UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS

DECANATO




PROYECTO DE TESIS

I. GENERALIDADES

1. Ttulo del Proyecto:
Efecto del Tacrolimus (inmunosupresor) en
poblacin granuloctica de Cavia porcellus

2. Personal Investigador:
2.1 Autor: CUBAS ALARCON, Deniss Manuel
2.2 Patrocinador: Blgo. ESPINOZA VALERA, Carlos

3. Carrera Profesional/Especialidad:
Carrera Profesional de Biologa
Especialidad de Microbiologa y Parasitologa

4. Tipo De Investigacin:
4.1 De acuerdo al fin que se persigue: Aplicada.
4.2 De acuerdo a la tcnica de contrastacin: Explicativa.

5. Rgimen de Investigacin: Libre

6. Localidad e Institucin donde se desarrollar el proyecto:
Laboratorios de Microbiologa y Parasitologa de la Facultad de Ciencias
Biolgicas de la Universidad Nacional Pedro Ruz Gallo.

7. Duracin del proyecto: 4 meses

Fechas de inicio y terminacin:

7.1 Inicio: 17 de marzo
7.2 Terminacin: 12 de junio




8. Cronograma de Trabajo

ACTIVIDADES MESES
Marzo
2014
Abril
2014
Mayo
2014
Junio
2014
FASES DE PLANEAMIENTO
o Revisin Bibliogrfica X
o Elaboracin de proyecto
X
o Presentacin de proyecto
X
o Aprobacin de proyecto
X
o Implementacin de proyecto
X
FASES DE EJECUCIN

o Recoleccin de muestra
X X X
o Procesamiento de muestra
X X X
o Registro de datos
X X X
o Anlisis estadstico de datos
X X
FASES DE COMUNICACIN

o Anlisis e interpretacin X
o Elaboracin de informe X
o Presentacin de informe X




9. Recursos disponibles:

Personal:
Personal del servicio tcnico del Laboratorio de Microbiologa y Parasitologa.
UNPRG- Lambayeque.

Local:
Laboratorios del rea de Microbiologa y Parasitologa de la Universidad
Nacional Pedro Ruiz Gallo

II. PLAN DE INVESTIGACIN

Realidad Problemtica
La agranulocitosis es un trastorno hematolgico grave, con una mortalidad de 3 a
8%. Se caracteriza por una reduccin severa y selectiva de los granulocitos
(neutrfilos, eosinfilos y basfilos) circulantes y que tiene una causa gentica,
congnita o adquirida, pero frecuentemente ocurre como una reaccin adversa a
ciertos medicamentos. (Laporte JR.1989)
Se desconoce la incidencia y es difcil cuantificar el riesgo individual de cada
medicamento que lo produce. Sin embargo diferentes autores han estimado su
incidencia en 7,3 a 9,3 casos/milln de habitantes/ao.
En la actualidad el uso de algunos medicamentos son los que generan la
agranulocitosis, que muchas veces favorece en los avances de la medicina, como
en los transplantes de rganos o en el tratamiento de algunas enfermedades
inflamatorias inmunes, como es el caso de Tacrolimus, un inmunosupresor muy
usado hoy en da con la finalidad de reducir la respuesta inmunolgica frente a un
transplante.
Tacrolimus es un macrlido insoluble en agua con efectos inmunosupresores
derivado del actinomiceto Streptomyces tsukubaensis. Actualmente, se fabrica
para administracin oral e intravenosa en la profilaxis del rechazo de rganos, en
pacientes que reciben un rin alognico o en trasplantes de hgado. Su uso se ha
visto complicada por varios efectos secundarios como la diabetes mellitus, la
hipertensin arterial y la neurotoxicidad.
La administracin de Tacrolimus puede realizarse por va intravenosa u oral para
conseguir un efecto sistmico. La absorcin por va oral es variable, presentando
una biodisponibilidad del 20-25%. Los alimentos reducen la absorcin de este
frmaco, por lo que se aconseja retrasar la ingesta al menos una hora desde la
administracin del frmaco. Administrado de forma tpica en la piel apenas se
absorbe, por lo que Tacrolimus no se detecta en sangre salvo que exista una
alteracin importante en la funcin de barrera cutnea.
La elevada variabilidad farmacocintica interindividual, la ausencia de una
estrecha correlacin entre la dosis administrada y las concentraciones obtenidas y
un intervalo teraputico estrecho han puesto de manifiesto que el anlisis de los
frmacos inmunosupresores es un prerrequisito para el ajuste de las dosis segn
necesidades de cada paciente. Es por ello la importancia de este trabajo, para
determinar a qu concentraciones y por qu vas de aplicacin sern las ms
efectivas y las que menos efectos adversos conlleven.
Planteamiento del problema
Administrando Tacrolimus (inmunosupresor) a Cavia porcellus (cobayo) se
podr generar variacin en su poblacin granuloctica ?
Objetivos
Demostrar la accin del Tacrolimus (inmunosupresor) frente a los granulocitos
de Cavia porcellus (cobayo) mediante la inoculacin va intraperitoneal u oral.
Hiptesis
Administrando Tacrolimus a Cavia porcellus producir variacin poblacional de
granulocitos.
Justificacin e importancia
Teniendo en cuenta, que existe la frecuente utilizacin de Tacrolimus, y no
existen datos cientficos de tipo experimental que informen sobre la prevalencia
de agranulocitosis, ni los posibles factores de riesgo al administrar este frmaco,
es oportuno este estudio encaminado a cubrir ese vaco del conocimiento.
Es por ello que la finalidad de este trabajo es informar a la comunidad mediante
los resultados obtenidos durante el transcurso de la ejecucin del proyecto y
sensibilizarlos a tomar conciencia del problema que constituye.

Antecedentes
Habitualmente la neutropenia se presenta con un recuento de granulocitos < 1.500
clulas/ microlitro; hay neutropenia grave cuando el nmero de neutrfilos es
menor a 500/ microlitro, y agranulocitosis en casos de neutropenia grave (menos
de 100 clulas/microlitro) sintomtica, como presencia de fiebre, deterioro del
estado general, ulceraciones orofarngeas y/o perineales. (Banchero P, Giachetto
G. 2002)
Menciona que la agranulocitosis causada por frmacos tiene una incidencia
variable, con diferencias regionales importantes. En el caso de Suecia, la
incidencia es alta (1 cada 1.700 consumidores), por lo que se prohibi
definitivamente su consumo en 1999. (Elas PA, 2006)
La aplicacin a corto plazo de la pomada de tacrolimus es eficaz en el tratamiento
de la dermatitis atpica, con la sensacin de ardor siendo el principal efecto
secundario.( Ruzicka, 1997)
Hay marcada heterogeneidad en las concentraciones en sangre de tacrolimus tras
estndar con base en el peso corporal de la dosificacin. Esto es ms evidente en
los pacientes negros, que tienen un requerimiento de la dosis ms alta en
comparacin con otros grupos tnicos. El genotipo CYP3AP1 es un factor
importante en la determinacin de la dosis requerida para el tacrolimus, y
genotipado puede ser de valor en la planificacin de la dosificacin del frmaco
especfica del paciente. (Macphee, 2002)
Las reacciones hematolgicas adversas comunicadas durante el tratamiento con
tacrolimus son anemia (3059%), leucocitosis (32%), leucopenia (15%), y
trombocitopenia (24%). Los pacientes tratados con tacrolimus son ms
susceptibles al desarrollo de linfomas o desrdenes linfoproliferativos. En algunos
casos el desorden linfoproliferativo ha estado asociado a una infeccin por virus
Epstein-Barr. (Staatz, 2004)

Materiales
Material Biolgico
Cavia porcellus (Cobayo)
Material de Laboratorio
Tubos de ensayo pyrex 10x50 mm, 13x100 mm
Jeringas
Centrifuga
Gradilla
Tabla de diseccin
Reactivo de turk
Anticoagulante
Microscopio
Cmara de Neubauer
Reactivo de Ficoll-Hypaque
Limaduras de hierro
NaCl al 0.9%
Diseo Metodolgico
Determinaciones basales:
Es necesario estar seguros de la ausencia de agranulocitosis por lo que
se determina el recuento basal de la siguiente manera:
Obtencin de muestra:
Colocar el cobayo en la tabla de diseccin y sujetar
Limpiar la zona cardiaca con alcochol e introducir la
tuberculina para obtener el lquido sanguneo(1ml)
Realizar el frotis: colocar una gota de sangre en uno de los
extremos del porta y coger otro porta objetos y colocar sobre
el.
Primero en un angulo de 40 a 30 grados esperando que la
sangre se extienda por capilaridad realizando un movimiento
rpido a la izquierda.
Tcnica de coloracin (Wright)
Dejar secar espontneamente al aire 5 minutos
Coloracin con el colorante Wright dejar actuar por 5 minutos,
luego cubrir con igual cantidad de agua por 4 minutos
Luego lavar con agua destilada y dejar secar en posicin
vertical 5 minutos.
Agregar aceite de cedro y observar al microscopio ptico con
el objetivo de inmersin
Recuento en diferentes campos y anotar el nmero de
granulocitos por campo.
Determinacin del peso del medicamento
El tacrolimus viene en capsulas de 0.5, 1 y 5 mg. Y se recomienda una
dosis oral de 0.05 -0.1 mg/kg/dia, es por eso que se determin la
cantidad adecuado de este medicamento para cobayos en una regla de
tres simple:
0.5 mg -------------------------- 1kg
X mg -------------------------- 1.5 kg
X = 0.75 mg
Preparamos la solucin con el capsula de 1 mg en solucin salina
fisiolgica (10ml)
10ml ---------------------------------1mg
X ml -------------------------------- 0.75mg
X = 10ml (0.75mg) / 1mg
X = 7.5ml
Referencias Bibliogrficas
Banchero P, Giachetto G. Agranulocitosis inducida por
medicamentos.Arch Pediatr Urug 2002; 73(2): 74-7.
Benet L, Keroetz D, Sheiner L. Farmacocintica dinmica de la absorcin,
distribucin y eliminacin de frmacos. En: Hardman J, Limbrid L,
Molinoff P, Ruddon R, Goodman Gil-man A. Las Bases Farmacolgicas
de la Teraputica. 9 ed. Mexico: Mc Graw Hill, 1996: 3-30.
Kiono W, Coates T. Estrategias prcticas en trastornos de neutrfilos.
Clin.Pediatric Norteam 2003; 49(5): 889-934.
Staatz CE, Tett SE. Clinical Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of
Tacrolimus in Solid Organ Transplantation. Clinical Pharmacokinetics
2004, Vol. 43 Issue 10, p623-54.
Hgenauer C, Wenzl HH, Hinterleitner TA, Petritsch W. Effect of oral
tacrolimus (FK 506) on steroid-refractory moderate/severe ulcerative
colitis. B Alimentary Pharmacology & Therapeutics, Aug2003, Vol. 18
Issue 4, p415-24.
http://journals.lww.com/transplantjournal/Abstract/2002/12150/Tacrolimu
s_pharmacogenetics__polymorphisms.2.aspx