BIOLOGA MOLECULAR DE LA BARRERA HEMATOENCEFLICA

Para mantener un procesamiento neuronal eficiente, es necesario mantener un medio controlado

en el SNC, para lograrlo, est protegido por mecanismos de barrera, stos se encuentran en 5
diferentes interfaces: 1) la barrera hematoenceflica (BHE), a nivel del endotelio cerebral; 2) la
barrera aracnoidea, localizada entre el lquido cefalorraqudeo (LCR) del espacio subaracnoideo y
la duramadre; 3) los limitantes pia/glia, entre el LCR del espacio subaracnoideo y el fluido
extracelular cerebral; 4) la barrera LCR-cerebro, que es slo significativa en la etapa embrionaria,
formada por la separacin del sistema ventricular del fluido extracelular cerebral por uniones de
correa en el neuroepndima; y 5) la barrera sangre-LCR (BSLCR) a nivel de las clulas epiteliales de
los plexos coroideos (PC).
(1) (2)

Las funciones desempeadas por estas barreras, se encuentran presentes desde etapas tempranas
del desarrollo. El LCR en esta etapa se caracteriza por la presencia de altas concentraciones de
protenas, provenientes en su mayora del plasma sanguneo. Dentro de las barreras presentes en
el SNC, las ms importantes son la BHE y la BSLCR, estas barreras no son slo anatmicas, son
tejidos dinmicos, que expresan mltiples transportadores, receptores y enzimas. Los capilares
cerebrales, se asocian a los procesos terminales de los astrocitos y a la microglia, y tienen
influencia sobre la permeabilidad de la BHE, dando lugar a la unidad neurovascular. Las 2
funciones principales de estas barreras son: impedir la libre difusin entre los fluidos cerebrales y
la sangre, y proveer de mecanismos de transporte para nutrientes esenciales, iones y productos de
desecho metablico.
(1) (2)


Morfologa de la BHE y BSLCR

Aunque ambas barreras comparten caractersticas en comn, su base celular y sus funciones
primarias difieren. La BHE se localiza en los capilares cerebrales, es una estructura endotelial y su
funcin principal es proteger al cerebro de las fluctuaciones fisiolgicas en el plasma de solutos y
sustancias liberadas en la sangre que puedan interferir con la neurotransmisin, asimismo,
participa en mecanismos de intercambio de nutrientes, productos de desecho metablico,
molculas de sealizacin y iones entre el fluido intersticial cerebral y la sangre.
(2)
La BHE se forma
por la microvasculatura cerebral y su permeabilidad est regulada principalmente por las clulas
endoteliales, sin embargo no es la nica clula que compone la microvasculatura; existen por lo
menos 4 clulas y cualquier alteracin en ellas compromete la permeabilidad de la misma. La
clula endotelial y el pericito comparten la membrana basal, hay 1 pericito por cada 2-4 clulas
endoteliales. Los procesos terminales de los astrocitos recubren el 99% de la superficie de los
capilares cerebrales. Asimismo, existe inervacin en el capilar por terminaciones nerviosas de
origen intra o extracerebral. La membrana luminal y abluminal de las clulas endoteliales se
separa por 100-300nm de citoplasma endotelial. Para que una molcula llegue al espacio
intersticial cerebral, debe atravesar la membrana plasmtica de la clula endotelial, el pericito y
los procesos terminales de los astrocitos. El paso de nutrientes y molculas a travs de la BHE
resulta de una compleja interaccin entre sistemas de eflujo, en la membrana de las clulas
endoteliales, transportadores activos en los procesos terminales de los astrocitos y ectoenzimas
en la membrana plasmtica de los pericitos.
(3)


Existen 2 razones para estudiar la biologa molecular de la BHE: entender la expresin gentica
especfica de cada tejido expresado en la microvasculatura para tener un mejor entendimiento de
las enfermedades neurolgicas y desarrollar nuevas estrategias para el transporte de frmacos a
travs de la BHE.
(3)


Existen 3 tipos de transporte e la BHE: transportadores mediados pro protenas de membrana
(carrier mediated transport CMT), transportadores activos de eflujo (AET) y transportadores
mediados por receptores (RMT). Muchos de los sistemas AET pueden estar presentes en los
procesos terminales de los astrocitos o en la membrana plasmtica de los pericitos, en vez de en la
clula endotelial.
(3)
Sin embargo, no hay estudios que determinen la localizacin exacta de cada
sistema en la BHE.

Los capilares cerebrales tienen una morfologa que les permite la restriccin de la difusin de
solutos de la sangre por medio de las uniones estrechas que interconectan a las clulas
endoteliales adyacentes y sellan los espacios paracelulares. Adicionalmente, las clulas
endoteliales tienen baja actividad pinoctica, y el endotelio se asla gracias a los procesos
terminales de los astrocitos y los pericitos, que brindan una restriccin adicional a la
permeabilidad. La BHE tiene gran resistencia al paso de iones, presentando una resistencia
transendotelial (TEER) en promedio de 1500 cm
2
comparada con la TEER en otros tejidos que es
de 3-33 cm
2
. La superficie capilar aproximada del cerebro es de 20m
2
; por lo que se considera a
la BHE provee al cerebro de condiciones ideales para el proceso de intercambio entre la sangre y
el fluido intersticial cerebral.
(2)

La BSLCR est formada por una capa de epitelio cuboidal modificado, el plexo coroideo, que
secreta LCR. Los plexos coroideos son tejido epitelial altamente vascularizado, originado del
neuroepndima en la etapa embrionaria y del epndima en los adultos; y flota libremente en los
ventrculos; se unen al epndima ventricular por un tallo. El epndima es continuo con la capa
epitelial de los plexos coroideos, constituida por una capa nica de clulas llenas de mitocondrias
y unidas por uniones estrechas. La TEER en estas clulas es de aproximadamente 150 cm
2
, lo
que sugiere que es un epitelio sujeto a filtraciones que secreta grandes cantidades de lquido con
relativamente poca energa. Las clulas epiteliales de los PC tienen vellosidades en su superficie
apical y en las paredes laterales se encuentran interdigitaciones complejas que aumentan su rea
de superficie. Tienen 2 funciones principales: en primer lugar actuar como una barrera de difusin
entre la sangre y LCR; en segundo lugar, producir y secretar LCR. Los plexos coroideos estn
compuestos por un estroma central con numerosos vasos sanguneos, cubiertos por una sola capa
de clulas endoteliales que descansan sobre una membrana basal gruesa. Estos vasos son
fenestrados y las lneas de unin de las clulas endoteliales son discontnuas, sin embargo cuenta
con uniones, como las uniones estrechas, adherentes, de hendidura; formando la barrera sangre-
LCR. La presencia de estas uniones en las clulas endoteliales de los plexos adyacentes, desde su
aparicin y durante su desarrollo, se traduce en la reduccin del transporte paracelular entre la
sangre y el LCR tanto en la etapa embrionaria, como en los adultos.
(1) (2)
Durante el desarrollo cerebral, la diferenciacin y el crecimiento de los PC ocurre antes de la
vascularizacin; por lo que se sugiere que la va de entrada de la sangre al cerebro durante esta
etapa es a travs de los PC y el LCR.
(1)

Las caractersticas de cada una de las barreras dependen de su componente morfolgico y de sus
mecanismos de transporte celular. El aspecto morfolgico distintivo en la BHE son las clulas
endoteliales y en los plexos coroideos son las clulas epiteliales. Los mecanismos de transporte
celular comprenden mecanismos de influjo para el transporte de nutrientes, y mecanismos de
eflujo importantes para prevenir la entrada de toxinas y frmacos al cerebro; adems existen
mecanismos de transporte de iones y canales para transporte de lquidos que son clave para
mantener el ambiente cerebral y asegurar una adecuada funcin neuronal.
(1)


Biologa molecular de las uniones estrechas en la BHE y la BSLCR

Las clulas endoteliales cerebrales y las clulas epiteliales de los PC estn adheridas por uniones
estrechas (TJ) y adherentes (AJ), compuestas por protenas transmembranales y protenas
citoplasmticas que forman placas que agrupan a las protenas de las uniones estrechas creando
una plataforma de interaccin con las protenas de sealizacin. Adicionalmente un cinturn
circunferencial de actina que rodea a las clulas endoteliales/epiteliales, es necesario para la
formacin y fucin normal de las TJ.
(2)


Estructura protica de las uniones estrechas:

Las protenas transmembranales de las TJ incluyen a las ocludinas, claudinas y protenas de unin
adherente (JAM) A, B y C. Las ocludinas poseen 2 bucles extracelulares, 4 dominios
transmembranales y 3 dominios citoplasmticos. Los dominios citoplasmticos tienen un dominio
intracelular corto (N-terminal) y un largo carboxilo (C-terminal), este ltimo asociado a las
protenas de la zonulla occludens (ZO) 1, 2 y 3; e interacta con otras protenas reguladoras. Tanto
ocludinas como claudinas son fosfo-protenas que cambian su conformacin por medio de
fosforilacin/desfosforilacin de la cadena hidroxilo, alterando su interaccin con otras protenas.
La desfosforilacin de la ocludina provoca el desensamblaje de su asociacin con protenas de la
ZO. La parte N-terminal de la ocludina juega un papel importante en el ensamblaje de las TJ. Las
claudinas son las principales protenas que conforman la barrera, incluyen por lo menos 24
miembros. Todas tienen el mismo patrn estructural: 4 regiones que abarcan la membrana, 2
bucles extracelulares y 2 dominios citoplasmticos. Dos claudinas de clulas adyacentes forman
los filamentos de las TJ por medio de interacciones homoflicas claudina-claudina. Los bucles
extracelulares determinan la selectividad de carga paracelular, por lo que cada tipo de claudina,
determina la permeabilidad a molculas de distintos tamaos. El dominio C-terminal de las
claudinas se une a protenas citoplasmticas, sobre todo ZO-1,2 y 3. La interaccin adecuada de las
claudinas es esencial para limitar el transporte paracelular de iones, produciendo TEER alto en la
BHE. Al parecer las diferentes claudinas expresadas en cada barrera juegan un papel importante
en la TEER de cada una de ellas. La BHE expresa claudinas 3,5, 12 y probablemente 1, mientras que
las claudinas 1, 2, 3 y 11 se expresan en el epitelio de los PC.
(2)


El revestimiento de los ventrculos, compuesto por clulas ependimarias no restrigen la difusin de
solutos, ya que no expresan TJ, sin embargo expresan uniones parecidas a TJ brindando a esta
capa propiedades de barrera.
(2)


Las JAMs 1,2 y 3, miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas, tienen un dominio
asociado a membrana, un dominio extracelular (N-terminal) y uno citoplasmtico (C-terminal). Se
expresan en las uniones intracelulares de las clulas endoteliales cerebrales y clulas epiteliales de
los PC y tienen diversos patrones de interaccin, tanto homoflicos como heteroflicos, con las JAM
de clulas adyacentes, formando dmeros, importantes para la estructura de las TJ. El dominio C-
terminal media la interaccin con diversas protenas. Se cree que estas protenas tienen que ver
con la localizacin de ZO-1 y ocludina en las TJ. Las protenas transmembralanes de la TJ estn
unidas al citoesqueleto por las protenas e la ZO-1, 2 y 3 en las clulas endoteliales y epiteliales.
Las protenas de la ZO proveen de anclaje citoesqueltico a las protenas de las TJ y juegan un
papel en la distribucin espacial de las claudinas. La cingulina, una protena similar a miocina, se
une preferentemente a las protenas de la ZO en la cabeza globular a otras molculas de cingulina
en la cola y a la actina que tiene sitios de unin en todas las protenas de la ZO, en claudina,
ocludina y cingulinas.
(2)

La proten cinasa C (PKC) est involucrada en la expresin de TJ en las clulas endoteliales
cerebrales, provocando un reoirdenamiento de las protenas de las TJ aumentando la
permeabilidad paracelular de la BHE.
(2)


Uniones adherentes:

Son uniones clula-clula especializadas formadas por cadherinas y protenas asociadas en las que
se insertan los filamentos de actina. En las clulas endoteliales se encuentra la cadherina vascular
endotelial (VE), sin embargo sta slo se encuentra en rganos cicumventriculares y PC, en las
clulas que forman barreras, se expresa principalmente cadherina 10. Las cadherinas regulan las
funciones endoteliales de manera directa por la activacin de la fosfoinositid-3-cinasa, un sistema
de sealizacin que participa en la reorganizacin del citoesqueleto, formando complejos con el
receptor tipo 2 del factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF). En el epitelio de los PC slo
se han encontrado 2 tipos de cateninas: y , la -catenina se une a la red de actina.
(2)


Genes de adhesin celular y uniones estrechas:

En el estudio realizado por Liddelow y colabradores, se buscaron diversos transportadores y
expresin de genes durante el desarrollo del SNC en ratones (embriones y adultos) en la barrera
sangre-LCR, donde se demostr que la mayora de los genes no vara durante el desarrollo y en la
edad adulta; lo que indica un alto grado de madurez en los plexos coroideos, incluso en etapas
tempranas (da 15 embrionario, 3 das posteriores al inicio del desarrollo del plexo lateral). Los
genes que alteran su expresin durante el desarrollo son: de clulas de adhesin, de transporte
inico, transportadores de solutos, transportadores de eflujo, y en mayor proporcin, de protenas
de unin.
(1)


Las uniones estrechas forman la base estructural de la BHE y BSLCR; su funcin de restringir la
difusin paracelular entre la sangre y el LCR se encuentra presente en etapas tempranas del
desarrollo. Los componentes ultraestructurales como el nmero y complejidad de las protenas,
no sufre cambios significativos durante el desarrollo. Protenas clave como las de la zonulla
ocludens (ZO-1), ocludinas y claudinas 1, 3, 18 y 13 se encuentran presentes en etapas tempranas
del desarrollo (E15) y en la edad adulta. Sin embargo, algunas otras protenas como la claudina 2,
la protena de unin adherente 3 (JAM3); Marveld3, que aumenta la resistencia elctrica
transepitelial, mediando as la permeabilidad inica paracelular; estas protenas aumentan su
expresin en la etapa adulta. Durante la etapa embrionaria existen protenas importantes que
contribuyen con la funcin de barrera en los PC, incluyendo Racgap1 (protena 1 activadora Rac
GTPasa), importante para el establecimiento de las uniones; Rac-1 que regula la funcin de la
barrera ya que su activacin es importante para la formacin de las uniones estrechas; cadherina
2 (N-cadherina) y 11, importantes para la delimitacin de compartimientos en el cerebro
embrionario; y protocadherina-18, que participa tanto en la migracin celular durante el
desarrollo, como en la adhesin celular; la protena de la familia de las kinecinas Kif, involucrada
en el transporte de vesculas y organelos a travs de los microtbulos, lo que indica una mayor
importancia en este tipo de transporte durante la etapa embrionaria.
(1)


Biologa molecular de los procesos de transporte entre la sangre el fluido cerebral extracelular

Un componente clave para mantener en ambiente interno del cerebro es mantener la estabilidad
de la composicin inica en el LCR, el cual se asume, refleja la composicin del fluido intersticial
cerebral. La composicin del LCR difiere en la etapa embrionaria y en el adulto. Algunos gradientes
LCR/plasma se establecen en etapas tempranas del desarrollo, lo que indica que la integridad de
las uniones estrechas incluso en estas etapas, restringe la difusin paracelular de iones, y que hay
bombas de iones activas en las clulas epiteliales de los plexos coroideos. En el adulto, los
mecanismos clave para la secrecin de LCR son: anhidrasa carbnica, que produce HCO
3
-
, el cual es
transportado a travs de las clulas epiteliales; y el intercambiador de sodio-potasio (Na
+
-K
+

ATPasa) en la membrana apical de las clulas epiteliales de los PC. stos transportadores se
encuentran aumentados en la edad adulta. Asimismo, en esta etapa, hay un aumento en los
canales inicos de potasio (Kcnh1, Kcnd3, Kcnd3, Kcnh2 y Kcnk1), en el caso del sodio, cuyo
transporte se encuentra mediado por transportadores de solutos no asociadas a ATP, pertenecen
a una superfamilia de transportadores de solutos (SLC); esta superfamilia incluye transportadores
facilitados, transportadores acoplados a iones e intercambiadores que no requieren ATP. stos
facilitan el transporte de monosacridos, aminocidos, cidos monocarboxlicos, vitaminas,
nuclesidos, bases purinicas y pirimidinicas, iones y molculas anfipticas (aniones y cationes
orgnicos), algunos se encuentran aumentados en la etapa embrionaria (Slc6a13, Slc4a4) y otros
en la edad adulta (Slc5a5, Slc24a4).
(1) (2)


Los transportadores de aniones tambin son fundamentales para mantener el ambiente interno
del cerebro y la secrecin de LCR. Los transportadores ms importantes en la edad adulta
pertenecen a la familia Slc4; durante la etapa embrionaria, 2 de ellos se encontraron aumentados;
Slc4a1 (intercambiador Cl

HCO
3
) y Scl4a4 (co-transportador de Na
+
-HCO
3
-
); por lo que se puede
inferir que desde la etapa embrionaria, los mecanismos de transporte de iones son funcionales.
(1)


La segunda superfamilia de protenas de casete de unin a ATP (ABC), que se acoplan
directamente con los transportadores de eflujo para transportar molculas a travs de la bicapa
lipdica contra un gradiente de concentracin a hidrlisis de ATP.
(2)
Estos transportadores son
clave para la BHE y la BSLCR desde etapas tempranas del desarrollo y controlan el eflujo de
numerosos frmacos lipoflicos. Algunos de estos transportadores se encontraron con mayor
expresin en la etapa embrionaria (Abcg2, Abcg5, Abcg8) mientras otros se encontraron ms
elevados en etapas adultas (Abca2, Abca4).
(1)
La familia de transportadores ABC se divide en
subfamilias: protenas multidrogorresistentes o P-glicoprotenas (subfamilia Abcb, HUGO ABCB1-
11) y las protenas relacionadas a multidrogorresistencia MRPs (subfamilia Abcc, HUGO ABCC1-5)
y la protena resistente al cncer de mama (BCRP, HUGO ABCG 1-8). Sus sustratos pueden ser
pequeos iones hasta grandes polipptidos y el transporte ocurre contra un gradiente de
concentracin, utilizando la energa producida por la hidrlisis de ATP.
(2)


El transporte de molculas anfifticas (aniones orgnicos) es independiente de sodio y el
transporte es mediado por protenas de la familia SCL, la familia de transportadores de
anin/catin orgnico (OATs-SLC22) y la familia de transportadores de aniones orgnicos
polipeptdicos (OATPs-SLC21). Los miembros de la familia SLC21 transportan solutos anfifticos
grandes como sales biliares, hormonas tiroideas, leucotrienos, esteroides conjugados y
xenobiticos. OATs reciben molculas hidroflicas ms pequeas como metaboltos de
neurotransmisores, cGMP, cAMP, antibiticos, antiinflamatorios no esteroideos y otros frmacos
como antivirales, antidiurticos, antiepilpticos, y neurotransmisores (dopamina, colina,
cimetidina, N-metilnicotinamida).
(2)

La P-glicoprotena luminal en la BHE es mediadora del eflujo de sustratos del cerebro a la sangre,
impidiendo el influjo de sustratos al cerebro. Una P-glicoprotena (Pgp) abluminal es mediadora
del transporte de sustratos de la membrana abluminal al lquido intersticial cerebral, facilitando el
influjo de sustratos al cerebro. En los capilares cerebrales estas P-glicoprotenas se presentan
principalmente en la membrana luminal. Estas son las principales protenas que mantienen la
impermeabilidad en la BHE. La localizacin de los MRPs es controvertida, sin embargo se conoce
que MRP4, 5 y probablemente 2, se expresan en la membrana luminal de las clulas endoteliales
cerebrales. Las protenas resistentes al cncer de mama se expresan en la membrana luminal,
siendo stos los ms abundantes en las clulas endoteliales despus de la Pgp. OATP1A2 y
OATP2B1 se localizan en las clulas endoteliales; OAT3 y 1 se localizan en la membrana abluminal
en clulas epiteliales de los PC. Pgp en las clulas epiteliales de los PC se encuentran en la
membrana apical (LCR) y subapical, por lo que transportan sustratos de vuelta al LCR, es por ello,
que el transporte mediado por Pgp va en sentido contrario en BHE y BSLCR. El transportador de
eflujo ms importante en PC es MRP1 y 4, y se localiza en la membrana basolateral, al igual que
BCRP, mientras que OATP 1-5 se encuentran en la membrana apical, siendo OATP2 la ms
abundante en PC.
(2)

Las 2 diferencias ms importantes entre BHE y BSLCR son: Pgp dan la cara al lado sanguneo de las
clulas endoteliales cerebrales y son el transportador ms abundante en la BHE, mientras que en
las clulas epiteliales de los PC se encuentra principalmente en la membrana apical, dando la cara
al LCR y su funcin no es crtica para mantener la homeostasis. Por otro lado, en la BHE MRP1 es
escasa, y en BSLCR es el transportador ms abundante.

Transportadores de glucosa:

La glucosa es la principal fuente de energa en el cerebro y el suministro de este sustrato es
esencial para la funcin normal del cerebro. Su transporte al cerebro se lleva a cabo por medio de
transporte facilitado por protenas transportadoras. Se han encontrado diversas isoformas de
estos transportadores en el cerebro, incluyendo GLUT 1, 3 y 8. GLUT 1 es un transportador ubicuo
en todos los mamferos y es abundante en el cerebro, exclusivo de la BHE en la membrana
abluminal y en las clulas epiteliales del PC.
(2)
GLUT1 tiene un peso molecular entre 45 y 55kDa, los ms grandes se encuentran en la
microvasculatura y los ms pequeos en las neuronas y glia. GLUT3 slo se encuentra presente en
neuronas in vivo.

GLUT1 se encuentra presente en la membrana basolateral de las clulas
epiteliales de los PC y no se encuentra GLUT3 ni 2. Asimismo, la presencia de GLUT1 en la zona
apical del epitelio de los PC se encuentra ausente.
(2)


Existen diversas alteraciones que disminuyen la expresin de GLUT1 en el cerebro, sin embargo,
aunque ste se encuentre disminuido en la BHE, realiza un transporte suficiente de glucosa para
mantener la actividad neuronal. La expresin de GLUT1 en la BHE tambin se ve afectada por los
astrocitos y la glia, en caso de que el cerebro necesite mayor aporte de glucosa, aumenta su
expresin en las clulas endoteliales. Los astrocitos sometidos a hipoxia liberan factores
humorales que aumentan la expresin de GLUT1.
(2)


Se encuentran diferencias funcionales importantes en cuanto al transporte de glucosa en clulas
endoteliales cerebrales y clulas epiteliales de los PC; las primeras, proveen flujo transcelular de
glucosa al lquido intersticial cerebral, proveyendo al cerebro de su principal fuente de
combustible, mientras que las segundas, utilizan la glucosa para satisfacer sus necesidades
metablicas.
(2)


Transportadores de aminocidos:

El cerebro requiere aminocidos esenciales para la sntesis de protenas. El influjo de aminocidos
de la sangre al cerebro se aproxima a la tasa de incorporacin de aminocidos a las protenas
cerebrales.
(2)
Numerosos genes de la familia de SLC de transporte de protenas de membrana se
encuentran presentes en los plexos coroideos. En la etapa embrionaria se encontrar aumento en
varios transportadores de aminocidos: Slc16a10, Slc17a11, Slc1a4, Slc38a4, Slc7a1k, la mayora,
involucrados en el metabolismo protico. Otros, involucrados en el transporte de hormonas
tiroideas como Slc16a2 (MCT8) y Slco1c1 (Oatp14) se encontraron de manera similar en
embriones y adultos; finalmente uno de los transportadores de hormona tiroidea presentaba
mayor expresin en embriones fue Slc16a10 (TAT1, MCT10), sin embargo no se encontr en el
cerebro adulto.
(1)


El transporte de aminocidos se encuentra aumentado en la etapa embrionaria, ya que hay un
elevado nmero de transportadores en esta etapa, comparada con la etapa adulta.
(1)


La mayor parte de los aminocidos son neutrales, con cadenas largas y funcionan como sustratos
del sistema de L-transportadores de aminocido (LAT). LAT1 es el principal transportador en BHE y
se expresa en la membrana luminal y abluminal de las clulas endoteliales. Su actividad de induce
por la cadena ligera 4F2 (4F2lc), y su trfico e insercin a la membrana basal depende de la
coexpresin de la cadena pesada 4F2 (4F2hc) creando el complejo 4F2lc-4F2hc (antgeno de
membrana CD98). Por lo que se considera que 4F2hc es capaz de mediar el transporte e
aminocidos.
(2)
Otro transportador presente en las clulas endoteliales es LAT2 aunque en menor proporcin. LAT
1 y 2 tienen afinidad por aminocidos neutros pequeos, alanina, serina y cistina. Los aminocidos
catinicos son transportados de la sangre al cerebro por transportadores saturables dependientes
de sodio; sistema y
+
(SLC7A1), presente en la cara luminal de la BHE. En la membrana abluminal se
encuentran varios sistemas transportadores dependientes de sodio como SLC38A2 (alanina),
SLC1A5 (alanina, serina y cistena), sistema Bo
+
(SLC7A3) para aminocidos bsicos; sistema N
(SLC38A5) para aminocidos ricos en nitrgeno (glutamina, asparagina e histidina)
transportadores de aminocidos exitatorios (EAAT/SLC1A 1-3) que median el transporte de
aspartato glutamato.
(2)

Aminocidos pequeos como alanina serina son transportados por 2 sistemas dependientes de
sodio que se encuentran exclusivamente en la membrana abluminal; sistema A, que es la ruta
principal para el transporte de alanina y el sistema ASC que tiene afinidad para aminocidos
neutrales largos. Ambos sistemas estn relacionados con el eflujo de aminocidos del cerebro.
(2)


El sistema EAAT es importante ya que permite remover el glutamato del cerebro, ste puede
causar neurotoxicidad si se acumula en el lquido intersticial cerebral ya que puede provocar una
sobrecarga de calcio, provocando dao o muerte neuronal. El glutamato se libera durante la
neurotransmisin, pero es rpidamente tomado por neuronas y astrocitos. Hay 3 EAAT presentes
en la membrana abluminal de las clulas endoteliales: EAAT 1, 2 y 3, y su funcin es prevenir la
exitotoxicidad, ya que remueven el glutamato del lquido intersticial cerebral al citoplasma de las
clulas endoteliales cerebrales. En el lado luminal, el glutamato se transporta por transportadores
facilitadores X
G
-
.

A diferencia de la BHE, las clulas epiteliales de los PC no expresan EAAT, lo que
sugiere que no juegan un papel importante en la eliminacin de neurotransmisores exitatorios
fluido extacelular cerebral.
(2)


Muchos aminocidos neutros, aspartato y glutamato cruzan la parte luminal de las clulas
epiteliales de los PC por mecanismos independientes de sodio. Expresan LAT1 lo que puede
explicar este mecanismo, asimismo expresan transportador y
+
, sistema N, pero carecen de sistema
A y ASC. Tanto el epitelio de los PC como las clulas ependimales transportador lisosomal de
aminocidos (LYAAT-1) que regula el cotransporte de H
+
y juega un papel activo en el eflujo de
aminocidos de los lisosomas.
(2)


Transportadores de monocarboxilato:

El SNC se nutre principalmente de glucosa, sin embargo algunas clulas gliales y neuronas no usan
glucosa como fuente de energa en el mismo grado: los astrocitos toman la glucosa que atraviesa
las clulas endoteliales y realiza gliclisis, produciendo lactato, el cual se libera al lquido
intersticial cerebral que subsecuentemente es tomado por las neuronas circundantes.
(2)

Los protones, el lactato y otros aniones monocarboxilados necesitan mecanismos de transporte
especficos para atravesar la membrana celular, esto se logra por medio de los transportadores
monocarboxilados unidos a protones (MCT). Se han identificado 14, 4 de ellos se encuentran en el
cerebro: MCT 1, 2, 4 y 8. MCT4 se expresa en astrocitos y se encarga de exportar el lactato
producido durante la gliclisis al lquido intersticial cerebral, de ah, el lactato se transporta a las
neuronas por MCT2. Las clulas endoteliales cerebrales expresan MCT1 en la membrana luminal,
abluminal y en los organelos. MCT8 se expresa en la microvasculatura y es mediador del
transporte de hormonas tiroideas. MCT1 en la BHE juega un papel importante en la eliminacin de
lactato del lquido intersticial cerebral a la sangre. Las clulas epiteliales de los PC expresan
principalmente MCT8 en la superficie apical y se cree que tiene que participa en el transporte de
hormonas tiroideas, tambin expresa MCT1 en la membrana basolateral y apical en menor medida
que en la BHE y MCT2 se encuentra ausente.
(2)


Receptores y transportadores de pptidos:

Los pptidos no pueden utilizar los sistemas de transporte de aminicidos a que presentan enlaces
peptdicos por lo que tienen sistemas de transporte especficos. Los transportadores de pptidos
(PTR) son protenas transportadoras de solutos (SLC15A) responsables del transporte de
membrana de di y tripptidos. Otra familia de transportadores de pptidos (PTS 1-9) median el
transporte de pptidos ms largos (ms de 3 aminocidos en la cadena), en la mayora de los
tejidos funcionan como bombas de eflujo, removiendo los pptidos lipoflicos de las membranas
celulares.
(2)


La familia de los PTR consiste en 4 miembros: 2 transportadores de pptidos (PEPT 1 y 2) y 2
transportadores de histidina, que tambin transportan dipptidos (PHT 1 y 2). El transporte de
PTRs a travs de la membrana se acopla con el movimiento de protones (gradiente
electroqumico de protones). Aunque no hay evidencia de la presencia de PTRs en las clulas
endoteliales cerebrales estas cluals probablemente expresan algunos PTS en el lado abdluminal
que media el eflujo de pptidos pequeos del lquido intersticial cerebral (encefalinas, Tyr-MYF-1,
arginina vasopresina y LHRH).
(2)

Al parecer los sistemas de transporte de pptidos en la BHE impiden la transferencia de la sangre
al lquido intersticial cerebral de ppidos intactos. La entrega de pptidos al cerebro se impide por
la existencia de enzimas en las clulas endoteliales que modifican las cadenas de aminocidos o
hidrolizan los enlaces peptdicos; estas enzimas incuen la -glutamil transpeptidasa, descaboxilasa
cida aromtica, dipeptidil (amino) peptidasa 4 y aminopeptidasas A y N.
(2)


Los pptidos ms largos y protenas tienen receptores especficos en la membrana luminal de las
clulas endoteliales y utilizan la transcitosis mediada por receptores para atravesar la BHE. Este
mecanismo se utiliza para el transporte de insulina, transferrina, algnas citocinas, leptina,
inmunoglobulina G y factor de crecimiento similar a insulina.
(2)


En la endocitosis adsortiva, la interaccin de una protena o un pptido con carga positiva, con
glicoprotenas o regiones con carga negativa de las clulas endoteliales causa adsorcin de la
molcula a la superficie de las clulas endoteliales, causando internalizacin de la molcula,
aunque su destino posterior aun se desconoce. Se dice que pptidos de ms de 400KDa no pueden
atravesar la BHE, sin embargo no hay un punto de corte absoluto.
(2)

Con el aumento de la liposolubilidad, aumenta el secuestro heptico y la unin con protenas
plasmticas, por lo que disminuye la vida media del pptido en el plasma y hay menor
disponibilidad para la interaccin en las clulas endoteliales. Adems, la difusin libre es seguida
de escisin proteoltica en las clulas endoteliales o de eflujo activo por P-gp (Glicoprotena P) o
PTSs. Otra estrategia para el transporte de frmacos al cerebro es por medio de transocitosis
mediada por receptores (Caballo de Troya), incluye la conjugacin de diferentes pptidos con
suministro limitado en el cerebro a anticuerpos monoclonales contra alguno de los receptores de
pptidos de la BHE como el de transferrina. Al unirse el anticuerpo al receptor se desencadena el
mecanismo de endocitosis, sin embargo, estos receptores no son exclusivos de cerebro, por lo que
su uso es limitado.
(2)


Las clulas endoteliales cerebrales no slo participan en el transporte/transitosis de
pptidos/protenas, tambin son blanco de pptidos bioactivos y sintetizan pptidos neuroactivos;
producen y secretan diversas citocinas posterior a injuria cerebral.
(2)


Contrario a lo que sucede en la BHE, muchos transportadores de pptidos acoplados a protones de
la familia de los PTR se expresan en la BSLCR. PEPT2 es un transportador de oligopptidos
abundante en las clulas epiteliales; en cerebro se localiza en la membrana apical, del lado del
LCR. PEPT1 y 2 tienen afinidad a di y tripptidos. Adems de las clulas epiteliales de los PC, PEPT2
se encuentra en las clulas ependimales en los ventrculos cerebrales, por lo que la funcin de este
transportador es eliminar los di tripeptidos del LCR. Los PEPTs tambin transportan
peptidomimticos, por lo que su presencia en la membrana apical de las clulas epiteliales de PC
restringe la entrada de peptidomimticos de la sangre al LCR. Las clulas epiteliales de los PC
tambin participan en la endocitosis mediada por receptores y en la transitosis.
(2)


Las clulas epiteliales de los plexos coroideos no slo participan en la eliminacin de pptidos del
LCR y de su transporte de la sangre al LCR, tambin son blanco para mltiples hormonas como el
pptido natriurtico auricular, y son fuente extrahipotalmica de arginina vasopresina (AVP) que
disminuye el eflujo de cloro y consecuentemente disminuy la produccin de LCR. Una
caracterstica importante presente en las clulas epiteliales de los PC y no en las clulas
endoteliales es la sntesis de transtiretina (TTR) que funciona como transportador de tiroxina y
protena de unin a retinol. Al unirse a la albmina forman un sistema buffer para L-tiroxina
plasmtica por las afinidades sobrepuestas de la hormona.
(2)


Transportadores de iones en la BHE y PC:

Existe evidencia que demuestra que hay flujo desde el fluido cerebral intersticial de los capilares
cerebrales hacia los espacios ventriculares donde se mezcla con el LCR, este flujo se lleva a cabo
principalmente en los espacios perivscualres. Indicando que hay una produccin constante de
fluido intersticial cerebral que contribuye al volumen total del LCR. Aunque este fluido se produce
por el agua del metabolismo cerebral, la produccin de ste por las clulas endoteliales tambin
es una fuente importante contribuyendo con el 30% de su volumen. Esta produccin es esencial
para mantener el balance de fluido cerebral.
(2)

Hay 2 protenas de membrana que actan simultneamente en las clulas endoteliales para
regular el transporte de sodio y cloro en la BHE: Na
+
, K
+
ATPasas (familia ATP1) y Na
+
, K
+
, Cl
-

cotransportador (familia SCL12); el primero localizado en la membrana abluminal, proporciona
una fuerza motriz para el movimiento de iones y agua a travs de la BHE, 3 alfa (ATP1A1-3) y 2
beta (ATP1B1-2). Su actividad est relacionada con la regulacin del volumen celular. El segundo,
se localiza en la membrana luminal y su actividad se regula por sealizacin PKC. Adicionalmente,
expresan canales de potasio (Kv1 y Kir2), expresados en ambos lados, luminal y abluminal. Adems
las clulas endoteliales expresan 2 intercambiadores inicos de la familia SLC probablemente
involucrados en la regulacin del pH: el intercambiador decloro-bicarbonato (Cl
-
- HCO
3
-
)(SLC4A1) y
el intercambiador de sodio-hidrgeno (Na
+
-H
+
)(SLC4A6) con 2 isoformas (Nhe1 y Nhe2), ambas
presentes en la membrana luminal, ientras el intercambiador de cloro-bicarbonato (Ae1) se
encuentra en las membranas luminal y abluminal.
(2)

El flujo de K
+
en la BHE es crtico para mantener la homeostasis, sin embargo, su flujo a travs de la
BHE no se conoce con claridad. Al menos uno de los siguientes mecanismos debe ser la fuente de
ste en LCR: LCR secretado por los plexos coroideos o el fluido intersticial cerebral secretado por
las clulas endoteliales. Los PC principalmente reabsorben K
+
del LCR, por lo que se dice que por lo
menos de manera parcial, el K
+
presente en LCR es secretado en la BHE.
(2)


El transporte de iones en la BHE juega un papel importante en la regulacin del pH de las clulas
endoteliales, especialmente el transporte de bicarbonato. Cuando hay una carga leve de cido hay
influjo de HCO
3
-
regulado principalmente por el intercambiador de cloro-bocarbonato, sin
embargo, si hay cargas grandes de cido, ste se remueve prcticamente slo por el
intercambiador de Na
+
H
+
. Si hay una carga alcalina, el pH se regula por el intercambiador de cloro
bicarbonato.
(2)

El LCR juega un papel importante en la homeostasis y cumple con varias funciones: reduccin del
peso efectivo del cerebro, remocin de productos de desecho del metabolismo, remover el exceso
de neurotransmisores y detritus del epitelio de superficie y transporte de molculas de
sealizacin. El transporte de bicarbonato afecta directamente el pH del LCR, lo que afecta la
actividad neuronal en el centro respiratorio en la medula oblongada.
(2)


Existe 2 procesos principales regulados por el transporte de iones en los plexos coroideos: el
movimiento transepitelial basolateral a LCR de sodio, bicarbonato y cloro, crea una fuerza
osmtica que mueve el agua en la misma direccin. El movimiento de agua a travs de las clulas
epiteliales es por medio de acuaporina 1, un canal de agua ampliamente expresado en la
membrana apical y en menor medida en la basolateral. En segundo lugar el transporte de potasio
del LCR a la membrana basolateral. Adems del flujo de otros iones como calcio, aniones y
cationes orgnicos.
(2)

El movimiento de sodio de la sangre a los ventrculos debe ser dependiente de ATP. Los
transportadores de sodio que se expresan en la membrana basolateral de las clulas epiteliales de
los PC cargan a las clulas con sodio, mientras que los que se expresan en la membrana apical,
transportan sodio de las clulas al LCR. El cloro bicarbonato pasan la capa de clulas epiteliales
por va trascelular. Se cree que la principal ruta de entrada de sodio en la membrana basolateral
por un transportador estilbeno-sensible de Na
+
-HCO
3
-
y transporta sodio y bicarbonato al interior
celular. El cloro se acumula en las clulas epiteliales de los PC por accin del intercambiador de Cl

HCO
3
-
. En las clulas epiteliales en movimiento intracelular de cloro se dirige por un gradiente
externo de bicarbonato, creado por el cotransporte en la membrana basolateral de sodio-
bicarbonato.
(2)

El transporte de estos iones al LCR en la membrana apical depende de varias protenas. Na
+
, K
+

ATPasa, localizada en la membrana apical, es probablemente el ms importante extrusor de sodio.
Hay 3 subunidades en PC: 1 (ATP1A1), 1 (ATP1B1) y 2 (ATP1B2). El intercambiador Na
+
, H
+
tipo
1 tambipen predomina en la membrana apical, sin embargo se involucra en la regulacin del pH,
ms que como extrusor de sodio. El transporte de cloro en la membrana apical es impulsado por
un gradiente hacia el LCR, y se lleva a cabo principalmente por el cotransportador 4 de K
+
- Cl
-

(SLC12A7 o KCC4). La membrana apical tambin expresa el cotransportador 1 de Na
+,
K
+
2Cl
-
(SLC12A2 o NKCC1), sin embargo su papel es controversial ya que estudios recientes sugieren que
no contribuye con el flujo.

El transporte de bicarbonato del LCR por la membrana apical es
mediado principalmente por el intercambiador electrognico Na
+
- HCO
3
-
(SLC4A5 o NBCe2/NBC4)
que transporta 1 sodio y 3 bicarbonatos y tiene un papel importante en la regulacin del pH del
LCR. El flujo de bicarbonaro en PC es principalmente por el canal inico de cloro, que tiene ligera
permeabilidad a bicarbonato; este canal juega un papel en la extrusin de bicarbonato.
(2)


Acuaporinas:

Las acuaporinas 1, 9, 11 y 12, se encuentran igualmente expresadas durante la etapa embrionaria
y en la edad adulta en las clulas epiteliales de los plexos coroideos. Slo la acuaporina 1 se ha
documentado que tiene una funcin en el transporte de agua y secrecin de LCR en plexos
coroideos.
(1)


Protenas de unin:

La concentracin de protenas en LCR es mayor durante la etapa embrionaria. Se sugiere que es
debido a un mecanismo de transferencia de protenas especfico que permite el movimiento de
protenas de la sangre al LCR, y que ste mecanismo puede ser mediado por receptores. La
importancia fisiolgica de la alta concentracin de protenas el cerebro en desarrollo se debe a
que es necesario mantener gradientes de presin coloidosmtica altos que permitan el desarrollo
cerebral normal, y actuar como transportadores de molculas escenciales como factores de
crecimiento, hormonas o nutrientes.
(1)


Gypa, Gypc y Sparc, se encontraron aumentadas en la etapa embrionaria comparada con la edad
adulta. stas estn involucradas tanto en el transporte de albmina, como de otras protenas
plasmticas a travs de las clulas epiteliales de los plexos coroideos. La distribucin de las
protenas cambia dependiendo de la edad; en la etapa embrionaria, GYPA fue inmunorreactiva en
las clulas epiteliales en la zona apical y basolateral, y en clulas endoteliales, a diferencia de la
edad adulta, en la que se encontraban en baja cantidad, en el interior de la clula epitelial. SPARC
fue positiva sobre todo en la parte apical, extendindose a la membrana basolateral de las clulas
epiteliales de los plexos y su concentracin fue disminuyendo hasta llegar a la edad adulta, donde
se observa en forma de vacuolas citoplasmticas; en el espacio perivascular y las clulas
endoteliales fueron negativas.
(1)


Protenas de membrana asociadas a vesculas:

Las protenas de membrana asociadas a vesculas (VAMP), involucradas en la fusin vesicular, se
encuentran distribuidas en estructuras post-Golgi y en la membrana plasmtica de las clulas
transportadoras. Vamp 1,5 y 8 se encontraron aumentadas en las clulas epiteliales de los plexos
adultos. Esto sugiere que hay 2 mecanismos de transferencia en la barrera sangre-LCR: uno
especfico para protenas individuales; y otro no especfico, por formacin y liberacin vesicular.
Estos mecanismos pueden estar implicados en la translocacin de albmina y otras protenas a
travs del epitelio de los plexos. VAMP5 se encuentra en la membrana basolateral y apical,
ayudando a empacar molculas en sangre, LCR y en el interior celular, mientras VAMP1 se
encuentra en la membrana celular y VAMP8 se encuentra en los endosomas citoplasmticos y
remueve material no deseado de la clula.
(1)


Mecanismo propuesto para el transporte de protenas plasmticas a travs de las clulas
epiteliales de los plexos coroideos.

Existen 2 mecanismos de transferencia de protenas que actan de manera paralela a nivel de las
clulas epiteliales de los plexos coroideos en la BSLCR: uno especfico para protenas plasmticas
individuales (por la presencia de receptores especficos en la superficie basolateral) con direccin
de la sangre al LCR, que opera predominantemente durante el desarrollo; y el segundo, no
especfico de formacin y liberacin vesicular en ambas direcciones (de la sangre a LCR y del LCR a
la sangre), que opera durante el desarrollo y en la edad adulta.
(1)

rganos Circumventroculares:
A pesar de que la BHE y la BSLCR son las principales vas de entrada al SNC, estudios recientes han
demostrado que el ingreso de clulas y molculas al SNC no se limita a stas barreras.
En el SNC hay rganos que carecen de BHE, que monitorizan el estmulo hormonal o de otras
sustancias o secretan sustancias neuroendcrinas a la sangre y son conocidos como rganos
circumventriculares (CVOs). Se localizan cerca de la lnea media del cerebro, dentro de las paredes
ependimales que recubren el 3 y 4 ventrculo, formando la BSLCR y pueden ser otra va de
entrada al SNC.
(4)


La eminencia media (EM), en la base del 3ventrculo, corresponde a CVOs puramente
neuroendcrino, contiene los axones terminales de la hipfisis y glia especializada, incluye la
glndula pineal y neurohipfisis, se encarga de la liberacin de hormona liberadora de
gonadotropina, influyendo en las funciones reproductivas. Los CVOs sensoriales, como el rgano
subfornical (OSF), el organum vasculosum de la lmina terminal (OVLT) y el rea postrema (AP) se
caracterizan por presentar una alta densidad de neuronas pequeas, astrocitos y microglia. El OSF
y OVLT se encuentran en la pared del 3 ventrculo, y el AP se encuentra en el piso del 4
ventrculo. Estos CVOs monitorean cambios en la composicin inica, osmtica y hormonal de la
sangre, y estn involucrados en la regulacin de la sed y el metabolismo de fluidos.
(4)


Schulz y colaboradores realizaron un modelo experimental de encefalomielitis autoinmune en el
cual se observ aumento de molculas de adhesin (ICAM-1 y VCAM-1) en la microvasculatura de
los CVOs, acompaado de aumento de MCHI en CVOs y MHCII en las clulas perivasculares; por
lo que los CVOs pueden estar involucrados en procesos inflamatorios en SNC.
(4)


Se investigaron 4 CVOs: OSF, OVLT, EM, AP, todos ellos carecen de BHE y muestran
mucrovasculatura fenestrada MECA-32
+
, el cual es positivo en el endotelio maduro de la BHE. En
los ratones sanos se encontr en anticuerpo positivo en los OCVs, asimismo PCAM-1 fue positivo
y en algunos vasos ICAM-2. Molculas de adhesin como VAM-1, ICAM-1, MAdCAM-1, E y P-
selectina fueron negativos en ratones sanos. Se observ positividad para un pequeo nmero de
clulas perivasculares CD45. Y solo en el 10% de las tinciones se observaron marcadores de
macrfagos como F4/80, MAC-1, MHC I o II y LFAI. Las tinciones en parnquima para estos
marcadores siempre fueron negativas en ratones sanos. CD3, CD4, CD8 y B220, siembre fueron
negativos en los CVOs en ratones sanos.
(4)

En los ratones con EAE, continuaron positivos para MECA-32, PCAM-1 e ICAM-2. Sin embargo se
observaron altas concentraciones de clulas CD45
+
en la proximidad de la microvasculatura y se
observaron tambin en el parnquima de los CVOs. Adems del reclutamiento de clulas CD45
+
,
se observ positividad del marcador en clulas ramificadas, indicando que CD45 aumenta en en
las clulas de la microglia de los CVOs. Se buscaron marcadores de clulas T, B y macrfagos,
encontrando macrfagos o microglia F4/80
+
exclusivamente alrededor de la vasculatura y Mac-1
+

tambin en el parnquima. MAC-1 se detect en macrfagos reclutados a los CVOs y en la
microglia. Los linfocitos T DC3
+
se encontraron en escasa cantidad, sin embargo, las que fueron
positivas, reclutadas en el OSF fueron linfocitos T cooperadores CD4
+
.
(4)

Se buscaron molculas de adhesin ICAM-1 y VCAM-1 en la microvasculatura de los CVOs y se
observ una induccin importante de ICAM-1 y en menor grado de VCAM-1 y ausencia de
MadCAM-1, E-selectina y P-selectina. ICAM-1 se detect en la superficie luminal y VCAM-1 se
detect en la superficie luminal de los CVOs excepto en la EM. Con estos resultados se observa
que el reclutamiento de clulas inflamatorias en los CVOs, depende principalmente de LFA-
1/ICAM-1 o Mac-1/ICAM-1. Los mecanismos de reclutamiento de clulas inflamatorias son
diferentes a los de la BHE que son dependientes de -integrinas y VCAM-1.
(4)


Adems se observ un aumento en la expresin de MHC clase I en todo el parnquima y MHC
clase II en las clulas perivasculares. El infiltrado inflamatorio, se observ predominantemente en
el parnquima o las paredes ventriculares localizados en la vecinidad o adyacente a los CVOs,
demostrando su participacin en el reclutamiento de clulas inflamatorias.
(4)

Los CVOs se pueden considerar como va de entrada de citocinas proinflamatorias al SNC ya que
presentan de manera constitutiva receptores para estas citocinas y fragmentos bacterianos.
Asimismo, la liberacin de citocinas proinflamatorias como TNF- o IL-1 fuera del SNC enva
seales a ste por los CVOs provocando respuestas neuroendcrinas como la elevacin de ACTH,
fiebre y la activacin del eje hipotlamo-hipfisis-adrenal.
(4)

Bibliografa
1. Liddelow S, Temple S, Mllgard K, Gehwolf R, Wagner A, Bauer H, et al. Molecular
Characterisation of Transport Mechanisms at the Developing Mouse BloodCSF Interface: A
Transcriptome Approach. PLoS ONE. 2012; 7(3).
2. Redzic Z. Molecular biology of the blood-brain and the blood-cerebrospinal fluid barriers:
similarities and differences. Fluids and barriers of the CNS. 2011; 8(3): p. 1-23.
3. Pardridge W. Molecular Biology of the BloodBrain Barrier. MOLECULAR BIOTECHNOLOGY.
2005; 30.
4. Schulz M, Engelhardt B. The circumventricular organs participate in the immunopathogenesis of
experimental autoimmune encephalomyelitis. Cerebrospinal Fluid Research. 2005; 2(8): p. 1-14.