se mantiene entre
36-37C utilizando para refrigerar intercambiadores de calor por el que se haca pasar el
medio de cultivo. Tambin, se cultiv en otros sustratos como por ejemplo etanol pero,
no eran econmicamente viables.

Con Candida lipolytica se trataron aguas ricas en mezcla de cidos orgnicos,
utilizados en la elaboracin del nylon y que presenta un pH de 6,5, se consiguieron
producciones de 4-4,5 Kg. por m3 y hora, con un consumo de cidos orgnicos del 80%.
Se prob tambin como medio de cultivo hidrocarburos como el gasoil el objetivo era el
purificarlo y obtener protena unicelular. Cerca del 10% del gasoil es utilizado por la
levadura el resto es nuevamente llevado a la refinera.

British Petroleum construy plantas para la produccin de Candida a partir de
hidrocarburos, los cuales contenan en un 25% cadenas de carbono de entre 15-30
tomos. El cultivo se realiz en fermentadores con micro aireacin en condiciones no
estriles aunque el proyecto no fue econmicamente rentable.

En cuanto, a los factores que afectan a la productividad y rendimiento de estos
cultivos son similares al de bacterias. El rendimiento obtenido para hidratos de carbono
es de 0.39-0,55 g. de clula por gramo de sustrato utilizado. Candida utilis cultivada en
glucosa presenta un rendimiento de 0,51 g. de clula por gramo de sustrato; si el medio
es etanol los valores suben hasta 0,75 g. de clula por gramo de sustrato.

En el caso de Hansenula polymorpha en metanol su rendimiento es menor de
0,36 g. de clula por gramo de sustrato obtenido por Cooney y Levine en 1.975. Para
otras especies de Candida en sustrato de alcanos la produccin generalmente se
encuentra entorno a 0,88-1,1 g. de clula por gramo de sustrato obtenidos por Guenther
en 1.965. A raiz de estos estudios se desarrollaron ecuaciones empricas para determinar
la estequiometra del proceso tanto en hidratos de carbono como en hidrocarburos:


8nCH2O+0,8nO2+0,19nNH4+ elementos esenciales-----------n(CH1,7O0,5N0,19Ash)+
0,8nCO2+1,3H2O+80000n Kcal.
Desarrollada por Bennett en 1.969 para hidratos de carbono.

2nCH2+2nO2+0,19nNH4+ elementos esenciales---------------n(CH1,7O0,5N0,19Ash)+
nCO2+1,5H2O+200000n.Kcal. para hidrocarburos.

Estas frmulas son tambin aplicables a otros microorganismos utilizados en la
produccin de protena unicelular.

RECOLECCION

Las levaduras presentan un tamao 5-8 micro metro y posee una densidad de
1,04-1,09 g. /cm3 por lo que pueden ser recolectadas mediante mtodos de
centrifugacin obtenindose as una pasta que posteriormente se lava y se somete de
nuevo a un ciclo de centrifugacin.

En el cultivo de especies de Candida en alcanos se hace necesario el uso de
surfactantes para retirar trazas de hidrocarburos y luego centrifugar. Con gasoil es
mucho mas difcil la separacin y limpieza; en primer lugar se hace una decantacin con
ayuda de solventes y posteriormente una limpieza con surfactantes en combinacin de
nuevo con solventes. Otro mtodo por el que se consigue reducir bastante el contenido
de hidrocarburo es manteniendo el cultivo durante un periodo de tiempo mas largo en el
medio sin adicionar sustrato en dicho periodo y luego se recurre a un lavado y
centrifugacin. Se utiliz tambin floculantes que abarataban el proceso siempre y
cuando el uso de estos fuera compatible con el uso final del producto.



D) MOHOS Y HONGOS SUPERIORES

Estos presentan un tiempo de desarrollo mucho mayor al de bacterias y
levaduras entorno a las 16 horas o ms; lo que cuestiona su posible rentabilidad en la
produccin de protena unicelular.

CULTIVO

En Japn se cultiv Continellus berkelyanus en el que se dejaba incubar durante
dos aos sobre el tronco de determinados rboles como fagceas o betulceas,
inoculados con una suspensin de sus esporas . En China se cultiva Volvarea volvacea
inoculando paja arroz humedecida.

Durante la Segunda Guerra Mundial se investig el cultivo de numerosas
especies destinadas a la alimentacin, la seleccin de especies se realiz teniendo en
cuenta factores de temperatura de desarrollo aireacin requerida, estabilidad gentica as
como su ndice de patogeneidad y toxicidad. Aspergillus fumigatus y Fusarium
graminearium son potencialmente peligrosos para el hombre por lo que el uso de estos
organismos hace necesario un previo anlisis toxicolgico.

Son muchas las especies de mohos y hongos superiores estudiadas para la
produccin de protenas unicelular sobre sustrato con hidratos de carbono como
desechos de industrias madereras, restos agrcolas u otros residuos que los contengan.
Las concentraciones de hidratos de carbono en el medio de cultivo varan del 1 al 10% y
la relacin C:N puede llegar a valores de 20:1 dando buenos resultados pero, la mayora
de los casos se ajustan a proporciones de 5:1 15:1.

Como fuente de nitrgeno tanto el anhidro amnico como sales de amonio son
utilizados en cultivos continuos que necesitan tambin de un control del pH del medio.
En la aplicacin de hongos sobre determinados residuos, tanto el cultivo continuo como
el semicontinuo son apropiados utilizando en este ltimo fosfato amnico, sulfato
amnico o nitrato amnico como fuente de nitrgeno necesaria en este tipo de cultivo.

El cido fosfrico es conveniente como fuente de fsforo y en el caso de otros
nutrientes minerales como potasio, azufre, magnesio, hierro, calcio, manganeso, zinc,
cobre y cobalto son necesarios para la gran mayora de hongos; la concentracin de
estos compuestos inorgnicos en el medio de cultivo vara considerablemente en
funcin del sustrato utilizado. En el cultivo de determinadas especies puede limitarse su
uso a fin de evitar sabores amargos en el producto final.


El micelio de ciertos hongos no se desarrolla en medios artificiales a no ser que
se complementen con vitaminas, como ocurre con Caprinus comatus que necesita
tiamina para su crecimiento; por el contrario tanto Agaricus como Morchella crecen en
medios artificiales y su crecimiento se ve favorecido con la adicin de otros nutrientes
como vitamina.

Los valores de pH a los cuales se desarrollan los hongos vara de 3-7 aunque es
recomendable trabajar a pH 5 o menor para as disminuir el riesgo de posibles
contaminaciones bacterianas sobre todo cuando se trabajan en condiciones no aspticas;
si bien el crecimiento de Morchella se lleva a cabo con un pH de 6-6,5 para maximizar
la produccin, crecimiento y sabor. Por lo tanto este ltimo cultivo tiene que
desarrollarse bajo condiciones aspticas.

En cuanto a la temperatura a la cual se desarrollan mejor los cultivos vara de 25
a 36C aunque algunos como Aspergillus niger se desarrolla bien en temperaturas
superiores a los 36C

Al igual que en el cultivo de otros microorganismos aerobios se hace necesario
sistemas de refrigeracin para el control del calor producido durante su desarrollo, as
como el suministro de oxgeno requerido por el cultivo.

El crecimiento en hongos se caracteriza por la formacin de finos filamentos o
micelios en unos casos y en otros por la formacin de ndulos en el sustrato segn se
trate de un hongo superior o un moho. Por ejemplo en Morchella proporcionndola una
aireacin de 0,12 m moles de oxgeno por litro y minuto, desarrolla filamentos y su
rendimiento disminuy cuando el suministro se elevaba a valores de 0,15 m M de
oxgeno por minuto aunque esto no es aplicable para otros hongos.

Para el cultivo de micelio es preferible el uso de fermentadores con sistemas de
aireacin que proporcionen una correcta agitacin. Los medios de cultivos son a base de
hidratos de carbono, azcares y tambin se estudi sus aplicaciones en metano, etano,
metanol, y etanol aunque en estos ltimos solo tuvieron inters a escala de laboratorio.

Si bien el objetivo principal de estos cultivos era el de obtener hongos con valor
gastronmico mas que como fuente de protenas . Es por esto que se desarrollaron
cultivos de micelios de Morchella a escala comercial y las especies de inters fueron:
M.crassipes, M.esculenta y M.hortensis las cuales se cultivan en estanques con
capacidad de 7.500 litros y contenan unos 5.600 litros de medio de cultivo
obtenindose al menos 2 Tm. de micelio con una humedad del 90% y un rendimiento
final de 24-30 g. por litro de sustrato.


Como fuentes de hidratos de carbono se utilizaron residuos ricos en ellos como
restos de leguminosas, cereales, tubrculos y madera.

Para restos de guisantes y trigo en estanques aireados se inocularon con
Trichoderma viride y en el reciclaje de restos de caf se utiliz Trichoderma harzianum.

Para residuos de madera se estudiaron distintos mtodos para aumentar la
biodisponibilidad de la celulosa por hongos mediante hidrlisis con radiacin y
tratamientos alcalinos, aunque los mejores resultados se obtuvieron calentando la
celulosa con soluciones diluidas de hidrato sdico obteniendo hidrato de celulosa e
irradindolo con luz ultravioleta de 365 n.m. durante 1-5 das.

En cultivos puros con T.viride o en cultivos mixtos con Candida utilis y T.viride
sobre paja de cebada se obtuvo un producto que contena del 21-26% de protena sin
bien, fue en los cultivos mixtos donde se obtuvieron resultados similares en un menor
tiempo. El cultivo continuo de T.viride en restos de celulosa finamente molido
consumi entorno al 50-75% de la misma aunque si bien los cultivos de C.Chaetomiun
cellulyticum tuvo un crecimiento entre un 50-100% mayor y presentaba un 80% en
contenido proteico cuando el medio contena alrededor del 1% de celulosa purificada y
parcialmente deslignificada.

La degradacin de celulosa por hongos y su transformacin en protena
unicelular no ha sido satisfactoria a nivel industrial puesto que el tratamiento de
molienda al que ha de someterse la celulosa y su hidrlisis hacen que se encarezca en
exceso su cultivo.

En cuanto al rendimiento, este vara dependiendo de la especie y del sustrato
utilizado generalmente se obtiene bajas proporciones de clulas con relacin a la
cantidad de sustrato utilizado. As los 0,45 g. de clula por gramo de sustrato obtenido
en el cultivo Aspergillus nger en el extracto de judas se puede aplicar a todos los
mohos y un rendimiento de 0,32-0,50 g. de micelio por gramo de sustrato es aplicable al
cultivo de micelio como Morchella.

La productividad de estos cultivos se ve afectada en mayor medida por la
transferencia de oxgeno al hongo siendo el factor limitante en el rendimiento a escala
industrial.

RECOLECCIN

Para mohos y hongos superiores su recoleccin se ve facilitada porque permiten
el uso de sistemas de filtracin y centrifugacin poco sofisticados. En micelio de
Morchella centrifugado a 1.180 rpm. durante 10 minutos produca una capa de unos 10
cm. de espesor con una humedad del 74% aunque el micelio era fraccionado en trozos
esto no supona un problema si el micelio iba a ser desecado hasta polvo para su uso
como alimento.

En Aspergillus niger en extracto de judas crece formando filamentos en ndulos
para separarlos se recurre a filtros rotatorios. El secado debe realizarse a una
temperatura que no altere el sabor y el color del producto final.



E) VALOR NUTRICIONAL DEL PRODUCTO


Adems de protenas se obtienen otros componentes como aminocidos,
vitaminas y minerales.

En la tabla I aparece el resultado de los anlisis de los microorganismos que
tienen mayor inters en la produccin de protena unicelular.



TABLA I (g/100g de producto seco)



ORGANISMO SUSTRATO NITROGENO PROTEINA ENERGIA kcal/g
ALGAS
Chlorella sorokiniana CO2 9.6 60 5.2
Chlorella regularis CO2 9.3 58
Spirulina maxima CO2 10 62

BACTERIAS
Methalomonas clara METANOL 12--13 80--85
Methylophilus methylotrophus METANOL 13 83 3


LEVADURAS
Candida lipolytica ALCANOS 10 65
GASOIL 11 69
Candida utilis ETANOL 8.3 52
VINAZA 9 55
Saccharomyces cerevisiae MELAZA 8.4 53

MOHOS Y HONGOS
Agaricus campestris GLUCOSA 36
Aspergillus niger MELAZA 7.7 50
Morchella esculenta GLUCOSA 5 31
Morchella hortensis GLUCOSA 5.4 34
Tricholerma viride CELULOSA 10.2 64


Los valores de protena se obtienen determinando la cantidad de nitrgeno
presente y aplicndole un factor de conversin de 6,25, porque adems de protenas son
otros los componentes como aminocidos, cidos nucleicos y vitaminas lo que
contienen tambin nitrgeno.

En la tabla II se recogen los aminocidos presentes en las protenas obtenidas y
se comparan con los valores de referencia de la FAO.


TABLA II(g.aminocido/16g.N)


ORGANISMO SUSTRATO Ala Arg Asp Cys Glu Gly His Ile Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Try Tyr Val
ALGAS
Chlorella sorikiniana CO2 5.9 5.6 5.9 9.3 4.8 1.4 3.4 4 7.8 1.8 2.7 4 2.2 3.2 1.4 2.7 5.1
Chlorella regularis CO2 7.3 5.8 8.8 0.7 11.8 5.4 1.8 4.2 8.1 7.7 1.3 5.1 4.3 3 3.6 1.5 2.6 5.9
Spirulina maxima CO2 6.5 6.6 8.6 0.4 13.6 4.6 1.7 5.8 7.8 4.8 1.5 4.6 3.8 4.3 4.6 1.3 3.9 6.3

BACTERIAS
Methylophilus
methylotrophus metanol 6.8 4.5 8.5 0.6 9.6 4.9 1.8 4.3 6.8 5.9 2.4 3.4 3 3.4 4.6 0.9 3.1 5.2

LEVADURAS
Candida lipolytica alcanos 7.4 4.8 10 1.1 11.3 4.8 2 4.5 7 7 1.8 4.4 4.4 4.8 4.9 1.4 3.5 5.4
gasoil 5.8 5 10 0.9 12.1 4.5 2.1 5.3 7.8 7.8 1.6 4.8 3.7 5.1 5.4 1.3 4 5.8
Candida utilis vinaza 5.8 5.4 9.2 15.6 3.6 1.2 3.8 7.6 4.8 1.1 8.6 6 5 5.4 2.4 6.2 3.8
etanol 5.5 5.4 8.8 0.4 14.6 4.5 2.1 4.5 7.1 6.6 1.4 4.1 3.4 4.7 5.5 1.2 3.3 5.7
Saccharomyces
cerevisiae melaza 5 1.6 4 5.5 7.9 8.2 2.5 4.5 4.8 1.2 5 5.5

HONGOS
Aspergillus niger ext.judia 1.1 4.2 5.7 5.9 2.6 3.8 5 2.1 3.2 5.2
Morchella esculenta glucosa 4.8 8 5 0.3 14.8 2.9 2.1 2.7 5.1 3.8 0.9 2.5 4.2 3.1 3 0.9 1.7 3.4
Morchella hortensis glucosa 4.5 4 4.6 0.4 15.4 3 1.9 2.4 5 3 0.7 2.3 4.5 2.8 2.7 1 1.9 2.9
Trichoderma viride celulosa 4.8 4 7.8 1.5 8 4.5 1.9 3.5 5.8 4.4 1.4 8.7 3.8 4.2 4.9 3.3 4.4
REFERENCIA F.A.O 4.2 4.8 4.2 2.2 2.8 1.4 4.2


En estos datos podemos ver que solo unos pocos microorganismos
particularmente bacterias presentan unos valores acordes con los sugeridos por la FAO,
sobre todo en su contenido en metionina. Las levaduras presentan unos valores bajos en
metionina y altos en lisina y arginina. En algas tienen tambin poca cantidad de
metionina y glicina.


Estos valores son de ayuda a la hora de determinar si el producto obtenido tiene
una mejor aplicacin en alimentacin humana o animal. As si el objetivo es la
alimentacin humana han de tenerse en cuenta la digestibilidad de las protenas, su valor
biolgico, y su utilidad real. Si su uso est destinado a la alimentacin animal adems
de la digestibilidad hay que tener en cuenta los valores de conversin de protena
ingerida por peso ganado; esto se realiza con pollos de engorde.

Estudios realizados con Methylophilus methylotrophus y Pseudomonas
cultivados en metanol y con Aspergillus niger en extracto de judas, muestran que no
hay significativas diferencias cuando la cantidad de protena unicelular en la dieta de
pollos de engorde es del 10%; y los resultados obtenidos con Candida lipolitica y
Candida tropicalis fueron similares.

En cambio, en cerdos alimentados con levadura cultivadas en alcanos hay una
prdida de peso cuando la dieta es enriquecida con valores superiores al 10%. En
terneros el lmite est entorno al 7,5% de protena unicelular en la dieta. En dietas a
base de hongos superiores y mohos se hace necesario una suplementacin con
metionina para obtener resultados satisfactorios.

Adems de su valor nutricional hay que tener en cuenta si el producto es de total
garanta para el consumo tanto humano como animal. Se sabe que los cidos nucleicos
en determinadas cantidades producen clculos renales y gota. Adems el consumo de
protena unicelular puede producir molestias gastrointestinales y reacciones cutneas, o
ir acompaada de sustancias txicas o cancerigenas procedentes del medio de cultivo,
microorganismo o derivadas de los procesos de recoleccin y secado.

El contenido en cidos nucleicos del producto vara segn el microorganismo
que tratemos as en algas es del 4-6% de su peso en seco, en bacterias es superior al
16%, en levaduras entre 6-10% y en hongos entorno 2.5-6%. La cantidad mxima que
puede ser ingerida es de 3 g./da. En alimentacin humana se observ que el consumo
tanto de algas, bacterias como de levaduras cultivadas en etanol producan nuseas y
vmitos. En mohos, particularmente Fusarium graminearum poda producir sustancias
txicas para el hombre y los animales.

Para el uso en alimentacin humana hay que descartar a los hidrocarburos como
sustrato por el riesgo que hay de que el producto final presente trazas de los mismos,
aunque concretamente en alcanos los bajos niveles encontrados hacen que no presenten
un riesgo real.

En cuanto a costes econmicos son muy pocos los microorganismos rentables a
escala industrial para la produccin de protena unicelular. Actualmente el cultivo ms
desarrollado es el de Spirulina mxima que paso a relatar ahora.

F) SPIRULINA MXIMA

En el Instituto Mayor Campesino en Buga con una temperatura de 21C y una
altura de 1000 msnm, se llevaron a cabo ensayos para evaluar medios de cultivo
apropiados para la cianobacteria Spirulina maxima usando efluente de biodigestores y
vinaza, desecho proveniente de la fermentacin alcohlica de las mieles despus de la
adicin de cido sulfrico, suplementando con bicarbonato de sodio para cumplir los
requerimientos en carbono y estabilizar el pH. En primera instancia se reprodujo la
semilla en medio qumico con un tiempo de doblaje de biomasa de 20 a 30 das. Luego
se realizaron ensayos usando proporciones (volmenes) de efluente: agua de 0.25:0.75,
0.5:0.5, 0.75:0.25 y 1.0:0.0. A estas mezclas se agreg un inculo de spirulina en
proporciones de 200 ml de inculo por cada litro de la mezcla. El inculo contena 192
clulas/ml, dando as una concentracin inicial de clulas en los distintos medios de
aproximadamente 32 clulas por ml. Para la vinaza, las proporciones (vinaza:agua)
fueron: 0.5:0.5, 0.6:0.4 y 0.7:0.3, agregndose las mismas cantidades de inculo de
spirulina. Para el efluente de biodigestor se agreg 17 g de bicarbonato de sodio por
litro del medio; y en el caso de la vinaza 34 g de bicarbonato. Los medios se colocaron
en estanques rectangulares de vidrio, y fueron agitados con aire de un microcompresor.
Se obtuvo la mayor tasa de reproduccin del cultivo con el tratamiento de
0.5:0.5 (efluente:agua) tanto para el del biodigestor como el de la destilera. Las lecturas
fueron 530, 1380 y 9500 clulas/ml a los 2, 15 y 30 das despus. Los valores
correspondientes para la vinaza fueron 1170, 2190 y 10,460 respectivamente. La mayor
contaminacin que present el cultivo fue debida a Chlorella sp. y protozoarios como
Amoeba sp. y Paramecium sp. Los cambios de temperatura registrados entre el dia y la
noche fueron considerables (desde 23 a 29C), pero al parecer no afectaron
significativamente el desarrollo del cultivo.
La falta de fuentes proteicas que puedan reemplazar los concentrados con altos
costos de adquisicin en el mercado para los pequeos productores, llev a considerar la
Spirulina maxima como una fuente alternativa con alto contenido proteico (65%) y con
un balance de aminocidos excelente, aunque con un contenido bajo en metionina para
usarlo en la alimentacin animal, especialmente en monogstricos.
En pases desarrollados como Mxico, EEUU y Japn la Spirulina maxima es
usada en la alimentacin humana para suplir la deficiencia de protena, pero con
sistemas de produccin, cosecha y secado muy tecnificados y costosos (Shelef y Soeber
1980). Se han logrado producciones mximas de hasta 120 toneladas/ha/ao con un
promedio en contenido de protena del 50% y en sistemas de produccin para nutricin
en cerdos se han obtenido entre 14 y 34 gr/m/da (Lincoln 1985).
Se ha empleado en la alimentacin de animales, humanos, en acuacultura para la
cra de microcrustceos, para tratamiento de aguas residuales y como fuente energtica,
adems de contribuir a la eliminacin de desechos.
Caractersticas de la Spirulina maxima
La Spirulina maxima, una cianobacteria comnmente considerada como una
microalga por su estructura filamentosa, pertenece al grupo de las cianobacterias no
heterocsticas del gnero de las Oscillatoriaceae (Hargaravez y Viquez 1982). Se
considera como un tricoma helicoidal de forma cilndrica e inmvil, cuya reproduccin
se realiza por ruptura intracelular. Su talla oscila entre 13 y 25 micras.
La asimilacin de dixido de carbono se hace a travs del ciclo de Calvin, con
formacin de glucgeno como material de reserva. La espirulina es capaz de realizar la
fotosntesis oxignica y de fijar el nitrgeno del medio. Puede crecer en medios
minerales que tengan CO
2
como fuente de carbono y N
2
como fuente de nitrgeno a
partir de desechos, nitrgeno atmosfrico o de la respiracin bacteriana (Lincoln 1985).
Esta cianobacteria presenta un alto contenido de protena (50% a 65%) con todos los
aminocidos esenciales que se requieren nutricionalmente segn la FAO, pero con
contenido bajo en metionina (Kosaric et al 1974), como puede observarse en el Cuadro
1.
Cuadro 1: Contenido de aminocidos de la Spirulina mxima

Amino cidos * Datos FAO * Medio Sinttico * Efluente

Isoleucina 4.2 5.8 6.7
Leucina 4.8 9.3 9.2
Lisina 4.2 5.0 4.6
Fenilalanina 2.8 4.0 4.4
Metionina 2.2 2.2 2.1
Treonina 2.8 4.9 5.3
Triptfano 1.4 nr nr
Valina 4.2 6.9 6.6

* g/100 g de protena (Kosaric et al 1974)
nr: dato no registrado
Comparativamente con otros microorganismos como algas y levaduras el
contenido de aminocidos es mucho ms alto (Kosaric et al 1974, ver Cuadro 2).
Ensayos llevados a cabo en ratas y pollos demostraron el alto valor nutritivo que posee
y su alta digestibilidad gracias a que posee aminocidos de cadena simple y una pared
celular formada por mucopolisacridos no txicos (Shubert et al 1985).
Cuadro 2: Contenido de aminocidos de otros microorganismos.

Amino cidos *Scenedesmus sp *Sacharomyces cereviciae
(microalga) (levadura)

Cistena 0.6 0.74
Isoleucina 3.8 4.60
Leucina 8.4 7.00
Lisina 5.7 7.70
Metionina 1.7 1.70
Fenilalanina 5.1 4.10
Treonina 5.1 4.80
Triptfano 1.5 1.00
Valina 5.7 5.30

* g/16 g N ( Kosaric et al 1974)
Esta cianobacteria crece en condiciones alcalinas con un pH que oscila entre 8.5
y 10.5 y a temperatura promedio de 25 a 35C. La Spirulina platensis puede tolerar
temperaturas bajas nocturnas hasta de 18C. Los medios de cultivo pueden ser:
qumicos, sustratos convencionales y no convencionales. El medio qumico debe ser
rico en carbonatos, nitratos y sales, pero los elementos que lo componen son muy
costosos y usados slo en grandes producciones de biomasa de protena, con tecnologas
poco aplicables a nivel del pequeo productor (Ver Cuadro 3).


Cuadro 3: Composicin del medio qumico (g/litro de solucin)

Macroelementos Oligoelemento

NaHCO
3
*Solucin A:
K
2
HPO
4
H
3
BO
3

NaNO
3
MnCl
2

K
2
SO
4
ZnSO
4

NaCl CuSO
4

MgSO
4
MoO
3

CaCl
2
*Solucin B:
FeSO
4
NiSO
4

EDTA (Agente quelante) TiSO
4

Co(NO
3
)2

*Se agrega 1ml de solucin A y 1ml de solucin B, por litro del medio

Los desechos industriales o aguas residuales de las alcantarillas son ampliamente
utilizadas para los sustratos de cultivo en la obtencin de biomasa microalgal y para
purificacin de aguas. Se pueden usar: materiales con contenido de almidn, azcares
(mieles de remolacha, caa de azcar) o sueros. Entre algunos medios no
convencionales que evitan altos costos de produccin puede usarse eficientemente el
efluente de biodigestores anaerbicos, evitando la contaminacin de las fuentes de agua
con el lavado del estircol de los animales, ceniza de la quema de material vegetal con
alto contenido de minerales o los lodos de la fermentacin alcohlica de las mieles,
usados especialmente en Brasil (Ferraz y Aquarone 1985).
Usos de la espirulina
Suplementacin proteica en humanos
El polvo que se obtiene de la Spirulina sp. es una fuente proteica de alto valor
biolgico sin efectos txicos. Posee un 80% de la protena del huevo, es decir 124 g de
Spirulina maxima reemplazan 100 g de la protena del huevo. No se realizan
sustituciones totales de protena, sino parciales para suplir las deficiencias por falta de
fuentes proteicas a causa de los altos costos en el mercado. En dietas humanas se ha
considerado como una fuente importante de cido gamma linolico, como sustituyente
en la alimentacin de hipertensos y pacientes con tensiones premenstruales, resultando
mas econmico que otro tipo de aceites.
En la Florida existen plantas productoras de Spirulina maxima que abastecen
sistemas de cra de hasta 1000 cerdos en base a cultivos con efluente de biodigestores,
con sistemas de biofloculacin y con producciones de hasta 34 g MS/m/da con 60% de
protena. Igualmente se ha usado en la alimentacin de pollos, proporcionando la
suficiente protena y favoreciendo la coloracin del huevo (Lincoln 1985).
Acuacultura
La cra de microcrustceos, moluscos y peces, como consumidores de plancton,
requiere procesos de reproduccin y cra artificial a gran escala y por lo tanto es de gran
inters tener plantas pilotos de produccin de la cianobacteria para la alimentacin de
los primeros estados larvales. Se mantiene en el medio una alta productividad y estos
tapetes biolgicos constituiran una ptima calidad para el agua, acumulando el oxgeno
transfiriendo sustancias metablicas producidas por los organismos en cultivo.
Favorece la cra de peces ornamentales especialmente ya que la espirulina tiene
buen contenido de carotenos y permite mejorar el colorido y vistosidad de estas
especies. La cra de microcrutceos tambin se ha implementado para el cultivo de
peces, pero se ha comprobado que la eficiencia es mayor con las microalgas y
cianobacterias. Los moluscos producidos en base a este tipo de alimentacin no
convencional reduciran los costos de produccin y proporcionaran al mercado
alimento de alta calidad con mayores ganancias para el productor.
Tratamiento de aguas negras
Se han tratado aguas de desecho en base a Spirulina maxima, utilizada como
purificadora de aguas residuales que remueve los nitratos, fosfatos, y otros elementos
presentes en gran cantidad. En piscinas de oxidacin o estanques se pueden obtener dos
productos esenciales: protena vegetal continua y aguas tratadas y recuperadas, evitando
la contaminacin y eutroficacin activada por la ozonizacin del agua lo cual permite
utilizar el agua para consumo humano.
En Israel se aprovechan las aguas de las costas para produccin de microalgas
como Spirulina sp. o Scenedesmus sp., tratando de implementar mtodos menos
costosos y eficientes para el tratamiento de aguas de desecho industriales y domsticas.
En Londres se utilizan las aguas de tratamiento terciario de desechos para producir
biomasa y purificarlas (Kosaric et al 1978).
Los cultivos de la espirulina se realizaron en tanques rectangulares (20 cm x 25
cm x 30 cm) de vidrio y fueron agitados con aire de un microcompresor (2,500 cm
3
de
aire/minuto).
Tratamientos
Se utilizaron tres tratamientos preliminares correspondientes al medio qumico,
y efluente mezclado con agua a nivel de 0.5:0.5 y 0.75:0.25 volmenes de
efluente:agua, agregando bicarbonato de sodio en cantidades de 17 g por litro del medio
e inculo de spirulina (192 clulas/ml) de 200 ml por litro del medio de agua. Las
observaciones indicaron que la reproduccin fue ms eficiente cuando se hizo el medio
con partes iguales de efluente y agua.
Con base en esta informacin, se realizaron comparaciones de cuatro diluciones
del efluente correspondientes a volmenes efluente:agua de: 0.25:0.75, 0.5:0.5,
0.75:0.25 y 1.0:0.0 (ver Cuadro 4). A 1,000 ml de la mezcla se agregaron 200 ml de
inculo de espirulina (192 clulas/ml) y 17 g de bicarbonato de sodio. Despus de 15
das se agregaron otros 1,000 ml del medio (efluente, agua y bicarbonato en las
concentraciones usadas en el principio). El efluente se recolect de un biodigestor
plstico de flujo continuo (Solarte 1989), alimentado con excreta de cerdos, con un
tiempo de retencin de 60 das. El efluente contena (% base fresca): N 0.10, P 0.03, K
0.07, slidos totales.

Cuadro 4: Niveles de efluente usados como medio de cultivo*

Volumen efluent: Volumen agua
0.25:0.75 0.5:0.5 0.75:0.25 1.0:0.0

Cantidad de agua (ml) 750 500 250

Cantidad de efluente (ml) 250 500 750 1000

*A cada 1000 ml del medio se agregaron 17g de bicarbonato de sodio y 200 ml de inculo de espirulina
(192 clulas/ml).
Efluente de destilera (vinaza): Se emplearon tres medios de cultivo
suplementados con vinaza residual de la Industria Licorera en proporciones del 0.5:0.5,
0.6:0.4 y 0.7:0.3 volmenes vinaza:agua. La vinaza contena (% base hmeda): slidos
totales 60, N x 0.66, K x 0.27. Se adicion 34 g de bicarbonato por litro de medio y 200
ml de inculo de espirulina.
Diseo experimental
Se utiliz el diseo de bloques al azar con dos y tres repeticiones (para efluentes
de biodigestor y vinaza, respectivamente) y la evaluacin se hizo durante treinta das. Se
determinaron a los 2, 15 y 30 das, los siguientes parmetros: conteo de clulas de
cianobacterias y conteo de clulas de microorganismos por campo de cubreobjetos. A
los 30 das se midi el pH, la temperatura y el porcentaje de materia seca del medio.
Resultados
Durante los primeros 15 das la tasa de reproduccin de la espirulina se relacion
directamente con la concentracin del efluente en el medio, en el caso del efluente del
biodigestor (Cuadro 6). Sin embargo, despus de agregar otra vez el medio, fue mucho
ms marcado la respuesta en el tratamiento de mitad efluente:mitad agua, que con
concentraciones mayores, siendo altamente significativas las diferencias (P<.001). La
concentracin de clulas alcanzada en 30 das en el tratamiento 50:50 (9 x 10
3
/ml)
todava no representa el potencial del organismo, ya que concentraciones de hasta 1 x
10
6
/ml han sido reportadas por Noue y Proulx (1986).
La mayor contaminacin que present el cultivo con efluente del biodigestor fue
debida a Chlorella sp. y protozoarios como Amoeba sp. y Paramecium sp.
Los cambios de temperatura registrados entre el da y la noche fueron
considerables (desde 23 a 29C), pero al parecer no afectaron significativamente el
desarrollo del cultivo.
El porcentaje de materia seca del producto (6.4 a 6.8%) fue ms alto que el que
reportaron Nguyen (1982) y Lincoln (1985) (aproximadamente 5%), probablamente
debido al contenido de slidos residuales del efluente en el material.



Quadro 5: Efecto de la concentracin de efluente de biodigestor en el medio de cultivo sobre la tasa de
reproduccin de la espirulina

Porporcin de efluente*
0.25 0.5 0.75 1 ES Prob

Nmero de clulas de espirulina/ml :
Lectura
2 das 800 530 540 430 110 NS
15 das 1310 1380 2220 2700 280 0.16
30 das 830 9500 3460 4210 510 <0.001

pH 9.30 9.57 9.35 9.60
(ES) (0.07) (0.08) (0.07) (0.18)

Slidos totales (%) 6.39 6.80 6.27 6.57
(ES) (1.51) (2.65) (2.99) (2.60

* Reemplazando el agua
Se realizaron anlisis de espirulina en base seca y se obtuvieron los siguientes
resultados: N=7.2, P=0.24, K=0.85, Ca=1.02,
La vinaza
Los medios suplementados con diferentes niveles de vinaza presentaron
dificultades en cuanto a pH y agitacin. El pH de la vinaza es 4.2 luego de pasar por un
tratamiento final de cido sulfrico para la fermentacin alcohlica de las mieles y por
lo tanto se aumentaron los niveles de bicarbonato de sodio para aumentar el pH a 7.4 y
la agitacin fue muy lenta por la alta viscosidad del medio.
Cuadro 6: Efecto de la concentracin de efluente de destilera (vinaza) en el medio de cultivo sobre la tasa de
reproduccin de la espirulina

Proporcin de efluente*
0.5 0.6 0.7 ESmed Prob

Nmero de clulas de espirulina/ml
Lectura
2 das 1170 370 460 160 .06
15 das 2190 1630 2080 370 NS
30 das 10460 4510 5740 900 .04

pH 9.04 8.81 8.93
(ES) (0.1) (0.01) (0.01)

*Reemplazando el agua


Al parecer, la dilucin de partes iguales de vinaza y agua es la mejor, ya que no
hubo diferencias significativas en el nmero de clulas a los 15 das, siendo menores a
los 30 das las concentraciones de la espirulina con diluciones de 0.6 y 0.7
(P=0.04)(Cuadro 6).
Como puede verse el contenido de nutrientes de la vinaza es mayor que en el
efluente pero el contenido de potasio es muy alto, por lo tanto es muy importante la
asimilacin de este elemento por parte de la cianobacteria para que no sea txico para
consumo en animales y que a nivel industrial este desecho sea utilizable para otro fin.
Se revisaron las muestras para evaluar el contenido de microorganismos en los
medios pero no se encontr ninguno, por lo tanto esto favorece el crecimiento de las
clulas de la cianobacteria por no existir ningn tipo de competencia frente a los medios
suplementados con efluente de biodigestor donde la incidencia de microorganismos
como Chlorella sp., Paramecium sp. y Amoeba sp. es mayor.
El pH oscil entre 7.40 y 9.04, lo que muestra que la Spirulina maxima puede
resistir un pH extremo como lo hace la Spirulina subsalsa Oersted de Costa Rica
(Hargaravez y Viquez 1982). Las temperaturas tomadas para estos cultivos mostraron
mximos de 29C y mnimos de 23C en las noches y el promedio calculado fue de
24.6C. No se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos respecto a la
temperatura (Ver Cuadro 6).
Conclusiones
Al parecer, el nivel de efluente de biodigestor ms recomendable para el cultivo
de Spirulina maxima es una combinacin de partes iguales de efluente y de agua (sin
cloro) con 17 g de bicarbonato de sodio por cada litro de medio, teniendo en cuenta que
el efluente tendra una concentracin de slidos de aproximadamente 2%.
El nivel de vinaza ms efectivo para la reproduccin de la cianobacteria fue del
50% de vinaza y 50% de agua. En este caso fue usado 34 g de bicarbonato de sodio por
cada litro de medio, en vista de la acidez de la vinaza.
La poblacin de clulas de espirulina posiblemente fue afectada bsicamente por
la competencia de microorganismos cuando se us como sustrato el efluente, de ah la
ventaja de la suplementacin con la vinaza.
El pH y la temperatura para los ensayos, tanto de efluente como de vinaza, no
variaron significativamente como para afectar el cultivo de espirulina.
Recomendaciones
Realizar ms ensayos para tratar de aumentar los niveles de suplementacin con
efluente y vinaza.
Buscar otras alternativas para uso de desechos como sustrato para la espirulina,
adems de emplear elementos qumicos como el carbonato de calcio para suplir las
necesidades de carbono.
Hacer nfasis en la implementacin del cultivo de la cianobacteria a nivel de
campo, dando ms importancia al anlisis de los sustratos para el cultivo y las
tecnologas aplicadas para el pequeo productor.

BIBLIOGRAFIA
- Microbial Technology (Peppler and Perlman)
- Microbial Biotechnology. Fundamentals of Applied Microbiology. Eds. Glazer,
A.N. and Nikaido, H. Freeman 1.995.
DIRECCIONES WEB
http//www.colciencias.gov.co/simbiosis/proyectos
http//www.cipav.org.co/Irrd/Irrd1/1/gloria.htm
http//www.quien-es-quien.com.re/Qq-2-16/algas16.htm
http//wwwdos.lib.chalmers.se/cth/diss/doc/9798/FranzenCarlJohan.html
http//www.unu.edu/unupress/unupbooks/80362e/80362Eob.htm
http//ourwold.compuserve.com/homepages/pfh2/fungbiot.htm
http//abe.www.ecn.purdue.edu/ABE/Research/research94/REPORT.94Book_62.ht
ml