CONOCIMIENTO DE

TCNICAS ANALTICAS
PARTE I:
FUNDAMENTOS DE
ESPECTROFOTOMETRA.
I. OBJETIVO GENERAL
Conocer y aplicar los fundamentos de la
ESPECTROFOTOMETRA
para la determinacin de
concentraciones en soluciones.
II. OBJETIVOS PARTICULARES
a. Conocer los fundamentos de la espectrofotometra y las variables
involucradas en la ley de Lambert-Beer-Bourger.
b. Seleccionar la longitud de onda apropiada para DETERMINACIN de
absorbancia.
c. Construir una curva patrn de la solucin de YODO-YODURADO (serie
tipo) a diferentes concentraciones .
III. PROBLEMA
A partir del espectro de absorcin de una
solucin acuosa de yodo-yoduro de potasio
seleccionar la longitud de onda apropiada para
determinar el coeficiente de absortividad molar
de soluciones acuosas de yodo por medio de
una curva patrn.
I
2
+ I
-
I
3
-
0.002 0.2 2X10
-3
Introduccin
Espectro
Foto
Metra
Espectro de radiacin electromagntica
Luz visible
Medicin
ESPECTRO ELECTROMAGNTICO
Tipos de Espectrofotometra
La espectrofotometra de
Absorcin de infrarrojos
ABSORCIN DE UV-VISIBLE
Resonancia magntica nuclear (RMN)
Fluorescencia
Emisin atmica
Absorcin atmica de masas
Fluorescencia de Rayos X
Espectroscopia UV y Visible
Estudia el fenmeno de adsorcin de la radiacin UV-Visible de molculas orgnicas e
inorgnicas.
La regin UV del espectro electromagntico se encuentra entre 0.6 y 380 nm.
UV lejano UV cercano Visible
0.6 190 nm 190 380 nm 380 780 nm
UV cercano o de cuarzo. Regin en la que el aire y el cuarzo son transparentes)
UV lejano o de vaco . intervalo 0.6 a 190 nm.
El UV lejano requiere tcnicas especiales, ya que el aire que
se encuentra en el trayecto ptico absorbe intensamente en esta
regin, no es til desde un punto de vista prctico.
La regin visible, a la que es sensible el ojo humano, se localiza entre los 380 y
780 nm.
La absorcin de la radiacin UV o Visible por molculas ,
generalmente se produce por la excitacin de los electrones de
enlace.
La longitud de onda de los mximos de absorcin se puede
relacionar con los enlaces de las especies absorbentes.
Espectrofotometra
Es el mtodo de anlisis ptico Es el mtodo de anlisis ptico
ms usado en el rea de ms usado en el rea de
investigacin. investigacin.
Es la medida de la Es la medida de la cantidad cantidad de de
energa energa radiante radiante absorbida absorbida por por
las molculas de una las molculas de una muestra muestra en en
funcin de las longitudes de onda funcin de las longitudes de onda
especficas. especficas.
Los mtodos espectroscpicos se basan en la
capacidad de las sustancias de ABSORBER o
EMITIR radiacin electromagntica, y tales
mtodos se pueden emplear para determinar
la concentracin de un reactivo o producto
durante una reaccin.
Compartimento de
celda
Encendido y ajuste
Del cero de T
Selector de medida
Ajuste de cero
de Absorbancia
Pantalla de lecturas
El aparato detecta la cantidad de luz transmitida y/o
absorbida a travs de la solucin en la celda y la compara
con la que se transmite o absorbe a travs de una solucin
de referencia o blanco.
Qu establece la ley de Lambert-Beer-Bourger?
P
0
P
=
0
P
P
T
Transmitancia
0
log
P
P
A =

P
P
T A
0
log log = =
bc
P
P
A

= =
0
log
A diferencia de la transmitancia,
la absorbancia de una solucin
aumenta a medida que aumenta
la atenuacin del haz de luz
bc A bc
P
P
A

= = =
0
log
.- Es la cte. de proporcionalidad llamada coeficiente de
absorcin molar, de absortividad o coeficiente de extincin.
b.- Es el paso ptico, anchura de la celda que contiene la
muestra (cm).
c.- Es la concentracin de la especie de la cual se esta
midiendo la absorbancia (M).
La ecuacin mencionada es el fundamento de la
espectrofotometra, y se cumple para una radiacin
monocromtica que atraviesa una disolucin diluida ( 0.01M),
cuando la especie absorbente no participa en un equilibrio que
dependa de su concentracin.
1 ERA PARTE
CALIBRACIN DEL ESPECTROFOTMETRO Y
BARRIDO DEL ESPECTRO DE ABSORCIN
1.- Encender el espectrofotmetro.
2.- Esperar 15 minutos.
3.- Calibracin: oprimir la tecla MODE, hasta que la luz roja se
encuentre en A (absorbancia).
4.- Seleccionar la longitud de onda girando la perilla.
5.- Introducir la celda con el blanco (con un volumen por arriba de la
mitad; nunca llena) en la porta-celda, oprime la tecla (0A/100%T) y
esperar a que se ponga en ceros la absorbancia.
6.- Tomar la lectura de absorbancia de la solucin propuesta a una
longitud de onda baja ( nm). utilizar como blanco agua destilada.
7.- Repetir el procedimiento desde el punto 4 dando incrementos
regulares a la longitud de onda. Registrar los datos en la tabla 1
A5. ORGANIZACIN DE DATOS,
EVENTO (nm)
ABSORBANCIA
EVENTO (nm)
ABSORBANCIA
1 380 9
460
2 390 10 470
3 400 11 480
4 410 12 490
5 420 13
500
6 430 14
7 440
8 450
Registrar los datos experimentales del espectro de absorcin de yodo (2*10
-4
M) en la tabla 1.
Tabla 1. Absorbancia de la solucin de I
2
a diferentes longitudes de onda.
Temperatura:
Espectro Yodo 0.0002M
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
300 320 340 360 380 400 420 440 460 480 500 520
l (nm)
A
b
s
Seleccionar una de esta zona
Curva Patrn
1.- Preparar soluciones de distinta concentracin a partir de la
solucin de referencia I
2
KI (0.0002M - 0.2M) (Serie tipo).
2.- Seleccionar una longitud de onda adecuada para hacer las
lecturas de Absorbancia para las soluciones de la serie tipo.
3.- Introducir la celda con el blanco (agua destilada), con un
volumen por arriba de la mitad; nunca llena, en la porta-celda,
oprimir la tecla (0A/100%T) y esperar a que se ponga en
ceros la absorbancia.
4.- Tomar la lectura de absorbancia de las soluciones
propuestas para la serie tipo, a la longitud de onda
seleccionada ( nm).
5.- Registrar las lecturas de absorbancia y concentracin de la
serie tipo en la tabla 2
2
DA
PARTE
TABLA 2. Absorbancia a diferentes
concentraciones molares de I
2
Mezcla I
2
(0.002 M)
(ml)
H
2
O (ml)
I
2
mol/L Abs
1 6 4
C
I
V
1
=C
2
V
2
2 5 5
3 4 6
4 3 7
5 2 8
TABLA 2. Absorbancia a diferentes
concentraciones molares de I
2
Mezcl
a
I
2
(0.002 M)
(ml)
H
2
O (ml) I
2
mol/L Abs
1 10 0 0.002 1.61
2 8 2 0.0016 1.290
3 6 4 0.0012 0.950
4 4 6 0.0008 0.625
5 2 8 0.00045 0.311
Curva Patrn de soln de yodo ( Abs/ nm)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
1.6
1.8
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025
I2 (mol/L)
A
b
s
bc A =
b mx y + =